孕妇血浆及血清中胎儿游离DNA及RNA的研究进展

当今,无创伤性产前诊断越来越受到人们的关注,许多学者利用孕妇血中胎儿细胞进行产前遗传疾病的研究,但由于孕妇外周血中的胎儿细胞数量稀少,必须通过复杂的富集分离技术,但价格昂贵,因此限制了其临床推广应用。近来孕妇血浆及血清中的胎儿游离DNA及RNA的发现为无创伤性产前遗传病诊断开辟了一个新的天地。由于胎儿游离DNA及RNA具有含量较高且产后很快被清除等优点,使之成为未来最具潜力的无创伤产前诊断方法。     

母血浆中游离胎儿DNA:无创伤性产前诊断的靶标

孕妇血浆中游离胎儿DNA的发现,对无创伤性产前诊断产生了巨大的影响。近几年来,随着分子生物学技术的完善,使得从母血中检测胎儿DNA并应用于临床成为可能,对游离胎儿DNA的生物化学性质的进一步研究为无创伤性产前基因诊断在临床的广泛应用奠定了基础。     

孕妇血浆及血清中胎儿游离DNA及RNA的研究进展

当今，无创伤性产前诊断越来越受到人们的关注，许多学者利用孕妇血中胎儿细胞进行产前遗传疾病的研究，但由于孕妇外周血中的胎儿细胞数量稀少，必须通过复杂的富集分离技术，但价格昂贵，因此限制了其临床推广应用。近来孕妇血浆及血清中的胎儿游离DNA及RNA的发现为无创伤性产前遗传病诊断开辟了一个新的天地。由于胎儿游离DNA及RNA具有含量较高且产后很快被清除等优点，使之成为未来最具潜力的无创伤产前诊断方法。     

孕妇血浆胎儿游离DNA检测对胎儿染色体拷贝数异常的诊断意义

目的 探讨应用孕妇血浆胎儿游离DNA高通量基因测序技术检测胎儿染色体拷贝数的准确性和实际临床可行性.方法 选择需做产前诊断的153名孕妇,采用高通量基因测序技术检测母体血浆胎儿游离DNA,分析胎儿染色体拷贝数;同时行羊膜腔穿刺进行胎儿染色体核型分析.结果 153名孕妇中,母体血浆游离DNA平行测序技术共检测出6例染色体异常高风险胎儿.羊水分析证实6例均为染色体异常,其中非整倍体5例,分别为47,XYY; 45,X;47,XY,+18;47,XY,+21以及47,XY,+13;染色体结构异常1例,核型为46,XY,der (13; 21)(q10; q10),+21.另检出染色体多态性3例(1例46,XY,21p+;2例46,XY,Yqh-).两种方法检测胎儿染色体拷贝数异常结果一致.结论 母体血浆游离DNA高通量测序分析可以用于胎儿染色体拷贝数异常的检测,具有无创、灵敏度高、特异性强等优点,在胎儿染色体拷贝数异常疾病的产前检测中具有广泛的应用前景.     

孕妇外周血游离胎儿DNA诊断胎儿染色体异常的研究进展

胎儿染色体异常是我国当前控制和预防出生缺陷的重点目标疾病。近年来开展的孕妇外周血游离胎儿DNA(cell-free fetal DNA,cff DNA)检测这一新技术对诊断胎儿染色体异常具有很高的敏感性和特异性,是对原有产前筛查和产前诊断技术的有效补充。本文就孕妇外周血游离胎儿DNA诊断胎儿染色体异常的研究进展进行综述。     

利用孕妇血浆中游离胎儿DNA进行胎儿性别诊断

目的评价从母血浆中分离游离胎儿DNA的可行性和它在临床的应用性。方法用巢式PCR复合扩增技术检测31例孕妇血浆中Y染色体上的SRY特异序列和X染色体上的ATL1特异序列。结果在15例怀有男性胎儿的孕妇血浆中检测到Y染色体的特异序列，在怀有女性胎儿的孕妇血浆中仅检测到X染色体的特异序列。胎儿性别检测的敏感性和特异性为100％。结论从母血浆中分离游离胎儿DNA是可行的，该技术可在临床上早期探测胎儿性别，预防X-连锁的遗传病患儿的出生。     

孕妇血浆中的游离胎儿DNA及其意义

孕妇血浆中已证实存在着胎儿来源的游离DNA。作为一种胎儿新的检测材料,游离胎儿DNA的发现为非侵入性产前基因诊断提供了可能。有关游离胎儿DNA的临床应用以及其生物学包括来源、动力学和性质等,近年来引起人们很大关注。实时定量PCR技术是目前检测孕妇血浆中游离胎儿DNA的主要方法。实验室的一些技术因素会影响游离胎儿DNA的检测。尽管有些问题还不很清楚,但母体血浆中游离胎儿DNA的检测对于胎儿遗传病和妊娠相关性疾病的非侵入性产前诊断仍具有重要临床意义。讨论孕妇血浆中游离胎儿DNA的最新研究状况。     

应用QF-PCR技术研究孕妇血浆中胎儿游离DNA与染色体非整倍体妊娠的关系

目的孕21三体胎儿孕妇血浆中胎儿游离DNA水平明显高于正常孕妇,该研究旨在评价妊娠时期孕妇血浆中胎儿游离DNA作为筛查唐氏综合征指标的意义及可行性。方法应用荧光定量PCR技术(QF-PCR)检测怀孕唐氏综合征男胎孕妇和孕正常男胎孕妇血清中胎儿游离DNA的水平。15例孕唐氏综合征男胎孕妇和25例孕正常男胎孕妇及10例孕正常女胎孕妇参与该项研究。结果孕唐氏综合征孕妇血清中胎儿游离DNA水平为185.8基因当量/ml,明显高于正常组(81.9基因当量/ml),P=0.005。结论孕唐氏综合征男胎孕妇血清中胎儿游离DNA含量明显高于正常组,提示荧光定量PCR技术检测孕期母血中胎儿游离DNA水平可能成为筛查唐氏综合征的一个有效指标。     

应用酚提取法纯化孕妇血浆及血清中胎儿游离DNA

目的：应用酚提取法以提高纯化孕妇血中胎儿DNA的浓度，并应用套式PCR技术确定男性胎儿SRY基因的存在。方法：孕妇血浆和血清5-10ml采自孕龄为7-38周孕1产0的孕妇26名。其中孕男性单胎正常孕妇18名，孕女胎正常孕妇8名。加入等体积的苯酚：氯仿：异戊醇抽提，并经冰浴离心，所得DNA应用套式PCR技术确定男性胎儿SRY基因的存在。结果：血浆标本在第1次PCR扩增后有12名出现351bp的阳性一扩增带。其余6名在第2次扩增后出现254bp的阳性扩增带。第1次扩增确定性别的准确率是72.2%，第2次扩增是100%。血肖标本在第1次扩增后有9名出现351bp阳性扩增带，第2次有16名出现254bp阳性扩增带。第1次扩增确定性别的准确率为50%，两次准确率共为88.9%。同时对2例X-连锁遗传病患者（假性肥大性肌营养不良症和无汗性外胚层发育不良症的患者）进行了产前性别判断。结论：单纯应用酚提取的方法也可以纯化孕妇血浆及血清中胎儿游离DNA的浓度，可以应用较大量的孕妇血浆及血清进行DNA提取，以获得较高胎儿DNA的浓度。加用套式PCR使确定胎儿性别的准确率得到提高。提示可用此方法对有X-连锁遗传病家族史的患者进行产前性别判断 。     

孕妇外周血中胎儿游离DNA及RNA在产前诊断中的研究进展

孕妇外周血中胎儿游离DNA的发现。为无创伤性产前诊断提供了一条新途径。通过对胎儿游离DNA的检测．可以诊断胎儿性连锁性疾病，胎儿非整倍体病，RhD血型和妊娠相关性疾病。相对于胎儿游离DNA而言，胎儿游离RNA由于在血浆中具有极强的稳定性，且是非性别依赖性的胎儿核酸物质，大大扩展了临床检测范围，它将和胎儿游离DNA-起成为未来很有潜力的无创伤诊断方法。     

孕妇血浆中胎儿DNA的检测

从孕妇外周血中分离胎儿细胞一直是遗传病非损伤性产前诊断的主要思路与探索途径。尽管在孕妇外周血中服地细胞的富集,鉴定,和遗传病的非损伤性产前诊断等方面取得了一些重要的进展,但是利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行遗传病非损伤性产前诊断的主要障碍依然是胎儿细胞的富集效率不高,而过高的的母体背景影响检测胎儿特异等位基因。最近发现在孕妇的血浆中存在胎儿DNA,这一发现为非损伤性产前基因诊断开辟了新途径。我们结合煮沸法与硅法,建立了一种有效的,简便的,经济的从血浆中提取DNA的方法,通过调整PCR系统组成,增加循环次数,成功地从母体血浆中扩增出胎儿特异的SRY基因,同时采取严格的防污染措施,避免了假阳性或假阴性结果。我们的结果表明,应用我们建立的血浆DNA提取方法与调整的PCR系统,在孕早期可以准确地确定胎儿的性别,这对于性连锁疾病的非损伤性产前诊断具有重要意义。我们的工作为我国非损伤性产前诊断研究的开展与深入打下基础。     

高通量测序技术在无创性检测胎儿染色体非整倍性中的应用

目的 探讨应用高通量测序技术对孕妇血浆胎儿游离DNA进行无创性胎儿染色体非整倍性检测的可行性和准确性.方法 采用高通量基因测序技术检测母体血浆胎儿游离DNA,分析胎儿染色体的非整倍性信息.同时行羊水常规染色体核型分析.统计分析两种方法检测结果的一致性.结果 100名孕妇中,母体血浆游离DNA平行测序技术检测出8例胎儿染色体非整倍性高风险.采集的100份羊水标本均培养成功,成功率为100％.共检测出7例胎儿染色体核型异常,其中染色体非整倍体异常6例(3例47,XN,+21;1例47,XN,+18;1例47,XN,+13;1例47,XXY;1例47,XXX);嵌合体1例(46,XN[2]/47,XN,+13[33]/47,XN,+13,add(15) (p12) [15]).无创基因检测与羊水染色体核型分析两种方法的κ=0.928(P ＜0.05),检测结果具有一致性.无创基因检测技术的假阳性率1.01％,灵敏度100％,特异度98.9％,阳性预测值87.5％.结论 应用高通量测序技术在染色体非整倍性无创性检测具有很高的灵敏性,假阳性率很低,在胎儿染色体非整倍性疾病的产前检测中具有广泛的应用前景.     

孕妇外周血中胎儿核酸研究进展

1997年,Lo等首次报道在母体循环中发现了游离胎儿DNA,为无创产前诊断开辟了新的领域。近年来,从孕妇外周血中直接提取胎儿DNA进行产前诊断日益受到重视。虽然孕妇血中胎儿核酸物质的来源目前仍不清楚,应用相对简单的分子生物学技术已经可以进行胎儿DNA的高灵敏度、高特异性的检测。这些方法已应用到胎儿RhD血型的诊断、胎儿性别鉴定、异常妊娠及染色体综合征的诊断等领域。研究表明胎儿核酸分析前某些因素的变化以及分析方法的不同都会对孕妇外周血中胎儿游离核酸分析产生影响,把握这些因素将使此方法在产前诊断中具有更广阔的应用前景。     

孕妇外周血中无细胞胎儿DNA的研究进展及应用

孕妇外周血中无细胞胎儿DNA(cffDNA)是无创性产前诊断中重要的胎儿物质的检测来源.由于孕妇血中大部分是母体DNA,而游离胎儿DNA的量非常少,仅占3％～6％.因此从孕妇血中成功分离cffDNA,对后续的无创性产前诊断有着十分重要的意义.本文分别从孕妇外周血中cffDNA的发现来源,cffDNA的结构与稳定性,分离孕妇外周血中的cffDNA的实验方法,及在无创性产前诊断中的应用等方面进行介绍,并着重对该技术近年来的研究进展作一综述.旨在探寻较高效率分离孕妇外周血中cffDNA的实验方法,为无创性产前诊断提供较高浓度的检测物质,提高其准确率及成功率.     

Illumina 测序在无创性检测胎儿性染色体非整倍体的应用

目的：探讨应用 Illumina 测序技术对孕妇血浆胎儿游离 DNA 进行无创性胎儿性染色体非整倍性检测的可行性和准确性。方法对3200名传统产前筛查异常、既往有唐氏儿分娩史及高龄孕妇等采集外周血,采用Illumina 测序技术检测母体血浆胎儿游离DNA ,分析胎儿性染色体的非整倍性信息。对测序提示胎儿性染色体数目异常的,进行遗传咨询,对其中自愿行介入性产前诊断的,行羊水常规染色体核型分析。结果3200例样本中测序方法共检出20例性染色体非整倍体,其中12例接受了羊膜腔穿刺术,7例与 G 带核型分析结果一致,包括1例45,X,4例47,XXX,1例47,XYY,1例45,X[13]／46,XX[37],其余4例 G 带核型正常,1例47, XN ,＋mar。结论孕母血浆游离 DNA Illumina 测序可对性染色体非整倍体胎儿进行无创性产前检测,但存在假阳性,还需要进一步完善检测技术和分析方法以提高检测准确率。     

Maternal Serum sEndoglin and Cell-Free Fetal DNA as Probable Markers of Preeclampsia: A Study in Single Center,Egypt

Background: This study was conducted to compare the levels of maternal serum soluble endoglin (sEng) and cell-free fetal DNA (cffDNA) in pregnant females with PE to normotensive pregnant ones, together with relating these levels to preeclampsia (PE) severity and onset.

Method of the study: It was a comparative study in Mansoura University Hospital, Egypt, to detect the levels of serum sEng by ELISA besides the levels of cffDNA by quantitative real-time polymerase chain reaction in 80 pregnant females suffering from PE in addition to 80 normotensive pregnant ones that were included as control.

Results: Levels of serum sEng and cffDNA were higher in PE cases than control (p < 0.0001? both) and were significantly related to the severity of the disease. Levels were also higher in early than late onset PE (p < 0.003? and <0.002?, respectively). Sensitivities, specificities, positive, and negative predictive values in addition to accuracy of serum sEng and cffDNA were 97.5%, 98.8%, 98.7%, 97.5%, and 98.1% and 97.5%, 93.8%, 94.0%, 97.4%, and 95.6%, respectively.

Conclusion: Maternal serum sEng and cffDNA can be good markers for diagnosis of PE in Egyptian patients. They are positively related to the disease severity.

Abbreviations: cffDNA; Cell-Free Fetal DNA, sEng; soluble Endoglin, PE; preeclampsia, qRT PCR; Quantitative real-time polymerase chain reaction.     

Maternal Blood Serum and Plasma Human Tumor‐Associated Antigen RCAS1 During the Course of Uncomplicated Pregnancies: A Prospective Study

Citation Tskitishvili E, Sharentuya N, Tsubouchi H, Kinugasa‐Taniguchi Y, Kanagawa T, Shimoya K, Tomimatsu T, Kimura T. Maternal blood serum and plasma human tumor‐associated antigen RCAS1 during the course of uncomplicated pregnancies: a prospective study. Am J Reprod Immunol 2010; 64: 218–224 Problem We aimed to investigate the expression of the tumor‐associated RCAS1 protein in maternal blood of uncomplicated pregnancies. Method of study Maternal blood was obtained from women with uncomplicated pregnancies (N = 43) at 11–13, 20–22, 32–34, 37–38 weeks of gestation, and immediately after delivery. Serum RCAS1 concentration was studied by ELISA, and plasma mRNA was subjected to real‐time (RT)‐PCR. Results Serum RCAS1 protein concentration was significantly up‐regulated at 11–13 and 20–22 weeks than that at 32–34 weeks and after delivery. RCAS1 mRNA level was significantly increased at 11–13 weeks than that at 37–38 weeks. A significant positive correlation was defined between RCAS1 serum concentration at 11–13 weeks and gestational age at delivery and that between plasma RCAS1 mRNA levels at 37–38 weeks and umbilical cord blood base excess. A significant negative correlation was found between RCAS1 serum concentration at 37–38 weeks and umbilical cord blood pH at delivery. Conclusions RCAS1 protein might have importance in the development of uncomplicated pregnancies and for the prediction of pregnancy outcome.     

孕妇血浆中胎儿DNA在产前诊断中的应用

目的 探讨孕妇血浆中胎儿DNA在无创性产前诊断中的应用。方法 应用酚—氯仿法抽提44名孕7～41周妇女血浆中胎儿DNA，通过PCR扩增胎儿Y染色体上DYZl位点，长度为149bp。结果 22名妊娠男性胎儿孕妇中全部出现DYZ1基因扩增条带，检出率为100．00％。22名妊娠女性胎儿孕妇中20例为阴性结果，两例假阳性结果。早、中、晚孕期性别符合率分别为88．89％、100．00％、96．55％，总符合率为95．45％。结论 使用酚—氯仿法抽提血浆中的DNA。提高模版的浓度和纯度进行PCR，增加了结果的准确性。提示母体血浆中游离的胎儿DNA可以作为无创性产前诊断的标本来源。     

孕妇外周血中胎儿核酸的研究新进展

从孕妇外周血中直接提取胎儿成分进行产前诊断日益受到重视。明确胎儿细胞或者核酸在母血中的存在形式、正常含量以及病理情况下的改变,对非侵入性的产前诊断具有很重要的临床意义,同时孕妇外周血胎儿核酸在病理性产科及优生优育等方面都有了新的广泛的研究。