腺病毒介导的热休克蛋白70在神经元和胶质细胞中的抗缺氧研究

目的 探讨重组腺病毒介导的热休克蛋白70(HSP70)表达对神经元和胶质细胞缺氧/再复氧损伤的保护作用.方法 制备携带全长HSP70基因的重组腺病毒vAd-HSP70.感染体外培养的神经元和胶质细胞,检测靶细胞中外源性HSP70的表达.感染vAd-HSP70 24、48、72 h组和感染vAd-GFP对照组的细胞经缺氧/再复氧处理后,分别测定细胞活性、细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性及线粒体和胞质内细胞色素C含量.结果 感染vAd-HSP70的神经细胞可检测到外源性HSP70基因表达.经缺氧/再复氧处理,感染vAd-HSP70组细胞活性较感染vAd-GFP对照组明显增强(P均＜0.05);感染vAd-HSP70 24、48、72 h组细胞培养上清液中LDH活性[(1 480±121)、(1 023士106)、(1 132±197)U/L]均明显低于感染vAd-GFP对照组[(1 976±190)U/L],线粒体中细胞色素C含量(0.986±0.012、1.028±0.007、1.014±0.008)均明显高于感染vAd-GFP对照组(0.970±0.003),而胞质中的细胞色素C含量(0.987±0.008、0.960±0.005、0.964±0.003)则低于感染vAd-GFP对照组(1.011±0.005,P＜0.05或P＜0.01),其中以感染48 h最为理想(P均＜0.01).结论 腺病毒介导的外源性HSP70表达可保护神经元和胶质细胞抵抗缺氧/再复氧损伤,具有明确的细胞保护作用.     

热休克预处理对肠上皮细胞缺氧-再给氧损伤的保护作用及其机制

目的 :观察热休克预处理对肠上皮细胞 (IEC 6 )缺氧再给氧损伤的影响 ,并探讨热休克蛋白 70(HSP70 )的细胞保护作用。方法 :体外培养 IEC 6细胞 ,分为正常对照组、单纯缺氧再给氧组及热休克预处理组 ,观察缺氧再给氧后各组细胞 HSP70及 Bcl 2表达及细胞活力、乳酸脱氢酶 (L DH)漏出情况 ;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 :热休克预处理可诱导 HSP70产生 (P <0 .0 1) ,显著增加缺氧再给氧处理后IEC 6细胞活力 (P<0 .0 5 ) ,使 L DH漏出减少 (P<0 .0 5 ) ,凋亡相关基因 Bcl 2表达明显增加 (P<0 .0 1) ,细胞凋亡率明显降低 (P<0 .0 1)。结论 :热休克预处理可能通过诱导 HSP70表达来减轻肠上皮细胞缺氧再给氧损伤 ;增加细胞 Bcl 2基因表达并抑制肠上皮细胞缺氧再给氧后细胞凋亡可能是其保护作用机制之一。     

重组腺病毒介导的Bcl-2基因转染对缺氧再复氧肠上皮细胞的保护作用

目的探讨复制缺陷型重组腺病毒介导的Bcl-2基因转染对缺氧再复氧损伤肠上皮细胞的保护作用。方法构建能介导Bcl-2基因转染和表达的复制缺陷型重组腺病毒载体(Ad/CMV-Bcl-2),转染体外培养的小肠上皮细胞株(IEC-6),检测其Bcl-2基因表达变化,分别对正常对照组、缺氧复氧组(单纯给予缺氧复氧处理)、Ad-CMV/Bcl-2转染组(AdCMV/Bcl-2腺病毒载体转染48h后再给予缺氧复氧处理)细胞的凋亡率、死亡率及活力进行分析。结果对照组微弱表达,Ad/CMV-Bcl-2转染组细胞Bcl-2基因高表达;经缺氧再复氧处理后,Annexin-V-Flous试剂盒检测死亡细胞明显减少(P0.01),凋亡显著受到抑制(P0.01);采用MTT法证明,Ad/CMV-Bcl-2转染组细胞活力较对照组明显增强(P0.01)。结论复制缺陷型重组腺病毒介导的Bcl-2基因转染可显著减轻缺氧再复氧导致的肠上皮细胞损伤。     

转染HSP70基因对过氧化氢所致RAW264.7细胞损伤的影响

[目的]观察HSP70基因过表达是否能减轻过氧化氢所致的RAW264.7巨噬细胞损伤.[方法]用脂质体包裹重组质粒pcDNA3.1-HSP70导入RAW264.7细胞株,经G418筛选阳性克隆,用Western blot方法检测HSP70的表达情况;通过测定细胞存活率、LDH释放率,观察了HSP70基因过表达对过氧化氢所致RAW264.7细胞损伤的影响.[结果]获得了HSP70过表达的RAW264.7细胞系;HSP70过表达组细胞的存活率及LDH释放率与对照组比有明显差异.[结论]转染HSP70基因对过氧化氢所致RAW264.7细胞损伤有明显的保护作用.     

腺病毒介导的热休克蛋白70对脑缺血缺氧大鼠保护作用的研究

热休克蛋白(HSP)是生命体在高温、发热、缺血、缺氧、病毒感染以及炎症等不良环境因素作用下所产生的一组蛋白质,能保护机体或细胞不受或少受伤害,这一反应过程称为热休克反应[J].研究证明,采用基因工程技术诱导HSP70高效表达对心、肺、肠等器官的损伤有保护作用[2-4].本课题组前期成功构建了携带HSP70编码基因的重组腺病毒表达载体,并在体外研究中观察到其对神经细胞的缺血缺氧损伤具有保护作用[5].在此基础上,本研究中将重组腺病毒载体通过尾静脉注入脑缺血缺氧大鼠体内,观察重组腺病毒介导的外源性HSP70表达对脑缺血缺氧大鼠的保护效应,有望为脑缺血缺氧的防治提供可行性的基因治疗途径.     

山莨菪碱对脑微血管内皮细胞缺氧-复氧时细胞间黏附分子-1的影响

目的：探讨山莨菪碱（Ani）对缺氧－复氧时脑微血管内皮细胞间黏附分子－1（ICAM－1）表达的影响。方法：采用流式细胞仪检测脑微血管内皮细胞在缺氧、缺氧－复氧及加入Ani后ICAM－1的阳性细胞百分率。结果：缺氧12h，脑微血管内皮细胞ICAM－1的表达与常氧时差异无显著意义，缺氧12h再给氧12h，ICAM－1的表达明显增加，加入Ani后，ICAM－1的阳性细胞百分率明显降低。结论：Ani可减少缺氧－复氧时脑微血管内皮细胞ICAM－1的表达。     

外源性热休克蛋白70基因对心肌细胞损伤的保护作用

目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）基因转染对心肌细胞急性实验性缺氧／复氧损伤的保护作用及其机制。方法：进行大鼠乳鼠原代心肌细胞培养,随机分为4组,对照组、缺氧／复氧（A／R）组、热休克处理后缺氧／复氧（A／R＋HS）组和pCDNAHSP70质粒转导后缺氧／复氧（A／R＋pCDNA HSP70）组。用脂质体包裹pCDNAHSP70质粒,并转导入心肌细胞内。反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测HSP70mRNA表达,Westernblot检测HSP70蛋白表达。以心肌细胞存活率（MTT法）、培养液中乳酸脱氢酶（I．DH）活性、心肌细胞超微结构改变（透射电镜）及Ca^2＋负荷来检测心肌细胞损伤程度。结果：与A／R组相比,A／R＋HS组和A／R’pCDNAHSP7。组细胞存活率显著提高;LDH活性明显降低;细胞超微结构明显改善;心肌细胞Ca^2＋负荷明显减轻。A／R组HSP70mRNA和蛋白含量均较A／R＋HS组和A／R＋pCDNAHSP70组显著减低（P〈0．01）,而A／R＋pCDNA HSP70组的含量与A／R＋HS组相比显著增多（P〈0．01）。结论：通过基因转染使HSP70基因高表达能对抗缺氧／复氧对心肌细胞的损伤,这一作用与其能抗细胞Ca^2＋负荷有关。     

缺氧预适应对缺氧复氧诱导内皮细胞-中性粒细胞黏附的影响

目的：观察缺氧预适应对缺氧／复氧后血管内皮细胞表面黏附分子的表达以及中性粒细胞－内皮细胞黏附的影响。方法：采用β－N－乙酰氨基己糖苷酶比色法检测黏附率;流式细胞术检测内皮细胞表面黏附分子E－选择素、细胞间黏附分子－1（ICAM－1）的表达;苔盼蓝摄取法检测细胞存活率;常规生化法检测乳酸脱氢酶活性。结果：血管内皮细胞经缺氧／复氧处理后,苔盼蓝摄取率,乳酸脱氢酶活性均明显增高,E－选择素、ICAM－1表达明显上调,其表面中性粒细胞的黏附增加,缺氧预适应显著抑制缺氧／复氧的上述作用。结论：缺氧预适应通过调节内皮细胞表面黏附分子的表达,抑制缺氧／复氧诱导的内皮细胞－中性粒细胞黏附。     

异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HSP70mRNA和HSP70蛋白表达的影响

目的研究异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HSP(热休克蛋白)70mRNA和HSP70蛋白的动态表达规律及其作用的影响。方法采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位杂交原理检测HSP70 mRNA,应用组织化学染色法检测HSP70蛋白。结果异丙酚使HSP70 mRNA的表达增强,时间延长(P<0·05);HSP70蛋白表达量显著增多(P<0·05)。结论异丙酚能显著促进脑缺血再灌注时HSP70的表达。提示异丙酚一方面发挥自身的神经保护作用,另一方面也可以通过诱导HSP70的合成而发挥神经保护作用。     

过氧化氢诱导人血管内皮细胞凋亡及HSP70和Bcl2 基因蛋白表达的研究

目的探讨过氧化氢（H     

Heat shock protein 70-dependent protective effect of polaprezinc on acetylsalicylic acid-induced apoptosis of rat intestinal epithelial cells

Protection of the small intestine from mucosal injury induced by nonsteroidal anti-inflammatory drugs including acetylsalicylic acid is a critical issue in the field of gastroenterology. Polaprezinc an anti-ulcer drug, consisting of zinc and L-carnosine, provides gastric mucosal protection against various irritants. In this study, we investigated the protective effect of polaprezinc on acetylsalicylic acid-induced apoptosis of the RIE1 rat intestinal epithelial cell line. Confluent rat intestinal epithelial cells were incubated with 70 µM polaprezinc for 24 h, and then stimulated with or without 15 mM acetylsalicylic acid for a further 15 h. Subsequent cellular viability was quantified by fluorometric assay based on cell lysis and staining. Acetylsalicylic acid-induced cell death was also qualified by fluorescent microscopy of Hoechst33342 and propidium iodide. Heat shock proteins 70 protein expression after adding polaprezinc or acetylsalicylic acid was assessed by western blotting. To investigate the role of Heat shock protein 70, Heat shock protein 70-specific small interfering RNA was applied. Cell viability was quantified by fluorometric assay based on cell lysis and staining and apoptosis was analyzed by fluorescence-activated cell sorting. We found that acetylsalicylic acid significantly induced apoptosis of rat intestinal epithelial cells in a dose- and time-dependent manner. Polaprezinc significantly suppressed acetylsalicylic acid-induced apoptosis of rat intestinal epithelial cells at its late phase. At the same time, polaprezinc increased Heat shock protein 70 expressions of rat intestinal epithelial cells in a time-dependent manner. However, in Heat shock protein 70-silenced rat intestinal epithelial cells, polaprezinc could not suppress acetylsalicylic acid -induced apoptosis at its late phase. We conclude that polaprezinc-increased Heat shock protein 70 expression might be an important mechanism by which polaprezinc suppresses acetylsalicylic acid-induced small intestinal apoptosis, a hallmark of acetylsalicylic acid-induced enteropathy.     

高血压脑梗死与血浆热休克蛋白70抗体水平关系的研究

目的通过测定高血压脑梗死患者血浆热休克蛋白70（HSP70）抗体水平，探讨HSP70抗体与脑梗死损伤程度的关系及其在脑梗死发病机制中的作用。方法100例脑梗死患者经头颅CT或MRI确诊，其中男64例，女36例；高血压者67例，血压正常者33例。选100名社区居民作为对照组，其中男58名，女42名；高血压者35名，血压正常者65名。采用蛋白质免疫印迹-酶联免疫吸附法（Western blot—ELISA）测定血浆HSP70抗体，并进行Logistic回归分析。结果脑梗死组HSP70抗体阳性率明显高于对照组（69％比13％）；脑梗死组高血压者HSP70抗体阳性率明显高于血压正常者（57％比12％），对照组高血压者HSP70抗体阳性率亦高于血压正常者（11％比2％）。上述结果差异均有显著性（P均〈0．05）。结论HSP70抗体增多与高血压脑梗死发病相关，可作为高血压脑缺血时一种分子生物学诊断指标；HSP70抗体表达越强，脑梗死病情越严重。因此，HSP70抗体增高是反映脑组织损伤程度的标志。     

The diagnostic value of urine heat shock protein 70 and prostatic exosomal protein in chronic prostatitis

ObjectiveTo explore the diagnostic value of the levels of prostatic exosomal protein (PSEP) and heat shock protein 70 (HSP70) in the urine of patients with chronic prostatitis (CP).MethodUrine samples from 210 CP patients (70 cases of the USA National Institutes of Health Category II [NIH‐II], 70 NIH‐IIIa, and 70 NIH‐IIIb patients) and 70 control subjects were collected between May 2018 and February 2020. The levels of PSEP and HSP70 in urine were detected by enzyme‐linked immunosorbent assay. The differences in urine PSEP and HSP70 levels between the groups were analyzed, and receiver operating characteristic (ROC) curves were used to analyze the clinical value of PSEP and HSP70 in the diagnosis of CP.ResultsThe PSEP levels of CP patients were significantly higher than those of the control group (p < 0.001), but there was no difference in PSEP levels among CP subgroups. The level of HSP70 in the urine of the NIH‐II patients was significantly lower than the levels in the NIH‐IIIa and NIH‐IIIb subgroups and the control group, but there was no difference in HSP70 levels between the NIH‐IIIa and NIH‐IIIb subgroups and the control group. ROC curve analysis results showed that the area under the curve (AUC) of PSEP for the NIH‐II, NIH‐IIIa, and NIH‐IIIb patients was 0.751, 0.776, and 0.731, respectively. The AUC of HSP70 in NIH‐II patients was 0.784, and the AUC of combined detection of PSEP and HSP70 in NIH‐II patients was 0.858.ConclusionUrine PSEP can be used as a marker for the diagnosis of CP, but it cannot distinguish between the various types of CP, and HSP70 can be used as a diagnostic index for NIH‐II classification.     

早期谷氨酰胺强化肠外营养对危重病患者体内热休克蛋白70的影响

目的探讨早期给予谷氨酰胺(Gln)强化肠外营养对危重病患者脏器功能的影响及其与预后的关系。方法选择本院急诊及神经外科重症加强治疗病房(NICU)收治的44例危重病患者,按随机原则分为常规治疗组和Gln治疗组,每组22例。两组患者均行肠内、外营养,同时Gln治疗组静脉注射Gln 0.4g·kg~(-1)·d~(-1),连用7d;观察两组患者治疗前后体内热休克蛋白70(HSP70)、Gln含量,机械通气时间、入住ICU时间及肝、肾功能不全的发生率。结果常规治疗组和Gln治疗组治疗前Gln、HSP70水平差异无显著性(P均>0.05);常规治疗组治疗后Gln、HSP70水平较治疗前稍有增加,但差异无显著性;而Gln治疗组治疗后Gln、HSP70水平均较治疗前显著升高,差异有显著性(P均<0.01),且两组治疗后Gln、HSP70水平比较差异均有显著性(P均<0.01)。Gln治疗组体内Gln浓度和HSP70含量的变化存在显著正相关(r=0.650 5,P=0.001)。两组机械通气时间和肝功能不全的发生率差异有显著性(P均<0.05),入住ICU的时间和肾功能不全的发生率则差异无显著性(P均>0.05)。结论给危重病患者早期肠外补充Gln能有效改善患者的预后,降低脏器功能不全的发生率,其机制可能与提高患者体内HSP70水平有关。     

热休克蛋白70与慢性阻塞性肺疾病的关系

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)与慢性阻塞性肺疾病(COPD)的关系。方法选取COPD患者130例,按照暴露情况分为吸烟COPD组100例(按肺功能分为轻、中、重度)、不吸烟COPD组30例;同时选取对照组60例,按暴露情况分为吸烟对照组30例、不吸烟对照组30例。采用Westernblot法检测各组HSP70表达。分析四组及不同程度的吸烟COPD患者与HSP70的关系。结果吸烟COPD组、不吸烟COPD组、吸烟对照组和不吸烟对照组的HSP70吸光度分别为:19.22±5.33、21.96±7.85、22.65±10.01和22.21±8.94,吸烟COPD组中外周血HSP70的表达明显低于不吸烟COPD组、吸烟对照组及不吸烟对照组,差异均有统计学意义(t分别=2.41、3.25、2.98,P均<0.05);重、中、轻度COPD组的HSP吸光度分别为:17.92±5.81、24.13±13.11和26.82±14.93,重度的COPD患者外周血HSP70的表达明显低于中度及轻度的COPD患者,中度COPD患者低于轻度的COPD患者,差异均有统计学意义(t分别=2.50、3.93、3.18,P均<0.05)。线性回归分析显示:HSP70与COPD的严重程度呈负相关(r=-0.57,P<0.05)。结论 HSP70与COPD的发生相关,且HSP70表达的高低与COPD疾病的严重程度呈负相关。     

热休克蛋白70与严重多发伤后早期继发性肝脏损害

目的 :探讨热休克蛋白 70 (HSP70 )在严重多发伤后肝脏继发性损害中的作用。方法 :成年雄性 Wistar大鼠 ,采用严重胸部撞击伤伴单侧股骨骨折多发伤模型。动态观察致伤后 2 4 h及用糖皮质激素受体阻断剂米非司酮后大鼠肝组织 HSP70、肝功能指标及致伤 2 4 h死亡率等变化。HSP70表达测定采用免疫印迹法 ,并进行计算机图像分析。结果 :伤后 HSP70在肝组织中表达伤后迅速增加 ,8h达到峰值 ,2 4 h仍维持在较高水平 ;但血清丙氨酸转氨酶 (AL T)、总胆红素 (TB)及白蛋白的改变无显著差异。使用糖皮质激素受体阻断剂米非司酮能使肝组织 HSP70表达明显增多 ;血清 AL T及 TB在伤后早期即有明显升高 (P均 <0 .0 1) ,白蛋白明显下降(P<0 .0 1) ;伤后 2 4 h动物死亡率明显增加 (P<0 .0 1)。结论 :HSP70可能参与了肝组织细胞抗损伤机制的启动 ,但 HSP70过高表达则可能对肝脏造成损害。 HSP70可作为创伤后肝损伤与抗损伤机制的一个重要指标。     

顺铂内耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达的研究

目的观察顺铂内耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70(HSP70)的表达特点。方法制备顺铂内耳中毒听力损伤模型,分别于第3天,第6天处死豚鼠,取耳蜗做石蜡包埋切片,进行HSP70免疫组化(SP法)染色,检测耳蜗HSP70的表达和分布特点。图像分析采用计算机图像分析系统。结果对照组中Corti器、血管纹、螺旋缘、螺旋神经节呈弱阳性。Ⅱ组中Corti器、血管纹、螺旋缘、螺旋神经节的HSP70表达增强。Ⅲ组中Corti器、血管纹、螺旋缘、螺旋神经节呈强阳性。Ⅲ组平均灰度值较对照组有显著性差异(P<0.01)。结论顺铂能够诱导HSP70在豚鼠耳蜗中的表达,使HSP70在豚鼠耳蜗中的表达增强。     

Glutamine supplementation attenuates intestinal apoptosis by inducing heat shock protein 70 in heatstroke rats

BACKGROUND: Heatstroke is the most hazardous heat-related illness and has a high fatality rate. We investigated whether glutamine supplementation could have a protective effect on heatstroke rats.METHODS: Twenty-five 12-week-old male Wistar rats(weight 305±16 g) were randomly divided into a control group(n=5), heatstroke(HS) group(n=10), and heatstroke+glutamine(HSG) group(n=10). Seven days before heat exposure, glutamine(0.4 g/[kg·d]) was administered to the rats in the HSG group by gavage ever...