蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导髓系白血病细胞株HL60凋亡的机制研究

目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导髓系白血病细胞HL60凋亡的机制。方法 四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Hoechst33342染色形态学观察及流式细胞仪证实细胞凋亡,Western印迹检测B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2）、Caspase-9、Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）蛋白表达。结果 硼替佐米对HL60细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖关系,30nmol/L的硼替佐米作用24h能明显抑制HL60细胞增殖,抑制率为76％,形态学观察可见明显的胞核凝聚、固缩及碎裂;流式细胞仪检测可见明显的凋亡峰凋亡率为62．6％;Western印迹检测显示Bcl-2表达下降,Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白均裂解激活。结论 硼替佐米能诱导髓系白血病细胞HL60凋亡,其机制与Bcl-2蛋白的抑制及Caspase凋亡信号途径的激活有关。     

双氢青蒿素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡

目的：探讨双氢青蒿素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞的凋亡作用和机制。方法：用二甲氧唑黄（XTT）细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测双氢青蒿素对HL-60细胞生长的抑制作用,AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位变化,分光光度法检测细胞Caspase3活性变化。结果：双氢青蒿素对HL-60细胞生长有抑制作用,呈剂量依赖性,并能诱导HL-60细胞凋亡,使线粒体膜去极化,增强Caspase3活性。结论：双氢青蒿素能抑制人急性髓系白血病HL-60细胞生长,并诱导细胞凋亡,可能和线粒体凋亡通路有关。     

半胱氨酸蛋白酶在EPA和DHA抑制HL-60细胞增殖中的作用

目的探讨ω3多不饱和脂肪酸抑制HL60细胞增殖与半胱氨酸蛋白酶(caspases)之间的关系。方法用6.0×10-5mol/L二十碳五烯酸或二十二碳六烯酸处理HL60细胞,运用MTT比色法、流式细胞仪分析ω3脂肪酸对HL60细胞增殖能力和凋亡的影响,RTPCR和免疫印迹技术分析细胞caspase3、caspase8基因的表达变化,激酶活性分析检测caspase8活性。并观察caspases特异性抑制剂对ω3脂肪酸引起的HL60细胞生长抑制的拮抗作用。结果HL60细胞经ω3多不饱和脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,并检测到约6%的凋亡率,caspase3、caspase8基因表达增加,caspase8活性升高。caspases抑制剂可以部分拮抗ω3脂肪酸对HL60细胞的增殖抑制作用。结论ω3脂肪酸可以抑制HL60细胞增殖,并诱导细胞凋亡,而上调caspases的表达和/或活性可能在此过程中发挥重要作用。     

乌苯美司对人白血病细胞生长抑制及其机制探讨

目的：研究国产氨肽酶N抑制剂乌苯美司（Ubenimex）对人白血病细胞的作用及其机理。方法：应用MTT比色法观察Ubenimex对细胞的生长抑制作用，光学显微镜观察细胞形态结构的改变，DNA凝胶电泳、DNA片段原位末端标记及流式细胞仪（FCM）检测，分析细胞凋亡。结果：①Ubenimex明显抑制HL60细胞的生长，半数抑制浓度（IC50）为13．03μg/ml；而K562细胞的敏感性较差。其抑制作用均呈剂量效应关系。②典型的细胞形态改变，DNA末端原位标记的检出及流式细胞仪结果，均证实Ubenimex能诱导白血病细胞的凋亡。③10μg/ml Ubenimex作用12h即可明显诱导HL60细胞DNA断裂，K562细胞的凋亡敏感性显著低于HL60细胞；两者凋亡率均呈剂量和时间依赖性，经Ubenimex处理后，HL60细胞出现G1期阻滞。结论：Ubenimex能抑制K562，HL60细胞生长，诱导细胞凋亡是其机制之一。     

以Celecoxib为基础的联合方案对宫颈癌细胞抑制作用的研究

目的:探讨环氧化酶-2(cox-2)抑制剂Celecoxib与化疗药顺铂(DDP)联合应用对人宫颈癌Hela细胞的作用及机制。方法:用免疫细胞化学SP法检测Hela细胞cox-2蛋白表达后,将Celecoxib、DDP单独或联合处理Hela细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:Celecoxib可下调Hela细胞cox-2蛋白表达,抑制其增殖作用呈浓度和时间依赖性。在一定浓度范围内DDP也抑制Hela细胞生长,作用呈量效关系。Celecoxib与DDP联合应用后抗增殖作用较单一用药显著增强(P<0.05),DDP浓度≥1 mg/L时两者有协同或相加作用。Celecoxib及DDP均可有效诱导Hela细胞凋亡,联用凋亡率明显增加并出现G0-G1期细胞阻滞。结论:Celecoxib与DDP联用可通过抑制增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞对Hela细胞有协同抗肿瘤效应,提示两者联合可能在宫颈癌临床治疗上具有潜在价值。     

胆固醇合成抑制剂洛伐他汀对HL-60细胞caspase-3基因表达的影响

目的　观察胆固醇合成抑制剂洛伐他汀 (lovastatin ,LOV)对HL 60细胞caspase 3基因表达的影响 ,进一步探讨其抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡的分子机制。方法　 4、8、16μmol/LLOV处理HL 60细胞 1～ 4d后 ,MTT比色法及生长曲线测定检测细胞增殖效应 ,流式细胞仪测定细胞周期相的分布及凋亡率 ,DNA梯形带检测观察细胞的凋亡效应 ,RT PCR及Westernblot方法分别分析LOV对HL 60细胞caspase 3mRNA、caspase 3蛋白表达的影响。结果　LOV能显著抑制HL 60细胞增殖 ,使细胞周期阻滞于G0 /G1期 ,细胞凋亡率增加 ,有凋亡特征性的DNA梯形带出现 ;LOV能上调HL 60细胞cas pase 3蛋白表达 ,但对caspase 3mRNA表达无明显影响 ,该作用呈剂量 效应和时间依赖关系。结论　LOV对HL 60细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用 ,LOV能上调HL 60细胞caspase 3蛋白表达 ,推测这可能是LOV抑制HL 60细胞增殖并诱导其凋亡的重要分子机制。     

青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株凋亡抑制的实验研究

[目的]观察青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株的增殖抑制作用及凋亡机制探讨。[方法]应用不同浓度青蒿琥酯作用U937、HL60、Jurkat细胞株,MTT法检测抑制率;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡;Western-blot法检测细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase 8和ICAD蛋白表达的变化。[结果]青蒿琥酯能够明显抑制U937、HL60、Jurkat细胞增殖;8μg/ml以上浓度青蒿琥酯作用三种细胞24h、48h、72h抑制率均为Jurkat〉HL60〉U937(均P<0.01);其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase8蛋白出现明显的剪切激活带。[结论]青蒿琥酯既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导急性白血病细胞凋亡,对Jurkat的抑制最强。     

冬凌草甲素通过线粒体途径诱导入黑色素瘤A375—S2细胞凋亡

目的　研究冬凌草甲素诱导人黑色素瘤 A375 - S2细胞凋亡的作用机制。方法　 MTT法检测冬凌草甲素对 A375 - S2细胞生长的影响及各种 Caspase抑制剂、佛波酯 (PMA)、PKC抑制剂 H- 7对冬凌草甲素作用的影响 ;DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡 ;L DH法测定乳酸脱氢酶 (L DH)活力。结果　冬凌草甲素对 A375 - S2细胞生长有显著抑制作用 ,并能显著诱导 A375 - S2细胞发生凋亡 ,其作用呈明显的量效关系和时间依赖性。形态学观察可见凋亡小体的形成 ,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的 DNA梯带 ;Caspase家族抑制剂 ,Caspase- 9抑制剂能显著抑制冬凌草甲素诱导 A375 - S2细胞的凋亡。大剂量 PMA(4 0 0 ng/m L)显著抑制 34.3μmol/L 冬凌草甲素诱导 A375 - S2细胞凋亡 ,而小剂量 PMA(10 ng/m L)与冬凌草甲素有协同杀死细胞的作用 ,且 PKC抑制剂 H- 7也可下调这种凋亡作用。 Caspase- 3的抑制剂可抑制 Caspase- 3的活力升高。结论　适宜浓度的冬凌草甲素 (34.3μm ol/L )诱导A375 - S2细胞凋亡 ,这种作用是通过线粒体调节 Caspase的激活来实现的。     

全反式维甲酸诱导HL60细胞凋亡及相关信号途径的改变

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)诱导早幼粒细胞白血病细胞株(HL60细胞)凋亡及其分子机制。方法 HL60细胞经ATRA诱导不同时间，用活细胞记数法检测细胞增殖情况；用流式细胞术(FCS)检测HL60细胞凋亡及细胞周期的改变；用核酸提取及电泳技术检测细胞DNA分子的变化；用透射电镜技术观察了凋亡细胞的结构改变；用Western blot技术检测了ATRA诱导HL60细胞与凋亡有关的分子改变。结果 ATRA诱导HL60细胞第3天出现细胞增殖抑制且FCS发现细胞出现S期阻滞，开始出现凋亡，第5天出现明显的细胞增殖抑制及更高的凋亡比例，核酸电泳发现DNA“梯带”现象；对照组细胞在透射电镜下核大而圆，折光性低，染色质均匀；而ATRA处理5d的细胞出现核固缩、染色质浓缩边集及出现凋亡小体。同时细胞内ATRA核受体在诱导第3天开始表达增加，相应地与细胞凋亡相关的酶——半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)也表达增加，而磷酸化的Erk／STAT水平明显下调。结论 ATRA可以诱导HL60细胞发生凋亡，其机制可能为：ATRA诱导细胞后，RAR信号途径被激活，导致与凋亡相关的信号途径被激活(Caspase3表达上调)，而与细胞增殖相关的信号途径被阻断(p-Erk／p-STAT水平下降)，引起细胞增殖阻滞，发生凋亡。     

Caspase 8和Caspase 3在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用(英文)

目的探讨Caspase8和Caspase3在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导CHP212神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用。方法应用流式细胞仪检测TRAIL、Caspase8／Caspase3抑制剂＋TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用。应用比色法测定Caspase8、Caspase3的相对活性。应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学的观察。结果TRAIL可诱导CHP212细胞的凋亡，并存在剂量依赖性；Caspase8／Caspase3抑制剂能抑制TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用。随TRAIL作用时间的延长，Caspase8、Caspase3的活性逐步升高，分别于作用16h、8h后达高峰。透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征。结论TRAIL通过Caspase信号传导通路诱导CHP212细胞凋亡并伴随Caspase8和Caspase3活性的增高。     

蒙古黄芪凝集素诱导HL-60细胞凋亡作用研究

目的:探讨蒙古黄芪凝集素(AMML)诱导HL-60细胞凋亡的作用和机制。方法:MTT法检测AMML对HL-60细胞的增殖抑制作用。显微镜下检测细胞凋亡形态的变化,应用流式细胞仪Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡,同时分析细胞周期。免疫细胞化学法检测Bcl-2、Caspase-3的表达。结果:MTT法显示AMML对HL-60细胞的生长具有明显的抑制作用。荧光显微镜下,细胞呈凋亡形态学变化,流式细胞仪检测结果为细胞凋亡率明显增高,出现G0/G1期阻滞。Bcl-2表达降低,Caspase-3表达增高。结论:AMML明显抑制HL-60细胞的生长,诱导细胞凋亡。可应用于抗肿瘤药物的开发。     

塞来昔布对U266细胞株增殖和凋亡的研究

目的观察环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对骨髓瘤细胞株U266细胞的增殖抑制和凋亡诱导的影响,并通过比较单用塞来昔布和加用Caspase-3阻断剂Ac-DEVD-FMK后的U266细胞株的凋亡率以及Caspase-3的表达,探讨其诱导U266细胞株凋亡的分子机制。方法骨髓瘤细胞株U266细胞经不同浓度的塞来昔布处理后,应用CCK-8体外药物筛选法测定受试样品塞来昔布对人骨髓瘤细胞U266体外增殖有无抑制作用及作用强弱;Annexin V-FITC染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法测定不同实验组样品中Caspase-3总量的表达。结果塞来昔布浓度〉40μmol/L能抑制人骨髓瘤细胞U266体外增值,并呈浓度依赖性,IC50=66.83μmol/L。塞来昔布在40～120μmol/L浓度范围内能诱导人骨髓瘤细胞U266细胞凋亡,呈浓度依赖性。用Ac-DEVD-FMK阻断Caspase-3活性,塞来昔布诱导的U266细胞凋亡明显受抑。结论塞来昔布可诱导骨髓瘤细胞株U266细胞株凋亡,其机制涉及Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路。     

塞来昔布通过调节PI3K/Akt通路活化影响人膀胱肿瘤细胞株T24的增殖和凋亡

探讨PI3K/Akt通路在选择性环氧化酶2(Cox-2)抑制剂塞来昔布抗膀胱肿瘤机制中的可能作用。方法常规培养的贴壁生长的T24细胞,加入不同浓度PI3K抑制剂LY294002共培养,MTT法测定其对T24细胞增殖活性的影响;贴壁生长及悬浮培养的T24细胞,分别加入塞来昔布、PGE2、LY294002等共培养,流式细胞仪测定T24细胞凋亡率。Western blot检测塞来昔布及PGE2作用后悬浮生长的T24细胞Akt活化情况。结果塞来昔布对贴壁及悬浮培养的T24细胞均可诱导其凋亡;PGE2及LY294002均对贴壁的T24细胞增殖和凋亡无明显影响,但PGE2对悬浮生长的T24细胞可减少其凋亡,而LY294002可显著增加T24细胞的失巢凋亡率。Western blot结果提示塞来昔布显著降低而PGE2增加Akt的活化。结论塞来昔布对PI3K/Akt信号通路的主要作用是阻遏Akt的磷酸化,通过阻止Akt活化抑制T24细胞增殖并诱导其产生凋亡。更多还原     

海兔中新环氧甾醇的体外抗肿瘤活性研究

目的:研究一种海兔中新环氧甾醇(HEO)的体外抗肿瘤活性.方法:以体外培养的人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60作为研究对象,采用3H-TdR掺入实验、Annexin Ⅴ荧光染色检测、流式细胞术、透射电镜等观察HEO对细胞周期和诱导凋亡的作用,以考察HEO的抑瘤活性.结果:HEO对HL-60作用24 h的半数抑制浓度IC 50为1.4 mg/L,在0.8 mg/L时已明显抑制HL-60细胞的对数生长;3H-TdR掺入实验表明,随着HEO作用时间的延长,对HL-60细胞的增殖抑制作用明显增强.Annexin Ⅴ荧光染色表明HEO在作用24 h后,大量HL-60细胞开始出现凋亡.透射电镜显示肿瘤细胞染色质呈现凋亡表现.细胞周期分析显示G2 M期细胞增多.结论:HEO明显抑制HL-60生长,并通过诱导凋亡杀伤肿瘤细胞,抗肿瘤活性强;对细胞周期的影响提示其抑瘤机制可能为M期阻滞.     

塞来昔布对喉癌Hep-2细胞COX-2和Caspase-3表达的影响

目的:探讨塞来昔布对喉癌细胞株Hep-2生长抑制及对环氧化酶-2(COX-2)和Caspase-3变化的影响。方法:将不同浓度塞来昔布作用于体外培养的人喉癌细胞株Hep-2,MTT法计算细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot检测COX-2表达,分光光度法检测Caspase-3活性。结果:塞来昔布呈剂量依赖性显著抑制Hep-2细胞生长,阻滞细胞G0/G1期转化,且可明显降低COX-2蛋白水平,增加Caspase-3活性。结论:塞来昔布能抑制喉癌细胞的生长,其机制可能与下调COX-2表达、增强Caspase-3活性有关。     

双氢青蒿素人对急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的 探讨双氢青蒿素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的作用和机制.方法 用二甲氧唑黄细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测双氢青蒿素对HL-60细胞生长的抑制作用,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位变化,分光光度法检测细胞Caspase-3活性变化.结果 双氢...     

siRNA靶向抑制4-1BBL基因表达在HL-60细胞对淋巴细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察4-1BB配体（4-1BBL）-siRNA对HL-60细胞细胞因子分泌的影响;对比观察4-1BBL基因被干扰前后,HL-60细胞培养上清液对淋巴细胞增殖、凋亡诱导作用的影响;探讨肿瘤细胞的免疫逃逸机制。方法:采用化学合成法人工合成靶向人4-1BBL基因的siRNA,脂质体转染法转染HL-60细胞;半定量RT-PCR和流式细胞术检测干扰前后HL-60细胞4-1BBL-mRNA和表面蛋白的表达水平;ELISA法检测4-1BBL干扰前后HL-60细胞培养上清液转化生长因子-β（TGF-β）、血管内皮生长因子（VEGF）分泌水平。密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,收集4-1BBL干扰后的HL-60细胞培养上清液与体外分离的人淋巴细胞共培养,MTT法检测机体淋巴细胞增殖水平;流式细胞术检测淋巴细胞凋亡比率的变化。结果:靶向4-1BBL-siRNA转染HL-60后,4-1BBL-mRNA和蛋白的表达水平明显降低（P<0.01）; ELISA结果显示,4-1BBL基因被干扰后,HL-60细胞培养上清液中TGF-β和VEGF分泌水平明显降低（P<0.01和P<0.05）。与干扰前比较,干扰后的HL-60细胞培养上清液对机体淋巴细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用均下降（P<0.05）。结论:HL-60细胞高表达的4-1BBL信号具有反向调节作用,通过促进其分泌TGF-β、VEGF,使肿瘤细胞培养上清液对淋巴细胞活性的抑制作用增强并促进淋巴细胞凋亡,可能是肿瘤细胞逃避宿主免疫监视的机制之一。     

脐血CD3AK细胞诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 :探讨脐血CD3AK细胞诱导K5 6 2、HL 6 0细胞凋亡的作用。方法 :用细胞形态学观察、DNA琼脂糖电泳、原位末端标记法检测K5 6 2、HL 6 0细胞。结果 :K5 6 2细胞自然凋亡率 (3.5 0± 0 .97) % ,脐血CD3AK诱导的K5 6 2细胞凋亡率 (2 7.40± 4.6 4) % ;HL 6 0细胞自然凋亡率 (4.10± 1.10 ) % ,脐血CD3AK诱导的HL 6 0细胞凋亡率(2 1.10± 3 .82 ) % ,均有显著性差异。结论 :脐血CD3AK细胞能诱导K5 6 2、HL 6 0细胞凋亡 ,而且诱导K5 6 2凋亡的能力更强。     

二烯丙基二硫诱导HL-60细胞系凋亡及其与Caspase-3的关系

目的研究二烯丙基二硫（DADS）诱导白血病细胞凋亡及其机制。方法实验分对照组、DADS处理组、Ae—DEVD—CHO预处理组，进行体外细胞培养，采用形态学观察、MTT法、流式细胞术、DNA凝胶电泳等方法，进行细胞形态学观察、细胞增殖抑制作用研究，检测细胞凋亡率、Caspase-3活性以及DNALadder检测。结果DADS诱导前后，HL-60细胞形态学发生明显改变，DADS以剂量依赖的方式抑制细胞的生长，在DADS诱导HL-60细胞凋亡过程中有Caspase-3的活化，且与剂量和作用时间呈依赖关系，Caspase-3抑制剂Ac—DEVD—CHO能抑制DADS诱导HL-60细胞凋亡。结论DADS能有效地诱导HL-60细胞凋亡，其过程与Caspase-3活化相关。