山东地区汉族人 HLA-DPB1基因单核苷酸多态性

使用第十一届国际组织相容性会议提供的HLA－DPB1引物序列，由PCR技术扩增人HLA－DPB1基因第二外显子。产物纯化后，直接核酸序列分析确定个体的HLA－DPB1外显子核酸序列。使用基因定型软件与国际上公布的HLA－DPB1核酸序列构建的基因型核酸序列数据库进行比较，确定个体的基因型别、确定等位基因类型。研究结果提示中国人HLA－DPB1第二外显子基因序列与国际上公布的序列基本一致，但有不同之处，多处存在单核苷酸多态性（SNP），提示存在有新的等位基因。对51例个体研究显示，出现频率最高的等位基因是DPB1＊02012。     

用核酸序列测定1型糖尿病HLA-DPB1和DQB1第2外显子基因

目的 研究山东省汉族1型糖尿病与HLA－DPB1和HLA－DQB1等位基因的相关性。方法 采用基于核酸序列测定的基因分型技术对52例1型糖尿病患者及38例正常对照进行了DPB1和DQB1基因分析。结果 DPB1＊2201（P＜0．01）和DQB1＊0201（P＜0．01）、＊0303（P＜0．05）及＊0604（P＜0．05）等位基因频率在糖尿病患者组显著高于对照组,而PB1＊0402（P＜0．01）和DQB1＊0301（P＜0．01）等位基因在糖尿病患者组显著低于对照组。结论 DPB1＊2201和DQB1＊0201、＊0303及＊0604等位基因可能是山东省汉族1型糖尿病的易感性等位基因,而DPB1＊0402和DQB1＊0301等位基因可能是山东省汉族1型糖尿病的保护性等位基因。     

用PCR指纹图作HLA－DR快速配型的研究

ＰＣＲ指纹图技术选用通用型引物扩增ＨＬＡ－ＤＲＢ基因第二外显子，其产物在ＰＡＧＥ电泳中显示特定的“卫星”条带。可用于个体间作ＨＬＡ－ＤＲ的基因水平交叉配型，确定供受体间ＤＲＢ基因的相容性。采用ＨＬＡ纯合的Ｂ淋巴细胞系，分析单倍型上ＤＲＢＩ、ＤＲＢ３等基因异同时指纹图格局的变化，并通过１５对细胞间组合和比较，证实经ＤＮＡ交叉配合后的指纹图格局能十分敏感地反映个体间ＤＲ基因间的差异。在此基础上进一步对１７对随机个体作ＰＣＲ指纹图及交叉配型分析，表明这一技术在判别供受体间ＤＲ基因匹配性上十分有效，并有简单、快速、准确等优点。     

用PCR指纹图作HLA－DR快速配型的研究

ＰＣＲ指纹图技术选用通用型引物扩增ＨＬＡ－ＤＲＢ基因第二外显子，其产物在ＰＡＧＥ电泳中显示特定的“卫星”条带。可用于个体间作ＨＬＡ－ＤＲ的基因水平交叉配型，确定供受体间ＤＲＢ基因的相容性。采用ＨＬＡ纯合的Ｂ淋巴细胞系，分析单倍型上ＤＲＢＩ、ＤＲＢ３等基因异同时指纹图格局的变化，并通过１５对细胞间组合和比较，证实经ＤＮＡ交叉配合后的指纹图格局能十分敏感地反映个体间ＤＲ基因间的差异。在此基础上进一步对１７对随机个体作ＰＣＲ指纹图及交叉配型分析，表明这一技术在判别供受体间ＤＲ基因匹配性上十分有效，并有简单、快速、准确等优点。     

我国西双版纳傣族群体HLAⅡ类基因的寡核苷酸分型

我们对73名西双版纳傣族正常健康个体用第11届国际组织相容性专题讨论会的方法进行了HLA Ⅱ类基因的 PCR/SSO 分型。结果表明傣族的 HLA Ⅱ类等位基因频率分布在与中国南方人群相似以外尚有其独特性.共捡出 DRB1 等位基因20种,其中基因频率超过0.10的依次为1602、0901、1502、1401及1202,未发现01、08及1001等位基因。DRB3仅捡出0202及0301,DRB5仅捡出0101和0102。DQA1共捡出6种等位基因以0102、0101、03频率为最高。以0502为最高频率的 DQB1共捡出9种等位基因。绝大多数个体(91.8%)均具有 DPA1、0201等位基因、与目前所报道的东方人材料相一致,DPB1 0501频率最高,其次为0202、0201与1301。各位点均呈 Handy-WeinKeng 平衡.     

中国南方汉族人群HLA-Cw座位基因多态性分析

目的 分析中国南方汉族人群HLA－Cw座位基因多态性。方法 采用ARMS／PCR技术对60名随机选择的南方汉族健康个体作HLA－Cw基因分型。结果 共检出12种HLA－Cw等位基因或等位基因组（allele group)，其中HLA－Cw*07、＊01、＊03为该人群最常见HLA－Cw基因，频率之和为0．6932；证实该群体中HLA－Cw＊08频率为0．1056，检出率明显高于血清学分型；检出HLA－Cw*1202、＊1203、＊14、＊15等4种经典血清学分型不能鉴定的HLA－Cw基因，频率之和为0．0673。结论 提供了中国南方汉族人群HLA－Cw座位基因频率正常值，证实ARMS／PCR作HLA－Cw分型具有准确、快捷的优点。     

HLA-B40组等位基因多态性和血清学分型不明确标本分析

目的：利用DNA分型技术调查上海汉族人群HLA－B40组等位基因多态性并比较配型标本中HLA－B40抗原血清学和DNA分型的结果：方法：采用反向PCR－SSOP技术进行DNA分型，可检出HLA－B＊4001－4011等11个等位基因，结果：所有标本DNA分型均获成功，无假阳性和假阴性结果出现，质控DNA分型结果与UCLA结果相符，上海地区汉族人群共检出B＊4001－4003，4005－4007，4011等等位基因，未检出B＊4004，4008－4010等等位基因，296名无关个体中HLA－B40＊组等位基因频率为0．1402，血清学方法检测HLA－B40组抗原错误率为12．82％（10／78），结论：该技术用于HLA－B40分型分辨率高，分型结果较血清学方法更加精确，可确保HLA分型的准确。     

新的HLA-DRB1等位基因DRB1*1212的核苷酸序列分析

目的验证一个新的HLA等位基因HLA—DRB1＊1212的序列。方法采用盐析法抽提样本基因组DNA，利用HLA—DRB1组特异性引物PCR扩增先证者HLA—DRB1等位基因的第2外显子，PCR产物经割胶回收后进行测序分析，通过聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针方法验证测序发现突变点。结果先证者有两个HLA—DRB1等位基因，其中一个为HLA—DRB1＊090102，另一个HLA—DRB1等位基因，经BLAST验证为新的等位基因，新的等位基因序列已递交GenBank（AY899825）。与最接近的DRB1＊120101等位基因序列相比，新的等位基因仅在第2外显子上有1个核苷酸不同，即第199位A→C，导致第67位氨基酸Ile—Leu。结论该等化基因为新的HLA—DRB1等位基因，被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-DRB1＊1212。     

湖南汉族人群HLA-DP、-DQ位点等位基因多态性与鼻咽癌的相关性

目的 探讨湖南汉族人群HLA—DP、HLA—DQ位点等位基因多态性与鼻咽癌遗传易感性之间的关系。方法 应用聚合酶链反应—特异性寡核苷酸探针基因分型技术对87例湖南汉族鼻咽癌患者与91名健康对照作HLA—DPAl、—DPBl、—DQAl及—DQBl的基因分型，采用x^2检验比较两组各位点等位基因频率，单倍型频率分布的差异。结果 发现鼻咽癌组DPAl*0201、DPBl*1901、DQAl*0201较对照组明显降低，DPBl*0402、DQAl*0101较对照组明显升高；单倍型DPAl*0201—DPBl*1401及DQAl*0201—DQBl*0201较对照明显降低；但P值经Bonferroni校正后，差异均无显著性(Pc＞0．05)。结论 湖南汉族人群HLA—DP和—DQ位点与鼻咽癌无明显相关，与以往用受累同胞对方法在鼻咽癌家系中未能证实鼻咽癌易感基因与HLA—DP和—DQ位点连锁的结果一致。     

一例HLA-A新等位基因A*3308的测序分析

目的研究HLA新的等位基因HLA-A＊3308的分子机制。方法样本DNA抽提采用PEL-FREEZ抽提试剂盒，应用PCR方法扩增先证者HLA-A基因的第1～8外显子，PCR产物直接经TOPO转染克隆到质粒载体中获得等位基因的单链，对所得克隆进行第2、3、4外显子双向测序分析。结果先证者样本克隆测序得到两个等位基因，其中1个等位基因为A＊0201，另一个经BIAST验证其为新的等位基因，新的等位基因序列已递交GenBank（DQ089631，DQ089632，DQ089633）。与最接近的A＊3303等位基因序列相比，新的等位基因在第2外显子上有5个核苷酸不同，即第240位A→T，第256位C→G，第259位A→G，第261位C→G和第270位T→A；这导致3个氨基酸改变：第62位Arg→Gly、第63位Asn→Glu和第66位Asn→Lys。结论该等位基因为新的HLA-A等位基因，被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-A＊3308．     

弥漫性泛细支气管炎HLA基因的研究进展

弥漫性泛细支气管炎（DPB）是一种两肺弥漫性呼吸性细支气管的气道慢性炎症性疾病。它的发病可能与亚洲黄种人所特有的某些基因有关，参与机体的免疫或变态反应。HLA是机体疾病易感性的主要遗传成分与人体免疫功能相关。目前研究表明，DPB疾病的HLA正相关基因主要为HLA—B5401，HLA＊A11等，负相关基因可能HLA＊B44与HLA—A33和HLA＊DRB1＊1302，而HLA Ⅲ类分子和此病无关，因而认为DPB疾病相关基因位点可能在HLA-B和HLA-A基因之间。     

新等位基因HLA-B*070503的认定

中华骨髓库辽宁分库组织配型实验室常规HLA基因分型工作中发现一个新的HLA-B等位基因，被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-B＊070503（HWS10003243-DQ162803）。     

HLA-B新的等位基因B*5136的确认和分析

目的研究HLA-B新的等位基因B＊5136的分子机理。方法先证者为浙江省脐带血造血干细胞捐献者。盐析法抽提样本DNA，常规PCR反应扩增先证者HLA-B基因第2～4外显子的编码序列，PCR产物经TOPO试剂盒克隆转染到质粒载体中，分离其两个等位基因，对所得的克隆用第2、3、4外显子引物进行双向测序分析。结果先证者HLA-B基因经TOPO克隆后得到两个等位基因，一个为HLA-B＊4601，另一个经BLAST HLA验证为新的等位基因，其序列已递交GenBank（AY601729，AY610730，AY601731）。新的等位基因与最接近的B＊5108等位基因比较，在第3外显子上有4个核苷酸的差异：第527位T→A，导致第177位氨基酸Val→Glu；第583位C→T，导致第195位氨基酸His→Tyr；在第559位C→A和第560位T→C，导致第187位氨基酸Leu→Thr。结论该脐血捐献者的HLA-B为新的等位基因，被世界卫生组织HLA命名委员会正式命名为HLA→B＊5136。     

山西地区HLA-Ⅱ类基因多态性与妊娠期糖尿病的相关性研究

目的探讨本地区人群HLA-Ⅱ类基因多态性与妊娠期糖尿病的相关性。方法以序列特异引物聚合酶链反应技术，对本地区39例GDM孕妇及42例同期正常健康孕妇的瑚A-Ⅱ类基因进行检测。结果GDM组DRB1＊0301、DQB1＊0201等位基因频率分别为38．5％和28,2％，明显高于对照组的16．7％和915％，两组比较有统计学意义；GDM组DQA1＊0103等位基因频率为7．7％，明显低于时照组的14．3％，两组比较有统计学意义。结论HLA—DRB1＊0301、DQB1＊0201等位基因可能是该地区妊娠期糖尿病的易感基因，而DQA1＊0103等位基因可能是该地区妊娠期糖尿病的保护基因。     

寻常型天疱疮的Dsg3特异性抗体反应及其基因限制性

探讨寻常型天疱疮中的自身抗原桥粒芯蛋白（Dsg3)特异性抗体反应及其基因限制性，为自身免疫性疾病机制的研究提供依据。采用RT－PCR法克隆自身抗原Dsg3E1,E2,E3,E4,E5多肽片段的cDNA，定向插入表达载体PGEX－2T，导入大肠杆菌JM109中表达重组融合蛋白并经GST层析柱纯化，进一步经免疫印迹法与PV患者阳性血清反应；应用序列特异性引物聚合酶链式反应（SSP－PCR）技术对HLA－Ⅱ类等位基因进行特异性体外扩增，分析了天疱疮患者HLA基因的DR位点的DRB1、DQB1多态性。Dsg3 E1,E2和E4可与PV患者阳性血清反应，而不与疾病对照组、正常对照组反应。在10个PV患者中，均携带HLA的DR4或／和DR14抗原，有7个DRB1*0402,4个DRB1*1401,7个DQB1*0302,4个DQB1*0503.Dsg3 E1,E2和E4中包含抗体反应相关的抗原表位，HLA DRB1*0402t DQB1＊0302与PV发病中抗E4抗体反应密切相关。     

HLA-DQA1*0301及*0103与腔隙性脑梗死和原发性高血压的遗传易感性研究

目的：针对腔隙性脑梗死（lacunar stroke,LS）和原发性高血压（essential hypertension,EH)及多基因致病特点,进行HLA－DQA1位点的基因分型,分析其遗传易感性。方法：采用PCR－SSP方法对62例LS、52例EH和64例正常对照进行HLA－DQA1位点的基因分型。结果：①HLA－DQA1*0301等位基因与LS及EH呈显著正相关。②HLA－DQA1＊0103等位基因与LS及EH呈显著负相关。结论：HLA－DQA1*0301等位基因与LS及EH的发病有一定的关联,而HLA－DQA1＊0103等位基因可能是LS及EH的保护性基因。     

AITDs与HLA等位基因DQA1*0301、DR9的相关性研究

目的：探讨山东沿海地区自身免疫性甲状腺病（AITDs)与HLA－DQA1＊301，DR9的相关性。方法：采用多聚酶链式反应序列特异物分析（PCR－SSP）技术，扩增HLA等位基因DQA1＊0301，DR9的目的DNA片段（分别为199，236 bP)，分析2对等位基因在不同人群中表面频率的差异（χ^2检验），结果：山东沿海地区GD和HT女性患者组DQA1＊0301等位基因频率均显著高于对照组（分别为P＜0．001，OR＝4．89，P＜0．01，OR＝4．95）；DR9等位基因频率仅HT女性组显著高于对照女性组（P＜0．05，OR＝3．90），DQA1＊0301／DR9共同表达的频率，GD和HT女性组较对照女性组均显著性增高（分别为P＜0．05，P＜0．01），GD组和HT组2组间均无显著性差异（P＞0．05），结论：HLA－DQA1＊0301等位基因是山东沿海地区女性GD患者的易感基因；DQA1＊0301，DR9等位基因均是该地区女性HT患者的易感基因，2对等位基因在男性AITDs患者中的分布情况尚待进一步观察。     

山西汉族人群HLA-A、-B、-DRB1基因多态性研究

目的 调查山西汉族人群HLA-A、-B、DRB1基因多态性，获得完整准确的遗传学数据。方法 应用聚合酶链反应，序列特异性引物方法对7440名健康、无血缘关系的山西汉族个体进行HLA—A、-B、-DRB1基因型检测，并与不同人群等位基因进行比较。结果 检出A等位基因18个，B等位基因40个，DRB1等位基因13个，其中A＊02、A＊24、A＊11、A＊01、A＊03、B＊13、B＊51、B＊15、B＊40、B＊35、DRB1＊15、DR＊09、DR＊1：2、DR＊04、DR＊07等位基因频率分布较高。结论 山西汉族人群HLA—A，-B，-DRB1基因具有中国北方汉族人群共有的遗传特征，但也有其自身的分布特点。     

用PCR单链构象多态性快速判别个体间HLA－DP相容性并检出新等位基因

先确定和比较ＨＬＡ纯合细胞ＤＰＡＩ和ＤＰＢＩ基因ＰＣＲ扩增产物的单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ），然后分析了２０对无血缘关系个体单链ＤＮＡ及其两两混合状态下的构象多态性变化，在分子水平测定异体间ＤＰ匹配性，并和已有的ＤＰ基因分型（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）格局相比较，结果表明，ＲＦＬＰ不同的个体其ＳＳＣＰ必定不同；而ＲＦＬＰ相同的个体，ＳＳＣＰ一般相同，但有例外。从例外个体异常的ＳＳＣＰ格局中发现了新ＤＰ等位基因。本研究证实ＰＣＲ－ＳＳＣＰ在检测等位基因之间微小差异方面十分敏感，并具有简单、快速、经济等优点，对移植中的ＤＰ交叉配型有实际应用价值。