反复吸入七氟醚对大鼠海马神经元p-cofilin及cofilin表达和远期认知功能的影响

目的 探讨反复吸入七氟醚对大鼠海马神经元磷酸化丝切蛋白（p cofilin）及丝切蛋白（cofilin）表达和远期认知功能的影响。 方法 将20只雄性SD大鼠随机分为七氟醚组（n=10）和对照组（n=10）,七氟醚组大鼠吸入2.4% 七氟醚,每日2 h,连续7 d,对照组不吸入七氟醚。通过Morris水迷宫定位航行实验及空间探索实验检测两组大鼠认知功能,采用TUNEL实验检测海马神经元凋亡情况,Western Blot检测海马内Bax、Bcl 2、p cofilin和cofilin表达情况。 结果 定位航行实验的第3、4、5d,七氟醚组逃避潜伏期长于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;两组大鼠空间探索实验结果发现,七氟醚组大鼠穿越平台次数明显少于对照组,平台象限停留时间明显短于对照组（均P＜0.05）;两组游泳速度无明显差异（P＞0.05）;与对照组比较,七氟醚组大鼠海马组织凋亡细胞数目明显增加（P＜0.05）;七氟醚组Bax表达明显高于对照组,而Bcl 2表达明显低于对照组（P＜0.05）;七氟醚组p cofilin表达明显低于对照组,而cofilin表达明显高于对照组（P＜0.05）。 结论 反复吸入七氟醚可降低大鼠认知功能,其机制可能与上调cofilin表达诱导的细胞凋亡有关。     

脑神康胶囊对缺氧复氧损伤大鼠海马神经元凋亡的影响

目的观察脑神康胶囊对缺氧复氧损伤大鼠海马神经元凋亡及其Bcl 2、Bax mRNA表达的影响。方法随机将原代培养大鼠海马神经元分为对照组、损伤组、中药低、中、高浓度组。对照组正常培养,损伤组及中药组建立缺氧复氧损伤模型,中药各浓度组于复氧时换以不同浓度含药血清的培养液,采用MTT法测各组细胞存活率,采用流式细胞仪检测凋亡率,采用RT PCR法检测Bcl 2和Bax mRNA的表达并计算两者比值。结果损伤组细胞存活率及Bcl 2 mRNA表达明显下降(P均＜0.01),凋亡率及Bax mRNA表达显著升高(P均＜0.01),Bcl 2/Bax降低(P＜0.01);中药各浓度组较损伤组细胞存活率及Bcl 2 mRNA表达均升高(P均＜0.01),凋亡率及Bax mRNA表达降低(P＜0.01,P＜0.05),Bcl 2/Bax增加(P＜0.01),且呈明显的剂量依赖性。结论脑神康胶囊对海马神经元缺氧复氧损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与其调节凋亡相关蛋白、减少凋亡密切相关。     

葛根素抑制痴呆大鼠模型海马神经元凋亡的研究

目的 用痴呆大鼠模型研究海马神经元凋亡机制及葛根素对其干预效应.方法 雄性Wistar大鼠36只被随机分为对照组、痴呆组、治疗组,用HE染色、TUNEL染色和流式细胞技术观察痴呆大鼠模型海马神经元的凋亡现象及葛根素的影响,采用免疫组织化学染色和Western Blot 分析,研究其分子机制是否涉及凋亡基因Bax、Bcl-2和凋亡蛋白酶caspase-3表达变化.结果 HE染色、TUNEL染色时,对照组海马凋亡神经元少见;流式细胞术测定大鼠海马凋亡细胞率显示,对照组大鼠海马的凋亡细胞率处于较低水平,痴呆组与对照组比较海马凋亡神经元数量明显增加,凋亡细胞率明显增加(P＜0.05),治疗组与痴呆组比较海马凋亡神经元数量明显减少,凋亡细胞率明显降低(P＜0.05).痴呆组比对照组大鼠海马组织Bax、caspase-3蛋白的表达量明显增加(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达量明显减少(P＜0.05);治疗组与痴呆组相比大鼠海马组织Bax、caspase-3的表达量明显降低(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达量明显增加(P＜0.05).结论 葛根素能抑制痴呆大鼠模型海马神经元凋亡,可为葛根素治疗痴呆提供理论依据.     

糖尿病脑病海马神经元凋亡的实验研究

目的 检测糖尿病大鼠学习与记忆成绩及海马神经元凋亡情况，探讨糖尿病对学习与记忆影响的机制。方法 Wistar大鼠共24只，随机分成2组，对照组12只，糖尿病组12只，糖尿病组用链脲服佐菌素（STZ）制模，满12周后，用Y-迷宫检测大鼠学习与记忆成绩，处死动物取脑，应用TUNEL法、HE染色及图像分析技术对大鼠海马进行观察。结果 糖尿病组大鼠学习成绩降低（P〈0．05），海马神经元数目较正常组减少（P〈0．05），并出现TUNEL法阳性细胞。结论 海马神经元凋亡可能是糖尿病大鼠学习与记忆障碍的机制之一．     

NOS在糖尿病大鼠海马中的表达及其与认知功能的关系

目的：观察糖尿病大鼠学习记忆功能与海马NOS的变化，探讨二者的联系以及NO在糖尿病CNS病变中的作用。方法：将65只雄性Wistar大鼠随机分为实验(DM)组和对照(NC)组。每4周测血糖和体重。满12周时进行电迷宫实验，测试其学习记忆能力，并取海马组织进行免疫组化染色，检测nNOS和iNOS活性及含量。结果：与NC组相比，DM组大鼠达到9／10正确反应前所需的电击次数明显增多，其海马nNOS阳性神经元数目及平均光密度明显增高，NC组大鼠海马中未见表达的iNOS，在DM大鼠海马中亦有较高程度的表达。在DM组大鼠中，迷宫测试成绩与海马NOS阳性神经元数目呈正相关，与nNOS阳性染色深度亦呈正相关。而在NC组大鼠中，迷宫测试成绩与海马nNOS阳性神经元数目及阳性染色深度呈负相关。结论：适量NO是学习记忆形成和维持所必需的。糖尿病可导致海马NOS含量及活性增高并生成过量NO，从而影响LTP造成学习记忆功能损害。     

丹参注射液对糖尿病大鼠海马组织中Grp-78和CHOP表达的影响

目的研究丹参注射液对糖尿病大鼠海马组织中葡萄糖调节蛋白-78（Grp-78）以及生长停滞和DNA损伤损伤基因153（CHOP/GAD153）表达的影响。方法将30只SD大鼠按照随机数字表分为对照组、糖尿病组和丹参注射液组,每组各10只。糖尿病组、丹参注射液治疗组的大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素65mg/kg诱导糖尿病模型。48h后,丹参注射液治疗组每天腹腔注射丹参注射液1ml/kg,对照组和糖尿病组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。各组均连续注射6周,随后测定各组大鼠体重和血糖。采用水迷宫检测依赖海马的学习记忆能力,超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）试剂盒检测海马组织匀浆中SOD活性以及MDA含量,免疫印迹检测海马组织中cleavedcaspase-3蛋白表达,免疫组化检测海马组织中Grp-78和CHOP蛋白表达。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠体重减轻,血糖升高（P＜0.01）,水迷宫检测中的逃避潜伏期明显变长（P＜0.01）,穿越平台次数显著增多（P＜0.01）,同时,海马组织中SOD活性降低（P＜0.01）,MDA含量、Grp-78、CHOP和cleavedcaspase-3表达均升高（均P＜0.01）。而与糖尿病组相比,丹参注射液治组大鼠体重增加,逃避潜伏期明显减短,穿越平台次数显著减少,SOD活性明显提高（P＜0.01）,MDA含量、Grp-78、CHOP以及cleavedcaspase-3表达均减少（均P＜0.01）。结论丹参注射液能够抑制糖尿病大鼠海马组织中内质网应激的激活,从而减少神经元的凋亡,提高大鼠的学习记忆能力。     

慢性脑缺血对大鼠认知功能障碍及影响机制研究

目的观察慢性脑缺血（CCH）过程中大鼠认知功能的变化、前额叶皮层和海马神经元组织学改变以及胆碱能系统改变,探讨慢性脑缺血致大鼠认知障碍的影响机制。方法选取大鼠分组后,应用Morris水迷宫定位航行实验和空间搜索实验观察各组大鼠学习记忆功能变化;苏木精-伊红染色观察前额叶皮层和海马组织学改变;免疫组织化学方法显示前额叶皮层和海马胆碱乙酰转移酶和烟碱型乙酰胆碱受体α4阳性细胞表达。结果①Morris水迷宫测试：a.定位航行实验：各组大鼠逃避潜伏期随天数增加而缩短,逃避潜伏期有差异性;b空间搜索实验：CCH各组大鼠在中环停留时间随低氧时间延长而减少;②与对照组比较,CCH大鼠前额叶皮层和海马变性坏死神经元增多,随着低氧时间延长而加重;③CCH各组大鼠前额叶皮层和海马ChAT阳性表达随低氧时间延长而下降;④CCH各组大鼠前额叶皮层和海马nAChRα4阳性表达随着低氧时间延长而下降。结论慢性脑缺血大鼠认知功能障碍随低氧时间延长呈加重趋势。慢性脑缺血致大鼠认知功能障碍的机制与大鼠前额叶皮层和海马神经元组织学改变和胆碱能系统改变有关。     

胶质细胞对Aβ诱导的阿尔茨海默病大鼠脑神经损伤的影响

目的：探讨神经胶质细胞对β‐淀粉样蛋白（Aβ）诱导的阿尔茨海默病（AD）大鼠脑神经损伤的作用。方法将雄性Wistar大鼠20只,分为对照组和模型组,每组10只;模型组双侧海马注射凝胶态Aβ（10μg）,对照组注射生理盐水;行水迷宫实验;硫堇染色观察皮层神经元形态变化及数量;酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）、白细胞介素‐1β（IL‐1β）水平;免疫组化检测胶质细胞及神经胶质原纤维酸性蛋白质（GFAP）表达。结果模型组大鼠水迷宫各项指标均明显低于对照组（P＜0．05）;皮层神经元数量较对照组明显减少（P＜0．01）;血清中TNF‐α、IL‐1β明显高于对照组（P＜0．05）;海马GFAP阳性细胞数明显多于对照组（P＜0．05）。结论Aβ可激活胶质细胞及促炎因子释放,引起大鼠脑神经元损伤,导致大鼠学习、记忆能力降低。     

脑灵汤对阿尔茨海默病模型鼠凋亡调控基因的影响

目的 观察脑灵汤对阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease，AD）大鼠模型学习记忆能力及脑内海马细胞凋亡基因Bcl-2和Bax表达的影响。方法 通过半乳糖腹腔注射及氯化铝（Alcl3）皮下注射建立AD大鼠模型，采用γ-电迷宫检测学习记忆能力，提取脑内海马纽织总RNA，应用RT—PCR和琼脂糖凝胶电泳方法测定Bcl-2、Bax基因的表达。结果 脑灵汤能改善模型大鼠的学习记忆能力，增强受损海马神经元Bcl-2基因的表达，降低Bax基因的表达。结论 脑灵汤可能通过升高Bcl-2／Bax的比值而抑制海马神经元的凋亡，改善模型大鼠学习记忆能力。     

钙调神经磷酸酶抑制剂对Aβ1－42所致阿尔茨海默病大鼠学习记忆及细胞凋亡的影响

目的：探讨钙调神经磷酸酶抑制剂对β-淀粉样蛋白（Aβ1－42）所致阿尔茨海默病（AD）大鼠学习记忆及海马区细胞凋亡的影响及可能作用机制。方法36只SD大鼠随机分为AD模型组、FK506组及对照组,每组12只。 AD模型组和FK506组采用Aβ1－42海马注射建立AD大鼠模型,FK506组以钙调神经磷酸酶抑制剂他克莫司（ FK506）干预。用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,原位末端凋亡法（TUNEL）检测凋亡细胞,实时定量PCR（RT-PCR）、免疫组化检测海马区促凋亡蛋白（Bad）、细胞凋亡蛋白酶-3（Caspase-3）的表达。结果与对照组相比,AD模型组大鼠学习记忆能力明显减退（P＜0．01）,海马CA1区神经元细胞凋亡率增高（ P＜0．05）,而FK506可改善AD大鼠的学习记忆能力,并能减少海马CA1区神经元细胞凋亡率（P＜0．05）;Bad基因转录及其蛋白表达在AD模型组与FK506组中无明显差异（P＞0．05）,而FK506可显著减少AD大鼠海马区Caspase-3的表达（P＜0．05）。结论抑制钙调神经磷酸酶激活可改善AD大鼠的学习记忆能力。 AD的发病机制可能为,活化的钙调神经磷酸酶可能通过介导Bad去磷酸化而激活Caspase-3,最终导致细胞凋亡。钙调神经磷酸酶抑制剂可通过阻断该途径来治疗AD。     

厄贝沙坦对糖尿病鼠造影剂肾损害氧化应激和iNOS的影响

目的:观察糖尿病造影剂肾损害(CIN)发病过程中氧化应激的作用以及肾皮质诱导性一氧化氮合酶(iNOS)活性的变化,并探讨厄贝沙坦对糖尿病CIN氧化应激和肾皮质iNOS活性的影响。方法:雄性Wistar大鼠56只,10只作为正常对照组(N组),其他46只作为糖尿病造模组。用腹腔单剂量注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,饲养8周后糖尿病大鼠再随机分为3组:糖尿病对照组(DM组);糖尿病+造影剂组(CM组);糖尿病+厄贝沙坦+造影剂组(ARB组)。注入造影剂48 h后收集血、尿标本,测血肌酐(Scr)、内生肌酐清除率(Ccr)、尿微白蛋白排泄率(UAE)、尿N-乙酰--βD-氨基葡萄糖酐酶(NAG)。造影后第2天摘取肾脏左肾行组织病理学分析,右肾检测肾皮质内丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、iNOS活性。结果:与DM组比较,CM组注入造影剂后Scr、NAG升高,Ccr下降,肾皮质MDA含量升高,SOD、CAT活性下降,iNOS活性升高;与CM组比较,ARB组注入造影剂后Scr、NAG下降,Ccr升高,肾皮质MDA含量下降,SOD、CAT活性升高,iNOS活性下降。结论:氧化应激参与了糖尿病CIN的发病过程;厄贝沙坦对糖尿病CIN有保护作用,此保护作用可能与之抑制CIN的氧化应激有关。     

牛磺酸对糖尿病大鼠血浆、肾脏内皮素和一氧化氮水平的调节作用

目的：观察牛磺酸对糖尿病大鼠血浆、肾脏内皮素（ Ｅ Ｔ）和一氧化氮（ Ｎ Ｏ）水平的调节作用。方法：链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠接受牛磺酸（３００ ｍ ｇ／ｋｇ）处理 ３ 周后,测定血浆 Ｅ Ｔ、 Ｎ Ｏ、尿 Ｅ Ｔ 和肾皮质 Ｎ Ｏ 水平。结果：链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠血浆 Ｅ Ｔ、肾皮质 Ｎ Ｏ 水平和尿 Ｅ Ｔ 排泄量均较对照组明显升高,而血浆 Ｎ Ｏ 水平明显降低;牛磺酸处理的糖尿病大鼠上述参数均有不同程度逆转。结论：牛磺酸可影响糖尿病状态下 Ｅ Ｔ 和 Ｎ Ｏ 的合成和／或释放。     

阿魏酸钠对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性的影响

目的探讨阿魏酸钠(SF)对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C(PKC)活性的影响.方法链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠灌胃给予SF 110mg·kg-1.·d-1,治疗8周,测定各组大鼠肾皮质超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、PKC活性及丙二醛含量,观察肾脏病理改变.结果与正常对照组相比,糖尿病对照组大鼠肾重体重、肌酐清除率、24h尿蛋白、肾皮质胞膜PKC活性、胞膜PKC活性占总活性的百分比、肾皮质丙二醛显著升高,肾皮质超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性显著降低,肾脏病理学改变明显,SF治疗组上述指标显著改善.结论 SF可通过抑制肾脏PKC的激活对糖尿病大鼠肾脏产生保护作用.     

2型糖尿病大鼠大脑皮质HO-1表达的变化

目的:探讨2型糖尿病大鼠大脑皮质血红素加氧酶1(HO-1)表达的变化.方法:20只SD大鼠随机分为正常埘照组和糖尿病模型组,每组10只.正常对照组大鼠不做任何处理;糖尿病模型组大鼠采用链脲佐菌素连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型,一周后以血糖≥16.7mmol/L作为成模标准.HE染色观察大脑皮质神经细胞的变化,分别采...     

糖尿病大鼠早期EDLF和肾皮质Na+,K+-ATPase活性的变化

目的探讨大鼠糖尿病早期肾功能、内源性洋地黄样因子(endogenous digitalis-like factor,EDLF)含量以及肾皮质Na ,K -ATPase活性的变化.方法实验用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,用放射免疫方法测定血清和尿EDLF浓度以及尿白蛋白含量,以比色法测定肾皮质Na ,K -ATPase活性.结果糖尿病组大鼠血糖、尿量、尿白蛋白、肌酐清除率、肾重/体重和血、尿EDLF的浓度与正常对照组相比均显著升高,而肾皮质Na ,K -ATPase活性则显著下降.胰岛素治疗后,除肾皮质Na ,K -ATPase活性升高外,糖尿病大鼠的上述指标均显著下降.结论糖尿病早期肾皮质Na ,K -ATPase活性降低,可能与EDLF释放增多有关.胰岛素治疗可抑制EDLF的释放从而提高肾皮质Na ,K -ATPase活性.     

实验性糖尿病对大鼠胸腺的影响--多糖、脂类和酶组织化学研究

目的　探讨糖尿病大鼠胸腺多糖、脂类和酶组织化学反应变化及其与胸腺退化的关系。方法　采用四氧嘧啶型糖尿病动物模型 ,应用组织化学方法 ,在光镜下观察糖尿病大鼠胸腺多糖、脂类和酶组织化学反应变化 ,并对其进行半定量分析。结果　糖尿病大鼠胸腺皮质萎缩退化 ,皮质明显变薄 ,细胞密度显著降低 (P <0 .0 1)。巨噬细胞呈PAS、油红O、ACP、NSE、SDH强阳性反应 ,在皮质和皮髓质交界区大量聚集 ,并呈现组化反应异质性的变化。皮质许多上皮细胞呈PAS、SDH和ACP强阳性反应。大量胸腺细胞呈ALP或ACP强阳性反应 ,散在或成簇分布于皮质中。结论　糖尿病大鼠胸腺皮质明显萎缩退化 ,呈现明显多糖、脂类和酶组织化学反应变化 ,其变化与胸腺退化有关     

糖尿病大鼠外周血单个核细胞内与肾皮质中TGF-β1mRNA水平的相关性研究

目的:观测糖尿病状态及噻唑烷二酮类药物治疗对糖尿病大鼠外周血单个核细胞(PBMC)内TGF-β1mRNA水平的影响,比较其与肾皮质TGF-β1基因表达的关系.方法:54只SD大鼠随机分为正常对照组(C组)、糖尿病组(D组)及吡格列酮治疗组(DP组).2、4、8周每组各取6只,以RT-PCR 狭缝杂交法半定量检测PBMC内和肾皮质TGF-β1mRNA水平.结果:肾皮质TGF-β1mRNA水平8周内D组均高于C组(P<0.05),而PBMC内TGF-β1mRNA水平4周时略高于C组(1.27±0.38 vs 0.88±0.36,P>0.05),8周时差别有统计学意义(1.12±0.08 vs 0.84±0.16,P<0.05).D组和DP组在8周时PBMC内TGF-β1mRNA水平与肾皮质TGF-β1mRNA水平呈正相关(r=0.83、P=0.02,r=0.82、P=0.03).结论:在糖尿病肾病早期,PBMC内TGF-β1mRNA水平增高迟于肾皮质;但PBMC内TGF-β1mRNA水平可反映肾皮质TGF-β1mRNA水平的变化.     

补脾肾活血中药对糖尿病大鼠肾皮质糖基化终产物受体mRNA表达的影响

目的观察补脾肾活血中药对糖尿病大鼠肾皮质糖基化终产物(AGEs)含量及其受体mRNA(RAGE mRNA)表达的影响,探讨补脾肾活血中药防治糖尿病肾病(DN)的机制.方法采用链脲佐菌素(STZ)左下腹腔内单次注射造成糖尿病大鼠模型,随机分糖尿病组、中药组及氨基胍组,另设正常对照组.用荧光光谱法测定肾皮质AGEs含量,用RT-PCR的方法检测肾皮质RAGEmRNA的表达.结果糖尿病组大鼠肾皮质AGEs含量明显增加,RAGE mRNA出现过度表达.中药组治疗12周后肾皮质AGEs含量明显减少,RAGE mRNA表达明显下调,与糖尿病组比较都有显著差异(P＜0.01).结论补脾肾活血中药能够通过减少AGEs在肾皮质的积累,下调糖尿病大鼠肾皮质RAGE mRNA的过度表达,从而防治糖尿病肾病.     

荧光定量PCR法对糖尿病大鼠肾脏BAX基因表达的检测

目的:对单肾切除糖尿病大鼠肾脏中BAX基因mRNA的拷贝数进行精确定量,以探讨糖尿病肾病的发病机制。方法:以SYBRGreenI作为定量检测中荧光染料,采用实时荧光定量PCR法,对单肾切除糖尿病模型组和单肾切除对照组大鼠肾脏中BAX基因的转录水平进行检测。结果:糖尿病模型组中BAX转录拷贝数明显高于对照组。结论:糖尿病大鼠肾脏中存在BAX基因的转录异常,细胞凋亡亢进可能参与糖尿病肾病的发生发展。     

灯盏花素对糖尿病大鼠肾皮质糖基化终产物受体mRNA表达的影响

目的探讨灯盏花素对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾皮质RAGE表达水平的影响。方法雄性SD大鼠27只,随机分为3组。STZ腹腔注射建立糖尿病模型后,糖尿病灯盏花素治疗组(DD组)每日给予灯盏花素[20mg/(kg.d)]灌胃,8周后取肾脏组织行半定量RT-PCR检测RAGE mRNA的表达水平,与正常对照组(C组),糖尿病安慰剂组(D组)比较。结果成模8周时,糖尿病大鼠的体重、血糖与正常组相比有显著性差异(P<0.01),DD组与D组的血糖及体重无显著性差异(P>0.05);DD组、D组和C组的RAGE OD值/β-actin OD值分别为0.452±0.208,0.769±0.104,0.218±0.032,各组间RAGE表达有显著性差异(P<0.01)。结论糖尿病大鼠肾皮质RAGE mRNA表达明显高于正常对照组。灯盏花素能下调肾皮质RAGE的表达水平,对糖尿病肾病具有一定治疗作用。