蟾蜍灵抑制TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞-间充质细胞系转换

目的探讨蟾蜍灵对转化生长因子(TGF)-β1诱导的人肾小管上皮细胞-间充质细胞转换的影响。方法将体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)细胞分为3组:1)对照组;2)TGF-β1组:在细胞培养基中加入TGF-β1(浓度为5μg/L);3)蟾蜍灵+TGF-β1组:在细胞培养基中分别加入蟾蜍灵和TGF-β1(浓度为5μg/L),按蟾蜍灵的浓度分为A、B、C 3个亚组:分别为1×10~(-9)、1×10~(-8)和1×10~(-7)mol/L。72 h后,用倒置相差显微镜观察细胞形态;用实时定量PCR、蛋白印迹法和免疫荧光检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结果 TGF-β1组HK-2细胞从原有典型的铺路石样上皮细胞转变为长梭形肌成纤维细胞;胞质内大量表达α-SMA,同时E-cadherin的表达明显减少(P0.01);蟾蜍灵处理后TGF-β1诱导的细胞形态学改变减轻,胞质内α-SMA的表达减少(P0.05),同时E-cadherin的表达明显恢复,且呈剂量依赖性。结论蟾蜍灵能有效抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞转换,对肾脏病治疗具有潜在应用前景。     

Apelin抑制TGF-β诱导的人肾小管上皮-间充质细胞转换

目的探讨多肽Apelin对转化生长因子β(TGF-β)诱导的人肾小管上皮-间充质细胞转换(EMT)的抑制作用及其机制。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞,分别给予含TGF-β1(2μg/L)和/或不同浓度Apelin-13的培养基孵育细胞48 h,设立6个实验组(每组n=5):对照组、TGF-β组、TGF-β+Apelin(10-8,10-7和10-6mol/L)组和Apelin(10-6mol/L)组。刺激结束后,用免疫荧光染色观察细胞的上皮标志物E-钙黏素(E-cadherin)、间充质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布和表达。Western blot检测细胞中E-cadherin、α-SMA及Smads信号通路的主要信号分子p-Smad2/3、Smad2/3和Smad-7的蛋白表达。RT-PCR法检测细胞外基质纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)及细胞自身Apelin和APJ受体的mRNA表达量。结果与对照组相比TGF-β组细胞为长梭形,E-cadherin的表达减少,α-SMA的表达增多,细胞外基质FN和Col-Ⅰ的mRNA表达量也显著升高;TGF-β+Apelin组上述效应被显著抑制,且呈浓度依赖性。与TGF-β组相比,TGF-β+Apelin组细胞活化型Smads的水平降低(P0.05),Smad7的表达增加(P0.05)。TGF-β组细胞自身APJ受体的表达量显著升高(P0.05),TGF-β+Apelin组上述效应受到抑制,且呈浓度依赖性。结论 Apelin干扰TGF-β/Smads信号通路从而抑制肾小管上皮细胞EMT;肾小管上皮细胞自身Apelin/APJ系统可能起到一定的代偿作用。     

芳维A酸乙酯对体外培养小鼠肾小球系膜细胞增殖、凋亡及TGF-β1分泌的影响

目的研究芳维A酸乙酯(AE)对体外培养小鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖、凋亡及TGF-β1表达的影响。方法采用MTT法检测芳维A酸乙酯(AE)、全反式维A酸(atRA)对GMC增殖的影响;采用流式细胞仪检测AE干预后GMC的凋亡情况;采用ELISA法检测AE干预后GMC培养上清液中TGF-β1的含量。结果与正常组对比,AE干预组GMC增殖受到抑制(P<0.05),且当浓度在10~(-8)到10~(-5)mol/L范围内时,作用成剂量依赖性。AE能够诱导GMC的凋亡,正常组、10~(-7)mol/L、10~(-5)mol/L的AE干预组的GMC细胞凋亡率分别为(1.13±0.36)%、(9.52±0.99)%和(27.23±2.88)%。AE能够抑制GMC的TGF-β1分泌,与空白对照组,AE干预组TGF-β1表达降低(P<0.05)。AE抑制GMC增殖、诱导GMC凋亡及抑制GMC TGF-β1分泌的作用明显强于atRA。结论AE可以抑制体外GMC增殖并能诱导凋亡,其抑制增殖的作用可能与TGF-β1表达降低有关。AE可干预狼疮性肾炎病理病理进程。     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β1对表皮干细胞增殖和分化的作用

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)对体外培养的表皮干细胞(ESC)增殖和分化的作用。方法从10只1~3 d龄SD大鼠提取ESC,实验选用第2代细胞。按随机数字表法将细胞分为bFGF组、TGF-β1组、bFGF+SU5402组和TGF-β1+SB505124组和对照组,各干预组角质形成细胞无血清培养基中分别加入10 ng/mLbFGF、10 ng/mLTGF-β1、10 ng/mLbFGF+10μM-SU5402(bFGF受体抑制剂)、10 ng/mLTGF-β1+1 uM-SB505124(TGF-β1受体抑制剂),对照组不做处理,于处理后即刻、1、3、7、10 d 5个时间点显微镜下观察各组细胞形态,以MTS法检测各组ESC增殖情况,取各组处理后10 d细胞以Transwell法检测迁移能力,并采用实时荧光定量RT-PCR法及免疫印迹法检测各组基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的相对表达量。结果 bFGF组ESC较对照组增殖能力(t=6.65,P0.01)及迁移能力(t=7.50,P0.01)显著增强,MMP-1表达(t=12.90,P0.01)明显增高,而α-SMA(t=-30.31,P0.01)、Ⅰ型胶原(t=-10.61,P0.01)和Ⅲ型胶原的表达量明显偏低(t=-7.91,P0.01);TGF-β1组ESC与对照组相比增殖能力(t=-3.36,P0.05)及迁移能力(t=-3.96,P=0.01)显著减弱,MMP-1表达(t=-8.81,P0.01)明显减少,而α-SMA(t=15.92,P0.01)、Ⅰ型胶原(t=-16.47,P0.01)和Ⅲ型胶原(t=22.80,P0.01)的表达量较对照组明显偏高;bFGF+SU5402组ESC增殖迁移能力及分化程度较对照组均无明显差别(P0.05),而TGF-β1+SB505124组ESC迁移能力较对照组显著增强(t=9.81,P0.01)。结论 bFGF可以显著促进ESC增殖和迁移,进而减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的形成;而TGF-β1在抑制ESC增殖及迁移,进而促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的形成。     

碱性成纤维细胞生长因子对放射性诱导小鼠C17.2神经干细胞凋亡的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)抑制放射性诱导小鼠C17.2神经干细胞凋亡的作用。方法:用直线加速器进行总剂量为8 Gy外照射C17.2神经干细胞建立放射损伤细胞模型,将处理后的C17.2神经干细胞悬液以1×108/L的浓度接种于96孔板中,每孔加细胞悬液200μl,然后分别加入bFGF 0(对照),25,50和100μg/L干预24 h处理。用4-甲基偶氮唑盐法检测细胞活性并拟合生存曲线,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:随bFGF浓度增加,放射诱导后的C17.2神经干细胞增殖比明显增加(P0.01),呈现明显剂量-效应关系(r=0.628,P0.01)。在一定放射剂量下,随着bFGF浓度增加C17.2神经干细胞生存曲线右移,表明bFGF能够提高神经干细胞的放射耐受性(r=0.569,P0.01)。bFGF为100μg/L时,C17.2神经干细胞活性最强,且无细胞毒性作用。流式细胞仪测定的对照组C17.2神经干细胞凋亡率明显高于bFGF 25和50μg/L(P0.01)处理组,并且凋亡率在bFGF 25,50和100μg/L组间也存在显著差异(P0.01)。结论:bFGF能显著抑制放射诱导的小鼠C17.2神经干细胞凋亡,其机制有待进一步研究。     

TGF-β1对胃癌细胞增殖、凋亡及miR-302a和AKT通路的影响

目的探究转化生长因子-β1(TGF-β1)对胃癌细胞增殖、凋亡及miR-302a和AKT通路的影响.方法在含有TGF-β1(0、1、5、10 ng/ml)的培养基培养胃癌细胞系BGC-823,MTT法检测细胞增殖情况;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数量;Hoechst33258染色观察细胞形态;流式细胞术检测细胞凋亡以及周期阻滞情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞miR-302a表达;蛋白印迹(WB)法检测p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达情况.结果与Control组相比,TGF-β1处理组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率升高,细胞克隆数量降低,且随着TGF-β1浓度的增加,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率逐渐升高,细胞克隆数量逐渐降低(P<0.05).与Control组相比,TGF-β1处理组G1期细胞比例显著增加,G2期细胞比例显著降低,且随着TGF-β1浓度的增加,G1期细胞比例逐渐增加,G2期细胞比例逐渐降低(P<0.05).与Control组相比,TGF-β1处理组miR-302a表达升高,p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平均显著降低,且随着TGF-β1浓度的增加,miR-302a表达逐渐升高,p-PI3K、p-AKT蛋白表达逐渐降低(P<0.05).结论TGF-β1可能通过上调miR-302a表达、抑制AKT通路,使细胞G1期阻滞,从而抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡.     

外源性TGF-β_1对NB4细胞内源性TGF-β_1的影响及其促凋亡机制的研究

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)作用于NB4细胞后的细胞凋亡情况、细胞周期改变及内源性TGF-β1、P27Kip1、cyclin E及bcl-2 mRNA水平的变化。方法:瑞氏-吉姆萨染色观察凋亡细胞形态学的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;半定量RT-PCR技术检测内源性TGF-β1、P27Kip1、cyclin E以及bcl-2的mRNA水平。结果:TGF-β1能抑制NB4细胞的生长,促进NB4细胞的凋亡。5μg/LTGF-β1使NB4细胞阻滞在G1期。外源性TGF-β1浓度5μg/L时,内源性TGF-β1的mRNA表达上调,外源性TGF-β1浓度为10μg/L时,内源性TGF-β1mRNA表达下调。5μg/LTGF-β1可使P27Kip1表达上调、cyclin E、bcl-2表达下调。结论:TGF-β1可诱导NB4细胞凋亡,引起细胞周期分布异常;外源性TGF-β1可能通过(1)上调内源性TGF-β1,从而使下游因子P27Kip1高表达以诱导NB4细胞凋亡;(2)TGF-β1直接抑制了cyclin E的表达,或者通过调高P27Kip1的表达反馈抑制cyclin E的活性,进而导致细胞周期阻滞;(3)通过下调bcl-2而诱导NB4细胞凋亡。高浓度的外源性TGF-β1可拮抗内源性TGF-β1表达,可能与其导致TGF-β1受体突变,或存在TGF-β1受体靶点过饱和现象有关。     

甲状旁腺素对人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1表达的影响

目的:通过观察甲状旁腺素(PIH)对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,以探讨PTH在肾间质纤维化发病机制中的作用.方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分别用不同浓度的PTH(10-12、10-11、10-10、10-9、10-8 mol/L)作用于HK-2细胞48 h,以及10-8 mol /L作用于HK-2细胞不同时间(12、24、48、72 h).应用RT-PCR法检测HK-2细胞内α-SMA、TGF-β1 mRNA表达水平,免疫细胞化学法检测HK-2细胞表达α-SMA阳性细胞百分数,Western blot法检测细胞内α-SMA的蛋白表达水平.结果:(1)RT-PCR结果表明,PTH呈剂量和时间依赖性地促进HK-2细胞α-SMA、TGF-β1 mRNA的表达(P＜0.01),且两者之间呈正相关(P＜0.05).(2)免疫细胞化学结果表明,PTH可增加表达α-SMA阳性的HK-2细胞百分数,且呈剂量和时间依赖性(P＜0.05).(3)Western blot结果表明,PTH 可增加HK-2细胞α-SMA的蛋白表达量,也呈剂量和时间依赖性(P＜0.01).结论:PTH可通过促进肾小管上皮细胞转分化以及TGF-β1的表达促进肾小管间质纤维化.     

1,25（OH）2D3对甲状旁腺素诱导的肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1的表达的影响

目的:探讨1,25(OH)2D3对甲状旁腺素(PTH)诱导的肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)培养在含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液中。对照组:加入等体积含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液;PTH刺激组:加入终浓度为10-10 mol/L PTH的含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液;PTH+1,25(OH)2D3干预组:加入10-10 mol/L PTH,同时加入不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7 mol/L)的1,25(OH)2D3。刺激HK-2细胞48 h。半定量RT-PCR法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β1的基因表达;Western blot法检测细胞中α-SMA和TGF-β1的蛋白表达;免疫细胞化学法检测细胞中α-SMA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1的含量。结果:半定量RT-PCR结果显示,对照组HK-2细胞中几乎无α-SMA的mRNA表达,仅有少量的TGF-β1 mRNA表达;PTH刺激组α-SMA和TGF-β1mRNA表达量与对照组比较明显增加;PTH+1,25(OH)2D3干预组表达量比PTH刺激组显著降低,且随着1,25(OH)2D3浓度的升高呈一定的剂量依赖性(P<0.05)。Western blot结果显示,对照组HK-2细胞中无α-SMA的蛋白表达,仅有少量的TGF-β1蛋白表达;10-10 mol/L的PTH能够明显诱导HK-2细胞中α-SMA的蛋白表达,增加TGF-β1的蛋白表达量;PTH+1,25(OH)2D3干预组,α-SMA和TGF-β1的蛋白表达量比PTH刺激组显著降低(P<0.05)。免疫细胞化学法结果显示,对照组几乎无α-SMA阳性表达的细胞,PTH刺激组可见大量细胞α-SMA表达阳性;PTH+1,25(OH)2D3干预组α-SMA表达阳性的细胞数明显低于PTH刺激组(P<0.05)。ELISA结果显示,对照组细胞上清液中可检测到少量的TGF-β1,PTH刺激组含量显著升高,PTH+1,25(OH)2D3干预组与PTH刺激组比较含量明显降低(P<0.05)。结论:1,25(OH)2D3能够部分拮抗PTH诱导的HK-2细胞转分化和TGF-β1的表达。     

PI3K/PKB信号通路在TGF-β_1诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白中的作用

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白(OPN)的调控作用。方法:体外培养LX-2人肝星状细胞株,予TGF-β1(终浓度2.5、5、10、20μg/L)刺激24 h或予TGF-β1(终浓度10μg/L)刺激12 h、24 h、48 h;先经PI3K/PKB信号通路特异性抑制剂wortmannin(0.1μmol/L)预处理1 h,再予10μg/L TGF-β1刺激24 h,收集细胞,采用real-time PCR及Western blotting法检测OPN表达情况。结果:TGF-β1能够促进LX-2细胞表达OPN,在一定浓度和时间范围内,其表达量随着TGF-β1浓度和时间的增加而增加,呈剂量和时间依赖性关系;经wortmannin预处理再予TGF-β1刺激的LX-2细胞,与对照组相比,OPN表达受到明显抑制(P0.01)。结论:TGF-β1对LX-2人肝星状细胞OPN表达具有诱导作用,此作用可能受PI3K/PKB信号通路的调控。     

环孢素A慢性肾毒性时肾转化生长因子-β1表达和细胞凋亡间的相关性及茶多酚的影响

目的:探讨环孢素A(CsA)慢性肾毒性作用时肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达和细胞凋亡间的相关性及茶多酚(TP)对其的影响。方法:采用CsA慢性肾毒性大鼠模型,分别用CsA溶剂vehicle(oliveoil)、TP、CsA与CsA TP处理4周,观察肾功能与组织的改变,免疫组织化学和Westernblot检测肾组织TGF-β1表达,TUNEL法检测肾细胞凋亡,检测凋亡相关酶caspase-3活性。结果:与CsA组相比,CsA与茶多酚联用组明显增加肾肌酐清除率(0.12±0.03vs0.22±0.02,P<0.05)和减轻肾小管细胞损伤(2.29±0.43vs1.42±0.26,P<0.05)与间质纤维化程度(2.82±0.20vs1.43±0.19,P<0.05),并明显减少肾小管及间质凋亡细胞数(19.3±4.6vs7.5±2.1,P<0.05)与肾组织TGF-β1表达(P<0.05),肾细胞凋亡数和肾小管间质纤维化程度(r=0.89,P<0.05)与TGF-β1表达(r=0.85,P<0.05)间存在相关性。结论:肾小管间质纤维化与TGF-β1表达和肾细胞凋亡间存在显著的相关性,茶多酚抑制CsA慢性肾毒性时肾组织TGF-β1表达和细胞凋亡,改善CsA诱导的肾功能与组织结构损伤。     

IOX1对TGF-β诱导的LX2细胞增殖、凋亡及细胞外基质相关蛋白表达的影响

目的:探讨组蛋白去甲基化酶抑制剂IOX1(5-羧基-8-羟基喹啉)提高组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化(H3K9me2)水平对转化生长因子β(TGF-β)诱导的人肝星状细胞株LX2增殖、凋亡及细胞外基质合成和代谢的影响。方法:采用实时无标记细胞分析技术动态观察不同浓度IOX1对TGF-β诱导的LX2细胞增殖的影响。采用流式细胞术观察IOX1对TGF-β诱导的LX2细胞凋亡的影响。Western blot检测细胞中H3K9me2水平,以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col I)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)蛋白的表达。结果:与对照组相比,不同浓度的IOX1均能抑制LX2细胞增殖。流式细胞术结果表明,IOX1能够促进LX2细胞凋亡(P<0. 05)。Western blot结果发现,IOX1能提高LX2中H3K9me2水平,且呈剂量依赖性(P<0. 05);与对照组相比,300μmol/L IOX1能够明显抑制TGF-β诱导的LX2细胞中α-SMA、TIMP-1和Col I蛋白的表达(P<0. 05),MMP-1蛋白...     

丹酚酸B对活化的系膜细胞TGF-β_1受体和Smad2表达的影响

目的:通过观察丹酚酸B对活化的系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)受体和Sma与Mad的同源基因2(Smad2)分子表达的影响,探讨丹酚酸B拮抗系膜细胞活化及肾纤维化的机制。方法:分离纯化大鼠肾小球系膜细胞,TGF-β1刺激建立系膜细胞活化模型并检测Smad2、Smad7信号分子表达。丹酚酸B(剂量分别为10-6mol/L、10-5mol/L)进行干预,免疫荧光及蛋白印记法观察对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响,蛋白免疫印迹法检测系膜细胞TGF-β1两型受体(TβRⅠ、TβRⅡ)和Smad2信号分子表达的变化。结果:5μg/L TGF-β1刺激系膜细胞24h可成功制备系膜细胞活化模型,在系膜细胞活化早期即可见Smad2分子的显著磷酸化;10-6mol/L、10-5mol/L丹酚酸B均可明显抑制其活化标志蛋白α-SMA的表达;丹酚酸B干预可致系膜细胞TGF-β1两型受体表达减少,Smad2的磷酸化状态被抑制。结论:丹酚酸B可通过抑制大鼠肾小球系膜细胞TβRⅠ、TβRⅡ表达和信号分子Smad2的磷酸化而拮抗其活化,这可能是丹酚酸B抗肾纤维化的细胞学机制之一。     

白细胞介素-34/集落刺激因子-1R在转化生长因子-β1诱导A549细胞上皮-间质转化中的表达

目的探讨白细胞介素-34/集落刺激因子-1受体(IL-34/CSF-1R)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导A549细胞发生上皮-间质转化(EMT)中的表达。方法体外培养A549细胞;CCK 8法检测不同浓度TGF-β1在不同时间点对A549细胞增殖的影响;选用5μg/L TGF-β1刺激A549细胞(0、12、24、48h),提取细胞蛋白和RNA,Western blotting法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏连蛋白(E-Cad)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白的变化;Real-time PCR法检测IL-34、CSF-1R、MMP-2、MMP-9基因表达的变化。结果 TGF-β1对A549细胞的增殖无明显影响(P0.05)。TGF-β1刺激A549细胞后,间质细胞标志性蛋白α-SMA表达升高,上皮细胞标志性蛋白E-Cad表达下降,纤维化相关的MMP-2蛋白表达升高,MMP-9蛋白表达先升高后下降,TIMP-1蛋白早期出现短暂性增高后,呈持续降低趋势(P0.01)。IL-34mRNA表达逐渐升高,CSF-1R mRNA、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达先升高后下降(P0.01)。结论 TGF-β1诱导A549细胞的EMT过程中,存在IL-34/CSF-1R的动态表达。     

Celecoxib通过β-catenin-Tcf/Lef通路诱导SW620细胞凋亡的体外研究

目的 研究Celecoxib抗大肠癌的分子生物学机制.方法 不同浓度的Celecoxib作用于大肠癌细胞SW620,MTT(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖,Western印迹检测β-catenin 和survivin蛋白表达的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.siRNA沉默β-catenin,观察survivin蛋白表达变化情况.结果 Celecoxib浓度在10-mmol/L～10-3mmol/L范围内表现出较强的抑制细胞增殖的效应分别为34.13%、68.93%和71.66%,呈剂量依赖性;Celecoxib可抑制β-catenin和survivin蛋白表达;流式细胞仪检测结果显示60 μmol/L和80μmol/L Celecoxib处理后SW620细胞凋亡比例明显增高,凋亡细胞分别为对照组的4.9倍[(x±s)%=(4.02±0.67)%,P=0.007 837]和8.2倍[(x±s)%=(6.50±0.56)%,P=0.004 296];siRNA沉默β-catenin后发现survivin表达显著降低.结论 Celecoxib通过影响β-catenin,进一步通过β-catenin-Tcf/Lef途径抑制survivin表达来起到诱导SW620细胞凋亡的作用.     

视黄醇X受体激动剂通过调控Smad2通路抑制TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞胶原合成

目的:探讨视黄醇X受体(RXR)激动剂9-顺式视黄酸(9-cis-RA)干预对缺氧条件下转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠心肌成纤维细胞(CFs)胶原合成的影响和分子机制。方法:心肌组织块干涸法培养大鼠CFs,持续通氮气法建立细胞缺氧环境,评价9-cis-RA和TGF-β1对CFs胶原合成的影响;ELISA法测CFs上清液Ⅰ、Ⅲ型胶原水平,Western blot法检测胞浆、胞核和细胞的Smad2及p-Smad2水平,细胞免疫化学法观察p-Smad2的亚细胞定位。结果:TGF-β1(0.01~10μg/L)在缺氧条件下呈浓度依赖性地诱导CFs合成Ⅰ型和Ⅲ胶原,当浓度达到5μg/L时,Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成水平显著增高(P0.01)。9-cis-RA(10-9~10-6mol/L)则呈浓度依赖性抑制TGF-β1在缺氧条件下诱导的CFs胶原合成,当浓度为10-7mol/L时,Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成水平显著降低(P0.01)。Smad2抑制剂(20 nmol/L)亦可显著抑制TGF-β1在缺氧条件下诱导的CFs Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成。免疫杂交和细胞免疫化学结果显示,与TGF-β1干预相比,TGF-β1和9-cis-RA联合干预组的CFs其胞浆内p-Smad2的水平显著增加,但胞核内p-Smad2的水平明显降低(P0.05)。结论:RXR激动剂9-cis-RA显著下调TGF-β1在缺氧条件下诱导的CFs Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成,其机制与其抑制TGF-β1诱导的p-Smad2细胞核转位有关。     

HIV-1感染者T细胞分泌TGF-β和IL-10水平及其抑制作用的研究

目的探究我国HIV-1感染者T细胞分泌TGF-β和IL-10的水平,以及重组IL-10(r IL-10)和重组TGF-β(r TGF-β)对T细胞功能的影响。方法分离HIV-1感染者PBMC,加入r IL-2、r IL-15、r IL-12细胞因子体外刺激,采用胞内染色、流式细胞术检测T细胞内TGF-β、IL-10的产生情况。结果 HIV-1感染者总T细胞和CD8~+T细胞分泌的TGF-β明显高于正常人(P=0.000 1,P=0.003),分泌的IL-10在HIV-1感染者和正常人之间没有统计学差异;总T细胞分泌的TGF-β、IL-10与CD8~+T细胞分泌的TGF-β、IL-10有明显的正相关和正相关趋势(r=0.758,P=0.000 1;r=0.346,P=0.056);体外实验发现,r IL-10或r TGF-β对T细胞CD107a或IFN-γ的分泌具有抑制作用。结论 HIV-1感染者T细胞分泌的抑制性细胞因子TGF-β水平增加,抑制T细胞功能的发挥,因此在临床抗病毒治疗中,应注意调节细胞因子的平衡,降低TGF-β的抑制作用。     

胡椒醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌细胞分化和凋亡的影响

目的 观察胡椒醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌细胞BEL-7402的诱导分化和凋亡作用.方法 用不同浓度的1-(3,4-二氧亚甲基)苯甲亚氨基-2-吡啶-3-基-5-甲硫基-[1,2,4]三唑(LH-36)与BEL-7402细胞体外培养.MTT法检测细胞增殖和LH-36对细胞增殖的抑制作用.用Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡变化.免疫细胞化学检测细胞内激活型Caspase-3表达.反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞甲胎蛋白(α-FP)和白蛋白(Alb)mRNA表达,以了解细胞分化状态.蛋白质免疫印迹分析P53的表达.可见光法测定超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力.结果 LH-36在0.1 μmol/L～10 μmol/L的浓度范围能抑制细胞增殖,且抑制率随浓度和时间的增加而增高.0.1 μmol/L和1.0 μmol/L的LH-36使细胞α-FP mRNA表达量明显下降,Alb表达量增高,P53的蛋白表达明显增加,SOD活性升高(P＜0.01),而CAT活性降低,差异有显著性(P＜0.01,P＜0.05).药物浓度在10 μmol/L作用48 h,BEL-7402细胞皱缩,呈现凋亡各期改变,Caspase-3阳性细胞明显增加,细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.05).结论 胡椒醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌BEL-7402细胞具有抗增殖、促分化和凋亡作用,作用可能与过氧化氢的氧化损伤作用有关.     

TGF-β对缺氧环境下HepG2细胞表达VEGF的影响

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和低氧(CoCl2)对肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养肝癌细胞系HepG2细胞,实验分为对照组、不同浓度TGF-β1和CoCl2的分别处理组、TGF-β1(100 pmol/L) CoCl2(200 μmol/L)组;用免疫细胞化学法检测VEGF蛋白表达;半定量RT-PCR技术检测细胞中VEGFmRNA相对表达量。结果各处理组VEGF蛋白表达均为阳性;TGF-β1或CoCl2组中VEGF mRNA相对表达量明显高于对照组(P<0.01),并且呈浓度依赖性;TGF-β1 CoCl2组中VEGFmRNA表达高于单因素刺激组(P<0.05)。结论TGF-β1能够刺激HepG2细胞表达VEGF,并且可以协同CoCl2增加VEGF的表达。     

地塞米松促进卵巢癌细胞系p21/WAF1和TβR-Ⅱ的表达

探讨人工合成糖皮质激素地塞米松(Dex)抑制人卵巢癌细胞系HO-8910增殖的分子机理.采用RT-PCR测定细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21/WAF1,转化生长因子-β1(TGF-β1)及其I型受体(TβR-Ⅰ)和Ⅱ型受体(TβR-Ⅱ)的mRNA表达水平,免疫细胞化学方法分析TβR-Ⅱ的蛋白表达水平.发现Dex能够诱导HO-8910细胞p21/WAF1 mRNA的表达,10-7mol/L Dex处理细胞8 h组比对照组p21/WAF1 mRNA表达增加2.84倍(P＜0.01).并且证明Dex亦可上调TβR-Ⅱ mRNA的表达水平,10-7mol/L Dex处理8 h使TβR-Ⅱ mRNA的表达量比对照升高1.2倍(P＜0.01);Dex也引起TβR-Ⅱ蛋白表达的增加.这些效应均可被糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486逆转.而TGF-β1和TβR-ⅠmRNA的表达不受Dex的影响.以上结果提示,Dex通过GR介导而促进p21/WAF1和TβR-Ⅱ的表达,可能参与其抑制人卵巢癌细胞HO-8910增殖过程.