促肝细胞生长素对大鼠肝星状细胞增殖及α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的影响

目的:探讨促肝细胞生长素(pHGF)对大鼠肝星状细胞HSC-T_6增殖及α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的影响。方法:(1)采用MTT法分析pHGF对HSC-T_6细胞增殖的影响。(2)构建含人α1(Ⅰ)胶原基因5′侧翼序列(启动子)与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的重组体 pCOLH1.5,以脂质体法转染HSC-T_6细胞,ELISA法测定不同浓度pHGF作用24 h后,转染了重组体质粒的HSC-T_6细胞的CAT表达量。结果:(1)不同浓度pHGF对HSC-T_6细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组比较有明显差异(P<0.01)。(2)pHGF在200 μg/ml时对转染重组体质粒pCOLH1.5的HSC-T_6细胞的CAT活性具有明显的抑制作用,与对照组相比差异显著(P<0.05);增加pHGF浓度至400μg/ml时,对CAT活性抑制更为明显,与对照组相比差异非常显著(P<0.01)。结论:pHGF对HSC-T_6细胞增殖具有明显的抑制作用;对α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性具有负性调控作用。     

链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人正常肝细胞生长的影响

目的观察链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞生长增生的影响。方法常规培养链球菌,提取细菌全蛋白并通过阴离子交换层析获得蛋白分离组分SpⅠ和SpⅡ。不同浓度链球菌蛋白(10、50、100mg/L)作用于人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞24～72h后,采用MTT法检测两种细胞的增生活性。倒置显微镜下观察50mg/L链球菌全蛋白和SpⅡ对两种细胞的形态学变化。结果MTT结果显示,链球菌全蛋白及SpⅡ能显著抑制Bel-7402细胞的生长,与蛋白剂量和作用时间呈负相关关系;SpⅠ对Bel-7402细胞未显示出明显增生抑制作用。链球菌全蛋白及SpⅡ对人Chang氏正常肝细胞显示出不同程度的刺激生长作用。倒置显微镜下观察,链球菌全蛋白及SpⅡ作用后的Bel-7402细胞,细胞稀疏、脱落、排列紊乱,失去正常形态,而人Chang氏细胞未发现明显的形态学变化。结论链球菌全蛋白及SpⅡ能抑制人肝癌Bel-7402细胞的增生,并且能在一定程度上促进人Chang氏正常肝细胞增生。     

小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响

目的观察小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用.方法体外培养人肝癌Bel-7402细胞,台盼兰活细胞计数及集落形成抑制实验观察不同浓度小檗碱对Bel-7402细胞的增殖抑制作用,Hochest33258染色观察凋亡形态学变化,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率.结果小檗碱可显著抑制Bel-7402细胞生长,使集落形成能力明显下降,均呈时间、剂量依赖性.小檗碱处理后72 h,Hochest33258染色可观察到细胞核边集、固缩,有明显凋亡小体形成,流式细胞仪检测出现明显Sub-G1峰.结论小檗碱可以抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡,小檗碱可能具有治疗人肝细胞癌的潜在应用价值.     

芭蕉花活性成分提取及其体外生物活性研究

目的 研究芭蕉花的活性成分及其体外生物活性.方法 通过硅胶柱色谱、大孔树脂、TLC分离等对芭蕉花提取物进行分离,并用高效液相色谱,结合质谱分析等方法,进行成分鉴定;采用体外MTT法进行芭蕉花活性组分对抑制肝癌BEL-7402细胞增殖作用的筛选,对抑制AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖作用进行活性筛选.结果 通过液-质分析,从芭蕉花乙酸乙酯提取物和石油醚提取物中发现其中有一种化合物可能为豆甾醇.MTT筛选发现芭蕉花石油醚提取物的4种萃取物组分中,乙酸乙酯相和石油醚相对肝癌BEL-7402细胞具有显著的增殖抑制作用(P<0.01),且呈一定的剂量和时间依赖性;芭蕉花的3种提取物组分中,乙酸乙酯相和石油醚相对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖具有显著的抑制作用(P<0.01),且其抑制作用呈一定的剂量和时间依赖性.结论 芭蕉花石油醚提取物的石油醚萃取部位和乙酸乙酯萃取部位对肝癌BEL-7402细胞具有显著的增殖抑制作用,72 h的IC50分别为67.4μg/mL和34.5μg/mL,且石油醚提取物和乙酸乙酯提取物对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖有抑制作用,72 h的IC50为55.5μg/mL.从芭蕉花提取物中分离出单体豆甾醇,为芭蕉花活性成分的深入研究提供了参考.     

端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用

目的本研究将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸（PS-ASODN）经lipotap脂质体转染作用于肝癌细胞系BEL-7402,观察其对肝癌细胞端粒酶活性的影响,同时检测其对癌细胞的生长抑制作用,旨在探讨PS-ASODN对肝癌的治疗价值,为临床治疗肝癌提供一定的试验数据。方法分别采用MTT法、流式细胞术、酶联免疫吸附（ELISA）法检测不同浓度PS-ASODN对bel-7402的细胞增殖、细胞凋亡和端粒酶活性的作用。结果PS-ASODN能抑制BEL-7402细胞的生长,降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡。结论端粒酶与BEL-7402增殖活性有关,抑制端粒酶活性可能成为肝癌基因治疗的新靶点。     

复方斑蝥含药血清抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖的机制研究

目的 探讨复方斑蝥抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖的作用机制.方法 血清药理学方法制备复方斑蝥血清并处理人肝癌Bel-7402细胞,MTY方法观察其对人肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制作用,RTPCR技术检测其对c-Myc、p53基因表达的影响.结果 复方斑蝥含药血清能够显著抑制Bel-7402细胞的增殖,并下调c...     

半边旗提取物5F对肝细胞癌BEL-7402生长抑制作用及增殖细胞核抗原表达的影响

目的 研究半边旗提取物5F对肝细胞癌BEL-7402细胞生长的抑制作用.方法 MTT法检测5F对BEL-7402细胞的生长抑制作用;用Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡:流式细胞仪检测5F对细胞周期的影响;免疫细胞化学法检测5F对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 5F抑制BEL-7402细胞的生长,其效果与5F的浓度和作用时间相关,24、48和72h的IC50分别为60.33、21.32和11.22 mg/L;荧光双染色法显示经5F作用后细胞出现变形,染色质浓缩,产生凋亡小体;细胞被阻滞在G2/M,PCNA阳性表达率降低.结论 5F在体外能有效地抑制BEL-7402细胞的生长,其诱导凋亡作用可能与下调增殖细胞核抗原(PCNA)表达有关.     

甘草查尔酮类化合物对人肝癌Bel-7402细胞的抗癌活性研究

目的以天然查尔酮类化合物异甘草素(ILG)为先导物进行结构修饰,制备3-甲氧基异甘草素(3-MO-ILG),并研究ILG与3-MO-ILG的体外抗癌活性。方法利用酸催化的羟醛缩合反应制备ILG与3-MO-ILG目标化合物;应用人肝癌Bel-7402细胞为体外模型,用MTT法观察2种化合物对肝癌细胞增殖的抑制活性;用流式细胞仪测定促Bel-7402细胞凋亡能力;用张氏肝细胞(chang liver)测定对正常细胞的毒性。结果化合物ILG和3-MO-ILG对正常肝细胞无明显毒性,而对肝癌Bel-7402细胞的增殖有一定的抑制活性,浓度在5～200μg/mL范围内,对肝癌Bel-7402细胞的抑制率分别为23.28%～80.01%及41.96%～86.10%;2种化合物对肝癌细胞有明显的促进凋亡作用,最高凋亡率分别可达85%和93.5%。结论人肝癌Bel-7402细胞对甘草查尔酮类化合物具有较高的敏感性;ILG衍生物对人肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制活性呈浓度依赖性,而对正常细胞的毒性明显小于对癌细胞的毒性;其抗癌作用机制可能是通过增殖抑制和促进凋亡来产生。本研究为甘草查尔酮类化合物中筛选抗肝癌候选药物奠定一定基础。     

祁连圆柏提取物诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡的作用及筛选研究

目的探讨祁连圆柏提取物体外对人肝癌细胞Bel-7402体外增殖抑制、凋亡作用机制并进行有效组分筛选研究。方法采用硅胶柱层析法提取祁连圆柏有效抗瘤组分,分光光度法测定含量。用克隆形成实验、台盼蓝拒染法及MTT显色法检测祁连圆柏提取物对Bel-7402细胞增殖的影响,流式细胞术检测其诱导细胞凋亡的细胞周期阻滞状况及凋亡率,免疫组化观察对Bcl-2与Bax蛋白的表达水平,光镜、电镜观察凋亡细胞的组织形态和超微结构变化。结果祁连圆柏提取物对Bel-7402细胞增殖有明显的抑制作用,其中C液-组分-3细胞的半数抑制浓度为2.47μg/ml。流式细胞检测结果 G0/G1期细胞增多,G2/M期细胞减少,其中10～50μg/ml的祁连圆柏C液-组分-3在G1期细胞前出现典型"凋亡峰";免疫组化SP法检测实验组细胞BCL-2基因蛋白表达降低,Bax基因蛋白表达增加。光镜与电镜下均见凋亡细胞明显增多。结论祁连圆柏C液-组分-3具有显著的抑制Bel-7402细胞增殖以及诱导该细胞系凋亡的作用,其诱导Bel-7402细胞凋亡的作用与其上调Bax、下调Bcl-2蛋白的表达,激活Bax凋亡基因蛋白及G0/G1期阻滞有关,是其重要的抗肿瘤作用机制。     

苯那普利活性形式对胰岛素抵抗细胞模型的胰岛素敏感性的影响

为探讨苯那普利对胰岛素敏感性的影响，我们以高胰岛素诱导培养法复制的胰岛素抵抗（ＩＲ）原代大鼠肝细胞模型为研究对象，采用３Ｈ一葡萄糖掺入试验等技术，了解含有苯那普利活性形式一苯那普利拉的大鼠血清对ＩＲ细胞模型及对照大鼠肝细胞的胰岛素刺激下的葡萄糖掺入率、胰岛素酶活性及胰岛素受体数目的影响。结果显示，含苯那普利拉的血清能显著提高ＩＲ细胞模型及对照细胞的胰岛素介导的葡萄糖摄取和利用能力，对ＩＲ细胞模型的作用尤为显著。但对胰岛素酶活性及胰岛素受体数目无明显影响。本研究提示，苯那普利在体内的活性形式能提高胰岛素靶细胞的胰岛素敏感性，并对皿的发展有一定的阻止作用。     

反义核酸对胃癌细胞端粒酶活性与细胞生长的抑制

目的阐述反义核酸对端粒酶活性抑制作用的浓度依赖性和序列特异性,表明端粒酶活性表达对胃癌细胞分化的不依赖性. 方法运用改良的端粒酶活性定量检测法,测定三种胃癌细胞(MKN-28、SGC-7901、MKN-45)的端粒酶活性;用台盼蓝染色法,观察胃癌细胞的活力.结果三种不同分化程度的胃癌细胞均有端粒酶活性的表达,但其活性的高低与其分化程度没有显著关系.在指定的浓度下,端粒酶反义核酸作用于胃癌细胞后,MKN-45和SGC-7901胃癌细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长的抑制,但在同样浓度条件下,MKN-28胃癌细胞只出现端粒酶活性的抑制.错义序列对照组则无明显变化.结论端粒酶活性与胃癌细胞的分化没有显著相关性.端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制胃癌细胞的生长和端粒酶活性,其抑制作用有浓度依赖性和序列特异性,其作用机制是通过抑制端粒酶活性,端粒酶活性的抑制并不总是同细胞生长的抑制平行的.     

新型钌配合物通过内源性线粒体凋亡通路诱导Bel-7402细胞凋亡的机制

目的 研究钌配合物Ru-HMIP对肝癌细胞Bel-7402的抑制作用及其机制.方法 MTI法检测RuHMIP对Bel-7402细胞的杀伤作用;流式细胞术检测其诱导细胞凋亡情况;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS);Western blot检测细胞凋亡相关蛋白.结果 RuHMIP对Bel-7402细胞有较强的杀伤效果;其对细胞毒性作用是通过诱导细胞凋亡方式;Ru-HMIP在Bel-7402细胞中产生过量ROS,并且这种作用及其细胞毒性都可被还原剂乙酰半胱氨酸(NAC)所阻断.Ru-HMIP可以破坏Bel-7402细胞线粒体膜电位;上调Bax,下调Bcl-2,同时激活Caspase-9及Caspase-3.结论 Ru-HMIP可以在体外有效抑制Bel-7402细胞增殖,其作用机制是在细胞内诱发过量ROS,继而通过内源性线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡.     

蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用

[目的]观察蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用。[方法]肝癌细胞BEL-7402体外培养,采用MTT法检测蜂毒素对其增殖抑制作用,流式细胞术测定蜂毒素对细胞增殖核抗原表达和细胞周期的影响。[结果]蜂毒素体外能够抑制BEL-7402肝癌细胞的增殖活性;并抑制细胞增殖核抗原的表达,呈剂量依赖性;干扰细胞周期,使S期细胞增加,G2/M期细胞减少。[结论]蜂毒素具有抑制BEL-7402肝癌细胞增殖的作用,机制可能与抑制细胞增殖核抗原表达和干扰细胞周期有关。     

亚砷酸对人肝癌细胞生长增殖及分化的影响

目的 探讨岖砷酸对人肝癌细胞BEL-7402增殖、分化的作用。方法 通过体外细胞培养,用四氮唑盐(MTT)比色法观察细胞生长曲线的变化,台盼蓝拒染法观察细胞群体倍增时间(TD)的改变,并分别用自动化学发光法、生化法检测亚砷酸对细胞甲胎蛋白(AFP)合成及谷氨酰转肽酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响,用苏木精-伊红(HE)染色法及透射电镜观察细胞的分化形态特点。结果 亚砷酸(1．0～8．0μmol／L)能抑制BEL-7402细胞生长增殖,呈剂量、时间依赖性。亚砷酸(8．0μmoL／L)对BEL-7402细胞AFP合成及GGT、LDH活性有显著的抑制作用,HE染色及透射电镜观察可见部分细胞呈现分化的形态改变。结论 亚砷酸体外能够抑制人肝癌细胞生长增殖,并具有一定的诱导分化作用。     

买麻藤乙醇提取物抗氧化和抑制肿瘤作用的研究

目的 研究买麻藤50%和95%乙醇提取物对小鼠体内抗氧化作用及其对人肝癌BEL-7402细胞、人白血病HL-60细胞的体外抑制活性.方法 D-半乳糖造成实验性衰老小鼠模型,通过定试血清、肝、脑等组织内的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和ATP活性来观察买麻藤乙醇提取物对小鼠抗氧化能力的影响;MTT和SRB法测定买麻藤乙醇提取物对两种癌细胞的体外抑制作用.结果 买麻藤乙醇提取物对衰老小鼠各组织中的SOD、CAT、ATP活性都有明显升高;买麻藤乙醇提取物在质量浓度为1 mg/mL时,对BEL-7402细胞株的抑制活性最高为89.6%;在质量浓度为0.063 mg/mL时,对HL-60细胞株的抑制活性最高为87.0%.结论 买麻藤50%和95%乙醇提取物具有较好的小鼠体内抗氧化作用和体外抑制HL-60和BEL-7402肿瘤细胞生长的作用.     

溪黄草抗乙肝及抗肿瘤活性成分的体外筛选

目的 对溪黄草抗乙肝抗肿瘤活性部位进行初步筛选,为进一步分离活性成分奠定基础.方法 首先在HepG2.2.15细胞模型上对三种不同方法萃取所得的溪黄草提取物进行抗乙肝活性筛选,以用于进一步分析提纯.用MTT实验检测细胞毒性,ELISA和实时定量PCR检测细胞上清液中HBsAg、HBeAg的分泌及乙肝病毒DNA含量.然后,用硅胶柱色谱法进一步提取分离活性最大的提取物,用MTT和ELISA检测所分离各组分的抗乙肝活性.最后,在MCF-7,BGC-823和HepG2细胞中检测细胞毒性最大的三个组分的抗肿瘤活性.结果 乙酸乙酯萃取分离所得的提取物抗乙肝活性最大,可显著降低HepG2.2.15细胞的HBsAg、HBeAg抗原的分泌,并抑制乙肝病毒DNA的复制,被用来进一步分离提纯.从乙酸乙酯提取物中分离出14个组分,其中A3和A5组分对HBsAg有较好的抑制作用,A9组分对HBeAg有较好的抑制作用,并均存在明显的量效关系,且治疗指数均比乙酸乙酯提取物的要高.A6,A7和A11组分细胞毒性大,对不同的肿瘤细胞有不同的抑制活性.结论 溪黄草的乙酸乙酯提取物及其分离成分具有很强的抑制乙肝病毒复制的作用,从而具有很好的抗乙肝病毒活性,进一步提取分离有利于有效成分的纯化而具更强的活性.此外,一些分离成分对不同的肿瘤细胞还有很高的细胞毒性,具一定的抗肿瘤作用.本实验为溪黄草在临床的使用及其作为潜在的高效抗乙肝和肿瘤药物的进一步研究开发工作提供了理论基础.     

不同化疗药物对人肝癌耐药细胞BEL-7404/ADM端粒酶活性抑制的研究

目的:观察几种常用化疗药物对人肝癌耐药细胞BEL-7404/ADM端粒酶活性的影响.方法:利用端粒重复扩增实验(TRAP)结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法,测定BEL-7404/ADM耐药细胞经过多种化疗药物[顺铂(DDP)、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)、长春新碱(VCR)]不同浓度和时间作用后端粒酶活性的变化.结果:当各种药物高浓度处理细胞24 h后再去除药物,DDP对端粒酶的活性完全抑制,MMC有部分抑制,ADM和VCR无抑制作用;低浓度药物处理细胞3 d,其结果同高浓度相似.结论:高浓度DDP和MMCC在短时间内或低浓度长时间作用对人肝癌耐药细胞BEL-7404/ADM端粒酶活性有显著抑制作用,抑制作用可能与药物的作用浓度和时间有关.     

促肝细胞生长素对微小病变型肾病大鼠整合素连接激酶表达的影响

目的 观察促肝细胞生长素(Hepatocyte Growth-promoting Factor,pHGF)对大鼠微小病变肾病(HCD)中整合素连接激酶(Intergrin Linked Kinase,ILK)表达的影响.方法 雄性SD大鼠72只,随机分为对照组、模型组、pHGF干预组各24只,一次性尾静脉注射阿霉素建立大鼠微小病变肾病模型,pHGF干预模型组于造模2周后腹腔注射pHGF30mg/kg,电镜观察大鼠肾小球足细胞形态学变化,免疫荧光观察各组大鼠在4周内肾小球足细胞中ILK表达情况.结果 ①电镜结果显示:模型组大鼠7天和14天足细胞广泛足突融合;pHGF干预模型组足细胞的足突变形、融合较模型组有所减轻;②与对照组相比,模型组大鼠肾小球ILK蛋白的表达7天减少,14天明显增加,差异有统计学意义(p<0.05);与模型组相比,pHGF干预模型组大鼠肾小球ILK蛋白的表达第21天出现减少,第28天达到最低值,差异有统计学意义(p<0.05);结论①ILK表达增加及分布异常,与足细胞病变密切相关,可能是判断肾小球足细胞损伤及导致蛋白尿原因的一个早期重要指标.②pHGF能抑制微小病变肾病大鼠肾小球ILK蛋白的表达,对MCD在肾脏结构及功能上既有保护作用又有治疗作用.     

端粒酶反义寡核苷酸体外抑制宫颈癌细胞端粒酶活性的研究

目的探讨端粒酶反义寡核苷酸(ASON)对宫颈癌Hela细胞端粒酶活性的影响.方法针对端粒酶RNA的ASON作用于Hela细胞,同时以加有转染剂FuGENE6者为对照组,计数连续作用1,3,5 d后的细胞数.TRAP方法测定端粒酶的活性.结果ASON组与随机引物及空白对照组比较,端粒酶活性降低,细胞的增殖速度延缓;有转染剂FuGENE6的ASON组的细胞增殖数目和端粒酶活性显著低于无FuGENE6的ASON组;细胞对有FuGENE6的ASON的摄取显著多于单纯的ASON.在FuGENE6的介导下,ASON对端粒酶活性的抑制与ASON的浓度和治疗时间呈正相关.结论针对端粒酶RNA的ASON能抑制Hela细胞的端粒酶活性,转染剂FuGENE6可以增强端粒酶ASON对宫颈癌细胞端粒酶活性的抑制作用.     

槟榔子中抗血小板聚集及抑制乙酰胆碱酯酶活性的有效成分（英文）

目的：研究槟榔子（Areca catechu）粗提取物中所含的抗血小板聚集及抑制乙酰胆碱酯酶活性的有效成分及其作用机制。方法：使用70%甲醇水溶液对槟榔子进行粗提取。使用生物发光血小板凝集仪在富血小板血浆中测定槟榔子粗提取物的抗血小板聚集作用,使用分光光度计在试管内测定槟榔子粗提取物对乙酰胆碱酯酶活性的抑制作用。检测槟榔子中的多种化合物以测定槟榔子中抗血小板聚集及抑制乙酰胆碱酯酶活性的有效成分。结果：槟榔子粗提取物能够抑制花生四烯酸、二磷酸腺苷、血小板活化因子、肾上腺素及钙离子载体引起的血小板聚集,尤其对二磷酸腺苷及钙离子载体引起的血小板聚集的抑制最为明显;槟榔子粗提取物能够显著抑制乙酰胆碱酯酶的活性。在所检测的槟榔子所含化合物中,只有儿茶素对肾上腺素引起的血小板聚集有显著的抑制作用,而这种抑制作用显著弱于槟榔子粗提取物,提示槟榔子中的其他成分参与了这种抑制作用;鞣酸、没食子酸、薯蓣皂苷元和异去甲槟榔次碱能够抑制乙酰胆碱酯酶的活性,其中鞣酸的抑制作用强于槟榔子粗提取物。结论：槟榔子中含有抗血小板聚集及抑制乙酰胆碱酯酶活性的有效成分,而发挥这些功效的确切成分有待进一步的研究证实。