巨噬细胞对血管内皮细胞增殖和整和素ανβ3表达的影响

目的　建立人巨噬细胞系U937(humanmacrophagecelllineU937)与人脐静脉血管内皮细胞系ECV -30 4体外共培养模型 ,以刀豆蛋白A(concanavalinA ,conA)作为U937激活剂 ,研究巨噬细胞调节血管生成的机制。方法　实验分 4组 :ECV - 30 4 ,conA (ECV - 30 4 ) ,U937 ECV - 30 4 ,conA U937 ECV - 30 4。将ECV - 30 4细胞接种培养 ,待细胞 6 0 %融合 ,按照不同的分组共培养 4 8h后 ,用流式细胞仪检测细胞周期的变化 ;采用 3H -TdR掺入试验检测内皮细胞DNA合成变化 ;用免疫荧光在流式细胞仪上检测整和素受体ανβ3表达的变化。 结果　conA刺激的U937细胞使内皮细胞S期、DNA合成明显增加 (P <0 0 1) ,conA刺激的U937细胞使内皮细胞整和素受体ανβ3的表达水平明显上调 (P <0 0 1)。 结论　conA活化的巨噬细胞通过影响内皮细胞的细胞周期、DNA合成及整和素受体ανβ3的表达来促进内皮细胞的增殖、迁移及与基质的黏附 ,从而调节血管的生成。     

生脉成骨胶囊对血管内皮细胞增殖及分泌VEGF功能的影响

目的探讨生脉成骨胶囊兔血清对人脐静脉血管内皮细胞株（ECV304细胞）增殖及分泌血管内皮生长因子（VEGF）功能的影响.方法以MTT法测定体外培养的ECV304细胞增殖,采用ELISA法检测培养液上清中VEGF浓度,应用透射电镜技术观察药物血清作用12 h后细胞显微结构.结果不同剂量生脉成骨胶囊兔血清在作用12 h和36h后对ECV304细胞增殖无促进作用,中剂量和高剂量兔血清在36h表现出抑制ECV304细胞增殖的作用（P＜0.01）,低剂量兔血清作用1 h后可显著促进ECV304细胞分泌VEGF（P＜0.01）.结论生脉成骨胶囊兔血清对ECV304细胞增殖无促进作用,低剂量生脉成骨胶囊兔血清可促进ECV304细胞分泌VEGF,提示这可能是生脉成骨胶囊促进血管生成的主要作用机制之一.     

生脉成骨胶囊对血管内皮细胞增殖及分泌VEGF功能的影响

目的 探讨生脉成骨胶囊兔血清对人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304细胞)增殖及分泌血管内皮生长因子(VEGF)功能的影响。方法 以MTT法测定体外培养的ECV304细胞增殖,采用ELISA法检测培养液上清中VEGF浓度,应用透射电镜技术观察药物血清作用12h后细胞显微结构。结果 不同剂量生脉成骨胶囊兔血清在作用12h和36h后对ECV304细胞增殖无促进作用,中剂量和高剂量兔血清在36h表现出抑制ECV304细胞增殖的作用(P<0.01),低剂量兔血清作用1h后可显著促进ECV304细胞分泌VEGF(P<0.01)。结论 生脉成骨胶囊兔血清对ECV304细胞增殖无促进作用,低剂量生脉成骨胶囊兔血清可促进ECV304细胞分泌VEGF,提示这可能是生脉成骨胶囊促进血管生成的主要作用机制之一。     

苏拉明对肺癌血管生成的抑制作用

目的　研究苏拉明对肺癌血管生成的抑制作用及其机制。方法　采用细胞培养和免疫组织化学的方法离体研究肺癌A5 49细胞、人血管内皮ECV 30 4细胞VEGF及其受体 (Flt、KDR)的表达及苏拉明的影响。结果　苏拉明对肺癌细胞产生和分泌VEGF无影响 ;ECV 30 4细胞KDR、Flt的蛋白表达在苏拉明浓度为 0 .2 5ng/ml和 2 .5ng/ml时 ,受到显著抑制 ;而苏拉明浓度为 0 .2 5ng/ml和 2 5ng/ml时Flt的表达 ,以及苏拉明浓度为 2 .5ng/ml和 2 5ng/ml时KDR的表达则无明显变化 (与对照组比较 ,P >0 .0 5 ) ;苏拉明对A5 49、ECV 30 4细胞增生无影响。结论　苏拉明抑制肺癌血管生成的作用机制可能是通过抑制血管内皮细胞上的VEGF受体表达 ,减少VEGF与其受体结合所致。     

腺病毒介导的生长抑制基因4对ECV304细胞体外生长及分泌血管内皮生长因子的影响

目的: 检测腺病毒介导的生长抑制基因4(adenovirus-mediated inhibitor of growth family member 4,Ad-ING4)感染后ECV304细胞体外生长及分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,探讨ING4抑制肿瘤生长的可能机制。方法: 构建ING4腺病毒载体,用MTT法检测Ad-ING4感染后ECV304细胞体外生长影响,ELISA检测VEGF的分泌情况。结果: Ad-ING4感染后第3天和第4天ECV304细胞体外生长均受到抑制(P < 0.01),第4天时抑制率达63.6%,VEGF分泌受到抑制。结论: ING4能抑制ECV304细胞生长及VEGF分泌。Ad-ING4能抑制血管内皮细胞生长和血管的生成,从而可抑制体内肿瘤的生长。     

蜂毒素体外抑制内皮细胞血管生成及其作用机制

目的:探讨蜂毒素对人脐静脉来源内皮细胞(ECV304)血管生成的抑制作用及其机制.方法:体外培养ECV304细胞,分别测定蜂毒素对其增殖、迁移及形成管状结构的影响.采用酶联免疫吸附法检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的含量.应用实时荧光定量PCR方法检测ECV304细胞VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达.结果:经蜂毒素作用后,ECV304细胞的增殖明显受到抑制,24,48,72 h的IC50分别为5.11,4.68,4.40 mg/L.蜂毒素低、中、高浓度组和沙利度胺(TLD)组ECV304细胞迁移数目(19.44±6.54),(11.17±2.85),(4.22±1.83)和(18.28±5.29)个,明显低于空白对照组(42.33±9.63 )个(P＜0.01).蜂毒素低、中、高浓度组及TLD组形成管状结构的面积分别为 (5947.22±973.72),(1558.33±281.06),(705.85±318.01)和(2928.92±735.67) μm2/视野,均低于空白对照组(7828.94±1202.54) μm2/视野(P＜0.01).经蜂毒素处理后,ECV304细胞分泌VEGF及bFGF的功能明显下降.荧光定量PCR证实,蜂毒素可降低ECV304细胞VEGF mRNA和bFGF mRN的表达.结论:体外实验结果表明,蜂毒素具有抑制ECV304细胞血管生成的作用,这种效应与血管内皮细胞VEGF和bFGF的活性降低及其合成受到抑制有关.     

羟基红花黄色素A抑制异常增殖血管内皮细胞的机制研究

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)抑制异常增殖血管内皮细胞的作用机理。方法建立人结肠腺癌细胞LS180上清液和人脐静脉内皮细胞ECV304体外共培养模型,通过实时荧光定量PCR检测ECV304细胞中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(KDR)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)及其受体(b FGFR)、HSPG2、p53、c-myc mRNA水平的表达;ELISA法检测细胞培养上清VEGF、VEGFR(KDR)、b FGF、b FGFR蛋白的表达。结果在共培养细胞模型中,0.66、0.33 mg/L浓度的HSYA对血管生成促进因子VEGF及其受体KDR、b FGF及其受体b FGFR和癌基因c-myc及与细胞增殖相关蛋白多糖HSPG2的mRNA表达具有抑制作用;对抑癌基因p53 mRNA的表达具有促进作用。0.66、0.33 mg/L浓度的HSYA对血管生成促进因子VEGF及其受体KDR、b FGF及其受体b FGFR的蛋白表达具有抑制作用。结论 HSYA抑制新生血管的生成、抑制共培养模型中血管内皮细胞的异常增殖,其可能的作用机理是通过调控VEGF及其受体、b FGF及其受体、HSPG2、c-myc和野生型p53的表达发挥抗肿瘤作用,揭示HSYA可能是潜在的肿瘤血管生成抑制剂。     

重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子体外抗血管内皮细胞增殖的活性

目的：研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子（VEGI）体外抗血管内皮细胞增殖的活性。方法：MTT法检测重组人可溶性VEGI对血管内皮细胞及肿瘤细胞增殖的抑制活性。结果：在体外,重组人可溶性BEGI可强烈抑制人脐静脉内皮细胞ECV304、大鼠肺源毛细血管内皮细胞（MPCEC）及新生牛主动脉内皮细胞（BAEC）的增殖,不能报制黑色素瘤细胞B－16和小鼠成纤维细胞L－929的增殖。结论：重组人可溶性VEGI能作用于不同来源的血管内皮细胞,而对肿瘤细胞增殖无抑制作用,提示其可能通过抗肿瘤新生血管生成而发挥抗肿瘤作用。     

抗人血管内皮生长因子发夹状核酶对人脐静脉内皮细胞ECV304的影响

目的观察抗人血管内皮生长因子（VEGF）发夹状核酶对人脐静脉内皮细胞ECV304生物学特性的影响。方法将抗人VEGF发夹状核酶（RZ）基因构建的pcDNA3.1＋/RZ转染ECV304细胞,经G418筛选后,用RT-PCR法鉴定RZ基因在ECV304细胞中的转录,用MTT法和流式细胞仪检测转染前后ECV304细胞增殖活力和细胞周期,ELISA法检测细胞上清VEGF的表达水平。结果RZ基因在ECV304细胞中获得转录,它不改变细胞增殖活力和细胞周期,但能明显下调VEGF的表达。结论抗人VEGF发夹状核酶能够显著抑制ECV304细胞VEGF的表达,为进一步开展核酶的肿瘤基因治疗提供了实验依据。     

姜黄素抑制血管生成作用的实验研究

目的研究姜黄素对血管生成和内皮细胞生长的影响。方法利用生长因子(VEGF和bFGF)诱导的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管增生模型观察姜黄素对血管生成的影响；利用培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，采用MTT法观察不同时间、不同浓度姜黄素对内皮细胞增殖的抑制作用。结果姜黄素能明显抑制VEGF和bFGF诱导的CAM小血管生成，对内皮细胞增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性。结论姜黄素具有显著的抗血管生成作用。     

心肌成纤维细胞诱导体外血管新生的实验研究

目的探讨心肌成纤维细胞在血管新生中的作用。方法分离培养乳鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CF),并收集其条件培养液(cardiacfibroblastconditionedmedium,CF CM)作为ECV304[人脐静脉内皮细胞株(humanumbilicalveinendothelialcellstrain)]细胞的培养液,用3H TdR掺入法检测CF CM对ECV304细胞增殖活性的影响;采用体外血管新生三维模型,检测其是否能诱导ECV304细胞向凝胶内侵入。结果乳鼠心肌成纤维细胞的条件培养液明显促进ECV304细胞增殖(P<0.01),诱导ECV304细胞向凝胶内侵入迁移生长,形成树枝样发芽结构。结论心肌成纤维细胞的条件培养液可促进ECV304细胞增殖和迁移,即有促血管新生作用。     

三羟异黄酮对脐静脉内皮细胞ECV304增殖影响与VEGFR的关系

目的探讨三羟异黄酮(genistein)抗肿瘤血管生成的机制.方法通过绘制生长曲线和流式细胞仪检测三羟异黄酮和血管内皮生长因子(vaScular endothelial growth factor,VEGF)对脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响,应用免疫沉淀和激酶活性分析方法检测ECV304细胞血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growthfactor receptor,VEGFR)磷酸化水平和蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)活性.结果VEGF单独处理能使ECV304细胞增殖,VEGFR磷酸化水平和PTK活性升高,而三羟异黄酮单独处理能抑制ECV304细胞生长,细胞周期主要被阻止在G2/M期,并出现细胞凋亡现象,VEGFR磷酸化水平和PTK活性降低(P＜0.01),三羟异黄酮和VEGF同时处理时,细胞周期主要仍被阻止在G2/M期,但凋亡率下降,VEGFR磷酸化水平和PTK活性与VEGF单独处理组相比降低.结论三羟异黄酮能下调ECV304细胞VEGFR的磷酸化水平及PTK活性,从而阻断胞外生长刺激信号向胞内转导的级联反应,阻遏血管内皮细胞生长,抑制肿瘤血管生成.     

阿魏酸钠对小鼠H22肝癌生长的抑制作用及其机制研究

目的 观察注射用阿魏酸钠对小鼠H22肝癌生长及血管生成抑制作用及其对血管内皮生长因子(VEGF)Mrna转录的影响.方法 昆明小鼠前腋下皮下接种H22小鼠肝癌细胞,腹腔注射阿魏酸钠,每3 d测量1次肿瘤体积.用免疫组化法测定VEGF及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.MTT法检测阿魏酸钠对H22肿瘤细胞及血管内皮细胞(ECV304)增殖的影响,RT-PCR法测定肿瘤组织的VEGF Mrna的转录.结果 阿魏酸钠组小鼠H22肿瘤体积、重量增长明显较对照组缓慢(P＜0.05),同时阿魏酸钠组的肿瘤微血管密度及VEGF、PCNA阳性细胞较对照组显著减少(P＜0.05).阿魏酸钠组VEGF Mrna转录比对照组显著减少(P＜0.05).体外实验,阿魏酸钠对ECV304及H22细胞的增殖均无显著抑制作用.结论 阿魏酸钠可以显著抑制小鼠H22肿瘤的生长及血管生成,且能抑制VEGF的表达,但不能抑制ECV304及H22细胞的增殖.阿魏酸钠对肿瘤组织VEGF表达的抑制作用可能是其抗H22肿瘤及抗血管生成的一个重要机制.     

β-榄香烯对血管内皮细胞成血管能力、细胞凋亡及MMP-2、MMP-9活性的影响

  目的 观察β-榄香烯对血管内皮细胞成血管能力、细胞凋亡及基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9活性的影响,探讨β-榄香烯对肿瘤血管生成的抑制作用。方法 人血管内皮细胞株ECV304体外培养,Matrigel胶检测血管内皮细胞的成血管能力,Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,明胶酶谱实验检测血管内皮细胞中MMP-2和MMP-9的活性。结果 接种于Matrigel胶的ECV304细胞经β-榄香烯作用后,形成管腔数目明显减少。随着β-榄香烯浓度增加及作用时间延长,ECV304细胞凋亡明显增多。明胶酶谱实验结果显示,β-榄香烯可明显抑制内皮细胞中MMP-2和MMP-9的活性。结论 β-榄香烯可以促进体外培养的血管内皮细胞凋亡,抑制血管内皮细胞的成血管能力,使血管内皮细胞在Matrigel胶中形成的管腔数目减少,同时β-榄香烯能够抑制血管内皮细胞中MMP-2和MMP-9的活性。     

3-脱氧葡萄糖醛酮诱导新血管生成的实验研究

目的观察3-脱氧葡萄糖醛酮（3-DG）对新血管生长的影响。方法应用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）和内皮细胞体外培养的方法研究3-DG对新血管生长的影响。CAM血管生长采用单位面积血管百分比法评价;细胞增殖采用MTT法评价。结果0.1、1μg3-DG和0.1μgAGEs组均可促进CAM新生血管生成,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。与内皮细胞孵育24h后,3-DG50、100、150、200和250mg/L浓度组均明显促进内皮细胞生长（P〈0.05）,而300、400mg/L浓度组则无促进作用（P〉0.05）;与内皮细胞孵育48h后,50、100、150和200mg/L浓度组均有促进内皮细胞生长的趋势,但差异均无统计学意义（P〉0.05）,250mg/L无作用呈下降趋势,而300和400mg/L浓度组则明显抑制内皮细胞生长（P〈0.05）。形态学观察,3-DG300mg/L组与空白对照组比较,出现细胞核固缩。结论3-DG可以诱导新血管生长。     

Celebrex对VEGF诱导的内皮细胞迁移的影响及其机制

目的:观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂celebrex对血管内皮生长因子(VEGF)诱导的内皮细胞细胞迁移能力的影响及其与细胞内MMP-9表达的关系。方法:体外培养内皮细胞系ECV304,将细胞分为4组:①空白对照组(ECV304);②VEGF组(ECV304+VEGF);③celebrex+VEGF组(ECV304+VEGF+cele-brex);④celebrex组(ECV304+celebrex)。观察:①用损伤修复实验观察不同浓度celebrex对ECV304细胞迁移能力影响及对VEGF诱导下ECV304细胞迁移速度影响;②用半定量RT-PCR法检测VEGF及celebrex对ECV304细胞MMP-9 mRNA表达的影响。结果:ECV304细胞的迁移速度随VEGF浓度(0.02,0.2,2μmol/L)的增加呈降低趋势;celebrex+VEGF组(2μmol/L celebrex+5μg/L VEGF)迁移速度为(3.55±0.02)μm/h与VEGF组(5μg/L VEGF)迁移速度(7.66±0.02)μm/h比较,两者有显著差异(P<0.01);celebrex+VEGF组(2μmol/L celebrex+5μg/L VEGF)的MMP-9表达量明显低于VEGF组(5μg/L VEGF)。结论:celebrex能抑制VEGF诱导的ECV304细胞迁移,并使COX-2下游的MMP-9表达量显著下调,这是可能的机制之一。