消除肝组织免疫组化中非特异性显色的探讨

目的:初步研究加热抗原修复对内源性抗生物素蛋白结合物(EABA)的影响,探讨蛋清液在封闭肝组织EABA、消除非特异性显色中的作用.方法:采用免疫组化SP法及蛋清液封闭法,对甲醛固定石蜡包埋的30例肝细胞癌组织,30例门脉性肝硬化组织,10例肝脏海绵状血管瘤之周围正常肝组织进行EABA检查.结果:①经甲醛固定石蜡包埋后肝组织中的EABA被封闭.②加热抗原修复可造成EABA暴露.③EABA在正常肝组织、肝硬化组织及肝癌组织中都有分布,主要以颗粒状形式存在于胞质中,造成非特异性显色.④20%蛋清液可封闭肝组织中的EABA,消除它对正常染色的干扰.结论:加热修复可使甲醛固定石蜡包埋组织中的EABA重新暴露,暴露的EABA见于人体正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中,因而对正常免疫组化染色可造成干扰;暴露的EABA可被蛋清液封闭,以蛋清液消除肝组织中非特异性显色的方法经济便捷,效果良好.     

高压锅抗原修复法在免疫组化染色中的应用

免疫组织化学染色技术的出现 ,是病理学发展史上的一次革命。免疫组织化学特异性高、简便易行 ,无论在临床病理诊断 ,还是病理研究领域 ,都起着十分重要的、不可缺少的作用。但日常工作中所使用的 10 %福尔马林固定的石蜡包埋组织常产生蛋白交联反应 ,遮蔽了组织内某些蛋白抗原 ,使抗体不能与抗原结合 ,导致免疫组化染色呈假阴性结果 ,影响了病理诊断的结果及科研的结论。微波加热辅射修复经 10 %福尔马林固定标本的抗原 ,提高免疫组化的染色敏感性的方法已得到证实[1] ,但微波加热修复抗原法 ,常会出现染色结果不一致 ,稳定性差且一次处理…     

应用不同免疫组化抗原修复技术的体会

免疫组化成败的关键因素之一是抗原决定簇是否充分暴露,经甲醛固定的组织常引起蛋白质空间结构的改变而导致抗原决定簇的封闭,抗原修复技术在石蜡切片免疫组织化学染色中是一种简单有效的增强方法,但无论是高压热修复还是微波热修复均会出现不同程度的脱片现象,给技术人员带来烦恼,并加大了工作量.     

高压锅和微波抗原修复法的对比分析

免疫组织化学技术是用已知抗体或抗原检测组织细胞中的未知抗原或抗体的技术 ,具有操作简单、敏感性和特异性强等优点 ,已广泛用于病理诊断。但在甲醛固定、石蜡包埋后的组织有部分抗原决定簇与核酸或其他蛋白发生交联 ,形成网络 ,固定液中的醛基在使蛋白质变性的同时 ,自身也会交联形成网络结构 ,使组织抗原决定簇封闭。导致表达不佳或假阴性。因此 ,充分的抗原修复是关系免疫组化结果的重要因素 ,抗原修复技术对免疫组织化学方法的敏感性起着决定性的作用 [1 ] 。微波炉和高压锅加热是目前常采用的抗原修复方法 [2 ] ,本文比较了这两种方…     

免疫组织化学染色中消除内源性生物素的方法研究

内源性生物素(endogenous avidin-bindingacticity,EABA)指得是体内能够与亲和素结合的分子或基因.虽然早已被发现,但是由于对它的研究或观察的样本较少,所以未引起人们的高度重视.随着免疫组织化学技术的发展,在应用单克隆抗体检测石蜡包埋组织,加热抗原修复在增强抗原决定簇表达的同时,也增强了组织中内源性生物素的反应.常用的SP法属于亲和素一生物素法之一,如果待检组织和细胞中富含EABA,则可出现假阳性,导致假阳性结果.     

微波在免疫组化中检测癌基因C—erbB—2的应用

随着免疫组化技术的广泛普及 ,微波抗原修复的应用日益受到人们的高度重视。癌基因Ｃ -ｅｒｂＢ - 2 易受固定液影响 ,在福尔马林固定、石蜡包埋的组织中进行免疫组化检测不易获得较高的阳性率。我们应用抗原修复法在食管癌和贲门癌切片上进行癌基因Ｃ -ｅｒｂＢ - 2 的检测 ,获得了较高的阳性率 ,现介绍如下。1　材料和方法1.1观察对象　选用食管癌和贲门癌石蜡包埋组织块各 2 0例 ,全部做成 3～ 4μｍ的切片。1.2　试剂　广谱生物素癌基因Ｃ -ｅｒｂＢ - 2 单克隆抗体 ,美国Ｓａｎｔａ -Ｃｒｕｚ公司生产。抗原修复液 0 .0 1ｍｏｌ枸橼酸…     

免疫组化染色中防脱片的技术改进

应用抗原修复技术暴露被封闭的组织抗原决定簇，是免疫组织化学技术中的关键步骤。微波抗原修复技术是一种有效的抗原修复方法，目前该技术已广泛应用于病理切片的免疫组织化学染色操作中。它利用高温效应和微波的直接作用，打开蛋白间的交联键，暴露组织固定时被封闭的抗原决定簇。但是在微波加热处理组织切片的过程中，常发生脱片现象而导致实验失败。为了克服这个缺点，我们经反复实践摸索，使用简单的材料设计了一种可行的方法，较好地防止了脱片现象的发生。     

利用微波促进组织抗原恢复在石蜡切片免疫组化染色中的应用

将石蜡切片浸泡于抗原恢复液，利用微波进行高强度辐射，以恢复组织 因甲醛固定而被封闭的抗原，提高抗原的检出率和染色强度。结果表明，抗原被封闭的组织经抗原恢复处理后，免疫组化染色强度有不同程度的增加，获得了满意的染色效果。一些常规免疫组化方法呈细胞角蛋白，波形蛋白和结蛋白染色阴性或弱阳性的组织，特别是经甲醛长时间固定的组织因抗原的恢复而呈阳性或强阳性反应。     

利用微波促进组织抗原恢复在石蜡切片免疫组化染色中的应用

将石蜡切片浸泡于抗原恢复液，利用微波进行高强度辐射，以恢复组织中因甲醛固定而被封闭的抗原，提高抗原的检出率和染色强度。结果表明，抗原被封闭的组织经抗原恢复处理后。免疫组化染色强度有不同程度的增加，获得了满意的染色效果。一些常规免疫组化方法呈细胞角蛋白，波形蛋白和结蛋白染色阴性或弱阳性的组织，特别是经甲醛长时间固定的组织因抗原的恢复而呈阳性或强阳性反应。这对改善免疫组化染色效果，提高外科病理对肿瘤的鉴别诊断水平，对经甲醛长时间固定的尸解组织进行回顾性免疫组化研究有一定的意义     

免疫组织化学中肝组织EABA的封闭

目的 :初步探讨蛋清液在封闭肝组织EABA中的作用 ;方法 :采用免疫组化SP法及蛋清液封闭法 ,对 4 0例肝细胞肝癌组织进行EABA检查 ;结果 :2 0 %蛋清液可封闭肝组织中的EABA ;结论 :以蛋清液封闭肝组织中的EABA的方法经济便捷 ,效果良好     

家用微波炉及金属溶液在恢复陈旧石蜡包埋组织抗原性中的应用

应用家用微波炉及饱和硫氰酸铅溶液对３５倒不同陈旧性甲醛固定石蜡包埋组织切片进行免疫组化染色，其中间叶性恶性肿瘤组织５例，流行性出血热肺、肾上腺、甲状腺组织各１０例，分别使用Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ、Ｃ１同相应组织中的抗原反应，同时与常规免疫组化进行对照。结果表明：改良的免疫组化法与常规免疫组化法相比，不需要酶的消化处理，阳性染色强度大，范围广。提示，应用微波炉及金属槽液能促使陈旧性石蜡包埋组织中抗原的恢复，其染色效果明显优于常规酶液处理之方法。     

固定液及抗原修复液pH值对免疫组化染色的影响

目的 :研究固定液pH值和抗原修复液pH值对免疫组化染色结果的影响。方法 :取正常皮肤、胃粘膜、子宫肌瘤、乳腺癌组织 ,分别用 pH值 3.0 ,5 .0 ,7.0 ,8.0 ,10 .0的缓冲福尔马林固定液固定。选用EMA、SMA、ER、CK(AE1/AE3 )为一抗 ,Evinsion二步法免疫组化染色。染色时分别用 pH值 6 .0 ,7.0 ,8.0的抗原修复液或用市售pH值 8.0的EDTA作微波抗原修复。结果 :不同条件可造成阳性细胞数量及染色强度变化 ,本实验得知CK (AE1/AE3 )、ER是以阳性细胞数目改变为主 ,SMA、EMA是以染色强度改变为主。结论 :(1)使用 10 %中性或微碱性缓冲福尔马林固定液 ,固定效果最佳。 (2 )本实验所用的 4种组织 ,抗原修复液选择pH值 7.0、8.0均优于 pH值6 .0 ,皮肤组织选择EDTA(pH值 8.0 ) ,雌激素受体选择 pH值 8.0时染色效果最佳。 (3)固定液pH值 >8.0容易造成背景染色 ,修复液 >8.0影响切片附着 ,造成脱片     

增殖细胞核抗原和细胞分化相关基因N-myc下游调节基因1在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞分化相关基因N-myc下游调节基因1(NDRG1)在乳腺癌中的表达。方法选择乳腺手术切除标本90例进行切片,应用免疫组织化学链霉亲和素-生物素复合物(SABC)法检测45例乳腺癌组织、23例乳腺增生组织、22例癌旁正常乳腺组织中PCNA和NDRG1蛋白的表达情况,并分析其与乳腺癌生物学行为的关系。结果 PCNA在癌旁正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺癌组织中的表达率分别为36.3%、62.5%和88.9%,PCNA在癌旁正常乳腺组织中的表达明显低于乳腺增生组织(P<0.05)和乳腺癌组织(P<0.05)。NDRG1在癌旁正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺癌组织中的表达率分别为63.6%、30.4%和15.5%,NDRG1在癌旁正常乳腺组织中的表达明显高于乳腺增生组织(P<0.05)和乳腺癌组织(P<0.05)。PCNA与NDRG1表达呈负相关(r=-0.679,P<0.05)。结论 PCNA与NDRG1共同参与乳腺癌的发生与发展,联合检测PCNA和NDRG1蛋白有助于判断乳腺癌的恶性程度。     

“综合修复法”在BrdU免疫组化染色中的应用

目的 探讨Brdu免疫组织化学染色的最佳修复方法.方法 采用不同的抗原修复方法:酶修复,pH6.0柠檬酸盐缓冲液高压修复或微波修复,pH 9.0 Tris-EDTA高压修复或微波修复,以及0.1％Triton X-100/0.1％柠檬酸钠渗透及胰酶增加细胞膜的通透性、冷0.1mol/L盐酸去除染色体组蛋白、2mol/L...     

EGFR、C—erB2和PCNA在多原发乳腺癌组织的表达及意义

目的：研究多原发乳腺癌组织EGFR，C-erbB2和PCNA变化规律，探讨EGFR，C-erbB2和PCNA预测第二原发癌发生的价值。方法：应用免疫组组化检测34例良性恶性乳腺组织中EGFR、C-erbB2，PCNA的表达，并比较其阳性表达率和程度的差异。结果：多原发乳腺癌和无复发乳腺癌组织EGFR，C-erbB2，PCNA阳性表达率均较乳腺纤维腺瘤组织高，多原发乳腺癌EGFR，C-erbB2阳性表达程度高于无复发乳腺癌。结论：EGFR，C-erb2B，PCNA可反映癌组织细胞增殖活跃，EGFR，C-erbB2过表达在预测第二原发癌发生具有一定价值。     

乳腺癌组织中抗凋亡基因survivin、P53和PCNA蛋白的表达及其相关性的探讨

目的 检测乳腺癌组织中生存素(survlvin)、p53和PCNA蛋白的表达，探讨它们对肿瘤凋亡通路调节的机制，进一步了解与凋亡相关的两个蛋白的内在联系。方法 用免疫组织化学法检测40例乳腺癌和15例乳腺良性肿瘤survivin、p53和PCNA蛋白的表达。结果 乳腺癌组织中survivin、p53和PCNA的阳性率分别为90％、37．5％和100％。Survivin的表达在良、恶性乳腺肿瘤间有显著差别(P=0．001)。Survivin基因阳性表达与患者年龄、p53蛋白的表达无相关性(P＞0．05)；与肿瘤组织学类型有关，预后好的髓样癌和粘液腺癌阳性程度较低，而预后差的浸润性小叶癌和浸润性导管癌阳性程度较高，两者差异有显著性差别(P＜0．05)。Survivin的表达与PCNA密切相关，表明乳腺癌细胞增殖大于凋亡。结论 抗凋亡基因survlvin和增殖细胞核抗原PC-NA的高表达、p53蛋白的失活抑制了肿瘤的凋亡，也预示着肿瘤的预后不佳。Survivin可能是乳腺癌中一个独立的预后指标。     

微波对DH7抗原性恢复的免疫组织化学应用

目的应用微波处理ＡＢＣ免疫组化法，对福尔马林固定、石蜡包埋切片组织内的ＤＨ７抗原性恢复进行研究。方法微波热时间分别以７、１４、２１、２８ｍｉｎ处理组织切片。ＤＨ７单抗分别以１２０、１４０、１８０、１６０四种稀释度测试。结果微波热１４ｍｉｎ，ＤＨ７单抗稀释度１８０，染色结果良好。结论实验结果提示：既往认为长期福尔马林液固定石蜡包埋的组织不宜免疫组化染色，而通过微波处理恢复其组织抗原性，仍可获得良好的染色结果。此种恢复组织抗原性的方法简便，可减少免疫组化的假阴性率，并可适用于外检材料有关免疫组织化学的回顾性研究。     

抗原修复液pH值及修复时间对免疫组化染色效果的影响

目的:探讨使P504S、P63、CD10 、Ki-67抗原抗体复合物在免疫组化检测中获得高表达的抗原修复条件.方法:取前列腺癌、良性前列腺增生、乳腺增生组织和人乳头状瘤病毒感染的外阴上皮组织,用10%(体积分数)中性缓冲甲醛固定液固定.用EnVision二步法行免疫组化染色, P504S、P63、CD10、 Ki-67分别作为前列腺癌、良性前列腺增生、乳腺增生组织和感染人乳头状瘤病毒的外阴上皮组织的一抗,使用统一的EnVisionTM二抗.每种组织皆分别使用3种不同的缓冲液进行抗原修复:pH 6.0的枸橼酸缓冲液、pH 8.0的乙二氨四乙酸二钠(EDTA)缓冲液和pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液.对每一种抗原修复液,应用4个不同的抗原修复时间:12 min、20 min、25 min和30 min.染色完成后,镜下对比不同条件下抗原抗体复合物表达的情况.结果:P504S在pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液中修复20 min阳性信号最强,阳性细胞比率最高;P63在pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液中修复30 min阳性信号最强,阳性细胞比率最高; Ki-67在pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液中修复25 min阳性信号最强,阳性细胞比率最高;CD10在不同pH值的缓冲液中修复20 min或25 min效果相同,都能得到最强表达.结论:不同的抗原有其各自最适合的抗原修复液、pH值范围和最适修复时间.相对来说, 高pH值的EDTA-Tris缓冲液的修复效果要优于低pH值的修复液.     

MMP1，TIMP1在肺癌组织中的表达及临床生物学意义

目的：研究基质金属蛋白酶－1（MMP－1）和基质金属蛋白酶组织抑制剂－1（TIMP－1）在肺癌组织中表达及其临床生物学意义。方法：常规石蜡包埋切片行SABC免疫组织化学检测46例肺癌组织中MMP－1和TIMP－1的表达。结果：46例肺癌和15例正常肺组织中MMP1表达阳性的例数分别为24％（52．2％）和3例（20％）,两者无相关性；TIMP1在正常肺组织和肺癌中的表达分别为12例（80％）和19例（41．3％），肺癌明显低于正常肺组织；MMP1和TIMP1在肺癌中表达与其分化程度、分期、淋巴结转移有明显相关性，且MMP1和TIMP1的表达呈明显负相关。结论：MMP1和TIMP1蛋白的表达与肺癌的发生发展、生物学行为、侵袭和转移有关，可作为重要的生物学标记物。