乙醇及二甲基亚砜对人γδT细胞和αβ细胞凋亡与细胞活性的影响

目的　观察不同浓度的乙醇及二甲基亚砜 (DMSO)对人γδT细胞和αβT细胞凋亡与细胞活性的影响。方法　分别用结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)、CD3单抗(CD3mAb)刺激正常人外周血单个核细胞 ,分别获得Mtb Ag激活的T细胞 (αβT细胞为主 )及CD3mAb激活的T细胞(γδT细胞为主 ) ;用不同浓度的乙醇及二甲基亚砜分别作用于γδT细胞和γδT细胞 4、2 4h后 ,应用Annexin V FITC/PI染色 ,流式细胞术检测不同T细胞亚群的凋亡 ,应用四唑盐(MTT)法检测T细胞的活性。结果　Mtb Ag激活的T细胞中γδT细胞比例可达 70 %～ 90 % ;CD3mAb激活的T细胞中γδT细胞比例 >90 % ;与对照组相比 ,除浓度为 1 0 %及 2 0 %的DMSO作用于γδT细胞 2 4h的诱导凋亡作用明显 (P <0 0 5 )及浓度为 2 0 %的DMSO作用于γδT细胞 4h对细胞活性抑制明显 (P <0 0 5 )外 ,低浓度乙醇及DMSO(≤ 2 0 % )对人γδT细胞和γδT细胞的诱导凋亡作用及对细胞活性的抑制作用均无显著性 (P >0 0 5 ) ;与对照组相比 ,除 5 0 %乙醇作用于γδT细胞 4h及 5 0 %DMSO作用于γδT细胞 4h诱导细胞凋亡作用不明显 (P >0 0 5 )外 ,高浓度乙醇和DMSO(5 0 % )对γδT细胞和γδT细胞的诱导凋亡作用及对细胞活性的抑制作用均增加 (P <0 0 5 )。结论     

乙醇诱导肝癌细胞凋亡的形态学观察

目的：探讨在乙醇诱导下发生凋亡时,原发性肝细胞癌（简称肝癌）细胞的形态学变化。方法：用含60mL.L^-1乙醇的培养液持续作用6h诱导人肝癌细胞系HCC－9204凋亡,进行凋亡活细胞的台盼蓝,吖啶橙／溴化乙啶（AO／EB）染色,凋亡细胞固定后的May-Grunwald-Giemsa (MGG),HE染色和透和透射电镜观察,并进行TUNEL法凋亡检测。结果：60mL.L^-1乙醇可使HCC－9204细胞产生明显的细胞固缩,变圆,胞核和胞质浓染,胞核呈颗粒状,环形或新月体状,胞质可见“出泡”现象等凋亡形态学变化,大部分细胞为台盼蓝拒染,并呈TUNEL阳性着色,部分TUNEL阳性细胞也可见明显的凋亡形态学变化。结论：乙醇可使肝癌细胞产生明显的凋亡形态学变化。TUNEL法可原位同时显示凋亡细胞的形态和分布。     

DNA末端标记法检测番荔枝内酯诱导人乳癌细胞凋亡

目的：用ＤＮＡ末端标记法（ＴＵＮＥＬ法）研究番荔枝内酯凋亡诱导作用，以及ＴＵＮＥＬ法用于凋亡检测和抗癌药所致凋亡的探讨。方法：用台盼蓝拒染法，ＴＵＮＥＬ法，ＤＮＡ凝胶电泳，电镜等技术，研究番荔枝内酯对具有多药抗药性的耐阿霉素的人乳癌ＭＣＦ７／ＡＤＲ细胞的生长抑制作用及凋亡诱导。结果：电镜下观察到细胞染色质浓缩，聚集核膜下，核碎裂等典型的凋亡细胞形态学改变。凝胶电泳可见明显的ＤＮＡ梯形条带。ＴＵＮＥＬ法检测的凋亡细胞明显多于形态学改变的凋亡细胞。结论：番荔枝内酯对人乳癌ＭＣＦ７／ＡＤＲ细胞具有明显生长抑制作用，半数抑制浓度（ＩＣ５０）为１０．５ｍｇ／Ｌ，并诱导其凋亡。ＴＵＮＥＬ法可配合其他方法用于检测抗癌药诱导的人癌细胞凋亡及抗癌药的评价。     

神经酰胺对人γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用

目的: 观察神经酰胺对人γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用。方法: 用结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)和CD3单抗(CD3mAb)分别刺激正常人外周血单个核细胞,获得Mtb-Ag激活的T细胞(γδT细胞为主)及CD3mAb激活的T细胞(αβT细胞为主);用不同浓度的神经酰胺(C2-Cer)分别作用于γδT细胞和αβT细胞,培养3 h后收获细胞,应用Annexin-V-FITC/PI染色,流式细胞术检测不同亚群T细胞的凋亡,应用四甲基噻唑氮蓝(MTT)比色法检测T细胞的活性。结果: Mtb-Ag激活的T细胞中γδT细胞比例可达70%~90%,CD3mAb激活的T细胞中αβT细胞比例>90%;与对照组比较,低浓度的C2-Cer (≤ 10 μmol/L)对人γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用和细胞活性抑制作用均不明显(P>0。05);而高浓度的C2-Cer对γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用和细胞活性抑制作用存在显著差异:100 μmol/L的C2-Cer诱导γδT细胞、αβT细胞凋亡比例分别增加10。4%(P>0。05)及73。5%(P<0。01),活细胞区(R1区)的细胞比例分别为对照组的88。1%(P>0。05)和7。8%(P<0。01);而500 μmol/L时诱导γδT细胞和αβT细胞凋亡比例分别增加71。9%和73。8%(P<0。01),R1区的细胞比例分别为对照组的36。5%和2。7%(P<0。01)。结论: 神经酰胺能诱导活化的人γδT细胞和αβT细胞发生凋亡,诱导γδT细胞发生凋亡所需的C2-Cer浓度明显高于诱导αβT细胞所需浓度。     

冷冻保护剂二甲基亚砜的毒副作用及应用剂量研究

本文主要用台盼兰排斥试验、CFU-GM体外琼脂培养技术和细胞电泳技术研究了冷冻保护剂二甲基亚砜(DNISO)在4℃和室温条件下对细胞活力的影响。结果表明,DMSO对骨髓、胎肝和淋巴细胞的毒性在室温比在4℃时大。小鼠静脉注射DMSO的LDS0剂量为3.9364±0.8709mg/g体重。提出了应用DMSO作为冷冻保护剂冻存人骨髓和胎肝细胞悬液的临床输注方法和DMSO的剂量安全值。     

结扎冠状动脉对大鼠心肌凋亡相关基因表达的影响

目的：研究大鼠冠状动脉结扎时心肌组织中凋亡相关基因的表达状况与急性心肌缺血的关系。方法：结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血模型。描记Ⅱ导心电图;检测血清肌酸激酶（ｃｒｅａｔｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ,ＣＫ） 活性、心肌组织丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ, ＭＤＡ）含量和超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ,ＳＯＤ） 活性;ＲＴＰＣＲ 法检测凋亡相关基因Ｆａｓ、ＣＰＰ３２ 、Ｂｃｌ２ 和Ｂａｘ 在心肌组织的相对表达量。观察伪结扎组、结扎组、苦豆碱（ａｌｏｐｅｒｉｎｅ,Ａｌｏ）给药组（２０ ｍｇ·ｋｇ－ １）、普萘洛尔（ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ,Ｐｒｏｐ）给药组（２ ｍｇ·ｋｇ－１） 对上述各指标的影响。采用单因素方差分析（Ｏｎｅ Ｗａｙ ＡＮＯＶＡ） 对结果进行统计处理。结果：结扎大鼠左冠状动脉前降支可导致心电图明显的缺血性改变及血清ＣＫ 活性显著升高;心肌组织的ＭＤＡ 含量和ＳＯＤ 活性显著增加;缺血心肌组织中Ｆａｓ、ＣＰＰ３２ 和Ｂｃｌ２基因的表达显著增加（ Ｐ＜０ ．００１）,Ｂａｘ 变化不明显（ Ｐ＜ ０．０５） 。Ａｌｏ 和Ｐｒｏｐ 能明显缓解心电图的缺血性改变并降低血清ＣＫ 活性;减少心肌组织的     

环孢素A对心肌细胞凋亡的影响

目的探讨环孢素A治疗急性排斥反应的作用机制.方法采用Ono方法建立SD大鼠心脏移植排斥反应动物模型,将实验分为两组:对照组n=10,未进行任何治疗;环孢霉素A(CsA)组:n=20,术后1～7 d腹腔内注射CsA 10mg/(kg*d).采用ELISA法测定术后IL-2的含量,采用Tunel法检测心肌细胞凋亡,并计算凋亡指数.结果两组移植物存活时间为7.25 d±0.71 d和19.4 d±2.07 d,实验组比对照组延长12 d(P<0.01).实验组术后IL-2含量明显减少,与对照组相比较差异有显著性(P<0.05).两组中心肌细胞凋亡指数分别为2.84±1.48和0.54±0.19(P<0.0001).结论 CsA通过抑制IL-2的分泌和心肌细胞凋亡,发挥抗排斥作用.     

蛋白激酶C在乙醇诱导人γδT细胞凋亡中的作用

目的: 观察蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在乙醇诱导人γδT细胞凋亡中的作用。方法: 用结核杆菌多肽抗原(MtbAg)刺激正常人外周血单个核细胞,获得Mtb-Ag激活的T细胞(γδT细胞为主);采用Annexin-V-FITC/PI染色流式细胞术观察不同浓度乙醇对人γδT细胞凋亡诱导情况,并观察Rottlerin (PKC抑制剂)预处理对乙醇诱导γδT细胞凋亡的影响。结果: 4.0%的乙醇作用结核杆菌抗原活化的γδT细胞4 h、12 h、24 h均可显著诱导γδT细胞凋亡(P<0.01);5.0 μmol/L和40.0μmol/L Rottlerin可显著抑制4.0%乙醇诱导γδT细胞凋亡(P<0.01),凋亡抑制率分别为75.17%和58.95%。结论: PKC途径参与乙醇诱导人γδT细胞凋亡信号传导。     

辛伐他汀诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡及对凋亡相关基因表达的影响

目的 :观察辛伐他汀诱导大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡及可能参与其中的凋亡相关基因。方法 :贴块法体外培养 VSMC,以透射电子显微镜技术、流式细仪 PI/Annexin 双重染色等鉴定细胞凋亡 ;Western印迹杂交法检测 Bax、Bcl- 2蛋白表达及 caspase- 3的激活情况。结果 :加入 30μmol/L辛伐他汀 2 4 h后电镜显示细胞呈典型的凋亡形态 ,PI/Annexin 染色流式细胞仪检测凋亡细胞占 (35 .5± 5 .8) %显著多于对照组 (15 .1± 5 .0 ) %(P<0 .0 5 ) ;辛伐他汀不改变 Bcl- 2蛋白的表达 ,而使 Bax蛋白表达增高并激活 caspase- 3。结论 :辛伐他汀能诱导VSMC产生凋亡 ,并与 Bax表达增高及 caspase- 3的激活有关     

地塞米松引起小鼠胸腺内细胞凋亡的半薄切片观察

目的：获取地塞米松引起小鼠胸腺细胞凋亡的时间变化曲线。方法：雄性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔内注射地塞米松，油镜下观察甲苯胺蓝染色的半薄切片，计数１００ｍｍ２内细胞总数及凋亡细胞（Ａｃ）数和凋亡小体（Ａｂ）数及Ａｃ、Ａｂ百分率。结果：胸腺皮质与髓质形成Ａｃ、Ａｂ的高峰时相为１５ｈ。在皮质，１～１５ｈ为凋亡上升期，１５～１９ｈ为凋亡高峰平台期，１９～３０ｈ为凋亡下降期；在髓质，１～１５ｈ为凋亡上升期，１５ｈ为凋亡高峰期，１５～３０ｈ为凋亡下降期。结论：这一时间变化曲线为深入探讨胸腺的细胞凋亡提供数值变化资料。     

二膦酸盐对MG-63细胞增殖及凋亡的影响

目的体外观察二膦酸盐对骨肉瘤MG-63细胞的抑制增殖和促进凋亡作用。方法将不同浓度的二膦酸盐药物与MG-63细胞体外培养,采用MTT比色法测定其细胞活力,绘制细胞生长曲线;Hoechst33258细胞染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪进行细胞周期分析及凋亡检测。结果MTT比色法测得药物作用72h对MG-63细胞的ID50为52.37μmol/L;细胞生长曲线表明细胞增殖数量与药物浓度及时间有显著依赖性;细胞荧光染色观察实验组细胞形态改变;细胞流式观察细胞凋亡实验组较正常差异有显著性,72h后细胞凋亡率40.2%±2.1%相比正常细胞2.8%±0.7%有统计学意义;细胞周期分析实验组细胞SubG1相比正常组显著累积G2/M细胞被阻滞。结论二膦酸盐抑制体外培养骨肉瘤MG-63细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡。     

紫外线照射对人外周血细胞凋亡及吞噬功能的观察

目的观察中波紫外线(UVB)照射对正常人外周血淋巴细胞(PBL)凋亡及吞噬功能的影响.方法采用50、100、200和400 J/m2不同剂量的UVB照射PBL,培养24 h后以及100和200 J/m2剂量下培养0、6、12和24 h后,用AO染色、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,用葡萄球菌法观察受UVB处理后吞噬细胞的功能变化.结果 PBL受照后死亡方式之一是凋亡,AO染色法荧光显微镜计数凋亡细胞百分率及DNA梯状带检测结果发现,细胞凋亡有时间和剂量依赖性;AO染色法检测结果与FCM检测的凋亡细胞随剂量的加大及时间的延长而增多的结果不呈平行关系.同时PBL的吞噬功能有不同程度地受损.结论 UVB照射可诱导PBL凋亡,凋亡可呈现时间和剂量效应关系,PBL的凋亡与细胞功能相关.     

吡罗昔康对人γδT细胞和消化系统肿瘤细胞的作用比较

目的:探讨吡罗昔康对人γδT细胞杀伤消化系统肿瘤细胞株的影响。方法:用异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的吡罗昔康诱导γδT细胞和消化系统肿瘤SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116、LOVO细胞株,用MTT法检测吡罗昔康对这些细胞的抑制率和用乳酸脱氢酶法测定γδT细胞的杀伤活性,用流式细胞术检测诱导前后的γδT细胞和SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞凋亡百分率。结果:γδT细胞培养10d时从扩增前4.21%增加到70.35%。吡罗昔康各种浓度对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株抑制率明显高于γδT细胞。0.01~0.04mmol/L吡罗昔康诱导24h后的γδT细胞对5种肿瘤细胞的杀伤活性最高,浓度超过0.04mmol/L时杀伤活性呈下降趋势;SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞经不同浓度的吡罗昔康诱导24h后γδT细胞对其的杀伤活性与对照组比较无明显变化。0.16mmol/L吡罗昔康诱导24h对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株的凋亡率分别为12.26%、13.46%、14.59%、25.64%和39.36%,显著高于γδT细胞(8.16%)。结论:吡罗昔康在临床常规使用的药物浓度时可增强γδT细胞杀伤肿瘤细胞作用,超过这一浓度可明显抑制γδT细胞和肿瘤细胞的增殖能力和杀伤活性及增加细胞的凋亡率;吡罗昔康对肿瘤细胞株的抑制率明显高于γδT细胞。这一结果为临床吡罗昔康预防消化道肿瘤的用量提供了实验依据。     

阻断细胞信号传导子和转录激活子6基因表达对人结肠癌细胞凋亡的影响

目的 探讨细胞信号传导子和转录激活子6（STAT）信号传导通路与结肠癌细胞凋亡的关系。方法构建4个STAT6特异的shRNA质粒载体，应用阳离子脂质体瞬时转染人结肠癌细胞HT-29，以阻断Stat6信号通路；分别用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测STAT6 mRNA表达和运用流式细胞术检测磷酸化STAT6蛋白（pSTAT6）表达来筛选有效的小发夹RNA（shRNA）；运用流式细胞术分析细胞凋亡变化；RT-PCR和Western印迹观察Bcl-2和Bax基因表达。结果成功构建并筛选出两个STAT6特异的shRNA质粒载体；STAT6基因沉默的结肠癌细胞中凋亡细胞明显增加，空白对照组细胞早期凋亡率为0．4％，pshRNA-STAT6-1组和pshRNA-STAT6-4组分别为13．0％和8．8％（P〈0．05）；Stat6信号通路被阻断的结肠癌细胞中Bcl-2基因表达明显减少，而Bax蛋白基因表达明显增多（P〈0．01）。结论Stat6信号传导通路能抑制结肠癌细胞凋亡，可能是通过调节Bcl-2和Bax基因的表达发挥作用。     

六味地黄汤对糖皮质激素肾阴虚模型免疫器官淋巴细胞凋亡的抑制作用(I)

为进一步探讨肾阴虚证在免疫学上的实质,将30只Wister大鼠分为正常对照组、模型组、六味地黄汤组3组,采用糖皮质激素肾阴虚大鼠模型以原位末端标记法标记凋亡细胞,观测了六味地黄汤对胸腺淋巴细胞凋亡的影响.结果显示:模型组淋巴细胞凋亡增多,且多在胸腺皮质部,凋亡细胞计数模型组显著高于正常对照组(P＜0.01);六味地黄汤组淋巴细胞凋亡较模型组明显减少,凋亡细胞计数六味地黄汤组低于模型组(P＜0.01).提示六味地黄汤能够抑制糖皮质激素诱导的胸腺淋巴细胞凋亡.反证了肾阴虚证存在胸腺淋巴细胞凋亡的情况,而滋补肾阴的药物可以对其有抑制作用.     

三氧化二砷对人胆管癌细胞系QBC939生长与凋亡的影响

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人胆管癌细胞系QBC939的生长抑制与促凋亡作用 .方法　采用 MTT法检测 As2 O3 对胆管癌细胞的抑制作用 ;相差显微镜、电镜下观察细胞形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳测定 DNA L adder;流式细胞术分析 DNA含量 .结果　 0 .5 ,1,2 ,4,8μmol· L- 1 As2 O3均能抑制人胆管癌细胞 QBC939的生长 ,且抑制率具有浓度和时间依赖性 ,4μmol· L- 1 (IC50 )的 As2 O3 作用后 ,QBC939细胞出现典型的凋亡形态特征 ,DNA L adder出现 ,并检测到亚二倍体峰 .结论　 As2 O3 能有效地抑制 QBC939细胞生长并促进其凋亡 .     

细胞内游离钙影响细胞凋亡的研究进展

钙离子作为第二信使在细胞的各项生理活动中已得到广泛的研究 ,但胞内游离钙和细胞凋亡之间的关系尚未得到进一步阐明。在病理 (如肿瘤 )状态下的研究也仅多见于神经和血液系统疾病中。本文就细胞内游离钙与细胞凋亡的最新研究作一综述。1　细胞凋亡途径　　细胞凋亡最终涉及核酸内切酶 (ＤＮａｓｅ)和半胱氨酸蛋白酶 (Ｃａｓｐａｓｅｓ) ,前者彻底破坏细胞生命活动所必须的全部指令 ,后者导致细胞结构的全面解体。ＤＮａｓｅ的激活需要有凋亡相关基因激活 ,但和Ｃａｓｐａｓｅ的激活也密不可分。Ｃａｓｐａｓｅ的激活主要有两条途径[1 ] ,…     

褪黑素对CCl4诱导大鼠肝纤维化模型肝星状细胞凋亡和功能的影响

目的探讨褪黑素(MT)对肝星状细胞(HSC)凋亡和功能的影响。方法予SD大鼠背部皮下注射CCl4造肝纤维化模型。体内实验MT组大鼠灌胃给予MT〔0.125、0.5、2.0mg/(kg.d)〕8周,HE染色观察病理改变,放免法检测血清透明质酸(HA)与Ⅲ型前胶原(PCⅢ)。体外实验从模型组来源的HSC给予MT(10、0.1μmol/L和1nmol/L),从正常组来源的HSC给予生理盐水;48h后,流式细胞术检测HSC细胞凋亡,放免法检测培养上清中HA、PCⅢ。结果体内实验中,MT各剂量组均明显改善CCl4引起的肝脏病理改变,降低血清HA、PCⅢ。体外实验中,MT10μmol/L显著诱导HSC凋亡,各浓度MT均明显降低HA、PCⅢ的水平。结论MT可能通过诱导HSC凋亡和抑制其合成或分泌HA与PCⅢ而改善CCl4致大鼠肝纤维化。     

甲硫氨酸脑啡肽对NIH 3T3细胞和人肝癌Bel 7402细胞生长具有抑制作用

目的 :研究甲硫氨酸脑啡肽对体外培养的NIH3T3细胞、人肝癌Bel740 2细胞增殖的影响。方法 :MTT微培养染色法检测不同质量浓度的甲硫氨酸脑啡肽对NIH3T3细胞、人肝癌Bel740 2细胞的作用以及一定质量浓度的纳洛酮、阿片δ受体单克隆抗体、5 氟脲嘧啶对这种作用的影响。结果 :(1) 10mg·L-1至 80mg·L-1的甲硫氨酸脑啡肽对这 2种细胞均有不同的抑制效应 (NIH3T332 %～ 6 6 %与Bel740 2 36 %～ 6 4% ) ;(2 )纳洛酮能阻断甲硫氨酸脑啡肽对细胞抑制效应 ,阿片δ受体单克隆抗体没有这种阻断能力 ;(3) 5 氟脲嘧啶 (10mg·L-1)和甲硫氨酸脑啡肽 (5 0mg·L-1)有协同作用。结论 :甲硫氨酸脑啡肽能抑制细胞增殖。提示NIH3T3细胞和Bel 740 2细胞胞膜上可能存在阿片 ζ受体介导。     

六味地黄汤对糖皮质激素肾阴虚模型免疫器官淋巴细胞凋亡的抑制作用(Ⅱ)

为进一步探讨肾阴虚证在免疫学上的实质,随机将 30 只 NIH 小鼠分为正常对照组、模型对照组和六味地黄汤组,给药 6 d 后处死动物,以原位末端标记法检测脾动脉周围淋巴鞘区域的 T 淋巴细胞凋亡情况.结果显示,正常对照组动脉周围淋巴鞘少有 T 淋巴细胞凋亡,模型组动脉周围淋巴鞘见较多 T 淋巴细胞凋亡,而六味地黄汤组动脉周围淋巴鞘 T 淋巴细胞凋亡数明显低于模型组(P＜0.05).提示滋阴补肾中药六味地黄汤有拮抗糖皮质激素诱导脾 T 淋巴细胞凋亡的作用.反证了肾阴虚证存在脾 T 淋巴细胞凋亡的情况,而滋补肾阴药物对其有抑制作用.