CMTM5通过下调HER2抑制前列腺癌的肿瘤行为

目的：CMTM5是一种在多种肿瘤中发生下调的抑癌分子,有可能影响跨膜信号转导。现有的临床试验证实,与其他上皮来源、具有HER2基因表达的肿瘤不同,针对表皮生长因子受体(EGFR)的靶向治疗在前列腺癌中并不奏效,提示前列腺肿瘤中HER2可能有其他的促癌机制。本文的目的在于观察CMTM5与HER2在促进前列腺肿瘤的发生中可能存在的联系,以期发现新的治疗靶点。方法：通过芯片技术观察了不同分级肿瘤的HER2及CMTM5的表达水平。比较转染了CMTM5-v1之后前列腺癌细胞系PC3中HER2水平的变化以分析两者之间可能存在的关联性。结果：随着肿瘤分级升高,HER2水平升高而CMTM5水平降低。PC3细胞系中CMTM5过表达可以降低HER2的蛋白水平进而减少细胞周期调控蛋白CyclinD1的水平,从而抑制细胞分裂。结论：前列腺癌中,HER2很有可能不是通过EGFR发挥促癌作用,因而目前针对EGFR的靶向治疗对前列腺癌效果不佳。在肿瘤中降低的CMTM5作为一种新发现的HER2抑制分子有可能成为新的治疗靶点。     

灵芝孢子油抑制前列腺癌LNCaP细胞中AR激活及转录活性

目的:研究灵芝孢子油对双氰睾酮诱导的前列腺癌LNCaP增殖、雄激素受体AR的激活和转录活性及相关激酶的影响。方法:采用质粒转染、Western blot、CCK-8细胞增殖活性检测及双色荧光素酶报告基因活性等研究灵芝孢子油对雄激素依赖的前列腺癌LNCaP细胞的作用。结果:CCK-8检测显示灵芝孢子油明显降低DHT刺激的LNCaP细胞的增殖活性,同时,Western blot检测表明灵芝孢子油降低了DHT诱导的前列腺癌LNCaP细胞中AR和蛋白激酶D的磷酸化活性,而对其本底蛋白的表达水平无影响。荧光素酶报告基因活性检测进一步表明灵芝孢子油明显抑制DHT诱导的LNCaP细胞中AR的转录激活活性。结论:灵芝孢子油可能通过抑制AR的激活及其转录活性而抑制雄激素依赖的前列腺癌细胞的增殖。     

CMTM5与表皮生长因子受体在前列腺癌中的表达及意义

目的：通过检测CMTM5（CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 5）及表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）在前列腺癌中的表达,分析其在前列腺癌发生及发展中可能存在的联系。方法：免疫组织化学检测前列腺癌和良性前列腺增生（benigh prostatic hyperlasia,BPH）组织中CMTM5的表达,分析其与前列腺癌临床病理学特征的关系;免疫组织化学检测EGFR在前列腺癌组织中的表达,并分析其与CMTM5在前列腺癌中表达水平的关系;Western blot检测CMTM5和EGFR在BPH组织及各前列腺癌细胞系的表达。结果：免疫组织化学结果显示,CMTM5在75%（27/36）BPH和35.9%（23/64）前列腺癌组织中高表达,差异有统计学意义（P=0.000 2）。CMTM5的表达水平与年龄、临床分期、有无转移之间无明显关系（P>0.05）, 在中高度分化（Gleason评分≤7）的肿瘤组织中,CMTM5的表达水平高于低度分化（Gleason评分≥8）的肿瘤组织,差异有统计学意义（P=0.003）。EGFR在57.8%的前列腺癌组织中高表达（37/64）,其与CMTM5表达水平的差异有统计学意义（P=0.021）。23例前列腺癌组织CMTM5低表达且EGFR高表达,占35.9%。Western bolt结果显示CMTM5在BPH组织中表达,但在各前列腺癌细胞系中均表达缺失,而EGFR在BPH组织中的表达低于各前列腺癌细胞系,特别是激素非依赖性细胞系PC3和DU145。结论：CMTM5的表达缺失与EGFR的过表达可能同时参与了前列腺癌的发生与发展。     

姜黄素对前列腺癌LNCaP细胞PSA生成及AR表达的影响

【目的】研究姜黄素对前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖的影响。【方法】化学发光法检测不同浓度的姜黄素处理前列腺癌细胞株LNCaP后前列腺特异抗原(PSA)含量,利用荧光素酶报告基因pGL-3构建含PSA基因5’侧启动子区640 bp DNA的荧光素酶表达载体pGL3-PSA,并将其转染LNCaP细胞,不同浓度姜黄素作用24 h后应用荧光素酶测定系统检测荧光素酶表达活性。用免疫印迹Western-blotting技术检测雄激素受体(AR)的表达。【结果】姜黄素抑制LNCaP细胞培基中PSA蛋白及含PSA启动子的荧光素酶活性的表达;形态学结果显示姜黄素可抑制前列腺癌细胞LNCaP的增殖;Western-blotting技术检测结果显示姜黄素抑制AR的表达,并且对AR表达的抑制程度依赖于姜黄素的浓度。【结论】姜黄素对PSA启动子的影响及PSA蛋白表达的抑制作用是通过抑制雄激素受体(AR)的表达实现的,姜黄素能够抑制前列腺癌细胞LNCaP的增殖。     

组蛋白去乙酰基酶在前列腺癌中的作用及机制研究

目的 研究组蛋白去乙酰基酶在前列腺癌中的作用及机制.方法 采用LNCaP细胞系建立前列腺癌异种移植体动物模型,分为对照组和HDAC抑制剂组,对照组动物常规饲养,HDAC抑制剂组采用0.4％HDAC抑制剂丙戊酸（VPA）饮用水连续饮用35 d.免疫组化法检测乙酰化组蛋白H3、p21WAF1/CIP1、p27KIP1、细胞周期蛋白D1、雄激素受体（AR）表达.结果 与对照组相比,HDAC抑制剂组乙酰化组蛋白H3阳性染色MOD值显著升高[（0.63±0.12）比（0.75±0.11）,P＜0.05],p21 WAF1/CIP1[（0.27 ±0.06）比（0.79±0.10）,P＜0.05]和p27KIP1 [（0.31 ±0.08）比（1.09±0.18）,P＜0.05]阳性染色MOD值显著增加,细胞周期素D1的阳性染色MOD值显著减少[（0.69±0.09）比（0.58±0.08）,P＜ 0.05],AR阳性染色MOD值显著降低[（0.62±0.10）比（0.53±0.07）,P＜0.05].结论 HDAC参与前列腺癌细胞的细胞周期调控并与AR过表达有关,HDACI可通过诱导癌细胞周期阻滞及下调AR表达水平等机制抑制前列腺癌肿瘤移植体生长.     

二氢睾酮对前列腺癌LNcap和PC-3细胞株EGFR mRNA表达的影响

目的探讨AR免疫表型突变对前列腺癌(prostate carcinoma,PCa)增殖和凋亡效应的影响机制,为PCa的病理及临床提供实验依据.方法应用不同水平DHT刺激LNcap和PC-3细胞株,检测EGFR mRNA及蛋白在不同AR表达的PCa中的表达特点,研究雄激素及AR与PCa增殖和凋亡的相关性.结果低水平DHT促进LNcap细胞EGFRmRNA的表达,促进LNcap细胞增殖,随DHT水平升高EGFR mRNA表达下降,增殖活性下降,不加DHT组EGFR mRNA表达较低.低水平DHT与不加DHT对PC-3细胞EGFR水平影响不大,增殖活性较高,高水平DHT刺激则EGFR表达下降.结论在AR正常表达情况下,雄激素可提高前列腺癌细胞EGFR水平且有剂量依赖性.AR表达异常,雄激素信号途径改变,不能影响EGFR的转录水平,EGFR的表达和激活可能受其他表达上调的细胞因子调控.     

敲减CMTM3增强前列腺癌细胞系PC3迁移与侵袭能力

目的：应用慢病毒载体shRNA对PC3细胞中的人趋化素样因子超家族成员3（CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 3,CMTM3）进行敲减,以探究CMTM3对前列腺癌细胞系生物学行为改变的影响。方法： 研究分为两组进行,其中shN为未敲减CMTM3的PC3细胞系对照组,sh393为敲减CMTM3的PC3细胞系实验组。运用Western blot检测PC3细胞系慢病毒shRNA敲减CMTM3后的表达,Transwell与细胞划痕实验检测敲减CMTM3对PC3细胞系迁移能力的影响,Matrigel实验检测敲减CMTM3对PC3细胞系侵袭能力的影响。结果： 前列腺癌细胞系PC3经慢病毒敲减CMTM3后,sh393组CMTM3表达水平明显低于shN组（0.004 0±0.000 4 vs. 0.490 0±0.055 7,P<0.001）, 且sh393组侵袭（248.6±4.5 vs. 113.0± 3.3）、迁移（203.6±1.9 vs. 103.0±1.2）及迁移愈合能力（95.0±2.9 vs. 33.0±1.5）均明显强于shN组（P<0.001）。结论： 敲减CMTM3可以影响PC3细胞的迁移与侵袭能力,CMTM3下调与PC3细胞系肿瘤生物学特性的改变可能具有负相关性。     

雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌雄激素受体表达水平的变化

目的:从雄激素受体表达水平变化的角度,探讨雄激素依赖性前列腺癌向雄激素非依赖性前列腺癌转化的可能机理。方法:体外培养雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP细胞)和雄激素非依赖性前列腺癌细胞株(PC-3细胞),应用流式细胞术测定两种细胞株在生理盐水和二氢睾酮(DHT)作用下雄激素受体(AR)的表达水平。结果:两种细胞株均有AR表达,两种条件下AR的表达水平分别为:LNCaP细胞生理盐水处理组85.99±4.97,DHT处理组93.74±3.63;PC-3细胞生理盐水处理组8.52±1.57,DHT处理组9.52±1.75,两种条件下LNCaP细胞的AR表达水平均高于相应条件下PC-3细胞的AR表达水平,两者有显著性差异(P<0.05)。DHT作用下LNCaP细胞的AR表达水平显著高于生理盐水作用下LNCaP细胞的AR表达水平(P<0.05);DHT作用下PC-3细胞的AR表达水平与生理盐水作用下PC-3细胞的AR表达水平无显著性差异(P>0.05)。结论:雄激素依赖性前列腺癌细胞过表达AR,并且二氢睾酮能促进其表达AR;雄激素非依赖性前列腺癌细胞AR表达较少,二氢睾酮对其AR表达无明显作用,雄激素依赖性前列腺癌向雄激素非依赖性前列腺癌转化可能与前列腺癌雄激素受体表达水平下降有关。     

前列腺特异性抗原密度在前列腺癌诊断中的价值

目的 探讨前列腺特异性抗原密度(PSAD)对良性前列腺增生与前列腺癌的鉴别诊断价值.方法 采集80 名健康人、160例良性前列腺增生患者和60例前列腺癌患者的血清,用化学发光免疫法测定前列腺特异性抗原(PSA),腹部前列腺B超检查计算前列腺体积,计算前列腺特异性抗原密度. 结果前列腺癌患者PSA和PSAD水平分别为(82.66±20.62) μg/L和(0.68±0.2),前列腺癌患者中PSA和PSAD水平明显高于前列腺增生患者. 160例良性前列腺增生患者血清PSA水平为4～10 μg/L,明显高于正常对照组,前列腺癌组中PSA>10 μg/L 和PSAD>0.2明显高于前列腺增生患者.血清PSA>10 μg/L 诊断前列腺癌的敏感性和特异性分别为50.0%和91.3%,PSAD诊断前列腺癌的敏感性和特异性为96.7%和85.0%. 结论 PSAD是诊断前列腺癌更敏感、更有效的指标,在前列腺癌和良性前列腺增生中有鉴别意义.     

人前列腺不同生长发育期雄激素受体表达变化

目的检测雄激素受体(AR)在人前列腺不同生长发育时期表达的变化,探讨它们变化的病理意义。方法采用免疫组化两步法检测10例胎儿前列腺(EP)、10例正常前列腺(NP)、20例前列腺增生(BPH)、20例雄激素依赖性前列腺癌(ADPC)和15例激素非依赖性前列腺癌(AIPC)组织的AR表达。结果 EP细胞浆和细胞核均有AR表达,且间质细胞AR表达先于腺上皮AR表达。NP组织的AR表达主要集中在上皮细胞核,与EP相比,基底细胞和间质细胞AR表达明显减少,而BPH组织的腺上皮细胞和间质细胞均有AR的较强表达。AR在前列腺癌(Pca)的表达位于癌细胞核,AIPC的AR表达比ADPC明显增强。结论 AR表达的变化与人前列腺不同生长发育时期和前列腺癌的发生发展密切相关。     

survivin启动子的克隆及其在前列腺癌细胞系中的活性鉴定

目的克隆survivin启动子片段,并检测其在人前列腺癌细胞中的转录活性,为该启动子在前列腺癌靶向基因治疗中的应用提供实验依据。方法PCR方法扩增survivin基因启动子S1pro和S2pro,克隆入pGL3-Basic,分别构建重组质粒pGL3-S1pro和pGL3-S2pro,脂质体转染前列腺癌细胞和Changliver肝细胞,检测survivin启动子在细胞中的转录活性。结果survivin基因启动子在前列腺癌细胞中均具有较强活性,其中S2pro活性明显高于S1pro,达到CMV启动子活性的三分之一。结论survivin启动子在前列腺癌细胞中具有较强启动活性,有可能成为新的前列腺癌靶向性基因治疗工具。     

IL-6调节miR-21在激素抵抗性前列腺癌中的机制研究

目的检测转染微核糖核酸-21抑制剂（miR-21-inhibitor）前后前列腺癌细胞PC3在不同白细胞介素-6（IL-6）浓度下微核糖核酸-21（miR-21）的表达情况,细胞的增殖能力及雄激素受体（AR）,转录信号诱导和激活者3（STAT3）水平。分析IL-6和miR-21在前列腺癌非依赖性进程中的作用及意义。方法通过RT-PCR检测不同IL-6浓度培养下非依赖性细胞系PC3在转染miR-21前后miR-21的表达情况。通过CCK-8检测转染前后细胞的增殖能力。通过western blot检测不同IL-6浓度培养下PC3细胞AR,STAT3的表迭情况。结果转染miR-21能显著的抑制前列腺癌细胞miR-21的表达量,并抑制前列腺癌细胞的增殖。IL-6在短期促进PC3细胞的增殖,并且诱导miR-21的高表达。IL-6短期能够诱导PC3细胞系AR,STAT3高表达。结论IL-6在非依赖性前列腺癌的进展中起重要作用,长期培养下IL-6对前列腺癌细胞系的作用需要进一步研究。miR-21与前列腺癌的恶性程度及依赖性相关,在前列腺癌的非依赖性进程中起重要作用,miR-21有希望成为非依赖性前列腺癌的一个潜在治疗靶点。IL-6可以诱导miR-21高表达,AR,STAT3在这-通路中起重要作用。     

NDRG3对前列腺癌细胞致癌潜能的影响

目的：研究过表达外源性和RNA干扰内源性NDRG3对前列腺癌细胞克隆形成的影响。方法：将NDRG3表达质粒稳定转染人类PC3前列腺癌细胞株,用1个NDRG3稳定表达亚克隆与做为对照的亲代和空质粒转染的PC3细胞进行克隆形成实验;同时利用RNA干扰技术沉默CL-1细胞的内源性NDRG3,并用Western blotting技术进行鉴定,在对照组、GFP-siRNA组和NDRG3-siRNA组进行克隆形成实验。结果：过表达外源性NDRG3的PC3细胞形成的克隆数明显多于亲代和空质粒转染的PC3细胞株;在RNA干扰实验中,CL-1对照组和GFP-siRNA组形成的总克隆数和大克隆数均明显多于NDRG3-siRNA组（P<0.05）。结论：NDRG3可以提高前列腺癌细胞的致癌潜能和克隆形成能力。     

NKX3.1与PTEN在前列腺癌组织表达及NKX3.1转染对PC3细胞效应的研究

目的 探讨前列腺癌组织中前列腺特异性同源框基因NKX3.1及抑癌基因PTEN(MMAC1/TEPI)蛋白的表达，相关性及意义；NKX3．1对其表达缺失株前列腺癌PC3细胞生长的影响效应。方法 对30例前列腺腺癌，1例前列腺肉瘤。10良性前列腺增生(BPH)进行组织X3．1与PFEN蛋白表达的免疫组化研究；稳定转染PC3细胞，研究NKX3．1对PC3细胞形态、细胞周期、增殖速率等影响。结果 (1)31例前列腺恶性肿瘤组织NKX3．1蛋白阳性表达率48．39％，PTEN蛋白阳性表达率29．03，良性前列腺增生中分别为70％、50％；未发现NKX3．1蛋白表达强度与PTEN蛋白表达存在相关性；(2)稳定转染NKX3．1基因的PC3细胞形态明显改变。细胞从G1期到S期发生抑制，MTT检测示细胞增殖活性明显降低。提示转染外源性NKX3．1基因可阻滞PC3细胞由G1期进入S期，并抑制肿瘤细胞增殖。结论 NKX3．1与PTEN基因失活在前列腺肿瘤发病中有重要作用，NKX3．1对其表达缺失的雄激素非依赖性细胞株PC3有生长抑制效应。     

去除雄激素对前列腺癌中凋亡抑制蛋白Bcl-2和Bcl-XL表达的影响

目的：探讨去除雄激素对人前列腺癌（PCa)细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达的影响。方法：采用雄激素依赖PCa细胞株LNCaP为研究对象,雄激素非依赖PCa细胞株PC－3为对照;以Western印迹法检测去除雄激素后Bcl-2和Bcl-XL蛋白的表达。结果：在LNCaP中去除雄激素12h后Bcl-2蛋白的表达开始升高,到24h最明显,而去除雄激素10h后Bcl-XL蛋白表达开始降低,在24h达最低,而在PC－3中去除雄激素前后未见Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达改变,结论：去除雄激素可促PCa细胞中Bcl-XL蛋白表达降低,可能是手术或药物去势治疗前列腺癌的机制之一,Bcl-2蛋白的表达升高可能和后期PCa雄激素非依赖性生长有关。     

活化的STAT3蛋白质抑制剂PIAS3在前列腺癌中的表达及意义

目的 比较活化的STAT3蛋白质抑制剂(PIAS3)在人雄激素依赖性前列腺癌(ADPC)和雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)中的表达情况,探讨其表达与前列腺癌发生雄激素非依赖的关系.方法 应用cDNA芯片技术筛选出AIPC中的上调基因PIAS3.分别用免疫组织化学、Western印迹及半定量RT-PCR技术检测PIAS3在ADPC和AIPC组织及细胞系中的差异表达.结果 (1)基因芯片结果显示PIAS3基因在ADPC和AIPC中表达有显著性差异,在AIPC中明显高表达.(2)半定量RT-PCR显示PIAS3mRNA在AIPC细胞中的表达水平高于ADPC细胞.(3)Western印迹结果显示:PIAS3蛋白质在AIPC细胞系中表达水平显著高于ADPC细胞系.(4)免疫组化检测结果显示PIAS3在前列腺癌中表达阳性,在AIPC中PIAS3阳性表达率明显高于ADPC,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PIAS3的表达水平和前列腺癌的雄激素依赖情况相关,在AIPC中表达水平显著高于ADPC.提示PIAS3基因对雄激素受体的调节发挥了重要作用,使前列腺癌细胞在无雄激素的条件下继续增殖,可能是雄激素非依赖发生的关键.     

抗端粒酶M1RNA核酶真核表达载体构建及肝癌细胞转染的研究

目的构建抗人端粒酶RNA(hTR)的M1RNA核酶的真核表达载体,并筛选稳定转染核酶的肝癌细胞株。方法设计并应用PCR技术合成hTR模板的M1RNA核酶,应用pEGFPC1载体构建M1RNA核酶的真核表达质粒,应用脂质体LipofectAMINEAM2000转染肝癌细胞系HepG2,应用G418筛选稳定表达核酶的细胞株。结果测序证实hTR的M1RNA核酶基因被正确克隆入真核表达载体pEGFPC1,应用脂质体成功转染肝癌细胞系HepG2。结论成功构建了hTR的M1RNA核酶,并筛选出了稳定表达核酶的肝癌细胞株。     

PKCzeta在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞增殖的影响

目的 检测PKCzeta在不同分级前列腺癌(PCa)组织的表达情况,并探究PKCzeta的表达对前列腺癌细胞系增殖的影响.方法 采用免疫组织化学染色法检测19例前列腺癌组织和4例正常前列腺组织的PKC-zeta表达情况,并按肿瘤分级分为3组,进行PKCzeta表达的差异性分析;应用Hilymax试剂转染PKCzeta质粒(CA-PKCzeta)过表达前列腺癌细胞PKCzeta;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot分别检测PC3和DU145细胞内PKCzeta的mRNA和蛋白水平;利用平板克隆形成试验和CCK-8试剂盒检测PC3和DU145细胞增殖能力的差异以及转染PKCzeta质粒后细胞增殖的变化.结果 PKCzeta在前列腺癌组织中的表达高于正常前列腺组织(P＜0.05),而且低分级(1级)前列腺癌PKCzeta的表达高于高分级(2～3级)前列腺癌(P＜0.05).DU145细胞的PKCzeta表达高于PC3细胞,而其增殖速度较PC3细胞低;过表达PKCzeta使前列腺癌细胞系的增殖受抑.结论PKCzeta与肿瘤分级存在负相关关系,在癌症早期可能有一定的保护作用,且过表达PKCzeta能抑制前列腺癌细胞的增殖.     

RUNX3参与抑制人前列腺癌迁移和血管发生

目的研究RUNX3基因对前列腺癌的发生与迁移的影响,并探讨其分子作用机制。方法运用肿瘤组织芯片（tissue microarray,TMA）技术评估RUNX3在前列腺癌发生过程中的作用;分别用RUNX3的真核表达载体pFlag—RUNX3和对照载体pFlag—control转染人前列腺癌细胞系PC3和DU145细胞;细胞迁移实验、细胞侵袭实验和微血管形成实验分别检测RUNX3基因高表达对2种前列腺癌细胞迁移、侵袭和促血管生成能力的影响;利用RT—PCR和Western blot检测RUNX3基因表达后对2种前列腺癌细胞中基质金属蛋白酶抑制因子-2（tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2）和基质金属蛋白酶-2（metalloproteinase-2,MMP-2）mRNA和蛋白表达的影响;明胶酶谱实验和ELISA实验检测RUNX3基因表达后对2种前列腺癌细胞分泌活性MMP-2和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的影响。结果相较于癌旁组织,RUNX3在前列腺癌组织中异常低表达,且与肿瘤分级有关。过表达RUNX3会上调TIMP-2、抑制MMP-2的表达与激活,从而抑制前列腺肿瘤细胞的迁移与侵袭。在前列腺细胞中抑制RUNX3表达会破坏TIMP-2和MMP-2之间的平衡,沉默TIMP-2会抑制MMP-2的表达。恢复RUNX3表达会降低VEGF的分泌,从而抑制内皮细胞生长和血管生成。结论RUNX3通过TIMP-2和VEGF通路对前列腺癌产生抑制作用。