阿利吉仑对2型糖尿病db/db小鼠肾脏损伤的保护作用

目的 观察肾素抑制剂阿利吉仑对2型糖尿病db/db小鼠肾脏损伤的保护作用。 方法 8周龄db/db和db/m小鼠行单侧肾切除,16周进入实验,分为4组：db/m小鼠对照组（db/m组）、db/db糖尿病小鼠对照组（db/db组）、db/db糖尿病小鼠阿利吉仑3 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1治疗组（db/db+A3组）和db/db糖尿病小鼠阿利吉仑25 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1治疗组(db/db+A25组)。阿利吉仑溶于磷酸盐缓冲液（PBS,350 mg/L）皮下泵入（0.25 μl/h）给药,疗程４周。治疗前后检测体质量、血糖、糖化血红蛋白、尿蛋白量、血压水平;PAS染色观察肾脏组织学变化;ELISA法检测肾皮质转化生长因子β1（TGF-β1）和纤溶酶原激活抑制因子1（PAI-1）含量;间接免疫荧光检测肾小球Ⅳ型胶原（ColⅣ）和纤连蛋白（FN）表达;实时定量PCR检测TGF-β1、PAI-1、ColⅣ、FN和肾素mRNA表达;放射免疫法检测肾皮质肾素活性和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平。 结果 与db/m组小鼠比较,db/db组小鼠有大量蛋白尿,肾小球细胞外基质沉积增加,TGF-β1、PAI-1、ColⅣ和FN蛋白及mRNA表达增加,同时肾皮质肾素mRNA、肾素活性和AngⅡ水平增高（均P < 0.05）。阿利吉仑25 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1治疗在没有影响血压情况下,显著减少db/db小鼠24 h尿蛋白量,减少肾小球细胞外基质沉积,减少TGF-β1、PAI-1、ColⅣ、FN蛋白和mRNA表达,同时降低肾皮质肾素活性和AngⅡ水平（均P < 0.05）。 结论 阿利吉仑对2型糖尿病db/db小鼠肾脏损伤有保护作用。     

罗格列酮对环孢素A所致大鼠成纤维细胞肾毒性的保护作用

目的观察免疫抑制剂环孢素A(CsA)对大鼠肾脏成纤维细胞(NRK)增生及细胞因子分泌的影响以及罗格列酮的干预作用,初步探讨罗格列酮对环孢素A肾毒性的保护作用。方法体外培养大鼠肾脏成纤维细胞。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定CsA及罗格列酮对细胞增生的影响。RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ、TGF—β1mRNA水平。western印迹检测PPARγ、AT1受体、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)及FN蛋白表达。酶联免疫吸附(ELISA)测定细胞培养上清液中TGF-β1的分泌。结果CsA可明显抑制NRK细胞增生,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05)。罗格列酮与CsA合用后,对细胞增殖的抑制作用更明显(P<0.01)。CsA刺激NRK细胞PPARγ、TGF—β1、AT1受体及FN的产生(P<0.05),罗格列酮可下调这些改变(P<0.05)。结论罗格列酮可减轻CsA所致的NRK细胞毒性。     

Erbin在肾间质纤维化中的表达和作用

目的 探讨Erbin在肾脏间质纤维化中表达量的变化及上调Erbin对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E）转分化的影响。 方法 体内实验采用SD大鼠5/6肾切除法建立肾纤维化动物模型,收集并检测各组血清中Scr、BUN水平;Masson染色观察肾间质纤维化程度;免疫组化及Western印迹检测Erbin的分布与表达。 体外实验采用TGF-β1（10 μg/L）刺激NRK52E细胞72 h建立上皮细胞-间充质转分化（EMT）细胞模型;免疫荧光及Western印迹法检测E钙黏蛋白（E-cadherin）和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达变化;RT-PCR及Western 印迹法检测Erbin的表达变化。用脂质体2000将质粒 Prk5-myc-Erbin瞬时转染至NRK52E细胞,Western印迹法观察上调Erbin表达后对上述各种指标的影响。 结果 （1）假手术组大鼠肾功能正常[Scr（33.96±7.28） μmol/L、BUN（8.11±2.55） mmol/L],Masson染色未见肾间质纤维化,Erbin在肾小管表达较少;模型组大鼠Scr [（140.52±61.11） μmol/L]、BUN[（34.23±7.66） mmol/L] 均显著高于假手术组（均P < 0.05）,肾间质可见明显纤维化,Erbin 在肾小管表达也明显增加,是假手术组的2.9倍（P < 0.01）。（2）正常NRK52E 细胞表达E-cadherin,少量表达Erbin和α-SMA。TGF-β1刺激后,NRK52E细胞E-cadherin表达显著减少,Erbin和α-SMA则表达增加（均P < 0.05）;而转染质粒Prk5-myc-Erbin可逆转TGF-β1诱导的NRK52E细胞E-cadherin表达下调,并可抑制α-SMA表达上调（均P < 0.05）。 结论 Erbin在肾间质纤维化中表达增加,上调Erbin表达可抑制TGF-β1诱导NRK52E发生EMT, 提示Erbin在肾脏纤维化中可发挥保护作用。     

黄芪通过c-met调控TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化

AB 目的：探讨黄芪对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质分泌的作用及机制。方法：体外培养正常大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）,应用倒置相差显微镜观察NRK52E细胞形态学变化;免疫组织化学染色法及实时荧光定量PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,肝细胞生长因子HGF受体（c-met）的表达;ELISA法定量检测细胞上清液中胶原Ⅰ（Col-Ⅰ）,胶原Ⅲ（Col-Ⅲ）和纤维黏连蛋白（FN）的水平。结果：TGF-β1可诱导肾小管上皮细胞肌成纤维细胞转分化（TEMT）,TGF-β1诱导组细胞肥大、拉长,呈长梭形,α-SMA表达明显增强,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN分泌增加（P〈0.05）。加入不同浓度黄芪后,细胞形态接近正常肾小管上皮细胞形态,α-SMA表达、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN分泌均较TGF-β1诱导组明显抑制（P〈0.05）,c-met表达较TGF-β1诱导组增加（P〈0.05）且呈剂量依赖性。结论：TGF-β1可以诱导肾小管上皮细胞肌成纤维细胞转分化,增加细胞外基质成分Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN的分泌;黄芪能够抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞转分化以及细胞外基质的分泌;黄芪抑制细胞转分化的机制可能与其增强c-met的表达有关。     

塞来昔布对Han：SPRD大鼠肾细胞外基质重塑的影响

目的 研究塞来昔布（CXB）对Han：SPRD大鼠肾细胞外基质（ECM）重塑的影响,探讨其抑制多囊肾肾间质纤维化的作用机制。 方法 选取杂合（cy/+）交配后第4代雄性、3周龄、体质量（68.5±16.6） g的Han：SPRD大鼠共57只,随机分成对照组（CXB：0 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1）、CXB小剂量组（CBX：3 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1）、CXB大剂量组（CBX：10 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1）,每组19只。另选19只SD大鼠作为正常对照。饲料中加入CXB喂食13周后,处死动物。倒置显微镜下分析肾组织纤维化指数;实时荧光定量PCR检测肾组织胶原Ⅳ（COLⅣ）、基质金属蛋白酶（MMP）2、金属蛋白酶2组织抑制剂（TIMP）和转化生长因子（TGF）β1 mRNA的表达;免疫荧光共聚焦扫描法检测COLⅣ、MMP-2、TIMP-2、TGF-β1与PCNA共染的蛋白丰度;蛋白免疫印迹法检测TGF-β1的表达。 结果 与对照组相比,小剂量组和大剂量组均能显著减少肾囊肿指数（42.90±6.56和47.10±7.28比64.80±62.71,均P < 0.05）、纤维化指数（11.20±2.63和10.10±3.30比16.30±4.16,均P < 0.05）和间质炎性细胞的浸润（2.60±0.26和2.80±0.31比3.70±0.33,均P < 0.05）。小剂量组和大剂量组COLⅣ、TIMP-2和TGF-β1 mRNA的表达量显著低于对照组（均P < 0.05 ）,而MMP-2 mRNA的表达量显著高于对照组（均P < 0.05）。小剂量组和大剂量组COLⅣ荧光强度较对照组显著减弱,差异有统计学意义（20.30±5.11比61.40±4.51,P < 0.01;27.50±6.73比61.40±4.51,P < 0.05）。小剂量组和大剂量组MMP-2/TIMP-2比值较对照组增高,差异有统计学意义（4.88±1.52 和3.63±1.67比0.35±0.13,均P < 0.05）。小剂量组和大剂量组TGF-β1蛋白表达比对照组均显著减少。 结论 塞来昔布可能通过下调TGF-β1、增加MMP-2/TIMP-2比值、促进胶原Ⅳ的降解来抑制肾小管间质的纤维化。     

低蛋白配伍α酮酸饮食可直接影响肾损伤大鼠系膜细胞肾素-血管紧张素系统表达

目的 观察肾损伤大鼠低蛋白配伍α酮酸饮食后是否可直接影响肾小球系膜细胞外基质（ECM）的产生和局部肾素-血管紧张素系统（RAS）的表达。 方法 30只雄性SD大鼠建立3/4肾切除模型,分组如下（均n=10）：正常蛋白饮食组（NPD,18%酪蛋白）、低蛋白饮食组（LPD,6.5%酪蛋白）和低蛋白配伍α酮酸饮食组（LK,5.4%酪蛋白+1% α酮酸）。另取10只大鼠行假手术后给予正常蛋白饮食作为对照组（sham）。12周后麻醉处死大鼠,收集各组动物血清。取10%浓度的血清干预体外培养的系膜细胞48 h。采用ELISA法检测细胞上清液中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、转化生长因子β1（TGF-β1）及纤连蛋白（FN）的水平。采用Western印迹法和实时定量PCR法检测系膜细胞血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）、FN及TGF-β1的蛋白和基因表达。 结果 （1）动物实验：各组大鼠体质量、血清总蛋白及白蛋白水平差异均无统计学意义,肾切除各组大鼠血肌酐及尿蛋白水平均显著高于sham组（均P < 0.05）。血肌酐水平在肾切除组间差异无统计学意义,但LPD组血尿素氮及尿蛋白水平显著低于NPD组（均P < 0.05）,而LK组更低（均P < 0.05）。（2）细胞实验：NPD血清干预组细胞分泌AngⅡ水平[（12.70±0.12） mg/g蛋白比（8.04±0.62） mg/g蛋白]及AT1R基因和蛋白表达水平均显著高于sham组,同时伴有FN[（39.84±0.06） g/g蛋白比（20.58±0.46） g/g蛋白]及TGF-β1[（83.85 ± 3.58） mg/g蛋白比（10.12±0.56）mg/g]基因转录和分泌水平的上升（均P < 0.05）;LPD及LK血清干预组可显著抑制上述改变（均P < 0.05）。应用RAS阻断剂氯沙坦可显著降低NPD组中FN及TGF-β1的合成与分泌,对LPD组中二者的表达也有进一步的抑制作用（均P < 0.05）,但对LK组无明显影响。 结论 低蛋白配伍α酮酸饮食可维持肾切除大鼠营养平衡,直接抑制系膜细胞RAS的表达,减少细胞外基质的分泌,从而发挥肾脏保护作用。     

细胞外信号调节激酶信号通路与醛糖还原酶对转化生长因子β1诱导人系膜细胞纤连蛋白表达的影响

目的　探讨细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路与醛糖还原酶（AR）在非高糖条件下对转化生长因子（TGF）β1诱导人系膜细胞（HMC）细胞外基质成分纤连蛋白（FN）表达的影响。 方法　应用醛糖还原酶抑制剂（ARI）、ERK信号通路抑制剂U0126、转染pCDNA3-AR及AR-siRNA分别作用于HMC后,再用TGF-β1刺激,观察刺激前后HMC表达FN的情况。Western印迹检测HMC内FN和AR的变化,实时定量PCR鉴定转染和干扰效果。 结果 HMC在TGF-β1作用后,AR、FN 和磷酸化ERK（p-ERK）蛋白表达升高,与对照组比较,分别升高了1.8、1.9倍（均P < 0.05）和5.1倍（P < 0.01）。使用ARI孵育后,再用TGF-β1刺激,与单独使用TGF-β1刺激组比较,FN蛋白表达量约为对照组的30%（P < 0.01）;用ERK信号通路抑制剂后,再用TGF-β1刺激,FN蛋白表达量约为对照组的10%（P < 0.01）;转染pCDNA3-AR后,HMC中AR mRNA表达增多,为对照组10倍以上（P < 0.01）,FN蛋白表达增加到对照组的2.5倍（P < 0.05）,再用TGF-β1刺激,FN蛋白表达增加到对照组的3.6倍（P < 0.05）;转染AR-siRNA后,HMC中AR mRNA表达减少,干扰效率大于80%（P < 0.01）,AR、FN及p-ERK蛋白表达减少,分别约为对照组的20%、24%、7%（均P < 0.01）,再用TGF-β1刺激,FN蛋白表达仍然减少,为对照组的25%（P < 0.01）。 结论　AR基因参与TGF-β1诱导的HMC细胞外基质表达过程的调控,在肾小球硬化过程中起一定作用,且这一过程与ERK信号通路的活化有关。     

血管紧张素Ⅱ灌注诱导nephrin表达改变与足细胞凋亡

目的 研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）灌注对大鼠足细胞裂隙膜分子nephrin表达及足细胞凋亡的影响，以及探讨AngⅡ引起蛋白尿及肾小球硬化的机制。方法 36只雄性Sprague Dawley大鼠分为AngⅡ灌注组(400 ng&#8226;kg-1&#8226;min-1)、生理盐水灌注组和正常对照组，测定28 d内大鼠血压及尿蛋白。分别于14、28 d处死动物取肾，观察组织学改变，并用免疫荧光、免疫电镜检测nephrin分布。RT-PCR及Western印迹法分别检测nephrin mRNA及蛋白表达。TUNEL法检测足细胞凋亡。结果 (1) AngⅡ灌注组大鼠血压升高，14 d达峰值并维持该水平至28 d；AngⅡ灌注7 d即出现蛋白尿，并持续增加。(2) AngⅡ灌注14 d时，足细胞裂隙膜变窄；灌注28 d时，足突增宽及节段性融合，部分足细胞有凋亡小体形成，少数肾小球出现节段性硬化。TUNEL法检测发现足细胞凋亡[（2.7±1.6）个/肾小球切面]，凋亡数与蛋白尿量呈正相关（r = 0.86，P < 0.01）。(3) AngⅡ灌注14 d时，肾皮质nephrin mRNA及蛋白表达上调（P < 0.05）。nephrin由正常的沿毛细血管袢线状分布向粗颗粒、团块状分布模式转变。AngⅡ灌注28 d时，肾皮质nephrin mRNA及蛋白表达下降（P < 0.05），且nephrin蛋白表达与足细胞凋亡数呈负相关（r = －0.63，P < 0.01）。 结论 AngⅡ灌注诱导的nephrin表达及分布改变可能导致了足细胞凋亡及肾小球硬化的发生与发展。     

虫草素通过下调TGF-β抑制高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化

目的：探讨虫草素对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响。方法：体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞株（NRK52E细胞株）,分为正常对照组（葡萄糖5.5 mmol/L,NG组）、高糖组（葡萄糖30 mmol/L,HG组）、高糖＋虫草素组（葡萄糖30 mmol/L＋虫草素10μg/ml,HG＋C组）。分别于刺激12 h,24 h,48 h后收集细胞。应用定量RT-PCR测定NRK52E TGF-β,E-cadherin,α-SMA mRNA的表达;Western印迹方法检测TGF-β、E-cadherin、α-SMA蛋白的表达。结果：高糖刺激后NRK52E细胞的TGF-β和α-SMA mRNA及蛋白表达明显高于正常糖组（P〈0.01）,而虫草素组TGF-β和α-SMA mRNA及蛋白表达显著低于高糖组（P〈0.05）;高糖诱导的NRK52E细胞E-cadherin mRNA及蛋白水平明显降低（P〈0.01）;而虫草素组NRK52E细胞E-cadherin mRNA及蛋白水平显著高于高糖组（P〈0.05）。结论：虫草素可以明显抑制高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化,其机制可能是通过下调TGF-β实现。     

尿毒清对阿霉素肾病大鼠肾纤维化的保护作用

目的 研究尿毒清对阿霉素肾病大鼠肾纤维化的保护作用及其可能机制。 方法 雄性SD大鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、尿毒清组、贝那普利组,每组12只。采用左侧肾脏切除加尾静脉重复注射阿霉素的方法建立阿霉素肾病模型。术后1周尿毒清组给予尿毒清3 g&#8226;kg-1&#8226;d-1灌胃,贝那普利组予贝那普利4 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1灌胃。用药4、8周后观察各组大鼠24 h尿蛋白量、血生化及光镜、电镜下肾脏病理变化,应用免疫组化方法测定肾组织骨调素（OPN）、纤连蛋白（FN）、胶原蛋白Ⅳ（COLⅣ）的表达。 结果 模型组大鼠24 h尿蛋白量、BUN、Scr、胆固醇（Cho）、三酰甘油（TG）水平及系膜肾小球系膜基质比（M/G）均显著高于正常对照组（P < 0.01）;血白蛋白（Alb）水平显著低于正常对照组（P < 0.01）;肾组织OPN、FN、COLIV的表达亦显著高于正常对照组（P < 0.01）。尿毒清组24 h尿蛋白量、BUN、Scr、Cho、TG水平及M/G均显著低于模型组（P < 0.01）;肾组织OPN、FN、COLIV表达亦显著低于模型组（P < 0.01）。 结论 尿毒清可减少蛋白尿的排泄,纠正脂代谢紊乱,改善肾功能,加强FN、COLIV的降解,抑制肾小球细胞外基质的过度积聚,从而减轻肾脏病理损害,发挥其肾脏保护作用。     

Par-3蛋白在转化生长因子?茁1介导的大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的 观察转化生长因子（TGF)β1诱导的正常大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E）转分化（EMT）过程中细胞极性蛋白Par-3的表达及上调Par-3蛋白表达对TGF-β1诱导NRK52E细胞转分化进程的影响。 方法 应用TGF-β1 (10 μg/L)刺激NRK52E细胞，采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光方法分别检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Par-3 mRNA和蛋白的表达；应用Lipofectmine 2000将pKH3-HA-Par-3质粒瞬时转染NEK52E细胞，采用Western印迹观察上调表达Par-3对上述指标的影响。 结果 TGF-β1刺激后，NRK52E细胞α-SMA蛋白和mRNA水平上调，E-cadherin蛋白和mRNA的表达下调；Par-3蛋白表达呈时间依赖模式下调，72 h TGF-β1刺激组与对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。但Par-3 mRNA水平在各时间点差异均无统计学意义（P > 0.05）。脂质体转染外源性质粒pKH3-HA-Par-3上调表达Par-3可显著抑制TGF-β1诱导NRK52E细胞α-SMA蛋白的上调表达；逆转E-cadherin蛋白的下调表达。 结论 在TGF-β1诱导NRK52E细胞转分化进程中细胞极性Par-3蛋白表达下调，基因转染上调表达Par-3可部分减轻EMT的程度，提示Par-3蛋白在TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和肾脏纤维化中可发挥保护性作用。     

Role of P311 in interleukin-1α-induced epithelial to myofibroblast transition in kidney tubular epithelial cells

Abstract

Tubular epithelial-myofibroblast transition (TEMT) is an important process in renal tubulointerstitial fibrosis. Interleukin-1α (IL-1α) and transforming growth factor-β1 (TGF-β1) have been demonstrated to be key inducers of TEMT. In mouse embryonic fibroblast cells (NIH3T3), P311 protein induces phenotypic changes that are consistent to myofibroblast transformation. In the present study, we investigated the role of P311 gene and protein as well as potential mechanisms underlying TEMT in normal rat kidney tubular epithelial cells (NRK52E). Morphological and molecular changes were determined in NRK52E cells that were treated with IL-1α and/or P311 antibodies. The results showed that the NRK52E cells triggered by IL-1α became fibroblast-like cells, exhibiting hypertrophy of elongated and fusiform-shaped cells. IL-1α induced a time-dependent increase in P311 gene expression in NRK52E cells, with a peak time at 4 days. The expression levels of P311 gene were positively correlated with α-SMA and TGF-β1 gene expression levels. Anti-P311 antibody inhibited P311 and α-SMA expression in the presence of IL-1α. In contrast, anti-P311 antibody increased the expression of TGF-β1 gene in cells cultured with IL-1α. Therefore, P311 gene, together with α-SMA and TGF-β1 genes, was induced in the process of TEMT. P311 protein triggered by interleukin-1α may promote TEMT through a TGF-β1-independent pathway.     

囊泡型H+-ATP酶B亚基在转化生长因子β1致肾小管上皮细胞转分化中的变化及其意义

目的 探讨在转化生长因子（TGF）β1致大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）发生上皮细胞向间质细胞转分化（EMT）过程中囊泡型H+-ATP酶（V-ATPase）B亚基的变化及其可能意义。 方法 NRK52E细胞无血清培养后予TGF-β1（10 μg/L）刺激不同时间（0、6、12、24、48、72 h）,应用实时定量PCR、Western印迹、免疫荧光技术检测?琢平滑肌肌动蛋白（?琢-SMA）、E钙黏素（E-cadherin）、V-ATPase B亚基（B1、B2）mRNA、蛋白表达及分布的变化。 结果 TGF-β1刺激NRK52E细胞48 h后?琢-SMA mRNA及蛋白表达显著上调,E-cadherin mRNA及蛋白表达显著下调,同时V-ATPase B2亚基mRNA及蛋白表达也显著增加（均P < 0.05）。但是B1亚基在细胞内表达很低,刺激后也未见显著变化。免疫荧光也显示V-ATPase B2亚基在细胞内的分布明显增加并向胞膜聚集。 结论 在NRK52E内主要分布的是V-ATPase B2亚基。TGF-β1刺激NRK52E EMT过程中V-ATPase B2亚基表达显著增加,这提示B2亚基可能参与肾小管EMT过程。     

Numb基因在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用

目的 探讨Numb在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用。 方法 重组人转化生长因子β1（TGF-β1）刺激大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E细胞),不同浓度TGF-β1 （0、1、5、10、15、20 μg/L）作用48 h与TGF-β1 10 μg/L作用不同时间(0、24、48、72 h)后,采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光染色分别检测NRK52E细胞内E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Numb 的表达。采用RNA干扰技术下调Numb表达,Western印迹观察改变Numb水平对E-cadherin、α-SMA蛋白水平的影响。 结果 TGF-β1以剂量及时间依赖的方式诱导NRK52E细胞E-cadherin 蛋白表达下调,α-SMA 蛋白表达增高。Numb蛋白的表达随TGF-β1浓度的增加而增高,在5、10、15和20 μg/L时分别为0 μg/L时的1.33倍（P = 0.024)、1.39倍（P = 0.035）、1.45倍（P = 0.025）和1.51倍（P = 0.000)。而Numb蛋白和mRNA的表达亦随TGF-β1作用时间的延长而增高,作用24 h、48 h、72 h,Numb蛋白分别为0 h的1.48倍（P = 0.046)、1.54倍（P = 0.011）、1.79倍（P = 0.028）,Numb mRNA分别为0 h的1.56倍（P = 0.012)、1.82倍（P = 0.008）、1.82倍（P = 0.002）;同时Numb的分布也发生了改变,大量聚集在胞质中。下调Numb表达可以显著抑制TGF-β1诱导的α-SMA表达上调（为Numb表达正常时的18.1%,P = 0.004）、E-cadherin表达下调（为Numb表达正常时的2.19倍,P = 0.004）。 结论 Numb可以促进肾小管上皮细胞发生转分化。     

Klotho mitigates cyclosporine A (CsA)-induced epithelial–mesenchymal transition (EMT) and renal fibrosis in rats

Purpose

Klotho deficiency is implicated in various kidney diseases, including renal fibrosis. The aim of this study was to investigate the effect of Klotho administration on epithelial–mesenchymal transition (EMT) and renal fibrosis induced by cyclosporine A (CsA) in rats.

Methods

CsA-induced renal fibrosis was established by oral administration of CsA (30 mg/kg) to rats on a low-salt diet for 28 days. Klotho was administered to rats by intraperitoneal injection. Renal pathological changes were evaluated by hematoxylin and eosin and Masson’s trichrome staining. The EMT response was assessed by measuring the level of TGF-β1, E-cadherin and α-SMA by immunohistochemistry and Western blot.

Results

Administration of CsA for 28 days induced renal damage, decreased Klotho expression and activated the EMT response (demonstrated as increased TGF-β1 and α-SMA expression accompanied by decreased in E-cadherin expression). Treatment with Klotho significantly ameliorated pathological lesions of the kidney by modulating the expression of EMT-associated proteins in the kidney.

Conclusions

Klotho inhibits CsA-induced EMT and renal fibrosis in rats. Klotho may serve as a therapeutic agent to minimize CsA-induced renal fibrosis.

     

罗格列酮对高血压大鼠的肾保护作用及其与血管紧张素Ⅱ受体表达的关系

目的 研究罗格列酮对高血压肾损伤的保护作用，及其与肾内血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)受体表达的关系。 方法 两肾一夹高血压大鼠随机分为:(1)高血压未治疗组；(2)普通降压组(利血平50 µg·kg^-1·d^-1+二肼苯达嗪6.25 mg·kg^-1·d^-1+氢氯噻嗪6.25 mg·kg^-1·d^-1)； (3)常规剂量罗格列酮组(罗格列酮5 mg·kg^-1·d^-1)；(4)大剂量罗格列酮组(罗格列酮20 mg·kg^-1·d^-1)。假手术大鼠作为对照。 结果 常规剂量罗格列酮组收缩压为(176±18) mm Hg，与高血压未治疗组(191±25) mm Hg相比，无显著差异。大剂量罗格列酮组收缩压为(143±16) mm Hg， 普通降压组收缩压为(137±27)mm Hg，与高血压未治疗组相比，差异有统计学意义(P < 0.05)。 在血压、血糖、血脂水平相似的情况下，大剂量罗格列酮组尿蛋白排泄率为(16.78±3.50)mg/24 h，较普通降压组(27.94±12.79)mg/24 h显著降低(P < 0.05)。未钳夹侧肾脏病理改变轻，大剂量罗格列酮组肾小球损伤指数为18.04±7.76，与普通降压组27.92±6.39相比，差异有统计学意义(P < 0.05)；大剂量罗格列酮组微动脉壁/腔比为1.75±0.38，与普通降压组2.16±0.90相比，差异有统计学意义(P < 0.05)；大剂量罗格列酮组2型血管紧张素Ⅱ受体(AT2R)mRNA表达上调。 结论 罗格列酮对高血压肾损伤具有保护作用，可能与其上调肾内AT2R表达有关。     

Albumin-induced epithelial mesenchymal transformation

Background: Progressive chronic kidney disease is often associated with albuminuria and renal fibrosis linked to the accumulation of myofibroblasts producing extracellular matrix. Renal myofibroblasts are derived from a number of cells including tubular epithelial cells (TECs) through epithelial mesenchymal transformation (EMT). This study explores the hypothesis that exposure of TECs to albumin induces EMT. Methods: Normal rat TECs (NRK52E) were exposed in culture to de-lipidated bovine serum albumin (dBSA; 10 mg/ml) for 2, 4 and 6 days. Binding/uptake of fluoresceined albumin by PTCs was evaluated. Transformation into myofibroblasts was assessed by light and electron microscopy, immunofluorescence and Western blotting for α-smooth muscle actin (α-SMA), E-cadherin and transforming growth factor-β1 (TGF-β1). We also investigated the expression of fibroblast-specific protein-1 (FSP-1) and collagens I, III and IV. TGF-β1 biological activity, mRNA and protein were measured. A neutralising anti-TGF-β1 antibody was used to analyse the role of TGF-β1 in albumin-induced EMT. Results: Exposure of TECs to dBSA led to binding/uptake of albumin as well as fibroblastic morphological changes. Incubation of TECs with dBSA caused a reduction of TEC marker E-cadherin (ANOVA p = 0.0002) and de novo expression of fibroblast markers α-SMA and FSP-1 (ANOVA p = 0.0001) in a time-dependent manner. It also increased expression and activity of TGF-β1. Neutralisation of TGF-β1 significantly reduced EMT (p < 0.01). Conclusion: This study demonstrates that in vitro, albumin induces the transformation of TECs into cells with myofibroblast characteristics; a process that may be TGF-β1 dependent.     

丹参抑制转化生长因子-β1诱导的肌源性干细胞向肌成纤维母细胞分化

目的 观察丹参对失神经骨骼肌肌源性干细胞(MDSCs)向肌成纤维母细胞分化的抑制作用.方法 采用差速贴壁法分离出大鼠失神经骨骼肌MDSCs,加入转化生长因子-β1(TGF-β1)和丹参进行干预,将细胞分为3组:A:对照组;B:10 μg/L TGF-β1组;C:10 μg/L TGF-β1+ 150 mg/L丹参组.荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞在干预后5个时间点α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白(Vimentin) mRNA和蛋白表达.结果 与A组比较,B组和C组细胞α-SMA、Vimentin的mRNA在干预后第2、3、5、7天均明显升高(P＜0.05),其蛋白表达在干预后第3、4、6、8天亦显著升高(P＜0.05);与B组比较,C组细胞α-SMA、Vimentin的mRNA和蛋白在对应时间点均明显降低(P＜0.05).结论 丹参能抑制TGF-β1诱导的失神经骨骼肌MDSCs向肌成纤维母细胞的分化.