哺乳动物的促分裂原活化蛋白激酶信号途径

促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)是一类表达于所有真核细胞的丝氨酸/苏氨酸激酶,能够被诸如细胞因子、生长因子、神经递质、激素、细胞应急以及细胞粘附等各种刺激因素激活.MAPK途径的基本组合包括MAPK、MAPK激酶(MKK)和MAPK激酶激酶(MKKK)三种保守的成分,由此建立一个连续的激活途径.哺乳动物的MAPK可以大致归纳为5类:ERK1/2(MAPKerk1/2)、P38(MAPKp3g)、JNK(MAPKjnk)、ERK3/4(MAPKerk3/4)和ERK5(MAPKerk5).MAPK家族在各种细胞活动中具有重要作用,如增殖、分化、发育、转化及凋亡等.文章讨论了哺乳动物MAPK的功能和调节.     

烫伤大鼠肝葡萄糖激酶,肌己糖激酶性及红细胞三磷酸腺苷…

为进一步探讨损伤后糖代谢状况，我们测定了３０％体表烫伤后大鼠不同时间的血糖和血乳酸，并比较休克期（伤后６ｈ）和高代谢期（伤后７２ｈ）的肝葡萄糖激酶及比目鱼肌已糖激酶（Ⅱ型）活性。结果显示血乳酸水平在伤后６ｈ和４８ｈ各有一个高峰，可能分别是应激和代谢乱的表现。血糖水平在伤后６ｈ明显升高，但６ｈ内波动很大。伤后７２ｈ肝葡萄糖激酶活性显著降低（Ｐ＜０．０５），可能与创伤后血糖升高，糖异生增强及胰岛素抵抗     

遗传编码荧光激酶生物传感器的发展和应用

遗传编码荧光激酶生物传感器(genetically-encoded fluorescent kinase biosensors),又被称作为激酶活性报告探针(kinase activity reporters, KARs)。它是由串联的嵌合蛋白组成的FRET生物传感器,属于分子内的FRET荧光探针,它主要对活细胞内的特定蛋白激酶进行实时监测,在探索酪氨酸激酶和丝/苏氨酸激酶活性研究中的应用广泛。本文收集当前已报道的遗传编码荧光激酶生物传感器并对其发展和应用进行综述。     

重组葡激酶N端缺失突变体对纤溶酶原的激活作用

目的 比较重组葡激酶（ＳＡＫ）及其Ｎ端缺失突变体地纤溶酶原（ＰＬＧ）激活作用的酶动力学常数,探讨ＳＡＫＮ端结构与功能的关系,以进一步改造ＳＡＫ分子。方法 采用酶反应动力学方法结合生物传感器测定ＳＡＫ、△ＮＳＡＫ与ＰＬＧ、纤溶酶（ＰＬＭ）作用的动力学常数。结果 两者与ＰＬＭ形成的复合物催化ＰＬＧ的Ｋｍ值分别为６．２９、４．６μｍｏｌ／Ｌｍ,Ｋｃａｔ值分别为０．７２５ｓ＾－１、０．３１２ｓ＾－１;两者     

MEKK3蛋白激酶的研究进展

 有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶（mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase kinase kinase 3,MEKK3）是MAP3K（mitogen-activated protein kinase kinase kinase）家族的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它在哺乳类动物的各种组织中广泛表达。该蛋白激酶能够有效激活有丝分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）和NF-κB信号通路,与多种肿瘤的发生与发展密切相关。本文将从其结构、蛋白磷酸化、信号传导、免疫调节及与肿瘤的关系等方面对MEKK3的研究进行相关综述。     

Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系

目的 探讨Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系.方法 实验设正常对照组(细胞未作其他处理)、人乙酰肝素酶重组蛋白处理组(5、10 μg/ml)以及提前3 h加入Src激酶特异性抑制剂pp2(5 μmol/L)或p38激酶特异性抑制剂SB 203580(1 μmol/L)再加入人乙酰肝素酶重组蛋白(10 μg/ml)作用24 h组.利用划痕损伤实验和Transwell小室基质侵袭实验分别检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞、高表达乙酰肝素酶的人胃癌SGC-7901细胞和乙酰肝素酶表达被下调的SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中Src激酶、p38激酶、磷酸化Src激酶(p-Src)和磷酸化p38激酶(p-p38)蛋白表达的影响.结果 与正常对照组比较,5和10 μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白均能明显增强人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力(P<0.05);与未加抑制剂的人乙酰肝素酶重组蛋白比较,抑制剂pp2和SB 203580均能削弱人乙酰肝素酶重组蛋白增强的人胃癌MGC-803细胞的迁移和基质侵袭能力(P<0.05).10 μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白促进人胃癌MGC-803细胞Src激酶和p38激酶的磷酸化,而SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中磷酸化的Src激酶和p38激酶表达水平较SGC-7901细胞明显下调(P<0.01);抑制剂pp2和SB 203580对人胃癌SGC-7901细胞中乙酰肝素酶蛋白表达无明显影响;在人胃癌SGC-7901细胞和MGC-803细胞中,Src激酶的抑制剂pp2抑制磷酸化p38蛋白的表达,而p38激酶的抑制剂SB 203580对磷酸化Src蛋白表达无明显影响.结论 乙酰肝素酶可能通过促进Src激酶磷酸化或p38激酶的磷酸化或先促进Src激酶磷酸化再促进p38激酶的磷酸化,从而促进人胃癌细胞迁移和侵袭能力.乙酰肝素酶-Src激酶磷酸化-p38激酶磷酸化可能是人胃癌细胞内存在的与细胞迁移和侵袭有关的信号转导通路.     

儿童病毒性心肌炎血清学指标研究

目的:建立实验室诊断儿童病毒性心肌炎,疑似心肌炎的指标。方法:动力学连续监测法测CKMB、CK。结果:健康儿童、病毒性心肌炎患儿,疑似心肌炎患者CKMB分别为:10.25±7.88,42.98±22.49,22.48±14.68;CK分别为92.18±45.1,268.15±203.1,121.24±67.8。病毒性心肌炎中85.2％(KMB增高,51.9％CK增高;疑似心肌炎61.8％CKMB增高,32.4％CK增高。患儿64％一年内不复发,36％一年内复发。结论:CKMB、CK的测定用于病毒性心肌炎、疑似心肌炎早期诊断,动态观察对临床治疗,预后更有意义。CKMU优于CK。     

MKK4在原发性肝癌中的表达及其临床意义

研究丝裂原活化蛋白激酶激酶4(mitogen-activated protein kinase kinase 4,MKK4)在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测45例原发性肝细胞癌及其癌旁组织和20例正常肝脏组织中的MKK4蛋白的表达,并分析其与肝细胞癌临床病理参数之间的关系。结果肝细胞癌组织中MKK4蛋白阳性表达率(75.6%)较癌旁(100.0%)及正常肝脏组织(100.0%)中低,二者差异有统计学意义(P<0.05)。MKK4蛋白表达与肿瘤有无转移、肿瘤分化程度及临床分期有关(P<0.05),与患者的年龄、性别、肿瘤大小、乙肝表面抗原情况无关(P>0.05)。结论 MKK4可能与原发性肝细胞癌侵袭转移的过程有关,并可能成为一个判断肝细胞癌转移潜能大小的潜在观测指标。     

抵抗素对肝细胞葡萄糖激酶和磷酸烯醇式丙酮酸激酶活性的影响

目的:观察抵抗素(Resistin)对肝细胞糖代谢关键酶葡萄糖激酶(GK)和磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK)活性的影响及剂量效应.方法:正常大鼠的肝细胞,以不加Resistin与加不同剂量的Resistin培养24h,用6-磷酸葡萄糖脱氢酶偶联比色法、乳酸脱氢酶偶联比色法检测不同剂量Resistin对GK和PKPCK的影响.结果:Resistin浓度为10nM/L、50nM/L时,GK活性与空白对照组无明显差异,PEPCK活性明显升高(P＜0.05);当Resistin浓度上升为100nmol/L后,GK活性较空白对照组明显下降(P＜0.01),而PEPCK活性升高更明显(P＜0.01).结论:抵抗素浓度升高使大鼠肝细胞GK活性下降,PEPCK活性升高,从而抑制糖酵解促进糖异生,升高血糖.上述两种酶的活性与抵抗素浓度呈现不同的剂量依赖关系.     

乳腺癌与细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶关系的研究进展

在信号网络中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传递途径起着极为重要的作用,MAPK异常活化导致细胞分化、凋亡功能的丧失,引起细胞恶性转化,异常增殖、肿瘤发生、侵袭能力增强,最终导致肿瘤转移。细胞外信号调节激酶(ERK)是MAPK家族极其重要的一员,它的信号传递途径是涉及调节细胞生长、发育及分裂的信号网络的核心,其基本的信号传递步骤已明确,遵循MAPKs的三级酶促级联反应,即上游激活蛋白→MAPK激酶激酶(MAPKKK)→MAPK激酶(MAPKK)→MAPK。在ERKs的传递途径中,Ras作为上游激活蛋白,Raf作为MAPKKK,MAPK/ERK激酶(MEK)作为MAPKK,ERK即MAPK,即Ras-Raf-MEK-ERK途径,它是表皮生长因子受体(EGFR)信号传导通路最主要的通路之一,主要调节细胞增殖和生长。在恶性肿瘤尤其是乳腺癌的发生、发展、浸润和转移方面都起着重要的作用。     

蛋白激酶Akt在肝组织再生过程中的作用

目的探讨蛋白激酶PI3K／Akt信号途径在肝组织再生中的作用．方法采用切除小鼠肝组织2／3的部分切除法,制成小鼠肝再生模型;小鼠体内肝组织P13K的活性用腹腔注射Wortmannin来抑制．分别采用western blot和RT-RCR方法检测Akt磷酸化水平和增殖细胞核抗原PCNA mRNA表达．结果小鼠肝组织部分切除48h后,PCNA基因表达显著升高,表明肝组织再生发生．小鼠肝组织部分切除24h后,Akt磷酸化水平明显升高．PI3K特异性抑制剂wortmannin显著抑制Akt磷酸化水平和PCNA基因表达．结论PI3K／Akt信号途径在小鼠肝组织再生过程中起重要作用．     

重组葡激酶N端缺失突变体对纤溶酶原的激活作用

目的　比较重组葡激酶（ＳＡＫ）及其Ｎ端缺失突变体（ΔＮＳＡＫ）对纤溶酶原（ＰＬＧ）激活作用的酶动力学常数,探讨ＳＡＫＮ端结构与功能的关系,以进一步改造ＳＡＫ分子。方法　采用酶反应动力学方法结合生物传感器测定ＳＡＫ、ΔＮＳＡＫ与ＰＬＧ、纤溶酶（ＰＬＭ）作用的动力学常数。结果　两者与ＰＬＭ形成的复合物催化ＰＬＧ的Ｋｍ值分别为６．２９、４．６μｍｏｌ／Ｌ,Ｋｃａｔ值分别为０．７２５ｓ－１、０．３１２ｓ－１;两者与ＰＬＧ的亲和系数分别为２．６４×１０８、１．０７×１０９;与ＰＬＭ的亲和系数分别为１．３２×１０９、３．６７×１０８。结论　ＳＡＫＮ端１８个氨基酸对ＳＡＫ·ＰＬＧ复合物及ＳＡＫ·ＰＬＭ酶催化活性中心的形成无明显影响。     

天冬氨酸激酶的部分提纯和特性研究

研究了Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ菌的天冬氨酸激酶（下简称为Ａｓｐ激酶）的部分纯化和某些特性。由于使用了添加硫酸铵和天冬氨酸的磷酸缓冲液，成功地获得了纯度较高、比活力提高１０～１５倍的Ａｓｐ激酶。当硫酸铵以０．１～０．８Ｍ浓度添加时，对酶活性的促进作用最强。对照研究了一些氨基酸对脱盐酶液和Ｇ－２００酶液的不同影响，在５２４菌株种子培养时，以２０小时种龄，２５０ｍｌ／Ｌ装量，激酶的比活力最高；发酵培养时，２３小时后酶活力开始明显下降，但可随尿素的添加而回升。Ａｓｐ激酶的动力学常数是：ＫＡＳＰ为２０１．４ｍＭ；ＫＡＴＰ为３６．４ｍＭ；最适ｐＨ为９．０－９．５；Ｌ－苏氨酸Ｌ－苏氨酸＋Ｌ－赖氨酸对该酶的抑制，与ＡＳＰ是竞争性的，而与ＡＴＰ则是混合性的。     

丙酮酸激酶在急性心肌梗塞早期诊断的临床应用

本文分析了70例急性心肌梗塞(AMI)、14例陈旧性心肌梗塞(OMI)、50例心绞痛及其它各类疾病患者的血清丙酮酸激酶(PK)活力的动态变化,在发病24h内住院的54AMI血清PK浓度全部明显升高,与对照组比较有非常显著差异(P<0.001)。开始升高时间为2h,峰值时间为22～24h,恢复为对照组水平时间在56h内。PK对AMI早期诊断的敏感性100％,特异性95％。     

胃癌组织中Raf激酶抑制蛋白和磷酸化Raf激酶抑制蛋白的表达及临床意义

目的探讨Raf激酶抑制蛋白（RKIP）和磷酸化Raf激酶抑制蛋白（P—RKIP）在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法选取2002年1月至2010年1月胃癌组织及癌旁组织标本各80例。纳入标准：首次手术且术前未接受化疗和放疗的患者,具有完整的临床资料和病理资料。应用免疫组织化学方法检测RKIP和P—RKIP蛋白在胃癌组织及癌旁组织中的表达,并分析RKIP和P—RKIP蛋白的表达与临床病理资料之间的关系。结果免疫组化结果显示胃癌及癌旁组织中RKIP的阳性率分别为20．0％、80．0％,P—RKIP为26．3％、73．7％;胃癌组织RKIP和P—RKIP染色平均值分别为0．563±0．895和0．519±0．476。癌旁组织RKIP和P—RKIP染色平均值分别为1．182±0．752和0．933±0．513。胃癌组织中RKIP和P—RKIP的表达显著低于癌旁组织,差异有统计学意义（P〈0．05）;RKIP和P—RKIP的表达均与胃癌淋巴结转移及组织分化程度相关,尚不能认为与性别和年龄相关（P〈0．05）。结论RKIP和P—RKIP表达的减少或缺失与胃癌的发生发展、侵袭转移密切相关。     

FAK PI3K在胃癌中的表达及相关性研究

目的探索FAK和PI3K在胃癌发生发展过程中的作用及相互关系。方法采用免疫组织化学Envision二步法对112例胃癌及76例正常胃粘膜组织的FAK和PI3K进行检测,并加以分析比较。结果胃癌组FAK、PI3K表达均明显高于正常胃粘膜组(分别为χ2=13.900,P<0.001;χ2=9.994,P<0.05);且随着癌浸润深度的加深(分别为χ2=9.367,P<0.05;χ2=7.896,P<0.05)和淋巴结转移的出现(分别为χ2=8.932,P<0.05;χ2=9.455,P<0.05)FAK和PI3K表达明显增强,且胃癌中PI3K与FAK表达呈明显正相关(r=0.258,P<0.01)。结论胃癌组织PI3K活化与FAK明显相关,两者在胃癌发生发展过程中起促进作用,有望成为胃癌治疗的新靶点。     

新生儿窒息时磷酸肌酸激酶及其同功酶的变化观察

目的 探讨新生儿轻、重度窒息时心肌酶的变化。方法 轻度窒息、重度窒息患儿分别测定血磷酸肌酸激酶(CPK)和磷酸肌酸激酶同功酶(CK—MB)。结果 重度窒息CPK、CK—MB的活性明显高于轻度窒息。结论 CPK、CK—MB的活性增高与窒息程度呈正比。其活性可作为窒息新生儿心肌损害的指标。     

小分子激酶抑制剂在肝纤维化治疗中的应用

激酶活性异常或过度表达与包括肝纤维化在内的多种疾病的发生密切相关,已成为治疗这些疾病的重要药物靶点。蛋白激酶中的酪氨酸激酶和丝/苏氨酸以及脂类激酶中的磷脂酰肌醇-3激酶等能够通过调节肝星状细胞的活性及肝内血管生成等直接或间接机制参与肝纤维化的发生和发展。近期研究表明,小分子激酶抑制剂能够通过靶向激酶抑制细胞增殖以及血管生成从而发挥抗肝纤维化作用,有望为肝纤维化治疗提供一种新的治疗手段。本文对酪氨酸激酶、丝/苏氨酸激酶和磷脂酰肌醇-3激酶在肝纤维化中的作用和其参与调节肝纤维化发生发展的细胞信号通路,以及小分子激酶抑制剂在肝纤维化临床前动物模型和临床试验中的最新研究进展进行综述,为肝纤维化的治疗研究提供新的策略。     

FAK和FAKpY397在喉癌中的表达及意义

目的 检测黏着斑激酶(FAK)及磷酸化黏着斑激酶(FAKpY397)在喉鳞状细胞癌中的表达及临床病理意义.方法 采用免疫组织化学方法检测57例喉鳞状细胞癌和10例正常喉部组织中FAK及FAKpY397的表达.结果 57例喉鳞状细胞癌中FAK与FAKpY397阳性表达率分别为66.7%和84.4%,与正常喉组织相比差异有统计学意义(P<0.01).FAK、FAKpY397与肿瘤的临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤大小及分化程度无明显相关.结论 FAK和FAKpY397在喉癌中有高表达,推测与喉癌的侵袭及转移相关.