CD45RA和CD45RO在寻常型银屑病皮损中的表达的研究

目的：观察寻常型银屑病患者皮损中CD45RA和CD45RO的表达情况,探讨寻常型银屑病的发病机制。方法：免疫组化检测30例寻常型银屑病患者皮损中CD45RA和CD45RO的表达,取10例正常人的躯干皮肤做正常对照。结果：寻常型银屑病患者皮损中CD45RO的表达明显高于对照组（P〈0．01）,CD45RA的表达和对照组比较无统计学意义（P〉0．05）。结论：寻常型银屑病患者皮损真皮中浸润的淋巴细胞以记忆性T淋巴细胞为主,推测细胞免疫在寻常型银屑病的发病中起重要作用。     

寻常性银屑病患者外周血和皮损中Thl7细胞表达及相关性研究

目的探讨寻常性银屑病患者外周血和皮损中Th17细胞及相关因子IL-17、IL-22表达水平与疾病严重程度的相关性。方法抽取寻常性银屑病患者和正常人外周血,用流式细胞仪检测外周血Thl7细胞,ELISA试剂盒检测血清中IL-17、IL-22表达。取寻常性银屑病患者皮损和正常人对照者皮肤,用量子点免疫荧光双标法检测Thl7细胞表达。结果两组患者外周血中CD4及IL-17抗体阳性表达率相比差异有统计学意义(P<0.05);实验组患者外周血IL-17和IL-23表达水平明显高于对照组(P<0.05),并与PASI呈正相关(r=0.501,P<0.05);寻常性银屑病患者皮损和正常人对照者皮肤组织中Th17细胞表达比例差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Th细胞比例在寻常型银屑病患者外周血和皮损中明显增加,IL-17和IL-22的水平均升高。     

IL-21及其受体在银屑病患者外周血和皮损组织中的表达及意义

目的探讨IL-21及其受体在斑块型银屑病患者外周血PBMC和皮损组织中的表达情况及临床意义。方法采用流式细胞仪检测斑块型银屑病58例患者及20例健康对照者外周血PBMC中IL-21、IL-21R的表达;采用实时定量RT-PCR（quantitative real-time, RT-PCR）法检测25例银屑病和15例正常人外周血PBMCs和皮肤组织中IL-21、IL-21R mRNA的表达情况;采用Western印迹法检测皮肤组织中IL-21和IL-21R的表达情况;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测PBMC培养上清液中IL-21的分泌水平。结果流式细胞仪检测发现银屑病患者PBMC中IL-21和IL-21R占CD4+T细胞的百分率明显增加（P<0.01）;Real-time PCR发现IL-21、IL-21R mRNA在银屑病患者的PBMC和皮肤组织中表达均较健康对照者增高（P<0.01,P<0.05）;Western印迹法显示IL-21和IL-21R蛋白在银屑病患者的皮损中表达增高（P<0.01）;ELISA检测发现培养上清中IL-21分泌水平增加（P<0.01）。结论斑块型银屑病患者PBMC和组织中IL-21和IL-21R的表达水平均较健康对照者升高,IL-21可能参与了银屑病的发病过程,并可能成为一个潜在的治疗靶点。     

寻常性银屑病患者外周血Th1和Th17细胞亚群的研究

目的检测寻常性银屑病患者外周血中Th极化细胞Th1和Th17细胞数量和比例的变化,探讨其在银屑病发病机制中的作用。方法选择30例寻常性银屑病患者,采用流式细胞术(FCM)检测寻常性银屑病患者外周血中CD4+T细胞上IFN-γ+IL-17-(Th1)、IL-17+IFN-γ-(Th17)的表达,并与健康对照组比较,分析寻常性银屑病严重指数PASI和Th极化细胞表达量、Th1/Th17比值之间的关系。结果寻常性银屑病患者PBMC中IFN-γ+Th1细胞的数量、IL-17+Th17细胞的数量均高于健康对照组(P<0.01);Th1/Th17比值低于健康对照组(P<0.01),Th17细胞的数量与PASI呈正相关(P<0.01,r=0.726),Th1/Th17细胞比值与PASI指数呈负相关(P<0.01,r=0.573)。结论寻常性银屑病患者外周血存在Th1/Th17细胞失衡现象,Th1/Th17比值变化可能参与银屑病患者的免疫学发病机制。     

Expression of IRF-4 and IBP in skin lesions of patients with psoriasis vulgaris

The expression of the interferon regulatory factor 4 (IRF-4) and the IRF-4-binding pro-tein (IBP) in psoriatic skin lesions was investigated. The expression of IRF-4 and IBP in skin lesions of 20 patients with psoriasis vulgaris were immunohistochemically dectected. Normal skin from 10 healthy people was used as normal control. The study showed that expression of IRF-4 was increased significantly in keratinocytes and inflammatory cells in the lesions of psoriasis vulgaris than that in the normal control. The detection revealed that IBP expression in keratinocytes, lymphocytes, hair follicles, and sebaceous glands in normal skin was significantly lower than that in the lesions of pso-riasis vulgaris (P<0.05). Both IRF-4 and IBP might be involved in the pathogenesis of psoriasis vul-garis.     

共刺激分子异常介导寻常型银屑病免疫失衡的实验研究

目的通过检查外周血免疫细胞共刺激分子和细胞因子表达格局,分析寻常性银屑病患者可能发生的免疫异常。方法选择未经治疗的寻常型银屑病患者与正常对照组,抽取外周血并分离单个核细胞(peripheral bloodmonocytes,PBMC),采用RT-PCR对寻常型银屑病患者和正常对照组外周血CD86、B7H1、Foxp3、T-bet、GATA-3指标进行检测。采用流式细胞仪检查两组外周血清中IL-12、IFN-γ、IL-17、IL-2、IL-10、IL-9、IL-22、IL-6、IL-13、IL-4、IL-5、IL-1β、TNF-α含量。结果寻常型银屑病组PBMC中Foxp3和GATA3表达低于正常人群,但T-bet表达增高(P<0.05)。寻常型银屑病患者TNF-α明显高于正常对照组(P<0.05)。寻常型银屑病患者CD86相对表达量(0.3636±0.1003)明显高于对照组(0.1061±0.03883)(P<0.05);而B7H1相对表达量(0.06876±0.03145)明显低于对照组(0.3401±0.1152)(P<0.05)。结论寻常型银屑病患者Th1亚群增加、TNFa水平增高,而Th2和调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)亚群明显降低;寻常型银屑病患者外周血抗原递呈细胞(antigen present cells,APC)表达共刺激分子CD86增加而共抑制分子B7H1降低,提示寻常型银屑病患者体内存在的免疫功能紊乱可能是由于其APC功能异常所致。     

银屑病患者皮损间充质干细胞对HaCaT细胞增殖的影响

目的探讨银屑病患者皮损间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）对HaCaT细胞增殖的影响,揭示银屑病可能的免疫发病机制。方法寻常性银屑病患者8例,进行期4例,静止期4例,银屑病皮损面积和严重程度（PASI）评分范围为1．6—18．0,平均11．64。健康对照组8例,取自我院泌尿外科和整形外科手术切除的正常皮肤。分离、培养患者皮损与健康人皮肤MSCs,流式细胞术进行细胞鉴定;将第5代皮肤MSCs与HaCaT细胞共培养,并设自然增殖组,采用实时细胞分析系统进行HaCaT细胞增殖检测,培养74h后用细胞计数法检测HaCaT细胞的数量。结果倒置显微镜下,银屑病组与健康对照组皮肤MSCs的细胞形态相似,细胞表面抗原均高表达CD29、CD44、CD73、CDg0、CDl05,而CD34、CD45及HLA—DR表达阴性。皮肤MSCs可抑制HaCaT细胞的增殖（P〈0．05）,与健康对照相比,银屑病患者皮损MSCs抑制HaCaT细胞增殖的能力显著减弱[患者组细胞数为（2．35±0．254）×105,对照组细胞数为（2．04±0．122）×105,P〈0．05]。结论银屑病患者皮损MSCs抑制角质形成细胞增殖的能力减弱,这可能是银屑病的发病机制之一。     

NB-UVB对银屑病患者外周血RANTES的影响

目的探讨窄谱中波紫外线（NB-UVB）对寻常型银屑病患者外周血调节正常T细胞表达和分泌的活性因子（RAN-TES）的影响。方法采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测正常人和进行期寻常型银屑病患者（治疗前后）外周血血清中RAN-TES的含量。结果银屑病患者组治疗前外周血RANTES的表达明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。所有患者治疗后外周血RANTES的表达均下降,与对照组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。患者治疗前、后外周血RAN-TES的表达差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 NB-UVB可能通过降低外周血RANTES的含量达到治疗银屑病的目的。     

蕈样肉芽肿患者HLA-DR、LFA-1、ICAM-1、CD4和CD8抗原的表达

目的:探讨蕈样肉芽肿(MF)患者外周血淋巴细胞和皮损中人白细胞DR抗原(HLA-DR)、淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、分化群抗原4、8(CD4、CD8)抗原表达及其意义。方法:应用流式细胞仪和免疫组化技术检测15例MF患者的外周血和皮损HLA-DR、LFA-1、ICAM-1、CD4、CD8抗原的表达并与正常人相比较。结果:MF患者外周血HLA-DR 、LFA-1 及ICAM-1 淋巴细胞比正常对照增高(P均<0.01);MF患者外周血CD4 淋巴细胞较正常对照下降(P<0.001);MF患者皮损中HLA-DR 细胞、CD4 细胞、CD8 细胞及LFA-1 、ICAM-1 细胞的表达均比正常对照增高。结论:MF患者外周血淋巴细胞和皮损HLA-DR和LFA-1、ICAM-1、CD4、CD8抗原表达普遍存在异常,与MF的发病密切相关。     

雷公藤多甙对银屑病患者T淋巴细胞亚群的作用及意义

目的 为了进一步了解银屑病发病与T淋巴细胞亚群的关系，探讨雷公藤多甙治疗进行期寻常型银屑病可能的发病机制。方法 将30例进行期建党型银屑病患者用雷公藤多甙治疗，同时取30例相应条件的正常人作为对照组。采用流式细胞信仪进行检测，观察患者组治疗前后与正常对照组外周血T淋巴细胞亚群的变化情况。结果 进行期银屑病患者治疗前外周血CD4^ 、CD4^ /CD8^ 、CD3^ 均较正常对照组显著降低，而CD8^ 升高，在治疗后CD3^ 、CD4^ 、CD4^ /CD8^ 较为正常。而CD8^ 无明显变化。结论 T淋巴细胞亚群CD4^ 、CD8^ 在银屑病发病中具有重要作用。雷公藤多甙是治疗进行期银屑病的一个有效药物，它的治疗作用可能是通过抑制T细胞活化而实现的。     

A preliminary screening study on the associated proteins in human psoriasis vulgaris by serum proteomics technologies

Objective：To investigate the optimum screening conditions of associated proteins in human psoriasis vulgaris by serum proteomics technique, and to screen the different expression proteins related with psoriasis vulgaris. Methods：Serum samples of peripheral blood were collected from newly diagnosed psoriasis vulgaris patients in the clinic, and 20 matched healthy persons. Serum albumin IgG was removed by filtering with ProteoExtract Albumin/IgG. After comparative proteomics analysis the different protein spots were identified using 2-DE and MS. Results ：Electrophoresis figures with high resolution and reproducibility were obtained. Three different expression proteins were found only in the serum from psoriasis vulgaris patients, while nine other different proteins expressing from healthy volunteers. Conclusion：The protein expression was different in the serum between the psoriasis vulgaris patients and healthy volunteers. It was hoped that we could find the biomarkers related to psoriasis vulgaris by using proteomics.     

NB-UVB对银屑病患者外周血MCP-1及MIP-1α的影响

目的探讨窄谱中波紫外线(NB-UVB)对寻常型银屑病患者外周血单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)的影响。方法利用酶联免疫吸附法检测患者治疗前后和正常人血清中MCP-1及MIP-1α的值。结果寻常型银屑病患者外周血MCP-1及MIP-1α的值都明显高于正常人;照射治疗15次后,外周血中MCP-1明显降低(P<0.01),而MIP-1α却未见明显变化(P>0.05)。结论本研究提示NB-UVB可能通过降低外周血中MCP-1的含量而达到治疗银屑病的目的。     

氨甲蝶呤调控调节性T细胞数量及Foxp3表达在银屑病治疗中的作用

目的：探讨氨甲蝶呤(methotrexate,MTX)对调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)细胞数量及关键转录因子 Foxp3 mRNA的影响。方法：1)收集初诊的寻常型银屑病患者、健康对照者和经MTX治疗8周后疗效显著的寻常型银屑 病患者入组,抽取外周抗凝静脉血并分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用流式细胞 术(fl ow cytometry, FCM)检测Treg细胞数量,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测PBMC 中Foxp3 mRNA表达水平;2)将咪喹莫特(imiquimod,IMQ)连续外用在BALB/c小鼠背部,观察6 d,每天拍照记录小鼠 皮损变化,根据银屑病面积和严重程度指数(psoriasis area and severity index,PASI)进行评分,将小鼠皮损进行HE染色 观察其病理改变;3)在IMQ诱导中期(第3天)使用不同剂量MTX(38.5和77.0 nmol/L)进行小鼠腹腔内注射1次,同时设 置PBS组和阴性对照组,肉眼观察各组皮损外观并用HE染色方法观察皮损组织病理改变,观察6 d;随后采用FCM检 测小鼠脾淋巴细胞中Treg细胞数量,qRT-PCR法检测脾淋巴细胞Foxp3 mRNA表达水平。结果：1)在银屑病患者外周血 PBMC中Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达水平比健康对照者明显降低(P<0.05);用MTX治疗8周后疗效显著的寻常型银 屑病患者外周血Treg细胞的数量显著高于治疗前水平(P<0.05),Foxp3 mRNA表达水平显著升高(P<0.01);2)由IMQ诱 导的BALB/c小鼠表现出银屑病样的皮损外观及组织病理学改变,其脾淋巴细胞中Treg细胞数量下降(P<0.01),Foxp3 mRNA表达水平降低(P<0.05);3)使用不同剂量MTX于BALB/c小鼠腹腔内注射可有效缓解其银屑病样皮炎的皮损外 观、逆转病理改变,小鼠脾淋巴细胞Treg细胞数量部分逆转,Foxp3 mRNA表达水平增高(P<0.05)。结论：MTX可以通 过调控Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达水平来治疗银屑病。     

Expression of Plasmacytoid Dendritic Cells, IRF-7, IFN-α mRNA in the Lesions of Psoriasis Vulgaris

Psoriasis is a common and chronic inflammatory skin disease associated with both genetic and environ-mental risk factors. Recent researches have focused pri-marily on the role of innate immunity in psoriasis. Type Ⅰ interferons (IFNs), as represented by IFN-α, are promptly secreted upon the interaction between micro-bial pathogens and the immune system, and activate a variety of immune effector cells that belong to the innate as well as the adaptive immune system. Plasmacytoid dendritic ce…     

寻常型银屑病治疗前后自然杀伤T细胞变化及意义

目的:通过检测寻常型银屑病患者治疗前后外周血中自然杀伤T细胞(NKT细胞)变化情况,探讨其在银屑病发病机制中的作用。方法:银屑病32例均服用阿维A胶囊,治疗前及治疗后1个月,行PASI评分并抽取空腹静脉血。采用流式细胞术检测寻常型银屑病32例患者治疗前后及健康对照组29例外周血中NKT细胞比例。结果:寻常型银屑病患者外周血中NKT细胞较正常对照组减少(P<0.05),治疗后NKT细胞增加,但仍未达到健康对照组水平。银屑病32例患者外周血中NKT细胞比例,治疗前后均与患者的PASI评分间呈负相关(治疗前r=-0.686,P<0.01;治疗后r=-0.847,P<0.01)。结论:寻常型银屑病患者NKT细胞较正常人减少,提示NKT细胞可能在银屑病发病中起重要作用。     

寻常型银屑病TWEAK/CD163在外周血中表达的初步研究

目的 初步探讨肿瘤坏死因子相关弱凋亡诱导因子(TWEAK)及CD163在寻常型银屑病（psoriasis vulgaris，PV）中的作用。方法 2016年6~12月间共收集28例PV患者和15例健康对照者外周血，ELISA法测定血清TWEAK及CD163的表达水平，real time-PCR法测定外周血TWEAK mRNA及CD163 mRNA的表达水平，流式细胞仪检测外周血中TWEAK及CD163的蛋白在单核细胞的表达比例。分析PV患者银屑病严重程度（PASI评分）与TWEAK、CD163表达的相关性。结果 纳入时28例PV均处于进展期，治疗后随访到恢复期的有10例。PV进展期血清TWEAK水平较正常对照组升高，而血清CD163水平较对照组下降，PV恢复期血清TWEAK水平较进展期下降而血清CD163水平升高；TWEAK mRNA 水平在PV低于对照组，而CD163 mRNA水平在PV和对照无明显差异；TWEAK 在单核细胞的表达率在PV进展期和恢复期均高于对照组，而CD163在单核细胞的表达率在PV进展期和恢复期均低于对照组。PV进展期和对照组单核细胞的TWEAK和CD163共表达率均高于PV恢复期（P＜0.05），而PV进展期和对照组比较差异无统计学意义。血清TWEAK水平、血清CD163水平、TWEAK及CD163在单核细胞的各自表达率和共表达率均与PV严重程度无相关性（P>0.05）。结论 TWEAK/CD163炎症信号通路可能参与了PV的发病。     

寻常性银屑病患者外周血单个核细胞TLR4mRNA表达与TNF—α相关性

目的探讨寻常性银屑病患者外周血单个核细胞（PBMC）Toll样受体4（Toll-like receptor4,TLR4）的表达变化及其与血清中TNF—Q浓度的关系。方法采用荧光定量PCR技术检测寻常性银屑病患者外周血单个核细胞TLR4mRNA的表达,并采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清TNF—α的浓度。另取30例正常人作为对照组。结果寻常性银屑病患者外周血中PBMC的TLR4mRNA的表达较正常人对照组明显增高（P〈0．01）,TLRdmRNA表达与血清TNF-α浓度变化呈正相关（P〈0．05）。结论通过单核吞噬系统TLR4介导的,TNF-α大量产生,激活炎症级联反应可能是银屑病发病的重要病理机制之一。     

免疫磁珠法检测系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞亚群及其意义

目的探求系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血T淋巴细胞CD4、CD8亚群细胞数目的变化.方法采用免疫磁珠方法(magnetic activated cell sorting,MACS)分离SLE患者外周血CD4、CD8 T淋巴细胞并计数.结果SLE患者CD4及CD4/CD8较正常对照明显减少(CD4,P=0.001;CD4/CD8,P=0.046),CD8细胞无明显差异.结论SLE患者T淋巴细胞CD4及CD8亚群及两者的平衡关系存在异常,其中以CD4 T细胞减少更加显著.     

寻常型银屑病患者皮损中IL-22与IL-22R1、STAT3、c-myc的mRNA表达及关系研究

目的探究白细胞介素-22(IL-22)及IL-22R1、信号转导和转录激活因子-3(STAT3)、原癌基因(c-myc)在银屑病表皮异常增殖中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对23例寻常型银屑病患者皮损和11例正常人皮肤中IL-22、IL-22R1、STAT3、c-myc的mRNA水平进行检测。结果 IL-22、IL-22R1、STAT3、c-myc的mRNA在寻常型银屑病皮损中和正常人皮肤中均呈阳性表达;但在寻常型银屑病皮损中的表达水平较正常人组明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。IL-22的mRNA水平与IL-22R1、STAT3的mRNA水平呈正相关(P0.05);STAT3的mRNA水平与c-myc的mRNA水平呈正相关(P0.05)。结论 IL-22可能诱导STAT3活化导致银屑病角质形成细胞(KC)过度增殖,这为银屑病治疗提供了新的靶点。     

寻常型银屑病患者外周血线粒体DNA检测及其临床意义

目的： 分析寻常型银屑病患者外周血线粒体DNA（mtDNA）水平,并探讨其在疾病中的作用机制。方法: 收集28例寻常型银屑病患者和28例健康对照者外周血,实时荧光定量PCR检测血浆mtDNA表达。分离外周血单个核细胞,实时定量PCR检测环状GMP-AMP合酶（cyclic GMP AMP synthase,cGAS）和干扰素基因刺激物（stimulator of interferon gene,STING）mRNA表达水平。外周血单个核细胞与mtDNA共培养,ELISA检测上清液白细胞介素（interleukin,IL）-23、IL-17、干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）浓度。结果: 与健康对照组相比,银屑病组外周血mtDNA相对表达显著升高\[(2.34±0.81) vs (1.18±0.25),P<0.001］,且与银屑病皮损面积和严重程度指数（PASI）评分呈正相关（r=0.693,P<0.001）。与健康对照组相比,银屑病组外周血单个核细胞cGAS和STING mRNA相对表达均显著上升（P均<0.001）。与mtDNA共培养后,单个核细胞IL-23、IL-17、IFN-γ分泌显著增加（P均<0.001）,且与PASI评分均呈正相关（r分别为0.647,0.585,0.492,P均<0.01）。结论: 银屑病患者外周血mtDNA异常升高,可能通过活化免疫细胞cGAS/STING信号通路,参与银屑病疾病过程。