连翘对金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌的体外抗菌活性研究

[目的]观察连翘对金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌的体外抗菌活性。[方法]用新的中药抑菌实验方法进行连翘对84株金葡菌和140株表皮葡萄球菌的体外抗菌活性的测定。[结果]连翘对金葡菌和表皮葡萄球菌能抑制50%菌株的最低细菌浓度(MIC50)均为0.122g/L,而能抑制90%菌株的最低抑菌浓度(MIC90)分别为0.98和0.244g/L。[结论]连翘对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均有较好的体外抗菌效果。     

裸花紫珠联合万古霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌致大鼠肺炎模型的协同抗菌作用研究

目的观察裸花紫珠联合万古霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)所致大鼠肺炎模型的协同抗菌作用,为临床上治疗MRSA所致的感染提供一种更安全有效的治疗方法。方法将80只健康雄性SD大鼠随机分成8组,10只作为对照组,其余大鼠从左侧鼻腔分别滴入200μL MRSA(1×108 CFU/m L)菌液造模。每天记录观察饮食、饮水量情况及大鼠活动度,持续给药10 d后观察大鼠血液白细胞数、肺部载菌量和组织病理学变化。结果裸花紫珠联合盐酸万古霉素各组与模型组相比,白细胞计数均下降明显(P0.05);大鼠肺部的载菌量明显降低(P0.05),肺组织病理损伤程度均明显减轻。结论裸花紫珠联合盐酸万古霉素对MRSA有协同抗菌作用,能更好地治疗MRSA引起的肺炎,可提高抗生素对耐药菌疗效,缩短疗程。     

头花蓼对多重耐药金黄色葡萄球菌抗菌作用研究

目的研究头花蓼对多重耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性。方法采用纸片扩散法测定抑菌圈直径,微量肉汤稀释法测定各实验菌株的最低抑菌质量浓度(MIC)和半数抑制质量浓度(IC50值),液体转染法测定最低杀菌质量浓度(MBC)。结果头花蓼提取物对各多重耐药金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用,60%乙醇提取物对各耐药菌的抑菌圈明显大于水提物,并大于没食子酸。60%乙醇提取物与水提物对各耐药菌株的MIC值范围为0.78³.12 mg/mL和IC50值范围为0.463.12 mg/mL和IC50值范围为0.46¹.81 mg/mL,均小于没食子酸的MIC值和IC50值。60%乙醇提取物MBC值范围为1.561.81 mg/mL,均小于没食子酸的MIC值和IC50值。60%乙醇提取物MBC值范围为1.56⁶.25 mg/mL,小于水提物和没食子酸。结论头花蓼乙醇提取物体外抗多重耐药金黄色葡萄球菌作用优于没食子酸,提示头花蓼除了没食子酸外还存在其他抗菌成分。     

基于群体效应研究双氢杨梅树皮素对金黄色葡萄球菌的体内抗菌作用

目的:探讨双氢杨梅树皮素(ampelopsis,APS)通过群体效应(quorum sensing,QS)对体内金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus,SA)的抗菌作用。方法:对标准SA NTCC8325及其QS调控基因缺失株NTCC8325ΔagrA、NTCC8325luxS进行生长曲线测定,以确定3个株菌的活力最强时期;检测高、中、低剂量APS给药后3个株菌腹腔感染小鼠腹腔液活菌数和小鼠血液白细胞数。结果:标准SANTCC8325活力最强时期为10～12 h,NTCC8325ΔagrA、NTCC8325ΔluxS活力最强时期为12～14 h;APS对3个株菌腹腔感染小鼠均有保护作用,且在一定范围内呈量效关系;APS对NTCC8325ΔluxS腹腔感染小鼠的保护作用较APS对NTCC8325ΔagrA腹腔感染小鼠的保护作用强。结论:APS在体内通过直接影响agr QS系统及间接影响lux QS系统,从而产生抗SA的作用。     

中药对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌研究进展

正耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphy lococcus aureus,MRSA)是对一线抗菌药物普遍耐药的一类金黄色葡萄球菌,已成为医院感染和社区获得性感染的重要病原菌之一,是世界范围内公共卫生问题,可以引起皮肤软组织感染、菌血症和心内膜炎等疾病[1]。国内近年来报道的MRSA分离率在33%~80.4%。临床分离率逐年上升,治     

清热败毒合剂对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用及其机理

目的 观察清热败毒合剂对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用. 方法 168只小鼠随机分为清热败毒合剂大、中、小剂量组,阿莫西林组、六神丸组、模型组、正常对照组共7组,除正常对照组以外,其余各组小鼠腹腔注射金黄色葡萄球菌造成菌血症模型,观察各组小鼠死亡率并观察清热败毒合剂的体外抗菌作用.80只小鼠随机分为清热败毒合剂大剂量组、阿莫西林组、六神丸组、模型组、正常对照组5组,采用流式细胞仪观察小鼠外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞数量的变化. 结果 清热败毒合剂大剂量组、六神丸组与阿莫西林组、正常对照组小鼠的死亡率明显低于模型组(P<0.05或P<0.01).清热败毒合剂对金黄色葡萄球菌的细菌回收率小于70%.清热败毒合剂大剂量组CD3+表达明显高于模型组(P＜0.05),而CD4+、CD4+/CD8+、CD8+水平与模型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).清热败毒合剂大剂量组CD3+、CD4+/CD8+、CD8+的表达分别与阿莫西林组、六神丸组、正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),而其CD4+表达低于阿莫西林组、六神丸组、正常对照组(P＜0.05).阿莫西林组、六神丸组、正常对照组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+表达均明显高于模型组(P＜0.05),各组CD8+水平与模型组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 清热败毒合剂大剂量组对金黄色葡萄球菌感染小鼠有一定的保护作用,其作用机制可能与清热败毒合剂对金黄色葡萄球菌的抗菌作用以及提高免疫功能有关.     

地桃花水提物的体外抗菌实验研究

目的:探讨地桃花水提物在体外的抗菌作用。方法:采用琼脂二倍稀释法对地桃花水提物进行MIC实验研究。结果:地桃花水提液在体外对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎链球菌和普通变形杆菌均具一定的抑菌活性,且对金黄色葡萄球菌和普通变形杆菌的抑菌活性更为显著。结论:本研究为地桃花药材水提物的抗菌效用提供了实验依据。     

广西藤茶总黄酮对金黄色葡萄球菌抗菌机制研究

目的:研究广西藤茶总黄酮(TF)抗金黄色葡萄球菌(SA)作用机制,从而初步明确其作用靶位.方法:使用不同终质量浓度TF(310 ～38.75 mg·L-1)处理SA,另设不经药物处理的SA为对照,采用扫描电镜法观察155 mg'L-1 TF对菌体的超微形态结构,微生物粘着碳氢化合物法测定155 mg·L-1 TF对菌体表面疏水性,电导率法测定77.5,155,310 mg'L-1 TF对菌体通透性及比色法测定38.75,77.5,155,310 mg·L-1 TF对细菌脱氢酶活性的影响.结果:随着药物浓度增加,作用时间延长,细菌菌体超微形态有明显改变,表现为菌体表面粗糙不平,产生瘤状突起,细胞间界限模糊不清,细胞直径变大等;与不经药物处理的SA比较,TF作用SA 4,8,16 h后,能明显降低细菌细胞表面疏水性(P＜0.01);明显增加细菌细胞通透性;明显抑制细菌脱氢酶的活性.结论:广西藤茶总黄酮可能通过降低细菌表面疏水性,增加细菌通透性使细菌形态发生改变,并通过抑制细菌脱氢酶活性发挥抗菌作用.     

白毛夏枯草对金黄色葡萄球菌的作用规律及抗菌机理

目的比较白毛夏枯草不同溶剂提取液的抑菌效果,并对其发挥作用的机制进行研究。方法通过牛津杯法和改良二倍稀释法测定白毛夏枯草的抑菌活性,通过考察金黄色葡萄球菌的生长曲线、细胞形态、细胞壁和细胞膜的完整性的变化探究白毛夏枯草的抑菌机制。结果水提液的抑菌作用最强,能显著抑制金黄色葡萄球菌的生长,MIC为15.63 mg/m L,给药后细菌内碱性磷酸酶和蛋白质大分子外泻,细菌形态改变。结论白毛夏枯草对金黄色葡萄球菌有抑制作用,通过破坏细胞壁和细胞膜的完整性发挥作用。     

伤寒方恢复金黄色葡萄球菌感染小鼠血清抗菌活性的研究

目的 :验证《伤寒论》所载方剂抗金黄色葡萄球菌感染的作用。 方法 :先进行ip金黄色葡萄球菌和不注射金葡菌的动物血清的抑菌作用比较研究,然后以19种《伤寒论》中所载之方剂给金葡菌腹腔感染小鼠模型ig,取血清观察其抑菌效果。 结论 :ip金葡菌使血清的抑菌能力降低,而19种伤寒方剂可以扭转这一过程。 结果 :《伤寒论》所载部分方剂在一定程度上可恢复机体抗金葡菌感染的能力。     

连花清瘟胶囊抗金黄色葡萄球菌生物膜研究

目的: 观察连花清瘟胶囊对成熟金黄色葡萄球菌生物膜(Staphylococcus aureau biofilm,S.a BF)的抑制作用。 方法: 采用96孔板微量稀释法检测连花清瘟胶囊和青霉素最小杀菌浓度(MBC);用结晶紫(CV)和微生物活性(WST)检测法观察连花清瘟胶囊和青霉素抗S.a BF的作用;用扫描电子显微镜(SEM)和激光共聚焦显微镜(CLSM)观察药物作用后的S.a BF形态并测量厚度。 结果: 连花清瘟胶囊和青霉素对S.a的MBC分别为20 g·L^-1和2 mg·L^-1。与对照组比较,连花清瘟胶囊显著抑制S.a BF(P<0.05,P<0.01),青霉素差异不显著。SEM观察到空白对照组S.a BF较厚,细菌形态正常,密集叠加,大小一致;连花清瘟胶囊组S.a BF由散在菌落组成,大小不一致;青霉素组S.a BF较厚,细菌形态基本正常,密集叠加,大小一致,个别细菌塌陷萎缩;CLSM观察到空白对照组S.a BF以活菌为主体,其间散落死菌;连花清瘟胶囊组S.a BF有大量死菌,和活菌相互参杂;青霉素组S.a BF以活菌为主,部分死菌分布在S.a BF表层。与空白对照组比较,连花清瘟胶囊组S.a BF厚度显著降低(P<0.01),青霉素组差异不显著,连花清瘟胶囊组S.a BF厚度显著低于青霉素组(P<0.01)。 结论: 连花清瘟胶囊具有显著的抗S.a BF作用,抗S.a BF评估体系可应用于传统中药抗菌作用研究。     

抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌天然药物研究进展

以抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)天然药物为对象,检索了近年来对其天然药物研究的相关文献,并进行归纳整理。来源于植物、动物、微生物的能有效抗MRSA的化合物,包括植物中的黄酮类、萜类、蒽醌类等,动物中的抗菌肽及毒素,以及部分微生物的代谢产物等。部分化合物可作为未来抗MRSA的候选药物。目前抗MRSA的天然药物研究已经成为该领域的研究热点之一,但是多数研究仅停留在对活性药物的筛选上,缺少对候选药物的毒理、药理等深入研究。     

地桃花化学成分研究

 目的 对地桃花的化学成分进行分离和鉴定。方法 应用溶剂法进行提取,采用硅胶、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、MCI柱色谱、ODS反相柱色谱分离纯化,并利用MS、NMR技术确定结构。结果 从地桃花全草体积分数95%乙醇浸膏中分离鉴定了11个化合物,分别是东莨菪亭(scopoletin) (1)、梣皮素(fraxitin) (2)、己内酰胺(caprolactam) (3)、邻苯二甲酸异丁酯[bis(2-methylproyl) ester] (4)、芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖苷(6-C-β-L-rhamnosylopigenin,即isofurcatain) (5)、6,8-二羟基-山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(6,8-dihydroxy kaempferol -3-O-β-D-glycoside) (6)、黄芩素-7-O-α-L-鼠李糖苷(baicalein-7-O-α-L-rhamnoside) (7)、槲皮素-4′-O-芸香糖苷[quercetin 4′-O-α-L-rhamnosyl (1→6)-O-β-D-glycoside ] (8)、苯甲酸 (9)、七叶苷(esculin) (10)、丁香酸葡萄糖苷(glucosyringic acid) (11)。结论 11个化合物均为首次从地桃花中得到。     

内生真菌链格孢菌醋酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌抑菌机制的研究

目的研究分离自药用植物白毛蛇Humata tyermanni的内生真菌链格孢菌发酵产物醋酸乙酯提取物(B06e)对金黄色葡萄球菌细胞膜完整性和通透性的影响。方法采用二倍稀释法测定B06e对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC);测定B06e作用前后金黄色葡萄球菌培养液电导率,206、280 nm处吸光度(A)值的变化并结合流式细胞术研究B06e作用前后细胞膜通透性的变化。利用扫描电子显微镜(SEM)及傅里叶红外变换光谱(FT-IR)研究B06e对细胞膜结构的影响。结果 B06e对金黄色葡萄球菌的MIC为50μg/m L。3×MIC处理组的电导率是对照组的1.06倍;经B06e处理后,反应液的A260和A280值均显著高于对照组;3×MIC处理组的β-半乳糖苷酶活性是对照组的9.43倍;流式细胞仪分析表明3×MIC处理组被碘化丙啶(PI)着染的阳性细胞比例是对照组的47.63倍;SEM和FT-IR分析结果显示,B06e处理后,菌体细胞结构发生了损伤。结论 B06e能增强金黄色葡萄球菌细胞膜的通透性,破坏细胞膜的完整性,造成外源物质的大量流入和细胞质的大量外泄,从而使得菌体细胞内渗透压和代谢调控紊乱,最终导致细菌丧失生长繁殖的能力。     

地桃花的本草考证、生药学研究及其有效成分定量测定

目的 对地桃花Urenalobata进行本草考证、生药学分析及有效成分测定。方法 通过查阅文献厘清地桃花的历史使用沿革及植物分布情况,野外实地调研地桃花的植物基原,采集并制作腊叶标本,通过原植物形态、药材性状、显微特征等方法进行生药学研究;采用Waters e2695型液相色谱仪,CAPCELL PAK MGⅡC18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,体积流量1.0 mL/min,梯度洗脱,柱温30℃,PDA检测器,检测波长315 nm,建立地桃花药材中N-反式-阿魏酰酪胺和银锻苷的HPLC测定方法。结果 对地桃花药材的性状及显微特征进行了归纳,建立的测定方法稳定性和重复性良好,N-反式-阿魏酰酪胺和银锻苷线性范围0.999～79.890、1.068～85.420μg/mL,R2>0.999,平均回收率95.3%、97.1%。10批样品N-反式-阿魏酰酪胺、银锻苷质量分数为0.003%～0.045%、0.016%～0.046%。结论 建立的方法能够有效鉴别地桃花药材,为完善地桃花药材质量标准和地桃花药材收购提供依据。     

丁香挥发油联合喹诺酮类抗生素抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作用研究

目的 探究丁香挥发油的耐药性和丁香挥发油联合喹诺酮类抗生素抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的体外活性,为后续丁香挥发油联合抗生素治疗MRSA感染提供科学依据。方法 采用微量稀释法分别测定丁香挥发油、4种喹诺酮类抗生素（莫西沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星）的最小抑菌浓度（MIC）;棋盘稀释法测定丁香挥发油与4种喹诺酮类抗生素联用的部分抑菌浓度（FIC）指数;生长曲线法分析丁香挥发油联合4种喹诺酮类抗生素对MRSA的抑制作用;通过耐药性诱导实验,分析丁香挥发油对MRSA标准株ATCC33591耐药诱导30代后的MIC变化,分析丁香挥发油的耐药性。结果 耐药性分析发现,MRSA临床分离株对莫西沙星的耐药率（88.57%）最高,其次为环丙沙星和左氧氟沙星（77.14%）,耐药率相对最低的为诺氟沙星（74.29%）。FIC指数分析显示,丁香挥发油分别与莫西沙星、左氧氟沙星、环丙沙星和诺氟沙星联用呈现不同程度的相互作用,其中协同作用分别为42.86%、37.15%、34.28%、34.28%,相加作用分别为28.57%、25.71%、22.86%、42.86%,无关作用分别为28.57%、20.00%、42.86%、22.86%,与左氧氟沙星联合使用时17.14%实验菌株呈拮抗作用。生长曲线结果显示,丁香挥发油与喹诺酮类抗生素联用对MRSA有明显的协同抑制作用。诱导耐药实验结果显示,亚抑菌浓度的丁香挥发油连续诱导MRSA菌株30代后,MIC无变化;而相同条件下环丙沙星的MIC升高至原来的16倍,说明丁香挥发油不易产生耐药。结论 丁香挥发油不易产生耐药性;与喹诺酮类抗生素联用时呈现不同的作用,多数MRSA菌株呈协同和相加作用,可降低临床喹诺酮类抗生素抗MRSA感染的用量。     

枸杞多糖通过TLR4/Src通路促进巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌

目的 探究枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide,LBP）对巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的影响及其机制。方法 采用CCK-8法检测不同浓度的LBP对巨噬细胞活力的影响;利用Western blotting法检测LBP对巨噬细胞丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）和核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）及Src激酶家族成员（Src family kinases,SFKs）中的Src蛋白表达水平的影响;运用庆大霉素保护实验和流式细胞术检测LBP对巨噬细胞吞噬S.aureus的影响,同时使用Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）、MAPK、NF-κB和Src的抑制剂初步判断LBP的作用机制。结果 100～600 μg/mL的LBP对巨噬细胞无毒性,但能有效提高巨噬细胞的活力（P<0.01、0.001）,并且显著促进巨噬细胞对S.aureus的吞噬作用。虽然LBP可促进巨噬细胞中MAPK信号通路相关蛋白、NF-κB以及Src的磷酸化水平（P<0.01、0.001）,但LBP诱导巨噬细胞吞噬S.aureus能力仅被TLR4抑制剂TAK242和Src激酶家族抑制剂AZD0530显著抑制（P<0.001）,而不受NF-κB、MAPK抑制剂的影响。结论 LBP能够活化巨噬细胞,并通过TLR4/Src信号通路促进巨噬细胞对S.aureus的吞噬。     

盐酸小檗碱粉雾剂的制备及其对金黄色葡萄球菌肺炎的作用研究

目的制备盐酸小檗碱粉雾剂,肺部给药后考察其对于金黄色葡萄球菌肺炎的药效作用。方法通过正交试验优化喷雾干燥条件,制备盐酸小檗碱粉雾剂;对其肺部沉积、流动性、外观形态进行研究;并评价该制剂对金黄色葡萄球菌肺炎大鼠的药效作用。结果最终确定在130℃的进口温度、610L/h的气体体积流量下,以3m L/min的进料体积流量,通过喷雾干燥制备盐酸小檗碱粉雾剂。盐酸小檗碱粉雾剂肺部沉积率(FPF)76.4%,空气动力学直径为4.61μm。稳定指数(SI)≈1,充气能比(AR)=1.761,充气能量(AE10)=2.1 mJ10 mJ。对金黄色葡萄球菌的药效学评价,表面盐酸小檗碱粉雾剂可以有效改善肺炎大鼠的病理状态,显著降低肺炎大鼠白细胞、中性粒细胞的数量(P0.05),以及炎症因子(TNF-α、IL-1β及IL-6)的水平。结论盐酸小檗碱粉雾剂通过肺部给药可以直达病变部位,对金黄色葡萄球菌肺炎具有显著的治疗作用。     

野葛种质资源的随机扩增多态性DNA技术分析

目的:建立野葛RAPD分子标记技术并对野葛种质资源遗传背景进行探讨。方法:结合葛根素的测定,应用RAPD技术对11个产地野葛进行遗传多样性分析。结果:葛根素含量在3.26%~7.10%,8条引物共扩增出45条带,其中37条呈多态性,发现RAPD多态位点为82.22%,证明在野葛种质资源中存在较丰富的遗传多样性。结论:我国野葛具有明显的遗传分化,这些遗传分化是野葛种质资源筛选的关键。