转肿瘤坏死因子-α基因的肿瘤引流淋巴结细胞对人舌鳞癌SCID鼠移植瘤的生长抑制作用

目的探讨在体外具有强大抗瘤活性的经肿瘤坏死因子-α（TNF-α）基因转导的肿瘤引流淋巴结细胞（DNL）在体内的抑瘤效果以及与平阳星（PYC）联合应用的可行性。方法将舌鳞癌细胞系Tca8113细胞注入SCID鼠背部皮下建立移植瘤模型，取经TNF-α基因转导的DNL细胞在肿瘤区局部注射，联合应用低剂量PYC，观察肿瘤生长情况。至第8周以瘤重计算抑瘤率，并取瘤体标本经处理后作电镜和TUNEL检查，观察细胞凋亡情况。结果TNF/DNL加重组白细胞介素-2（rIL-2）组和TNF/DNL加rIL-2加PYC组抑瘤率均较高，2组间差异有统计学意义（P<0.05）；TNF/DNL加rIL-2组超微电镜及TUNEL检测均见凋亡细胞，与对照组相比，凋亡指数（AI）较高（P<0.05）。结论经TNF-α基因转导的DNL局部应用具有明显的抑瘤效果，与PYC联合应用抑瘤效果更大。诱导肿瘤细胞凋亡可能是TNF/DNL抗人舌鳞癌的重要机制之一。     

TNF—α基因修饰口腔鳞癌DNL生物学及免疫学特征研究

作者观察了转导及未转导ＴＮＦ－α基因的ＤＮＬ在含ｒＩＬ－２培养基中，以及转导基因ＤＮＬ在不含ｒＩＬ－２培养基中特性；并应用流式细胞仪对及未转导基因ＤＮＬ的ＤＮＡ指数、细胞周期、免疫表型进行屯分析。     

实验动物瘤周注射转TNF-α基因的舌癌DNL在体内分布的研究

目的　探讨肿瘤周围注射经TNF α基因转导的舌癌引流淋巴结淋巴细胞 (DNL)体内分布的特点。方法　在建立人舌癌原位移植模型基础上 ,用氚标胸腺嘧啶核苷 (3H TdR)标记转TNF基因的舌癌DNL后肿瘤周围注射 ,分别检测注射后 6h、1 2h、2 4h、48h、1 68h肿瘤组织及各脏器单位重量的放射活性 (衰变率 ,DPM)。结果　各重要脏器及血液中单位重量的TNF/DNL在不同的时间由高到低依次是 :1 2h瘤、脾、肝、肺 ,2 4、48、1 68h瘤、脾、肺、肝。瘤体单位重量DPM最高 ,平均是正常组织的 1 0 .9倍 ,是外周血的 1 2 .5倍。结论　肿瘤部位注射可提高肿瘤局部的TNF/DNL细胞量 ,可望发挥更好的抑瘤效果     

放射联合淋巴细胞对腺样囊性癌的抗瘤效应

目的 探索放射联合聩瘤引流区淋巴结淋巴细胞（ｔｕｍｏｒ ｄｒａｉｎｉｎｇ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ,ＤＮＬ对肿瘤细胞的作用。方法 取首次治疗病理证实的口腔癌患者颈清扫淋巴结,经常规消化、分离,加白细胞介素２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２,ＩＬ－２）培养,获取激活的淋巴细胞作为效应细胞,以效靶比（Ｅ：Ｔ）２５：１进行集落形成试验,观察对人涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞析（ａｄｅｎｏｉｄ     

TNF-α基因转导的Tca8113细胞体外诱导DNL的细胞毒活性

目的:探讨TNF鄄α基因转导的人舌癌Tca8113细胞在体外能否诱导口腔鳞癌的引流区淋巴结细胞(DNL)而提高起其细胞毒活性。方法:体外用逆转录病毒载体将TNF鄄α基因导入Tca8113细胞并进行放射灭活,灭活的转基因细胞与来自舌鳞癌患者的DNL共培养后,采用LDH释放改良法检测诱导后DNL对未转基因Tca8113细胞的杀伤活性。结果:转基因Tca8113细胞诱导的DNL对未转基因Tca8113细胞的杀伤活性高于未经诱导的DNL。结论:TNF鄄α基因修饰的Tca8113细胞能够从肿瘤引流区淋巴结细胞中诱导出高细胞毒活性的免疫活性细胞,诱导出的免疫细胞中可能含有CTL。     

转导TNF-α基因的口腔癌DNL中辅助病毒基因的检测

通过逆转录病毒介导将ＴＮＦ－α基因导入口腔癌ＤＮＬ中，应用ＰＣＲ技术对转导基因ＤＮＬ中ｅｎｖ基因进行了检测。结果转导基因ＤＮＬ中无ｅｎｖ基因存在，证明将外源基因导入ＤＮＬ时无辅助病毒导入，为应用转导ＴＮＦ－α基因ＤＮＬ治疗人体口腔癌提供安全保证     

平阳霉素固体植入式缓释剂间质化疗口腔鳞癌的实验研究

目的:制备含平阳霉素(PYM)原料药的可吸收固体植入式缓释剂,导入荷瘤裸鼠瘤体,实施组织内间质化疗,评价其抗肿瘤效应。方法:20只人舌鳞癌荷瘤裸鼠,随机分为5组,进行不同处理:①PYM固体缓释剂间质化疗;②PYM静脉化疗;③PYM瘤内注射;④缓释剂辅料瘤内植入;⑤生理盐水静脉注射空白对照。分别以肿瘤体积、组织学、分子生物学检测(TUNEL)和流式细胞术评价各组的抑瘤率、肿瘤细胞生长状态、凋亡指数及凋亡率,用SAS6.2软件包对抑瘤率、肿瘤细胞凋亡指数及凋亡率进行F检验。结果:①各组抑瘤率分别为(93.12±8.26)%(间质化疗组)、(57.57±2.90)%(静脉化疗组)、(55.20±4.28)%(瘤内注射组)和(22.48±3.74)%(辅料植入组);各组肿瘤细胞凋亡指数:15.88±0.80(间质化疗组)、6.80±0.59(静脉化疗组)、7.13±0.19(瘤内注射组)、3.0±0.37(辅料植入组)和2.2±0.18(生理盐水静注空白对照组);各组肿瘤细胞的凋亡率为:间质化疗组(27.80±13.78)%、瘤内注射组(13.13±0.35)%、静脉化疗组(6.81±0.89)%、辅料植入组(2.72±1.55)%和生理盐水静脉注射空白对照组(1.05±1.19)%。间质化疗组抑瘤率、肿瘤细胞凋亡指数及凋亡率显著高于其他各组(P<0.05);②间质化疗组肿瘤细胞增殖力下降,核分裂像罕见,细胞大量死亡或凋亡。结论:PYM固体植入式缓释剂间质化疗的抗癌效应优于其他给药方式,在体表肿瘤特别是口腔癌治疗中的应用前景乐观。     

顺铂双路疗法在晚期口腔鳞癌治疗中的作用

目的 研究顺铂双路化疗在晚期口腔鳞癌治疗中的作用。方法 采用颈外动脉插管灌注顺铂、平阳霉素及５－氟脲嘧啶,同时静脉滴注硫代硫酸钠解毒的方法治疗晚期口腔鳞癌２３例,连续使用５－７ｄ为一疗程,顺铂的总剂量达１５０ｍｇ以上时进行疗效判断。结果 除１例因插管后出现暂时性肢瘫拒绝化疗,１例顺铂剂量不足１５０ｍｇ外,特效７例、显效１１例、无效３例（肿瘤缩小不足５０％）,总有效率８５．７％。除Ⅰ～Ⅱ级的胃肠道反     

口腔颌面肿瘤活检标本对化疗药物敏感性的研究

目的 检测口腔颌面部癌肿活检标的体外化疗药物敏感性，明确临床常用各种化疗药物对口腔癌敏感性差别。方法 150例口腔癌化疗前活检新鲜组织标本行改变MTT药敏检测。检测用药是顺铂、5－氟尿嘧啶、平阳霉素、紫杉醇、替尼泊苷、表阿霉素、长春地辛和甲氨蝶呤8种常用化疗药物。结果 150例标本成功完成MTT药敏检测的有140例，检测成功率是93.33%。MTT药敏检测所用药物浓度是各药物峰血浆浓度的5倍。结果表明，8种药物对口腔癌细胞体外平均生长抑制率分别是：替尼泊苷63.76%、顺铂25.93%、表阿霉素25.86%、紫杉醇23.52%、平阳霉素22.97%、氟尿嘧啶22.08%、长春地辛18.42%、甲氨蝶呤18.93%；替尼泊苷对口腔颌面恶性肿瘤体外抗瘤效果显著高于其他7种化疗药物（P＜0.05)。＞40％的口腔鳞状细胞癌标本对替尼泊苷、顺铂、表阿霉素3种药物中度以上敏感；＞40％的腺源性口腔癌标本对替尼泊苷、紫杉醇和表阿霉互中度以上敏感。结论 大多数口腔颌面部癌肿对替尼泊苷敏感，顺铂、表阿霉素和紫杉醇敏感性也较高。替尼泊苷、表阿霉素和紫杉醇是口腔颌面部恶性肿瘤有潜力的化疗药物，其敏感性强于长春地辛、氟尿嘧啶和甲氨蝶呤。临床上应用改良MTT药敏检测法，筛选口腔颌面部癌肿化疗的有效药物是可行的。     

平阳霉素抑制舌鳞癌细胞系的量效和时效关系及可能的抗癌机制

目的:探讨平阳霉素体外抑制口腔鳞癌细胞系的量效和时效关系及可能的抗癌机制。方法:用不同浓度的平阳霉素培养人舌鳞癌细胞系Tca8113不同时间,以MTT法和荧光显微镜观察细胞增殖抑制情况,流式细胞术分析细胞凋亡率。结果:MTT法和荧光观察显示:不同浓度平阳霉素组间细胞生长抑制率有显著差异(P<0.05),浓度越高,抗增殖效应越明显;随药物作用时间延长,肿瘤细胞生长受抑制递增(P<0.05)。流式细胞术显示:凋亡率随药物浓度增加而增加,但与作用时间长短无关。低浓度药物无法诱导细胞凋亡。结论:平阳霉素在体外能明显抑制人舌鳞癌细胞系Tca8113生长,并具有浓度和时间依赖性。其抗癌机制可能包括细胞毒作用和启动程序化死亡信号等。     

立止血和平阳霉素瘤腔内注射治疗高血流性血管瘤

目的　探讨立止血 (Reptilase)和平阳霉素 (PYM)分次间隔施行瘤腔内注射治疗口腔颌面头颈部高血流性血管瘤的方法。方法　自 1 995～ 2 0 0 0年选择 1 0 5名具有高血流性特征的血管瘤患者 ,随机分为 2组 ,一组进行立止血 +平阳霉素分次间隔瘤腔内注射 ;另一组平阳霉素瘤腔内注射。 2组患者在注射前后分别行彩超扫描和触诊检查 ,以 χ2 进行统计分析。结果　立止血 +平阳霉素组 5 9例和单纯平阳霉素组 4 6例的总有效率分别为 86 4 4 % (5 1 / 5 9)和 8 6 9% (4 / 4 6 ) ,经 χ2 检验差异有非常显著性 (P <0 0 1 )。结论　对于高血流性血管瘤所具有的PYM注入后难以在局部高浓度积聚的特点 ,利用Reptilase的类凝血酶和类凝血激酶的作用 ,能迅速的在血管瘤内生成凝血酶 ,使凝血块形成而达到血流淤滞的作用 ,此时注入的PYM能最大限度的起到治疗血管瘤的作用     

口腔鳞癌免疫化疗近期疗效的临床和病理学观察

24例T3、T4期口腔鳞癌患者随机分组后接受术前诱导治疗，其中13例行免疫化疗（沙塔林15KE＋CDDP70mg／m2＋VCR1·4mg/m2＋PYM80mg，S-PVP），11例行单纯化疗（CDDP90mg／m2＋VCR1．4mg／m2＋PYM80mg，PVP）作对照。通过对诱导治疗前后临床肿瘤大小的测量和手术切除标本的组织病理学检查．评价免疫化疗和单纯化疗的临床及病理学疗效。结果为S－PVP组的临床和病理学疗效分别为92．3％和84．6％8而PVP组则分别为727％和45．5％。S－PVP组与PVP组间在病理学疗效上有显著性差异（P＜0．05），表明术前免疫化疗的近期疗效优于单纯化疗。与临床疗效评价相比，病理学疗效评价似更为客观、准确，可作为临床疗效评价的重要补充手段。     

平阳霉素对人脐静脉内皮细胞系ECV304的抑制作用及其机制的实验研究

目的：探讨平阳霉素对人脐静脉内皮细胞系ECV304的抑制作用及其相关机制。方法：用不同浓度的平阳霉素作用ECV304细胞不同时间,以MTT法比较平阳霉素作用24、48及72h后的细胞抑制率,应用DNA电泳实验、流式细胞术分析细胞凋亡、坏死情况、细胞周期及Fas、Bcl-2蛋白的表达。结果：MTT法显示随平阳霉素浓度升高和作用时间的延长,细胞生长抑制越明显DNA电泳证实合适浓度平阳霉素作用下细胞发生凋亡,过高浓度细胞则发生坏死;流式细胞术显示细胞凋亡率和坏死率随药物浓度和作用时间增加而增高,过高浓度细胞坏死占主导;平阳霉素各浓度作用24h后,G2—M期百分率增高,S期百分率降低,G0—G1期百分率无明显变化;Fas表达随药物浓度增加而递减,Bcl-2表达随药物浓度增加而升高。结论：平阳霉素能明显抑制ECV304细胞生长,并具有浓度和时间依赖性;平阳霉素可能通过诱导凋亡和坏死作用以抑制ECV304细胞的体外生长和增殖;细胞凋亡发生在G2—M期,是通过上调Fas蛋白并下调Bcl-2蛋白的表达来实现的。     

热化疗诱导舌鳞癌CAL-27细胞免疫原性死亡的实验研究

目的:探讨平阳霉素（pingyangmycin, PYM）、热疗（hyperthermia, HT）及两者联合能否诱导舌鳞癌CAL-27细胞发生免疫原性死亡。方法:对人舌鳞癌细胞CAL-27分别进行PYM、HT及两者联合处理,采用CCK-8实验、Annexin V/PI联合染色、流式细胞术及酶联免疫吸附实验探讨不同处理方式对细胞增殖、凋亡、CRT膜表达及HMGB1分泌的影响。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:PYM抑制CAL-27细胞活性,且呈浓度依赖性（P<0.05）。PYM及HT均使CRT膜表达率升高;两者联合应用,细胞凋亡、CRT膜表达率及HMGB1分泌均较未处理组、单纯化疗组及单纯HT组升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:PYM化疗及HT均能诱导舌鳞癌CAL-27细胞CRT由胞内至膜表面转位,并促进HMGB1分泌;两者联合应用,无论在诱导凋亡还是在诱导免疫原性死亡方面,效果优于单纯PYM化疗组。     

不同剂量替尼泊苷联合化疗方案治疗口腔鳞癌的前瞻性研究

目的　前瞻性研究大、小剂量的替尼泊苷 (VM2 6)分别联合顺铂 (CDDP)和平阳霉素(PYM)对口腔颌面部鳞状细胞癌患者临床化疗效果和毒副作用。方法　共有 6 5例患者纳入研究 ,随机分为 2组 (33例和 32例 ) ,分别进行高剂量VM2 6(32 0mg)化疗方案 (PTP1)和低剂量VM2 6(15 8mg)化疗方案 (PTP2 )的治疗 ,观察、评价各自短期化疗效果和毒副反应。结果　接受高剂量VM2 6方案化疗患者 33例 ,共完成 38周期的化疗 ,化疗总有效率 (PR CR)为 81 82 % (2 7/33) ;另外32例接受低剂量VM2 6方案化疗 ,共完成 36个周期化疗 ,有效率为 81 2 5 % ,两组间化疗效果差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;两组间患者血液毒副反应差别明显 ,高剂量VM2 6化疗组的骨髓抑制率 (1～ 4级 )达到 4 8 4 8% ,明显高于低剂量VM2 6组 (2 5 0 0 % ,P <0 0 1)。结论　鉴于低剂量VM2 6化疗方案(PTP2 )治疗口腔颌面部鳞癌的有效率及相对较轻的不良反应 ,可在口腔鳞癌临床化疗中推广应用低剂量VM2 6联合CDDP、PYM组成的化疗方案。     

Synergistic effects of verapamil on pingyangmycin-induced cytotoxicity and apoptosis in KB cells

OBJECTIVES: Previous studies have shown that pingyangmycin (PYM; bleomycin A5) can induce two distinct modes of cell death (necrosis, apoptosis). At high concentrations, PYM can be considered as an apoptosis mimetic drug. In this study, we explored the possibility that the membrane-modifying agent verapamil might affect the transport function of PYM through the plasma membrane, resulting in inducing apoptosis of tumor cells at low concentration of PYM. METHODS: Cytotoxicity, flow cytometry and DNA fragmentation assays were used to detect the interaction of verapamil and PYM in human oral carcinoma cell line KB cells. RESULTS: Our results indicated that verapamil can enhance the cytotoxicity of PYM against KB cells with the non-toxic doses (P<0.05). The cell viability at a concentration of 500 microg ml-1 of PYM was 35+/-2% compared with control and 10 microg ml-1 verapamil decreased the cell viability lower to 28+/-1%. In addition, because of the synergistic effect of verapamil, KB cells apoptosis was found to be induced when treated with a lower concentration of PYM (50 microg ml-1) for 24 h by flow cytometry and DNA fragmentation assays. CONCLUSIONS: Verapamil was found to enhance PYM-induced cytotoxicity and apoptosis in KB cells. The responsiveness of PYM might be explained by the effective accumulation of PYM by verapamil in KB cells mediated by the inhibition of PYM efflux function of the cells.     

三氧化二砷抑制口腔鳞癌细胞增殖的研究

目的:体外试验研究三氧化二砷对口腔鳞癌的可能治疗作用。方法:以人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113细胞为研究对象之一,采用台盼蓝拒染法计数活细胞,观察三氧化二砷作用于Tca8113细胞的量效关系、时效关系。采用平皿法姬姆萨染色观察三氧化二砷对Tca8113细胞的克隆形成抑制作用。以舌鳞状细胞癌临床新鲜标本组织块为研究对象之二,消化后细胞悬液与各浓度三氧化二砷、一定浓度的MTX、5Fu、PYM体外培养后MTT法测定临床舌癌细胞生长抑制率。结果:三氧化二砷对Tca8113细胞、临床舌癌细胞均有显著生长抑制作用。1μmolAs2O3台盼蓝染色活细胞计数Tca8113细胞生长抑制率28.57%,克隆形成抑制率31.01%;3μmolAs2O3浓度Tca8113细胞生长抑制率58.36%,克隆形成抑制率76.63%;5μmolAs2O3浓度Tca8113细胞生长抑制率86.03%,克隆形成抑制率91.30%。体外药敏测定:1μmol浓度As2O3的临床舌癌细胞的生长抑制率39.5%,3μmol浓度As2O3为47.2%,5μmol浓度As2O3为89%,MTX为36.5%,5Fu为41.3%,PYM为58.16%。临床药敏标准一般大于30%为敏感,PYM大于50%为敏感。结论:体外试验表明三氧化二砷可显著抑制人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113细胞的生长,对临床癌细胞也表现了良好的抗增殖作用,三氧化二砷可能成为治疗口腔鳞癌的有效药物     

绞股蓝皂甙及平阳霉素对口腔鳞癌颈淋巴结转移癌细胞抑制作用的研究

目的 :探讨绞股蓝皂甙 (gypenosides,GP)及平阳霉素 (PYM )对口腔鳞癌颈淋巴结转移癌GNM细胞的体外抑制作用及作用机制。方法 :采用MTT法及流式细胞仪进行分析。结果 :GP与PYM对GNM细胞均有抑制作用 ,抑制率与药物浓度呈正相关 ,二者联用 ,抑制率增强。GP主要作用于细胞的“S”期。结论 :GP与PYM对GNM细胞具有抑制作用 ,GP对细胞的损伤是通过干扰细胞周期实现的 ,GP与PYM联用抑制作用增强在于二者作用的细胞周期不同。提示用药时可根据二者各时相时间分开应用。GP具有临床应用价值。     

口腔颌面部恶性肿瘤化疗药物敏感性临床分析

目的　恶性肿瘤化疗的一个最大问题是肿瘤对化疗药物的耐药性。MTT肿瘤药敏检测是一种定量比色体外药敏测定方法。本研究的目的是初步评价 MTT药敏检测结果对指导口腔肿瘤个体化化疗的临床意义。方法　应用 30例口腔颌面外科手术或活检的恶性肿瘤标本 ,进行常规 MTT药敏检测 ,同时将检测结果与临床资料进行对比性分析。检测药物共有 6种 :DDP、5 - Fu、VDS、MTX、E- ADM、PYM。结果　 (1)病变部位以舌部为主 ,占30 % ,药物敏感性与肿瘤部位有关 ;(2 )检测 30例口腔颌面部恶性肿瘤组织的药敏性 ,所得结果与临床资料进行分析。8例采用传统经验用药方案进行化 ,其疗效与 MTT法检测的药敏结果一致 ;(3)大部分肿瘤对 DDP、5 - Fu有中度以上敏感性 ,但也有少部分存着抗 DDP、5 - Fu现象 ,这也是临床上采用传统经验用药方案 ,有些肿瘤化疗效果不理想的原因之一。结论　通过肿瘤药敏检测 ,找出对恶性肿瘤有效的化疗药物组成联合用药方案 ,可以做到化疗方案的个体化 ,进而提高疗效     

Observation of clinical and pathological responses in short-term following immunochemotherapy for oral squamous cell carcinoma]

24 patients with oral SCC in Stage T3 or T4 were randomly divided into two groups,and treated with two inductive therapies,13 cases of whom received an immumochemotherapy regimen(Sapylin 15 KE+CDDP 70mg/m(2)+VCR 1.4mg/m(2)+PYM 80mg,S-PVP) and 11 cases,a chemotherapy regimen(CDDP 90mg/m(2)+VCR 1.4mg/m(2)+PYM 80mg,PVP) as control.The clinical response and pathological effect after immunochemotherapy or chemotherapy were evaluated through the clinical measurement of tumor size and pathological examination of the specimen.The results showed that the rate of clinical and pathological responses in S-PVP group were 92.3% and 84.6%,respectively;and in PVP group,72.7% and 45.5%.There was a significant difference between two groups in pathological effect(P<0.05),which indicated that the S-PVP regimen in short-term was better than of inductive chemotherapy.It may be relatively objective and accurate in comparison with clinical investigation which could act as an important supplement to the evaluation of clinical response.