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目的　了解血管内皮细胞生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)可溶性受体sFlt 1联合内皮抑素 (Endostatin ,ES)基因治疗对甲状腺滤泡状癌细胞生长的影响 ,并探讨其作用机理。方法　 2 0 0 1年 6月至 2 0 0 3年 12月 ,采用表达ES的肿瘤细胞系FTC133 rvEndo和表达sFlt 1的 2 93 Flt1 3d细胞行动物实验 ,观察肿瘤在裸鼠模型中的生长状况。用抗CD31抗体对肿瘤切片进行免疫组织化学染色检测微血管 ,计算微血管密度 (microvesseldensity ,MVD)。检测血清中ES和VEGF浓度。结果　在裸鼠模型中 ,种植 2 8d后 ,抑瘤率sFlt1组为 70 37% ,sFlt1 ES组为 93 4 9%。免疫组化染色表明对照组MVD为 (10 2 71± 13 14 ) ;而sFlt1组为(40 76± 12 6 5 ) ,sFlt1 ES组为 (13 71± 6 2 7) ,各组间差异有显著性 (P <0 0 5 )。对照组带瘤鼠血清中人VEGF浓度为 (31 2 5± 6 2 1) pg ,而sFlt1组为每毫升 (10 5 9± 0 72 ) pg ,sFlt1 ES组为每毫升 (7 4 5± 0 81) pg ,后两者与对照组间差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　sFlt1和ES的联合应用可增强其抗肿瘤血管生成和抗甲状腺滤泡状癌肿瘤生长的作用。其机理可能与VEGF的受抑制有关。     

滤泡状甲状腺肿瘤微血管密度检测及其临床意义的探讨

目的检测甲状腺滤泡状肿瘤微血管密度 (microvesseldensity ,MVD) ,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化染色检测 4 0例甲状腺滤泡状腺癌 (follicularthyroidcarcinoma ,FTC)和 2 0例滤泡状腺瘤 (follicularadenoma,FA) ,计算MVD ,分析临床资料 ,进行t检验和 χ2 检验。结果FTC组MVD为 (2 2 8± 91)个 ,FA组MVD为 (15 6± 73)个。两组间差异有显著意义 (t=2 76 3,P <0 0 5 )。FTC组中 ,MVD与肿瘤长径和有无甲状腺外浸润有关 ,而与年龄、性别、颈淋巴结转移和预后无关。结论FTC的MVD高于FA。FTC瘤体的MVD与肿瘤长径和有无甲状腺外浸润有关。     

鼠源性血管抑素对裸鼠种植性肿瘤的抑制作用

目的　探讨鼠源性血管抑素转染入人肝癌细胞SMMC 772 1后对裸鼠种植性肿瘤的影响。　方法　建立鼠源性血管抑素基因的人肝癌SMMC 772 1细胞株 ,实验动物分 3组 :空白对照组种植SMMC 772 1细胞 ,空载体组种植SMMC 772 1/pcDNA3 1(+)细胞 ,血管抑素组种植SMMC 772 1/pcDNA3 1 mAST细胞。比较各组裸鼠肿瘤体积、重量和肿瘤微血管密度 (MVD)。　结果　在肿瘤细胞种植 35d时裸鼠肿瘤体积 :空白对照组 (35 38 1± 6 43 3)mm3 ,空载体组 (312 8 5± 5 46 6 )mm3 ,血管抑素组 (75 5 8± 198 2 )mm3 ;肿瘤重量 :空白对照组 (6 0± 0 7)g,空载体组 (5 9± 0 5 )g ,血管抑素组(2 1± 0 5 )g;肿瘤MVD :空白对照组 5 2 2± 6 6 ,空载体组 49 4± 7 0 ,血管抑素组 2 5 5± 4 1。血管抑素组裸鼠肿瘤体积、重量和MVD显著小于空白对照组和空载体组 (P均 <0 0 1) ,肿瘤的抑制率达78 6 %。　结论　转染血管抑素基因的人肝癌细胞SMMC 772 1在裸鼠体内的致瘤力明显降低 ,肿瘤的体积、重量和微血管密度显著低于对照组 ,表明血管抑素可通过抑制肿瘤血管生成而显著抑制肿瘤生长     

环氧合酶2对胰腺癌新生血管生成的调节作用及其机制

目的　探讨环氧合酶 2 (COX 2 )在胰腺癌新生血管生成中的调节作用及其作用机制。方法　应用免疫组织化学染色研究人胰腺癌组织COX 2、血管内皮细胞生长因子 (VEGF)表达 ;同时标记肿瘤新生血管内皮细胞vWF和血管壁Ⅳ型胶原 ,计算肿瘤组织微血管密度 (MVD)。建立裸鼠胰腺癌细胞株PC 3移植瘤 ,观察选择性COX 2抑制剂Celebrex对肿瘤组织MVD的影响 ,并应用免疫组织化学染色和逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)研究裸鼠移植瘤组织VEGF表达变化。结果　COX 2在人胰腺癌组织中表达阳性率为 87 5 % ,VEGF阳性率为 5 8 3%。COX 2强阳性组MVD平均值显著高于COX 2弱阳性 +阴性组 ,P <0 0 1。VEGF阳性组MVD平均值高于VEGF阴性组 ,但无统计学差异 ,P >0 0 5 ;Pearson相关性检验结果表明COX 2与vWF和Ⅳ胶原标记的MVD均有明显的相关性 (相关系数分别为 0 5 99和 0 6 ) ,P <0 0 5。在裸鼠移植瘤的体内实验中 ,与对照组MVD(6 3 89± 13 6 7)相比 ,Celebrex处理组MVD为 32 2 5± 12 99,两者差异显著 ,P <0 0 1。免疫组织化学染色和RT PCR结果表明Celebrex处理组肿瘤组织VEGF表达较对照组明显下调。结论　COX 2与胰腺癌新生血管生成密切相关 ,其高表达促进了胰腺癌新生血管生成 ;可能作用机制是上调促血管生成因子VEGF     

人内皮抑素基因转染对Hep3B肝癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的研究腺相关病毒转染人内皮抑素基因对肝癌细胞体内致瘤作用的影响。方法用含人内皮抑素基因的重组腺相关病毒(rAAV2/ES)体外转染人肝癌细胞Hep3B,以空病毒(AAV2)转染作阴性对照,RT-PCR方法检测ES在mRNA水平的表达。将转染细胞接种裸鼠,通过ELISA方法检测裸鼠血液中人内皮抑素的的浓度。观察内皮抑素对移植瘤的生长抑制作用。结果RT-PCR结果显示腺相关病毒可介导内皮抑素基因高效转染Hep3B细胞;rAAV2/ES转染细胞接种裸鼠后内皮抑素的表达随时间逐渐升高,在第4周达到最高浓度(115·79±8·70)ng/ml;rAAV2/ES转染组8只裸鼠中6只成瘤,成瘤时间为(26·80±6·42)d,明显长于对照组(17·17±4·17)d(P<0·05);对裸鼠移植瘤检测显示瘤体重量和瘤内微血管密度(MVD)分别为(0·36±0·22)g、(3·50±1·05)个/视野,明显低于对照组(1·54±0·48)g、(12·67±1·97)个/视野(P<0·01)。结论腺相关病毒介导人内皮抑素基因转染可有效抑制Hep3B细胞在裸鼠体内的生长。     

抗人膀胱癌/抗血管内皮生长因子双功能基因抗体对膀胱癌的生长抑制作用

目的　对抗人膀胱癌 /抗血管内皮生长因子 (VEGF)双功能基因抗体进行免疫定位研究并观察其对人膀胱癌生长的抑制作用。　方法　采用免疫组化和免疫电镜前染色法对 6 0例膀胱癌患者的手术切除标本进行免疫定位研究 ;构建人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型并注射双功能抗体 ,观察肿瘤生长情况 ,同时检测肿瘤微血管密度 (MVD)值及肿瘤细胞凋亡指数 (AI)。　结果　 6 0例膀胱癌标本 ,抗原检测阳性 5 3例 ( 88.3% ) ;对照组 2 0例 ,抗原检测阳性 1例 ( 5 .0 % )。治疗后第 2周 ,实验组小鼠皮下种植肿瘤大小 ( 2 1.4 7± 6 .5 7)mm2 ,对照组 ( 5 9.85± 15 .4 3)mm2 ;实验组MVD 2 14 8± 10 9,对照组为 4 0 5 6± 36 7;实验组肿瘤细胞AI为 17.2 6 ,对照组为 7.0 9。组间比较 ,差异均有显著性意义。　结论　抗人膀胱癌 /抗VEGF双功能基因抗体对人膀胱癌有较好的靶向性 ,能够通过抑制肿瘤微血管形成和加速肿瘤细胞凋亡而抑制实验性人膀胱癌的生长     

内皮抑素转基因治疗裸鼠人肝癌的实验研究

目的构建表达人内皮抑素的重组真核表达载体,研究阳离子脂质体介导转染内皮抑素基因对裸鼠人肝癌生长的抑制作用。方法将含有IL-2信号肽和人内皮抑素基因全长cDNA插入真核表达载体pcDNA3.0产生重组质粒pCD-sEndo,脂质体Dosper介导将pCD-sEndo质粒转染至人肝癌细胞株SMMC-7721,RT-PCR和Western blot检测内皮抑素的表达。建立裸鼠人肝癌模型,按随机数字表法随机分成4组,分别瘤内注射Dosper+pCD-sEndo(Dosper+pCD-sEndo组)、Dosper+pcDNA3.0(Dosper+pcDNA3.0组)、Dosper(Dosper组)和生理盐水(生理盐水组),分时段测量肿瘤的体积;注射结束后1周处死动物,切取肿瘤,免疫组化检测肿瘤组织微血管密度(MVD),TUNEL染色检测肿瘤细胞凋亡指数(AI)。结果成功构建携带人内皮抑素基因和IL-2信号肽的真核表达质粒pCD-sEndo并经酶切鉴定证实;体外转染内皮抑素基因的SMMC-7721细胞,RT-PCR可以检测到内皮抑素mRNA表达,Western blot显示转染细胞培养液中有内皮抑素蛋白表达,而转染空白质粒者中没有;体内实验中,Dosper+pCD-sEndo组裸鼠肿瘤生长受抑,于第12 d起明显小于Dosper+pcDNA3.0组、Dosper组和生理盐水组(P<0.05)。Dosper+pCD-sEndo组平均MVD为6.2±2.5,明显低于生理盐水组(32.8±6.4)、Dosper组(27.8±6.4)和Dosper+pcDNA3.0组(25.5±5.5),P<0.05;Dosper+pCD-sEndo组肿瘤细胞平均AI为24.5±7.3,生理盐水组、Dosper组和Dosper+pcDNA3.0组分别是7.6±2.5、9.5±3.0和11.2±3.6,前者明显高于后三者(P<0.05)。结论瘤内注射携带内皮抑素基因的阳离子脂质体,可减少裸鼠体内种植性人肝癌的微血管数目,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长。     

抗血管内皮生长因子抗体对实验性肝癌的生长抑制作用

目的了解抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体对人肝癌的生长抑制作用.方法在已建立的人肝癌裸鼠皮下种植瘤的瘤灶旁,注射抗VEGF抗体,观察肿瘤生长情况,用CD31的免疫组化方法检测肿瘤内部的微血管密度(iMVD),用原位末端转移酶标记技术检测凋亡的肿瘤细胞.结果实验结束后1周,实验组和对照组肿瘤大小(长×宽)是(26.46±19.81) mm2和(105.77±17.40) mm2(P<0.001),2周后是(45.20±23.02) mm2和(150.77±77.41) mm2(P<0.05),而此时肿瘤的iMVD是(2 311±120)个/mm2和(3 900±328)个/mm2 (P<0.001); 肿瘤细胞凋亡指数是15.31% 和 6.83%(P<0.005).结论抗VEGF抗体能通过抑制肿瘤微血管的生长,抑制实验性人肝癌的生长,其实质是增加了肿瘤细胞凋亡.     

Angiostatin基因治疗人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的:研究Angiostatin基因治疗对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及其相关机理。方法:使用人原发性肝癌细胞株SMMC-7721建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。将荷瘤裸鼠随机分为两组,分别注射质粒PcDNA3、Angiostatin/PcDNA3,观察两组动物的肿瘤生长曲线,检测肿瘤的Angiostatin、VEGF、HIF-1α表达和微血管密度(MVD),利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析。结果:Angiostatin基因治疗在早期具有抑制肿瘤生长的作用,大约1周后肿瘤以更快的速度生长并迅速赶上空质粒对照组肿瘤;Angiostatin基因治疗组的肿瘤组织中有An-giostatin的局部高表达,MVD(24.8±2.8)低于空质粒对照组(30.2±4.1)(P〈0.05)。肿瘤组织中HIF-1α蛋白局部高表达,VEGF表达高于空质粒对照组,细胞凋亡指数(2.87±0.48)高于空质粒对照组(1.55±0.43)(P〈0.01)。结论:Angiostatin基因治疗对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的生长具有一定的抑制作用,肿瘤对Angiostatin基因治疗可以产生耐受性。     

α-干扰素对裸鼠移植性人肝癌细胞生长的影响

目的　观察α 干扰素 (INF)对部分肝切除后裸鼠残肝移植性人肝癌细胞生长的影响。方法　将人肝癌组织 (取自人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型 ,肝癌细胞株Bel 740 2 )植入 3 0只BALB/cnu/nu裸鼠肝脏 ,建立人肝癌原位移植瘤模型 ,随机分为 3组 ,每组 10只。A组为对照组 ;B组行部分肝切除 (占肝脏总体积 65 % )同时每天注射生理盐水 ;C组行部分肝切除后第 1天起 ,以INF α 3 0 0 0 0 0U /d进行皮下注射。术后 3 0d处死裸鼠 ,测量肿瘤大小和重量 ,计算肿瘤体积及抑瘤率 ,检测肿瘤组织微血管密度 (MVD)及血管内皮生长因子 (VEGF)的表达。结果　B组肝癌组织MVD和VEGF表达较A组明显增强 (P <0 .0 5 ) ,肿瘤重量和体积亦明显增加 (P <0 .0 5 )。C组肝癌组织MVD和VEGF表达较B组明显减低 (P <0 .0 1) ,肿瘤重量和体积亦明显减少 (P <0 .0 1) ,肿瘤生长抑制率达到 63 %。结论　部分肝切除可促进新生血管的形成 ,加速残肝原位移植瘤的生长 ,INF α可抑制瘤组织内VEGF的表达和新生血管的形成 ,同时明显抑制残肝肿瘤细胞的生长。