EGb761对H2O2诱导的晶状体上皮细胞增殖的影响

目的:观察银杏叶提取物(EGb761)对过氧化氢(H2O2)诱导的晶状体上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:将离体培养的SD大鼠的晶状体上皮细胞分成3组:实验组用H2O2 EGb761处理,对照组用H2O2处理,空白对照组未做任何处理。用免疫组化的方法检测上皮细胞PCNA表达,分析实验组、对照组和空白对照组的表达情况。结果:PCNA阳性细胞率:实验组由于EGb761的抑制作用,在3h为15.3±4.0(%),对照组在H2O2诱导下,3h增加至34.2±5.9(%),空白对照组仅为9.9±2.3(%)。结论:H2O2作用早期可引起晶状体上皮细胞增殖,EGb761在H2O2作用早期能减少氧化应激引起的细胞增殖。     

不同浓度17β-雌二醇对雌性大鼠晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的观察不同浓度17β-雌二醇对H2O2诱导的雌性大鼠晶状体上皮细胞凋亡的影响及其对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的调控,探讨不同浓度雌激素对晶状体上皮细胞凋亡的作用及其机制,为合理应用雌激素防治白内障提供实验依据。方法摘取健康成年雌性SD大鼠的透明晶状体48枚,随机分为6组培养:17β-雌二醇+H2O2组1、17β-雌二醇+H2O2组2、17β-雌二醇+H2O2组3、17β-雌二醇+H2O2组4、H2O2组以及空白对照组。除空白对照组外,其他组以终浓度为300μmol.L-1过氧化氢制作晶状体上皮细胞凋亡模型,并分别加入不同终浓度17β-雌二醇干预,17β-雌二醇+H2O2组1至4的17β-雌二醇干预浓度分别为1×10-8mol.L-1、1×10-7mol.L-1、1×10-6mol.L-1、1×10-5mol.L-1。于细胞恒温培养箱中孵育24h后,撕取各组晶状体前囊及赤道部囊膜铺片,采用TUNEL法检测晶状体上皮细胞凋亡率,免疫组织化学SP法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的阳性表达率。结果 TUNEL法检测晶状体上皮细胞凋亡率结果显示:17β-雌二醇+H2O2各组晶状体上皮细胞凋亡率(0.4508±0.0203、0.4245±0.0196、0.4077±0.0163、0.3770±0.0205)均显著低于H2O2组(0.9048±0.0186),差异均具有显著统计学意义(均为P=0.000),并且与17β-雌二醇的浓度呈负相关。免疫组织化学SP法检测Bcl-2及Bax阳性表达率结果显示:在空白对照组晶状体上皮细胞中,Bcl-2和Bax均有表达,且Bcl-2的表达(0.8907±0.0190)远较Bax表达(0.0777±0.0234)强;H2O2可明显降低Bcl-2表达(0.0930±0.0110),提高Bax表达(0.9248±0.0238);与H2O2组比较,17β-雌二醇可明显提高Bcl-2表达(0.5662±0.0564、0.5872±0.0441、0.6212±0.0548、0.6682±0.0568),降低Bax表达(0.4677±0.0352、0.4472±0.0451、0.4077±0.0154、0.3587±0.0310),差异均有显著统计学意义(均为P=0.000)。结论 17β-雌二醇对H2O2诱导的离体培养雌性大鼠晶状体上皮细胞的凋亡有抑制作用,此抑制作用在一定范围内与17β-雌二醇的浓度呈正相关;对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的调控可能是17β-雌二醇抑制晶状体上皮细胞凋亡的分子机制之一。     

暴露性干眼症大鼠模型角膜上皮细胞凋亡相关基因的表达

目的探讨暴露性干眼症大鼠模型角膜上皮细胞凋亡相关基因的表达与组织损伤的关系。方法25只健康成年Wistar大鼠随机分为4组实验组和1组正常组,每组5只。实验组通过睑缘缝线机械性阻止大鼠瞬目,充分暴露各组大鼠角膜0.5h、6h、24h及1周后,用角膜荧光素染色及SchirmerⅠ试验对实验组大鼠进行临床诊断;然后分别处死每组大鼠,取双眼角膜进行免疫组织化学染色,研究角膜组织中凋亡相关基因蛋白Bcl-2及Bax的表达。正常组大鼠不进行处理,处死后取双眼角膜标本按实验组同样步骤处理。结果不同实验组大鼠角膜上皮细胞Bax表达阳性细胞数与正常对照组相比增加,而Bcl-2表达阳性细胞数较对照组减少,且差异具有显著性(P<0.05);角膜上皮细胞Bax表达阳性细胞数与暴露时间呈正线性相关(r=0.76,P<0.05),而Bcl-2表达阳性细胞数与暴露时间呈负线性相关(r=-0.57,P<0.05)。结论暴露性干眼症角膜组织中上皮细胞凋亡可能是导致角膜上皮破坏进而功能丧失的原因之一,Bax增加及Bcl-2减少与角膜上皮细胞凋亡有关。     

阿司匹林对体外培养的人晶状体上皮细胞凋亡调节基因表达的影响

目的:研究阿司匹林(Asp)对培养的人晶状体上皮细胞(humanlens epithelial cells,hLEC)Bax,Bcl-2,caspase-3表达的影响。方法:人晶状体上皮细胞系SRA01/04传代培养,MTT比色法检测Asp对bFGF诱导的hLEC增殖的影响;Western-blot方法检测Asp作用1,3,6,12,24h后凋亡相关因子Bcl-2,Bax,caspses-3蛋白的表达。结果:Asp5mmol/L可明显抑制bFGF诱导的hLEC增殖(P<0.01),且抑制作用呈浓度依赖性。Western-blot结果显示,10mmol/LAsp作用1h后Bax蛋白表达增强,随着时间的延长,表达逐渐增加,6h达到高峰,24h后恢复至基础水平;而Bcl-2的表达与其相反,Asp作用1h后Bcl-2蛋白表达明显下降,6h降到最低点,然后有上升趋势。caspase-3的表达与Bax相似,Asp作用1h后caspase-3表达增加,6h达到高峰,持续24h仍有较高的表达。结论:凋亡因子Bcl-2,Bax,caspase-3参与了Asp诱导的人晶状体上皮细胞凋亡途径。Asp通过调节凋亡基因蛋白产物的表达,诱导hLEC的凋亡。     

枸杞多糖对H2O2诱导人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对H2O2诱导人晶状体上皮细胞(SRA01/04)氧化应激损伤的保护作用.方法 将SRA01/04细胞传代培养24h后,加入不同浓度(50 mg·L-1、100 mg·L-1、200 mg·L-1、400 mg·L-1、800 mg·L-1和1600 mg·L-1)LBP预处理24 h,之后加入200 μmol·L-1H2O2继续培养24 h,用CCK-8检测LBP对H2O2诱导的SRA01/04细胞活力的影响并筛选出LBP最佳保护浓度用于后续实验.采用流式细胞仪检测SRA01/04细胞凋亡率和线粒体膜电位变化情况,Western blot检测各组凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达情况.结果 CCK-8检测结果显示:LBP浓度为200 mg·L-1和400 mg·L-1时,能够促进SRA01/04细胞增殖,细胞存活率分别为(121.10±5.56)％和(128.20 ±3.79)％,与对照组(99.98±4.73)％比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).H2O2模型组SRA01/04细胞经氧化应激损伤后,细胞存活率(51.67±4.91)％明显降低,与对照组(99.67±2.52)％相比,差异有统计学意义(P ＜0.001).用200 mg·L-1和400mg·L-1 LBP预处理后,SRA01/04细胞存活率明显提高至(74.01±3.21)％及(84.67±4.33)％,与H2O2模型组比较差异均有统计学意义(均为P＜0.01).400 mg·L-1 LBP对RA01/04细胞氧化应激损伤保护作用最大.流式细胞仪检测结果显示:对照组细胞凋亡率为(5.1±1.2)％;H2O2模型组细胞凋亡率为(25.9±1.5)％;400 mg·L-1 LBP预处理后,细胞凋亡率降至(13.8±1.2)％,与H2O2模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).线粒体膜电位检测结果显示:对照组阳性细胞数最多,线粒体膜电位高;H2O2模型组阳性细胞数最少,线粒体膜电位低;400 mg·L-1 LBP预处理后,阳性细胞数增多及线粒体膜电位升高,与H2O2模型组相比,差异有统计学意义(P＜0.001).Western blot检测显示:与对照组相比,H2O2模型组Bcl-2表达下降,Bax表达上升(P＜0.01);经400 mg·L-1 LBP预处理后,Bcl-2表达上升,Bax表达下降,与H2O2模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 LBP对H2O2诱导人晶状体上皮细胞的氧化应激损伤具有保护作用,可抑制细胞凋亡.     

N-乙酰-5-羟色胺(NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响

目的 探讨N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响.方法 取健康成年Sprague-Dawley大鼠66只,采用随机数字表法随机分为正常对照组(6只)、缺血再灌注组(30只)与药物组(30只),药物组于造模前30 min腹腔注射5 mg·kg-1NAS,缺血再灌注组腹腔注射同等剂量的生理盐水,缺血再灌注组与药物组按RIRI后时间,分为6h、12 h、24 h、48 h、72 h五个亚组.采用HE染色法观察各组视网膜形态学变化,免疫组织化学染色检测各组大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达.结果 HE染色显示正常对照组大鼠视网膜结构清晰,各层细胞排列紧密;缺血再灌注组大鼠RIRI后6h、12 h视网膜各层高度水肿,24h后水肿逐渐减轻,神经节细胞逐渐减少,分布较紊乱,随着时间延长,视网膜神经节细胞大片缺失;药物组6h、12h较缺血再灌注组细胞水肿明显减轻,24h、48 h、72h组较缺血再灌注组细胞排列规整,神经节细胞数量减少减轻.缺血再灌注组视网膜活性Caspase-3阳性细胞数在灌注后6h开始表达增加,阳性细胞数为(561.15±37.19)个·mm-2,24 h达到较高水平,阳性细胞数为(1522.61±84.36)个·mm-2,随后逐渐下降,药物组视网膜各时间点活性Caspase-3阳性细胞数均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常对照组视网膜可见大量Bcl-2阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6 h Bcl-2阳性细胞开始下降,12h后继续减少,24h降至较低水平;药物组各时间点Bcl-2阳性细胞数均显著多于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常对照组大鼠视网膜几乎未见Bax阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6h神经节细胞层及内核层可见Bax阳性细胞,24h达到较高水平,48 h开始下降;药物组各时间点Bax阳性细胞均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 NAS可促进RIRI大鼠视网膜Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,降低活性Caspase-3蛋白表达,减轻细胞凋亡,具有神经保护作用.     

枸杞多糖对氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的调控

目的:研究枸杞多糖(lycium barbarum polysaccha-rides,LBP)对实验性氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞(lens ep- ithelial cell,LEC)凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的调控。方法:复制大鼠晶状体氧化损伤模型,同时加入终浓度为1g/L的枸杞多糖共同孵育24h后,取晶状体前囊膜采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果:Bcl-2和Bax在正常SD大鼠LEC中均有表达,Bcl-2的表达远较Bax表达强。H_2O_2组Bcl-2表达显著下调,Bax表达显著上调(Ridit检验,R_1值分别为0.97和0,P<0.01,差异均有非常显著性),Bcl-2/Bax比率下降。枸杞多糖可明显上调Bcl-2表达,下调Bax的表达(与H_2O_2组比较,P值均<0.01,差异有非常显著性),Bcl-2/Bax比率上升;其改变幅度与白内停组相比差异均有显著性(P值均<0.05)。结论:氧化损伤诱导LEC凋亡和枸杞多糖抑制LEC凋亡的分子机制可能与调控凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达有关。     

硅油并发性白内障和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中凋亡因子的表达差异

目的:分析硅油并发性白内障和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中凋亡因子的表达差异.方法:将我院2014-03/2016-03收治的硅油并发性白内障患者50例50眼作为研究组,另选同期收治年龄相关性白内障患者50例50眼作为对照组,两组患者均已如实掌握此次研究方案具体内容并签署知情同意书后对其晶状体上皮细胞中凋亡因子的表达进行测定和比较.结果:研究组Bcl-2蛋白表达阳性率92％、Bax蛋白表达阳性率100％、Caspase-3蛋白表达阳性率100％,而同期对照组Bcl-2蛋白表达阳性率80％、Bax蛋白表达阳性率84％、Caspase-3蛋白表达阳性率82％,组间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:硅油并发性白内障晶状体上皮细胞中凋亡因子的表达显著高于年龄相关性白内障,提示晶状体上皮细胞中部分凋亡因子全程参与硅油并发性白内障的发生发展过程.     

外源性H2S预处理对大鼠RIRI细胞凋亡的影响

目的:探讨气体信号分子硫化氢(H2S)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)过程中细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:以硫氢化钠(NaHS)作为H2S的供体。将54只SD大鼠随机分成正常组、视网膜缺血再灌注损伤组(RIRI组)及硫氢化钠(NaHS)干预组,后两组进一步分为再灌注后6,24,48,72h组。采用前房灌注加压的方法建立RIRI模型,TUNEL法检测视网膜神经细胞凋亡,免疫组织化学法检测视网膜组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果:细胞凋亡出现于缺血灌注后6h,并逐渐递增,24h达到高峰,48h开始下降。与RIRI组比,NaHS组Bcl-2蛋白表达增多,Bax蛋白表达减少(均P<0.05)。结论:H2S预处理可通过上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达、升高Bcl-2/Bax比值从而调控细胞凋亡,对大鼠RIRI进行保护作用。     

辅酶Q10对大鼠紫外线光损伤角膜上皮细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 研究辅酶Q10对紫外线所致角膜上皮细胞光损伤防护作用.方法 36只wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、阳性对照组与辅酶Q10治疗组.紫外线连续照射24 h建立角膜上皮紫外线光损伤模型.治疗组于光照前3周每天辅酶Q10灌胃.观察角膜组织病理学改变并用免疫组化染色观察凋亡相关基因蛋白Bcl-2、Bax、Fas和FasL的表达,进行细胞计数与统计学检验.结果 正常对照组角膜上皮可以见到Bcl-2、Fas和FasL的阳性表达,很少见到Bax的阳性表达.阳性对照组和辅酶Q10治疗组均可以见到Bcl-2、Bax、Fas和FasL的表达.与正常组比较,阳性组Bcl-2表达阳性的角膜上皮细胞数显著减少,Bax表达阳性的角膜上皮细胞数显著增多(P＜0.01);治疗组Bcl-2、Bax表达阳性的细胞数与正常组相比无明显变化(P＞0.05);而阳性组Fas和FasL表达阳性的角膜上皮细胞数明显增多(P＜0.01),治疗组Fas和FasL表达阳性细胞数明显少于阳性组(P＜0.05).结论 辅酶Q10通过上调Bcl-2的表达,下调Bax、Fas和FasL的表达,能够阻抑凋亡过程和细胞的死亡.     

硫化氢对H2O2诱导的视网膜神经节细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨硫化氢对H2O2诱导的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)-5氧化损伤的保护作用及可能机制.方法 将RGC-5分为4组,RGC-5组为正常对照组;RGC-5+ H2O2组:RGC-5在500 μmol·L-H2 O2中培养24 h诱导氧化损伤;RGC-5+ NaHS+ H2O2组:RGC-5置于50μmol·L-1NaHS中30 min后在500 μmol·L-1H2O2中培养24 h;RGC-5+ NaHS组:RGC-5置于50 μmol·L-1 NaHS中30 min.Western blot检测线粒体内、外细胞色素C和视神经萎缩蛋白1(optic atrophy 1,OPA1)表达;用荧光探针JC-1检测线粒体膜电位,用透射电镜观察线粒体形态.结果 与RGC-5组相比,RGC-5+ H2O2组RGC-5细胞质内细胞色素C表达增加,而线粒体内的OPA1表达减少(均为P＜0.05).RGC-5组和RGC-5+ NaHS+ H2O2组线粒体内、外细胞色素C的表达差异均无统计学意义(均为P＞0.05).与RGC-5组相比,RGC-5+ NaHS组细胞质内细胞色素C表达减少,而线粒体内的细胞色素C表达增加(均为P＜0.05).与RGC-5组相比,RGC-5+H2O2组RGC-5细胞质内OPA1表达显著增加,而线粒体内的OPA1表达减少(均为P＜0.05).RGC-5+ NaHS+H2O2组和RGC-5+NaHS组RGC6线粒体内、外OPA1的表达与RGC-5组相似,差异均无统计学意义(均为P＞0.05).RGC6 +H2O2组线粒体膜电位与其他3组比较明显下降,其余3组间线粒体膜电位比较,差异无统计学意义(P＞0.05).RGC-5+H2O2组线粒体肿胀呈球状,而其余3组线粒体肿胀不明显.结论 硫化氢可能通过阻止线粒体释放OPA1来减轻H2O2导致的RGC-5氧化损伤.     

Profile of pO2. Regulation of papillary pO2]

PO2 measurements using a double barelled recess type microelectrodes were measured in the optic nerve head of miniature pigs during systemic hyperoxia (100% oxygen breathing) and variations of the systemic blood pressure by intravenous injection of Adrenaline or trinitrine. During either systemic hyperoxia, or progressive variations of blood pressure, the intervascular PO2 remained stable. These results suggest a regulation of the tissue PO2 of the optic nerve head, as the retina does, at constant values.     

配戴亲水软性角膜接触镜治疗青光眼大疱性角膜病变

目的：评价配戴亲水软性角膜接触镜治疗绝对期青光眼导致的大疱性角膜病变的疗效及安全性。方法：给５６ 例５６ 眼因年老体弱,不能或不愿手术治疗而症状明显的绝对期青光眼大疱性角膜病变患者长期连续配戴软性角膜接触镜治疗,并戴镜滴用抗生素及皮质类固醇眼液。结果：大疱性角膜病变症状在戴镜后１ ～３ 天内明显改善者９８．２％ ,１ 周内均解除者９６．４％ 。有８９．２％ 的病例连续戴镜不取出超过３ 个月,平均８ ．８±１０．２ 个月。仅３２．１％ 的患眼出现角膜新生血管,未见继发感染者。结论：连续配戴亲水软性角膜接触镜能解除绝对期青光眼所致的大疱性角膜病变症状,且安全、简便、易行,尤其适用于不能或不愿接受手术治疗的患者。     

Expression of P2Y1, P2Y2, P2Y4, and P2Y6 receptor subtypes in the rat retina

PURPOSE: To elucidate the expression pattern of different types of metabotropic P2Y receptors in the adult rat retina. METHODS: Qualitative RT-PCR was used to investigate the expression profile of different P2Y receptor subtypes (P2Y1, P2Y2, P2Y4, and P2Y6), and in situ hybridization studies were performed to show their cellular localization within the retina. Immunohistochemical staining was used to detect the corresponding P2Y proteins (P2Y1, P2Y2, and P2Y4) and their cellular localization. Southern blot analysis and sequencing verified the identity of the P2Y PCR products. RESULTS: RT-PCR revealed the presence of P2Y1, -2, -4, and -6 mRNA in the neural retina and the retinal pigment epithelium (RPE) and choroid. In situ hybridization showed labeling in the retinal ganglion cell layer for all four P2Y receptor subtypes, although the intensity varied. In addition, staining for P2Y1, -4, and -6 mRNA was shown in the inner nuclear layer, but was absent for the P2Y2 receptor subtype. Immunohistochemistry showed intense staining for P2Y1, -2, and -4 in the ganglion cell layer and the outer plexiform layer. There was also a specific subtype staining in the inner plexiform layer (P2Y2, -4), the inner (P2Y1, -4) and outer (P2Y1) nuclear layers and the inner segments of the photoreceptors (P2Y1, -2). discussion. The data suggest that extracellular nucleotides may play complex roles as autocrine-paracrine mediators and may have neuromodulatory effects in the retina through metabotropic P2Y receptors.     

Comparison of 2 A-scans

PURPOSE: To compare 2 A-scan instruments with regard to differences in measured results for the same patient sample. SETTING: St. Erik's Eye Hospital, Stockholm, Sweden. METHODS: In a study to evaluate the lens-haptic plane concept of intraocular lens (IOL) power calculation, 148 patients eligible for cataract surgery were measured with 2 different A-scan instruments (BVI Axis and Sonomed 1500). The axial length (AL), anterior chamber depth (ACD), and lens thickness (LT) results were analyzed for systematic differences and random errors. RESULTS: The Sonomed 1500 measured systematically longer than the BVI Axis for AL (0.41 mm) and ACD (0.28 mm), although the correlation was good (r = 0.99 and r = 0.87, respectively). The LT correlated poorly (r = 0.18) and showed no systematic trend. The relative random errors (standard deviations) in ACD (7.2%) and LT (18.6%) were larger than that of the AL (0.8%). The systematic difference in the AL corresponds to a 1.0 diopter difference in the A-constant. CONCLUSIONS: The large random errors in the ACD and LT reduce their value as predictors of postoperative IOL position in formulas that use them. Systematic differences in AL can be large enough to require separate formula constants for different pieces of equipment. If this is the situation in 1 setting, there is a risk of mistakes. This confusion could be avoided if there were an agreed standard and a universal calibration procedure for instruments intended for AL measurement.