p16基因与急性白血病

多种肿瘤抑制基因p16在细胞增殖周期调控中发挥重要作用，p16基因及其表达产物的异常改变与肿瘤的发生发展密切相关。急性白血病患者DNA中可检测到p16基因纯合缺失、突变及甲基化等异常变化，导致细胞中p16蛋白表达异常，影响细胞的正常功能。对急性白血病p16基因及其表达产物的研究，为急性白血病的药物及基因治疗提供了理论依据。     

急性白血病p53基因P1启动子区域DNA甲基化研究

目的：通过检测急性白血病（AL）中p53基因P1启动子异常甲基化，探讨p53基因异常甲基化在急性白血病中的意义。方法:分别使用限制性内切酶MspⅠ、HpaⅡ、EcoRⅡ、BstNⅠ酶切提取基因组DNA，然后分别使用酶切后产物及基因组DNA为模板进行PCR扩增。产物电泳后在凝胶成像分析系统内观测电泳条带及摄像；部分标本的电泳条带经凝胶回收纯化后进行测序。结果:急性白血病患者p53基因第一启动子甲基化阳性率为38.7％，而急性淋巴细胞白血病（ALL）与急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者分别为45.5％、35.0％。正常对照标本中未检测到p53基因的异常甲基化。p53基因甲基化情况在急性白血病病人与正常人之间经过统计学检验，P<0.05；但急性淋巴细胞白血病与急性非淋巴细胞白血病患者之间无显著差异，P>0.05。分析急性白血病患者p53基因甲基化与患者临床资料之间的关系，其中，p53基因异常甲基化与肝脾淋巴结是否肿大之间的关系经统计学分析P<0.05。结论:①部分急性白血病患者存在p53基因第一启动子异常甲基化，正常对照中未检测到p53基因的甲基化；②p53基因第一启动子在急性淋巴细胞白血病与急性非淋巴细胞白血病均可发生异常甲基化，两者之间发生甲基化的概率无统计学差异；③p53基因异常甲基化与肝脾淋巴结肿大有显著差异，但p53基因异常甲基化与急性白血病治疗效果及预后的关系尚不能确定，须进一步研究确定。     

p15基因甲基化在骨髓增生异常综合征中的变化

目的:探索p15基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征中的变化及其在各亚型中的表达。方法:采用MSP(Methylation-specific-PCR)的方法,研究p15基因异常甲基化在32例骨髓增生异常综合征(MDS)及其各亚型中的发生率。结果:在MDS中p15基因异常甲基化占50%(16/32);在各亚型中的比例为:难治性贫血(RA)为0%,难治性贫血伴环状铁粒幼细胞(RA-S)为20%(1/5),难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB)为57.1%(4/7),慢性粒单核细胞白血病(CMML)为71.4%(5/7),难治性贫血伴原始细胞转化型(RAEB-T)为85.7%(6/7)。其中4例是在亚型间转型或进展为急性髓性白血病(AML)时发生p15基因异常甲基化。结论:p15基因甲基化可能是MDS发病的原因之一,并与MDS病程进展有关;其各亚型并非独立的分型,亚型间因病情的进展而转型时易有p15基因异常甲基化的发生。     

软组织平滑肌肉瘤中p16基因的甲基化检测

目的 探讨软组织平滑肌肉瘤（ＬＭＳ）中p16基因ＩＮＫ４Ａ的甲基化状态及其与p16表达的关系。方法 应用ＭＳＰ法检测３８例软组织平滑肌肉瘤,１０例平滑肌瘤及５例正常平滑肌组织中p16基因ＩＮＫ４Ａ的甲基化状态,用免疫组织化学ＳＰ方法检测p16蛋白表达情况。结果 ３８例ＬＭＳ中９例发生异常甲基化,异常甲基化率为２３.7%（９／３８）。其中,７例p16蛋白表达阴性,２例p16蛋白弱阳性,在p16蛋白表达阴性的ＬＭＳ中,异常甲基化率为５０％（７／１４）。结论 p16基因第一外显子启动子区５‘CpG岛的异常甲基化是导致p16基因失活、蛋白缺如的重要基因外机制,并可能参与肿瘤的发生。     

膀胱移行细胞癌中p16、p53及c-erbB-2蛋白的异常表达及临床意义

目的研究膀胱癌组织中p16、p53及c-erbB-2蛋白表达,探讨其与膀胱癌病理分级、临床分期和转移的关系.方法应用免疫组化SP法对75例膀胱癌组织中p16、p53及c-erbB-2蛋白表达进行检测.结果75例膀胱癌中p16、p53及cerbB-2的阳性率分别为41.3%(31/75)、44%(33/75)和40%(30/75),p16、和c-erbB-2基因在膀胱癌中的阳性率与肿瘤病理分级和临床分期有显著性统计学意义(P＜0.05),p53及c-erbB-2阳性率与肿瘤临床分期及转移有密切的关系(P＜0.01).773%(58/75)肿瘤有上述癌基因和(或)抑癌基因的异常表达,其中53.3%(40/75)的肿瘤同时有多个基因的表达异常.结论肿瘤的多基因分析比单基因分析更有价值,癌基因c-erbB-2和抑癌基因p16、p53基因的表达异常及协同作用在膀胱癌的发生发展中起重要作用.     

胃癌中p16基因失活机制的研究进展

p16基因是一个多种肿瘤抑制基因 ,已证明与肺癌、乳腺癌、白血病等多种肿瘤的发生和发展相关。胃癌是人类高发性肿瘤之一 ,本文介绍了近年来胃癌中 p16基因纯合缺失、点突变异常 ,以及启动子区域 Cp G岛异常甲基化的研究进展。研究表明 ,p16基因失活是胃癌中的一个较常见事件 ,与胃癌的发生发展密切相关 ,而启动子区域 Cp G岛异常甲基化则是 p16基因在胃癌中失活的最主要机制。由于 p16基因作用机制为直接抑制细胞周期 ,且基因较小 ,容易进行基因操作或蛋白修饰 ,因此 ,进一步明确 p16基因失活与胃癌的关系以及 p16基因的失活机制 ,对胃癌的临床诊断、治疗和预后等方面有着重要的意义。     

乳腺癌中p16INK4a和视网膜母细胞瘤基因甲基化状况及其表达

目的 研究乳腺癌及癌旁增生组织中p16INK4a和视网膜母细胞瘤(RB)基因启动子区域的甲基化状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR方法 对46例乳腺癌、22例癌旁增生组织及7例正常乳腺组织中p16INK4a和RB基因启动子区域甲基化状况进行检测,并采用免疫组织化学SP法对p16INK4a蛋白表达情况进行相应检测.结果 乳腺癌、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因的甲基化率分别为23.9%(11/46)、18.2%(4/22)、1/7;RB基因的甲基化率分别为10.8%(5/46)、9.1%(2/22)、0(0/7);肿瘤组织、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因、RB基因甲基化率差异均无统计学意义(P>0.05).正常乳腺组织、癌旁增生组织、乳腺癌中p16INK4a蛋白表达阳性率分别为7/7、60.8%(28/46)和81.8%(18/22),三者之间差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤组织中p16INK4a蛋白表达与肿瘤分级相关(P<0.05);肿瘤组织中p16INK4a甲基化状况与其蛋白表达、肿瘤分级、ER表达阴性具有相关性(P<0.05),与肿瘤大小、淋巴结转移、年龄均不相关;RB基因甲基化状态与肿瘤分级、肿瘤大小、ER表达及年龄均无相关性,但与淋巴结转移相关(P<0.05).结论 p16INK4a基因异常甲基化可能在乳腺癌发生过程中作用有限,但在肿瘤的演进中发挥作用;RB基因甲基化检测对于分析乳腺癌进展及预后情况可能有一定参考价值;p16INK4a基因甲基化是p16INK4a蛋白失表达的机制之一.     

乳腺癌中p16INK4a和视网膜母细胞瘤基因甲基化状况及其表达

目的 研究乳腺癌及癌旁增生组织中p16INK4a和视网膜母细胞瘤(RB)基因启动子区域的甲基化状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR方法 对46例乳腺癌、22例癌旁增生组织及7例正常乳腺组织中p16INK4a和RB基因启动子区域甲基化状况进行检测,并采用免疫组织化学SP法对p16INK4a蛋白表达情况进行相应检测.结果 乳腺癌、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因的甲基化率分别为23.9%(11/46)、18.2%(4/22)、1/7;RB基因的甲基化率分别为10.8%(5/46)、9.1%(2/22)、0(0/7);肿瘤组织、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因、RB基因甲基化率差异均无统计学意义(P>0.05).正常乳腺组织、癌旁增生组织、乳腺癌中p16INK4a蛋白表达阳性率分别为7/7、60.8%(28/46)和81.8%(18/22),三者之间差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤组织中p16INK4a蛋白表达与肿瘤分级相关(P<0.05);肿瘤组织中p16INK4a甲基化状况与其蛋白表达、肿瘤分级、ER表达阴性具有相关性(P<0.05),与肿瘤大小、淋巴结转移、年龄均不相关;RB基因甲基化状态与肿瘤分级、肿瘤大小、ER表达及年龄均无相关性,但与淋巴结转移相关(P<0.05).结论 p16INK4a基因异常甲基化可能在乳腺癌发生过程中作用有限,但在肿瘤的演进中发挥作用;RB基因甲基化检测对于分析乳腺癌进展及预后情况可能有一定参考价值;p16INK4a基因甲基化是p16INK4a蛋白失表达的机制之一.     

乳腺癌中p16INK4a和视网膜母细胞瘤基因甲基化状况及其表达

目的 研究乳腺癌及癌旁增生组织中p16INK4a和视网膜母细胞瘤(RB)基因启动子区域的甲基化状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR方法 对46例乳腺癌、22例癌旁增生组织及7例正常乳腺组织中p16INK4a和RB基因启动子区域甲基化状况进行检测,并采用免疫组织化学SP法对p16INK4a蛋白表达情况进行相应检测.结果 乳腺癌、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因的甲基化率分别为23.9%(11/46)、18.2%(4/22)、1/7;RB基因的甲基化率分别为10.8%(5/46)、9.1%(2/22)、0(0/7);肿瘤组织、癌旁增生组织和正常乳腺组织中p16INK4a基因、RB基因甲基化率差异均无统计学意义(P>0.05).正常乳腺组织、癌旁增生组织、乳腺癌中p16INK4a蛋白表达阳性率分别为7/7、60.8%(28/46)和81.8%(18/22),三者之间差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤组织中p16INK4a蛋白表达与肿瘤分级相关(P<0.05);肿瘤组织中p16INK4a甲基化状况与其蛋白表达、肿瘤分级、ER表达阴性具有相关性(P<0.05),与肿瘤大小、淋巴结转移、年龄均不相关;RB基因甲基化状态与肿瘤分级、肿瘤大小、ER表达及年龄均无相关性,但与淋巴结转移相关(P<0.05).结论 p16INK4a基因异常甲基化可能在乳腺癌发生过程中作用有限,但在肿瘤的演进中发挥作用;RB基因甲基化检测对于分析乳腺癌进展及预后情况可能有一定参考价值;p16INK4a基因甲基化是p16INK4a蛋白失表达的机制之一.     

miR-31-5p在急性髓系白血病中的表达下调

目的探讨miR-31-5p在急性髓系白血病中的表达变化,及其对白血病细胞功能的影响。方法用real-time PCR方法检测miR-31-5p在白血病患者及正常人外周血单个核细胞中的表达;用miR-31-5p模拟物转染人急性髓系白血病细胞系THP-1细胞,通过CCK-8试验和流式细胞术检测细胞增殖和单核系分化;用荧光报告基因和Western blot方法检测靶基因HuR的表达;用RNAi方法干扰内源性HuR的表达,并检测THP-1细胞的增殖和单核系分化。结果 miR-31-5p在急性髓系白血病患者外周血单个核细胞中的表达显著低于正常对照(P0.05);在THP-1细胞中过表达miR-31-5p可以抑制细胞增殖,并促进细胞向单核方向分化成熟;HuR为miR-31-5p的靶基因;干扰THP-1内源的HuR表达也会对THP-1的增殖和单核分化产生调控作用。结论 miR-31-5p在急性髓系白血病发生中可通过靶向抑制HuR发挥抑癌基因功能。     

外源性野生型p53基因在两个肺腺癌细胞系中表达及对p16和p21基因的调控

目的 探讨p53基因在肺癌细胞周期中的作用机制，以及裸鼠体内基因治疗的作用。方法 用以腺病毒为载体的野生型p53基因pAdCMV-p53(Ad-p53)感染高转移肺腺癌95D细胞系和高浸润肺腺癌L-18系，对感染前后各细胞系的细胞生长曲线、p53、p16和p21基因的表达以及调亡进行分析。此外，用Ad-p53对两细胞系进行了裸鼠体内感染实验。结果 体外实验中，导入p53基因细胞系的生长均得到抑制，并且最终都出现凋亡，感染后的细胞中p53和p21基因的mRNA表达量明显增高，p16基因的mRNA表达量则无明显变化。p53基因治疗后的裸鼠，其中95D细胞系的肿瘤全部消失；L-18细胞系的腹腔注射组肿瘤全部消失，而皮下注射组无明显变化。结论 p53基因是一个有效的肿瘤抑制基因，其诱导细胞凋亡的途径与p16基因不同。腺病毒介导的野生型p53基因可以有效地控制肺癌细胞的发展和转移。     

p16基因与妇科恶性肿瘤关系的研究进展

p16基因作为 cyclin D/ CDK激酶的抑制因子 ,在细胞周期的 G1 期调控中起重要作用 ,现已发现 p16基因 m RNA和 p16基因蛋白表达异常与肿瘤的形成和转移有密切关系。本文对 p16基因在妇科恶性肿瘤的发生发展中所起的作用进行综述。     

在所有常见的人类肿瘤中CDKN2/p16MTS1基因的失活通常与异常DNA甲基化有关

在人类肿瘤中定位于染色体9p21座位上的肿瘤抑制基因CDKN2/p16 MTS1因频发纯合子缺失而失活。最近研究发现,在一些恶性肿瘤中(非小细胞肺癌,胶质瘤和头颈鳞状细胞癌)p16基因的5′CpG岛的从头甲基化是该基因常见的一种异常。这种异常甲基化与正常p16或VHL mRNA表达丢失密切相关,使用去甲基试剂5′-脱氧氮胞苷处理有异常甲基化的细胞株后可恢复每一个基因的反应活性,提示异常甲基化可能是p16基因失活的一种交     

p16基因与妇科恶性肿瘤关系的研究进展

p16基因作为cyclinD/CDK激酶的抑制因子，在细胞周期的G1期调控中起重要作用，现已发现p16基因mRNA和p16基因蛋白表达异常与肿瘤的形成和转移有密切关系。本文对p16基因在妇科恶性肿瘤的发生发展中所起的作用进行综述。     

Survivin反义寡核苷酸联合化疗药物诱导儿童急性白血病细胞凋亡的实验研究

目的研究Survivin基因在儿童急性白血病细胞中的表达,Survivin反义寡核苷酸对儿童急性白血病细胞凋亡的影响,并探讨反义寡核苷酸与传统化疗药物对白血病的协同治疗作用。方法用PCR的方法检查儿童白血病细胞Sur-vivin表达,将Survivin基因反义寡核苷酸转染入白血病细胞,用TUNEL及流式细胞仪检查各组细胞的凋亡率。结果Sur-vivin基因在儿童急性白血病细胞中高表达,Survivin反义寡核苷酸及足叶乙甙均能够单独诱导白血病细胞凋亡,两者合用时细胞凋亡率更高。结论Survivin在儿童急性白血病细胞中高表达;Survivin反义寡核苷酸可诱导白血病细胞凋亡;Sur-vivin反义寡核苷酸可促进足叶乙甙诱导的儿童急性白血病细胞凋亡。     

不同处理因素对儿童白血病细胞抗凋亡基因表达的影响

目的研究儿童白血病骨髓基质细胞(BMSCs)、VLA-4抗体、化疗药物VP-16、VLA-4抗体联合VP-16对各组白血病细胞抗凋亡基因表达的影响并探讨相关机制。方法收集初治儿童急性白血病骨髓标本,分离单个核细胞,采用RT-PCR方法检测各组白血病细胞抗凋亡基因Survivin、Bcl-2的表达。结果29例儿童急性白血病中,23例有Sur-vivin基因的表达,表达率高达79%;28例有Bcl-2基因的表达。BMSCs组抗凋亡基因Survivin、Bcl-2表达量最多,骨髓基质上清组仅次于BMSCs组,上述两组之间差异无统计学意义,但与白血病细胞单独培养组比,均有显著差异。抗体组、药物组、抗体加药物组Survivin、Bcl-2基因的表达均显著降低,差异均有统计学意义。抗体加药物组的表达量最少,与BMSCs组比,Survivin表达降低了56%左右,而Bcl-2表达量降低了71%。结论VLA-4抗体和VP-16可下调白血病细胞抗凋亡基因Survivin、Bcl-2的表达,两者联合应用,下调幅度更大。     

非小细胞肺癌p16基因异常与临床病理相关性研究

目的　探讨抑癌基因p16在非小细胞肺癌中的失活方式、mRNA和p16蛋白表达与临床病理因素的相关性。方法　应用对比性多重聚合酶链式反应检测 6 4例非小细胞肺癌中p16基因启动子的甲基化状况 ,同时应用原位杂交和免疫组织化学方法 [链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶 (SP)法 ]检测p16基因的mRNA和蛋白表达水平 ,并将上述结果与非小细胞肺癌之临床病理因素进行了相关性研究。结果　 5 6 3% (36 / 6 4 )的肺癌标本被检出有p16基因启动子甲基化 ,且甲基化与p16蛋白表达呈负相关 (P <0 0 5 ) ;免疫组织化学检测结果显示 ,5 7 8% (37/ 6 4 )的标本呈现p16蛋白表达缺失 ;原位杂交检测有 2 0 3% (13/ 6 4 )的标本被检出p16mRNA表达 ,且这 13例阳性者的p16蛋白也表达。同时具有p16基因启动子甲基化和蛋白表达缺失的非小细胞肺癌患者淋巴结转移率明显增高 ,术后生存期明显降低 (P <0 0 5 )。结论　启动子甲基化是导致非小细胞肺癌p16基因失活的主要方式 ,同时具有p16基因启动子甲基化及p16蛋白表达异常的患者预后不良     

甲状腺肿瘤p63、p16基因表达与细胞增殖活性的关系

肿瘤的发生是一个多基因参与的复杂过程,抑癌基因功能的丧失和癌基因的表达及细胞周期的调节失控等导致细胞增殖和分化异常,细胞增殖过度,分化不足,最终发展为肿瘤。为了探索p63、p16蛋白与细胞增殖活性之间的关系,我们采用免疫组化EnVision法检测p63、p16蛋白及Ki-67抗原在甲状腺肿瘤中的表达水平,探讨甲状腺肿瘤的发生、发展和基因产物间的关系。     

急性白血病患者骨髓细胞nucleostemin基因的表达与其类型、疗效的关系

目的：探讨nucleostemin（NS）基因在急性白血病中的表达及临床意义。方法:采用荧光定量PCR的方法检测67例急性白血病患者骨髓细胞nucleostemin基因表达，分析其表达与临床的关系。结果:初治急性白血病患者nucleostemin 基因的表达水平高于完全缓解组、正常对照组（P＜0.01），急性淋巴细胞白血病（ALL）患者nucleostemin表达水平低于急性非淋巴细胞白血病（ANLL）患者（P＜0.05），ANLL中M2、M3、M4、M5患者nucleostemin表达进行两两比较无显著差异（P＞0.05）,急性白血病患者nucleostemin表达水平与性别、年龄、肝、脾肿大和外周血白细胞数无明显相关（P＞0.05），nucleostemin 基因高表达的急性白血病患者的症状完全缓解（CR）率低于低表达的患者（51.3% vs 83.3%，P＜0.05）,急性白血病患者治疗达完全缓解者nucleostemin呈低表达，nucleostemin持续高表达或下降后又上升的患者呈现难治及复发。结论:Nucleostemin基因在急性白血病细胞中高表达，可作为疗效评价及监测残留病灶的指标。     

复杂核型白血病患者的p53基因异常及临床意义

目的 探讨复杂核型异常白血病患者的p53基因异常的情况及其临床意义.方法 使用间期荧光原位杂交技术(interphase fluorescence in situ hybridisation,I-FISH)分析38例复杂核型异常及24例非复杂核型异常的白血病患者的p53基因异常的情况.结果 38例复杂核型异常的白血病患者p53基因的缺失频率为44.74%(17/38),24例非复杂核型异常的缺失频率为4.16%(1/24),两者之间差异有统计学意义(P<0.01).其中13例伴复杂核型的急性白血病患者完全缓解率15.40%,中位生存时间105天.结论 I-FISH可以快速、准确、灵敏的检测出p53基因的缺失,伴复杂核型的白血病患者p53基因缺失频率较高,完全缓解率低,中位生存时间较短.