宫颈癌中nm23-H1、erbB3、erbB4相关表达及与预后关系

目的 探讨nm23-Hl、erbB3、erbB4基因蛋白在宫颈癌中相关表达及与宫颈癌临床病理参数和预后关系。方法 采用免疫组化法HIGH-SABC法检测了50例宫颈癌(鳞癌、腺癌各25例)标本中nm23-Hl、erbB3、erbB4基因蛋白表达。结果 erbB3、erbB4在鳞癌表达率高于腺癌(分别为52％、44％；44％、36％)，nm23-Hl在宫颈腺癌阳性率(60％)高于鳞癌(44％)，但均无统计学意义。宫颈鳞、腺癌erbB3、erbB4表达均呈正相关；腺癌中nm23-H1、erbB4表达呈负相关，且nm23-H1阳性表达同时伴随erbB4阴性表达者的5年生存率明显高于nm23-H1阴性表达而erbB4阳性表达的5年生存率。结论 erbB3、erbb4表达的正相关性提示在调节宫颈癌细胞分化中,两者可能是以异二聚体形式存在。nm23-H1和erbb4联合检测在宫颈腺癌的预后评价中可能是重要的。     

FHIT基因、细胞凋亡在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的:探讨FHIT蛋白在宫颈癌中的表达及与细胞凋亡的关系。方法:采用免疫组化和Tunel标记法对62例Ⅰ～Ⅲ期宫颈鳞癌进行FHIT蛋白表达水平与细胞凋亡的检测。结果:(1)FHIT与病理分级、淋巴结转移有关,与年龄、临床分期及肿瘤大小无明显相关性(P>0.05)。(2)细胞凋亡与临床分期、病理分级、淋巴结转移及肿瘤大小均有一定的相关性(P<0.05)。(3)FHIT蛋白的表达与细胞凋亡有相关性。结论:FHIT基因和细胞凋亡在宫颈癌的发生、发展中起着重要作用,与宫颈癌的预后有关,FHIT基因与细胞凋亡有一定的相关性。     

宫颈癌中金属硫蛋白的表达及其与细胞增殖、凋亡的关系

目的 探讨宫颈癌及癌前病变中金属硫蛋白(MT)的表达及其与细胞增殖、凋亡的关系.方法 应用免疫组化SP法检测不同病变宫颈组织中MT和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,应用TUNEL法检测原位细胞凋亡.结果 在正常宫颈、慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样变(CIN)Ⅰ～Ⅱ级、CINⅢ级、宫颈浸润癌中,MT阳性表达率和增殖指数(PI)均依次递增(均P＜0.05);在CINⅠ～Ⅱ级、CINⅢ级、宫颈浸润癌中,凋亡指数(AI)逐渐降低(均P＜0.05),但明显高于正常宫颈和慢性宫颈炎;MT表达阳性组PI较高,AI较低,与MT阴性组比较,差异有显著性意义(均P＜0.05);MT的表达与宫颈癌的病理类型和组织学分级密切相关(均P＜0.05),与临床分期和淋巴结转移无关.结论 MT可能通过促进细胞增殖和抑制细胞凋亡参与了宫颈癌的发生,检测MT的表达对宫颈癌的早期诊断及恶性程度的评价具有重要参考价值.     

ErbB3/HER3和erbB4/HER4在肺癌中的表达

目的：探讨HER3和HER4(Human epidermal-growth-factor receptor 3 amd 4)过度表达与肺癌临床病理的关系，明确erbB3和erbB4癌基因在肺癌生长中的作用。方法：用免疫组化法分别检测20例非癌肺石蜡组织及70例肺癌（43例鳞癌和27例腺癌）石蜡组织中HER3和HER4的表达，并采用肺癌组织染色减去癌旁上皮组织染色≥2 的标准，对它们在肺癌中是否呈过度表达进行判断。结果：HER3和HER4在支气管粘膜细胞及肺泡细胞存在阳性表达（ ）；HER4在正常支气管细胞和肺泡细胞表达率的差异有统计学意义；肺癌中存在HER4的过度表达，但无HER3的过度表达；肺癌中HER4的过度表达与肺癌病理类型、分化程度无相关性，而与肺癌淋巴结转移、TNM分期、患者术后生存率相关。结论：erbB4是晚期肺癌生长的调控基因之一，人为地干预HER4的过度表达可能是一种治疗晚期肺癌的有效方法。ErbB3基因在肺癌细胞增殖中可能作用有限。     

姜黄素对前列腺癌PC3细胞的增殖和凋亡的研究

目的:从细胞水平观察探讨姜黄素对前列腺癌PC3细胞的抗肿瘤作用,为临床前列腺癌的有效治疗提供相应的理论依据.方法:利用MTT比色法检测姜黄素对PC3细胞的抑制作用,并计算IC50;流式PI单染法检测细胞周期;流式AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率.结果:姜黄素能明显抑制PC3细胞增殖,并呈剂量依赖关系;使细胞增殖阻滞S期;姜黄素对PC3细胞作用72h后的凋亡率随剂量增加而加大.结论:姜黄素显著抑制pC3细胞的增殖,诱导细胞凋亡,具有一定的抗前列腺癌作用.     

增殖细胞核抗原及凋亡相关基因蛋白在肺鳞癌中的表达及意义

目的分析PCNA、bcl—xl、bak蛋白在肺鳞癌中的表达，探讨其与肺鳞癌发生、发展的关系。方法应用免疫组化法对40例肺鳞癌组织中PCNA、bcl—xl、bak蛋白的表达进行观察和分析。结果PCNA在肺鳞癌中的阳性表达率显著高于正常支气管粘膜（P〈0．01）。bcl-xl在肺鳞癌中的阳性表达率显著高于正常支气管粘膜（P〈0．01）。bak在肺鳞癌中的阳性表达率显著低于正常支气管粘膜（P〈0．01）。随着肿瘤分化程度的降低，肺鳞癌中PCNA的阳性表达呈上升趋势，而bcl-xl及bak的阳性表达呈下降趋势。结论PCNA、Bcl-xl、bak都参与了肺鳞癌的形成和发展，因此，有效地控制细胞的增殖与凋亡，对肺鳞癌治疗有重要的研究价值，可为肺鳞癌的治疗提供新的思路。联合检测PCNA、bcl—xl、bak在评估肺鳞癌的发展及判断转移趋势方面均具有重要意义。     

增殖细胞核抗原及凋亡相关基因蛋白在肺鳞癌中的表达及意义

目的:分析增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-xl、Bak蛋白在肺鳞癌中的表达,探讨其与肺鳞癌发生、发展的关系。方法:应用免疫组化法对40例肺鳞癌组织中PCNA、Bcl-xl、Bak蛋白的表达进行观察和分析。结果:PCNA在肺鳞癌中的阳性表达率显著高于正常支气管黏膜(P<0.05)。Bcl-xl在肺鳞癌中的阳性表达率显著高于正常支气管黏膜(P<0.05)。Bak在肺鳞癌中的阳性表达率显著低于正常支气管黏膜(P<0.05)。随着肿瘤分化程度的降低,肺鳞癌中PCNA的阳性表达呈上升趋势,而Bcl-xl及Bak的阳性表达呈下降趋势。结论:PCNA、Bcl-xl、Bak都参与了肺鳞癌的形成和发展,因此,有效地控制细胞的增殖与凋亡,对肺鳞癌治疗有重要的研究价值,可为肺鳞癌的治疗提供新的思路。联合检测PCNA、Bcl-xl、Bak在评估肺鳞癌的发展及判断转移趋势方面均具有重要意义。     

erbB4/HER4在食道鳞状细胞癌的表达研究

目的探讨第四人体表皮生长因子受体（HER4）表达与食道鳞状细胞癌临床病理的关系。方法采用免疫组化的方法检测60例食道鳞状细胞癌组织中HER4的表达。结果食道鳞状细胞癌组织中HER4的过度表达率为68.33%。食道鳞状细胞癌中HER4的过度表达与淋巴结转移及TNM分期有关。结论 erbB4基因是食道鳞状细胞癌生长的一个调控基因,干预HER4蛋白的过度表达可能是治疗食道鳞状细胞癌的有效方法。     

宫颈鳞癌新辅助化疗前后对癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨细胞凋亡与宫颈癌新辅助化疗（NACT）疗效的关系。方法2005年3月~2008年3月期间,52例原发性宫颈癌患者进行新辅助化疗,根据NACT近期临床疗效分为NACT有效组和无效组,采用免疫组化技术验证NACT前后Bcl-2,Bax蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达差异,采用TUNEL法测定肿瘤组织的凋亡指数AI,观察两组NACT前后细胞凋亡水平的变化。结果NACT后Bax蛋白在宫颈鳞癌组织中表达增强,Bcl-2表达下降。NACT后凋亡指数（AI）明显高于NACT前,而有效组NACT前后的AI均高于无效组,有效组NACT后AI升高多于无效组,两者有显著差异,多因素结果表明,NACT前AI与NACT疗效有关（P〈0.05）。结论细胞凋亡水平可作为评价和预测宫颈癌NACT疗效的一个指标。     

BMP-4基因影响乳腺癌细胞增殖、凋亡和迁移能力涉及NF-κB途径

目的探讨骨形态发生蛋白-4(bone morphogenetic protein 4,BMP-4)基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响途径。方法通过向乳腺癌MCF-7细胞株转染PET-BMP-4质粒过表达BMP-4;采用RT-PCR、MTT法、Boyden小室培养、Hoechst染色、Western blot方法,检测质粒转染、NF-κB抑制剂吡咯二硫代氨基甲酸盐(pyrrodlidine dthiocarbamate,PDTC)预处理和对照组细胞增殖、凋亡、迁移能力及NF-κB、Bax、Bcl-2水平。结果与空质粒转染组和空白对照组细胞相比,过表达BMP-4基因可导致MCF-7细胞增殖能力升高,凋亡细胞比例降低,细胞迁移能力增强,NF-κB和Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低(P<0.05);PDTC预处理后NF-κB和Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高,显著降低过表达BMP-4对MCF-7细胞的生物学效应(P<0.05)。结论过表达BMP-4基因可增强乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移能力并抑制其凋亡,可能与上调NF-κB有关。     

沉默HERC4表达可抑制宫颈癌细胞的增殖、凋亡和迁移

目的 探讨HERC4对宫颈癌细胞生物学功能的影响及其分子机制.方法 设计特异HERC4siRNA干扰序列,Lipofectamine2000法转染Hela细胞,Western blotting检测转染特异siRNA后Hela细胞HERC4蛋白的表达水平;CCK-8法检测转染后Hela细胞的增殖能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测转染后Hela细胞凋亡率的变化;划痕实验检测转染后Hela细胞迁移能力.Western blotting检测转染后Hela细胞CyclinD1、Bcl-2表达变化.结果 转染特异siRNA后Hela细胞HERC4蛋白表达量明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组相比,干扰组Hela细胞生长速度明显减慢,细胞凋亡率增加,迁移能力明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).转染后Cyclin D1和Bcl-2在蛋白水平的表达显著下调(P＜0.01).结论 siRNA可有效降低宫颈癌Hela细胞中HERC4的表达,并通过抑制Cyclin D1表达抑制宫颈癌Hela细胞的增殖和迁移能力,抑制Bcl-2表达增加细胞凋亡能力.     

白藜芦醇对人宫颈癌Hela细胞凋亡、增殖影响的实验研究

目的研究白藜芦醇对宫颈癌Hela细胞体外生长的影响,并初步探讨其作用机制。方法用不同浓度的白藜芦醇作用于人宫颈癌Hela细胞,通过MTT法来检测白藜芦醇对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响;TdT酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL试剂盒）检测白藜芦醇对Hela细胞凋亡的影响。结果不同浓度白藜芦醇浓度对Hela细胞均有抑制作用。白藜芦醇在25～100μmol/L范围内呈时间和剂量依赖。在100μmol/L已达到作用浓度平台期。50μmol/L及以上浓度的白藜芦醇对Hela细胞有明显的凋亡阳性反应,随时间延长凋亡率增加。结论达到一定浓度的白藜芦醇就能够对人宫颈癌Hela细胞产生明显的抑制增殖作用。白藜芦醇在对Hela细胞抑制其增殖的同时诱导其凋亡。     

莪术二酮对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和侵袭作用的研究

目的:研究莪术二酮对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和侵袭的作用,为开发具有抗肿瘤活性的中药提供依据.方法:将Hela细胞分为对照组,莪术二酮低剂量组(12.5μmol/L)、莪术二酮中剂量组(25μmol/L)和莪术二酮高剂量组(50μmol/L)等四组.不同剂量的莪术二酮作用于Hela细胞12～48 h后,检测肿瘤细...     

腺病毒介导PSMA3基因过表达对肝癌SMMC7721细胞增殖、周期、凋亡及其荷瘤生长的影响

目的：构建蛋白酶体亚基α3（proteasome subunit alpha type 3,PSMA3）基因腺病毒重组载体,并观测腺病毒介导PSMA3基因过表达对肝癌SMMC7721细胞增殖、周期、凋亡及其荷瘤生长的影响。方法：RT-PCR法扩增PSMA3基因全长CDs序列后,克隆入pTG19-T载体,再亚克隆入pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体中,构建重组pAdTrack/PSMA3腺病毒载体,随后与骨架质粒pAdEasy-1同源重组形成pAd/PSMA3重组腺病毒,经包装及滴度测定,获高感染力的pAd/PSMA3病毒。用pAd/PSMA3病毒感染人肝癌SMMC7721细胞,荧光显微镜观测被感染的SMMC7721细胞的绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的变化情况。Cell counting kit-8（CCK-8）法检测pAd/PSMA3病毒对SMMC7721细胞增殖的影响。Real-time PCR和Western blot分别检测被感染的SMMC7721细胞的PSMA3基因、增殖细胞核抗原基因（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、Caspase-3促凋亡基因及其编码蛋白的表达情况。流式细胞仪（FCM）检测被感染的SMMC7721的周期、凋亡变化。将经pAd/PSMA3病毒感染的SMMC7721细胞移植裸鼠皮下以生成荷瘤,逐日观察荷瘤的生长情况。所有实验以空病毒感染及未感染的细胞做对照。结果：克隆到768 bp的PSMA3基因,并构建了其具高感染力的pAd/PSMA3重组病毒。CCK-8法结果表明,过表达PSMA3基因的SMMC7721细胞,其增殖明显减慢（P<0.05）。Real-time PCR、Western blot检测显示,pAd/PSMA3重组病毒可介导SMMC7721细胞过表达PSMA3基因,上调其Caspase-3基因及其编码蛋白的表达,并下调其PCNA 基因及其蛋白的表达（P<0.05）。FCM检测证实,过表达PSMA3基因的细胞可被阻滞于G1期（细胞周期）,并可促使其凋亡,其凋亡率差异有统计学意义（P<0.05）。动物实验证实,pAd/PSMA3病毒可明显抑制裸鼠荷瘤的生长（P<0.01）。结论：重组病毒pAd/PSMA3可将SMMC7721细胞阻滞于G1期（细胞周期）,抑制其增殖,促使其凋亡,并可抑制其裸鼠荷瘤的生长,这些可能和下调其增殖相关PCNA蛋白,上调其凋亡相关caspase-3蛋白的表达密切相关。     

局部化疗对宫颈鳞癌组织中Bcl-2、Bax表达水平及细胞凋亡的影响

目的探讨局部化疗前后宫颈癌组织中凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达及细胞凋亡的变化及临床意义。方法应用免疫组织化学法检测接受及未接受局部化疗的宫颈癌组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果接受局部化疗的宫颈癌组织中,Bcl-2表达降低,bax表达升高,细胞凋亡率上升。卵巢组织中情况相同。结论局部化疗可能诱导了肿瘤细胞的凋亡,Bcl-2/Bax平衡的改变参与了凋亡调控,同时局部化疗对卵巢组织也有一定程度的影响,可能具有降低宫旁转移率、预防肿瘤细胞扩散的作用。     

C—erbB—2基因蛋白和PCNA在乳腺癌中的表达

为了揭示Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因蛋白和ＰＣＮＡ与乳癌的关系，用ＡＢＣ法检测乳腺良恶性疾病３０例，发现乳癌时Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因蛋白和ＰＣＮＡ表达分别占５３％（８／１５）和１００％（１５／１５）。而良性疾病的Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因蛋白和ＰＣＮＡ表达均为１５％（２／１５）。ＰＣＮＡ可帮助早期诊断乳癌和监测良性肿瘤是否恶变。Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因蛋白的表达对乳癌预后估价有一定意义。     

没食子酸抑制人舌鳞癌SCC-9细胞增殖、凋亡及可能机制研究

目的 观察没食子酸(GA)对人舌鳞癌细胞SCC-9增殖、凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法 将SCC-9细胞分为对照组和低、中、高浓度没食子酸组(30、60、90μM GA组)。采用MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测SCC-9细胞周期及凋亡率;TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot检测SCC-9细胞中Cleaved-caspase9、Cleaved-caspase8、Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP、p-ERK1/2、p-JNK1/2和p-P38蛋白表达。结果 与对照组比较,低、中、高浓度没食子酸组SCC-9细胞增殖率逐渐下降,而sub G1期DNA含量、细胞凋亡率以及阳性凋亡细胞数逐渐增加,呈剂量依赖性;与对照组比较,没食子酸组Cleaved-caspase9、Cleaved-caspase8、Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP、p-ERK1/2、p-JNK1/2和p-P38蛋白表达均逐渐增加(P<0.05),呈剂量依赖性。结论 没食子酸具有抑制SCC-9细胞增殖、诱导凋亡作用,其机制可能与激活MAPK/ERK信号...     

CVB3非结构蛋白3A与TMED4相互作用对细胞凋亡的研究

【立论依据】 CVB3属于小RNA病毒科肠道病毒属,能引起包括病毒性心肌炎、无菌性脑膜炎、胰腺炎等多种严重的疾病;目前,CVB3感染引起病毒性心肌病我们尚无特效药物用于临床治疗,也没有合适的疫苗用于预防。3A是CVB3主要的非结构蛋白,参与形成病毒复制复合体的骨架蛋白及抑制内质网至高尔基体的物质转运,但其如何与宿主细胞内蛋白相互作用以及对宿主的致病机制仍不清楚。本课题的前期工作中,以CVB3病毒3A为诱饵、运用酵母双杂交系统从人心脏cDNA文库中筛出了多个阳性克隆,TMED4是7个阳性蛋白之一。相关文献报道,TMED4在细胞的凋亡中起促进作用,而TMED4表达的沉默,不仅可以促进HSP70的表达,也提高了HSP70和Apaf-1的结合能力,从而对细胞的凋亡起到了抑制作用。 【设计思路】 3A是否在细胞凋亡中有作用;进一步论证3A与TMED4存在相互作用;是否是3A和TMED4的相互作用影响了细胞凋亡。 【实验内容】 Annexin V法分别检测pBudCE4.1-3A+brefeldin A、pBudCE4.1+brefeldin A比较两组细胞的凋亡情况;COIP、激光共聚焦显微镜观察进一步论证3A与TMED4存在相互作用及共定位;动物感染CVB3后蛋白质印迹法检测TMED4的表达;Annexin V法及蛋白质印迹等实验分别对pBudCE4.1-3A+shTMED4、pBudCE4.1-3A+Cont.shRNA两组细胞的凋亡情况和HSP70、caspase-3的表达情况进行检测和分析。Annexin V法及蛋白质印迹等实验中每一实验组及对照组均采取多组平行实验分别按0、6、12、18、24、30、36、42 h等不同时间进行相关实验操作。 【材料】 成年BALB/c小鼠,TurboFect,brefeldin A,TMED4 Antibody,HSP70 Antibody,caspase-3 Antiboody,TMED4 shRNA Plasmid等。 【可行性】 本课题理论依据充足可行;课题所采用的各项技术已较熟练的掌握;课题所需器材完备,资金充足。 【创新性】 本课题的前期研究基础具有原创性且实验设计方案均为本组成员独立完成;TMED4是一个新发现且研究尚不足的蛋白,我们的研究成果必然会丰富TMED4在细胞内的功能且关于CVB3 3A与TMED4的相互作用对细胞结构和功能影响机制的研究在国际上属于首次。