层粘连蛋白受体的研究进展

层粘连蛋白受体的研究进展苏玲，周柔丽层粘连蛋白受体（ｌａｍｉｎｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＬＮ－Ｒ）是存在于细胞表面的跨膜糖蛋白，它广泛存在于肿瘤细胞及某些附着于基膜的正常细胞表面。由于ＬＮ－Ｒ与基膜中的层粘连蛋白（ｌａｍｉｎｉｎ，ＬＮ）的相互作用与恶性肿...     

67KDa层粘连蛋白在小胶质细胞上的存在及EGCG对其影响的研究

目的:证明67KDa层粘连蛋白(67LR)在小胶质细胞中的存在,并探讨67LR是否介导了EGCG抑制小胶质细胞的效应。方法:混合培养神经细胞-小胶质细胞,细菌脂多糖(LPS)刺激后分离纯化小胶质细胞,应用免疫荧光细胞双标及Western blot的方法观察小胶质细胞的形态、数量变化,在EGCG干预后观察小胶质细胞形态、数量的变化以及67LR表达量的变化。结果:小胶质细胞上表达一定量的67LR,LPS刺激小胶质细胞后显示其形态变化、数量增多,67LR表达总量增加,给予EGCG干预后小胶质细胞数量减少、胞体变小、67LR的总量减低,接近于静息状态的小胶质细胞。结论:小胶质细胞存在67LR的表达,并可能介导了EGCG抑制小胶质细胞的效应。     

人层粘连蛋白受体调节胃癌细胞多药耐药性的实验研究

目的：探讨相对分子质量为67000的人层粘连蛋白受体（LR）对胃癌细胞多药耐药性（MDR）的调节作用及其机制。方法：应用DNA重组技术构建LR前体蛋白（LRP）的反义RNA表达载体,并借助脂质体将其导入胃癌MDR细胞SGC7901／VCR中。用Western印迹法检测ＬＲ在胃癌细胞中的表达,ＭＴＴ法测定细胞对化疗药物的敏感性,流式细胞仪测定细胞周期以及阿霉素在细胞内的蓄积和潴留。结果：转染LRP反义RNA表达载体显著降低了LR在SGC7901／VCR细胞中的表达。转染细胞（SGC7901／VCR－anLRP)对长春新碱、阿霉素、5－氟尿嘧啶和顺铂的敏感性明显升高,细胞内蓄积和潴留的阿霉素也明显增多。细胞周期分析表明,SGC7901／VCR－anLRP细胞发生了G1期阻滞,并出现了自发性凋亡。结论：LR可能通过影响药物蓄积和细胞凋亡参与对胃癌细胞MDR的调节。     

67kD层粘连蛋白受体对HepG2细胞增殖的影响

目的 探讨 67 kD层粘连蛋白受体(67LR)与肝癌细胞生长增殖的关系. 方法 流式细胞术检测67LR转染的HepG2细胞稳定株细胞膜表面67LR的表达,采用CCK-8试剂盒测定细胞生长曲线,将不同细胞接种于裸鼠皮下,观察其成瘤能力的差异.采用免疫组织化学分析细胞增殖核抗原Ki-67的表达. 结果 67LR高表达的HepG2细胞株其细胞增殖速度明显降低,从第2 d开始有明显差异(P<0.01,n=3),在裸鼠体内成瘤能力下降,瘤体平均质量仅为对照组的35.7%,为67LR低表达组的42.9%(P<0.01,n=10).移植瘤的Ki-67表达明显减少. 结论 67LR可以降低肝癌细胞的生长增殖.     

67kDa层粘连蛋白受体与肿瘤

1　前　言层粘连蛋白 (laminin,L n)是细胞外基质中的一种重要的糖蛋白 ,它与肿瘤细胞的相互作用是影响肿瘤转移的一个重要因素。细胞可以通过不同的受体与层粘连蛋白结合 ,这些受体按结构可分为整合素家族与非整合素家族两大类 ,其中整合素家族是由 α和 β两个亚基通过非共价键结合起来的异二聚体 ,至今为止已发现至少有八种整合素能与层粘连蛋白结合 ,包括 α1 β1 、α2 β1 、α3β1 、α6 β1 、α7β1 、α6 β4 、α β2 、α β3,而非整合素家族有九种 ,其中发现最早、研究最多是 6 7k Da层粘连蛋白受体。1983年三个实验室分别通…     

涎腺腺样囊性癌中层粘连蛋白受体表达及其意义

层粘连蛋白受体(laminin receptor,LN-R),是一种跨膜糖蛋白,广泛存在于正常上皮细胞和肿瘤细胞表面.它与层粘连蛋白一起在细胞增殖、分化、迁移、粘附、胚胎发育、神经生长以及肿瘤发生、癌变与转移等多方面发挥着重要的作用.本研究拟用免疫组化方法研究LN-R在涎腺腺样囊性癌中的表达及其与涎腺腺样囊性癌临床病理分型和临床分期的关系.     

67 kDa层粘连蛋白受体在胆囊癌中的表达及意义

目的:研究67 kDa层粘连蛋白受体(67LR)在胆囊癌中的表达情况与其生物学行为之间的关系.方法:应用免疫组织化学SP法检测40例胆囊癌、21例慢性胆囊炎及9例胆囊腺瘤组织中67LR的表达.结果:胆囊癌组织中67LR阳性表达率为52.50%,明显高于慢性胆囊炎(P＜0.01),而与胆囊腺瘤差异无显著性(P＞0.05).67LR阳性表达率淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P＜0.005).结论:67LR可能在促进胆囊腺瘤恶变以及胆囊癌细胞获得浸润、转移能力等方面起作用.     

重组人可溶性TRAIL分子诱导细胞凋亡机理探讨

目的 探讨重组人可溶性TRAIL蛋白（rhsTRAIL）诱导细胞凋亡的机理。方法 应用DNA染料和流式细胞仪定性分别检测rhsTRAIL诱导的细胞凋亡；流式细胞仪检测靶细胞膜表面TRAIL受体表达格局，荧光定量法检测凋亡细胞中Caspase-3活性。结果 100ng/ml人可溶性TRAIL蛋白分子对外周血淋巴细胞无明显毒性，但可诱导肿瘤细胞凋亡，不同的肿瘤细胞凋亡率有差异。凋亡范围在26%-57%。不同细胞表面TRAIL受体表达量不同，外周血淋巴细胞的死亡受体DR4，DR5受体表达5%，而诱骗受体DcR1表达55%，相反肿瘤细胞上的DR4，DR5表达高（40%——88%）。而DcR1表达很低（8%-17%），rhsTRAIL诱导HL-60细胞发生凋亡，其细胞内Caspase-3活性增高，ActD可增加TRAIL抑制细胞生长活性。结论 重组人可溶性TRAIL蛋白分子可诱导肿瘤细胞凋亡，凋亡活性TRAIL受体类型及Caspase-3活性增高有关。     

67 kDa LN-R反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨转染67 kDa层粘连蛋白受体（67 kDa laminin receptor,67 kDa LN-R）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN）后卵巢癌细胞HRA的生物学行为变化.方法：合成67 kDa LN-R反义及正义寡核苷酸片段（sense oligonucleotide SODN）,设定反义组、正义组及对照组并分别转染卵巢癌细胞HRA;采用形态学观察、MTT、流式检测各组细胞生长情况;免疫组化检测各组细胞67 kDa LN-R蛋白表达：Transwell小室法检测67 kDa LN-R反义寡核苷酸对卵巢癌细胞体外侵袭转移能力的影响.结果：转染24～48 h内细胞增殖受到不同程度抑制,48 h后细胞生长状态有所恢复.0.02、0.04、0.08μg/μlASODN处理24 h后细胞凋亡率分别为19.38%、21.62%、30.35%,差异有统计学意义（P＜0.05）.转染反义寡核苷酸组67 kDa LN-R的表达逐渐减少,且下调作用与ASODN浓度呈剂量依赖性,与正义组及对照组相比差异有显著性（P＜0.05）;转染后HRA穿透人工基底膜的能力显著降低并呈现剂量依赖性（P＜0.05）.结论：67 kDa LN-R ASODN可下调卵巢癌细胞HRA67 kDa LN-R表达并降低其体外侵袭转移能力.     

金属蛋白酶类及层粘连蛋白受体与人黑色素瘤细胞侵袭转移 …

目的：揭示金属蛋白酶类（ＭＭＰｓ）及层粘连蛋白受体（ＬＮ－Ｒ）与人黑色素瘤细胞侵袭转移的关系，并探讨ＭＭＰｓ及ＬＮ－Ｒ用以判断肿瘤细胞侵袭转移的可能性。方法：通过流式细胞术（ＦＣＭ）定量研究和蛋白酶活性分析，对具有不同潜在转移能力的人黑色素瘤细胞系（ＷＭ３５，ＷＭ１３４１ｂ，ＷＭ９８３ａ，ＷＭ４５１）进行ＭＭＰｓ及瘤细胞表面６７０００ＬＮ－Ｒ的荧光阳性率和全部细胞的平均荧光强度测定。结果：早期ＷＭ     

MMTV-PyMT转基因小鼠自发成瘤乳腺癌细胞的分离培养及鉴定

目的：分离培养小鼠乳腺肿瘤病毒介导多瘤病毒中间T抗原（MMTV-PyMT）转基因小鼠自发成瘤的乳腺癌细胞,初步研究其生长特性、分子表型、体内成瘤和转移能力。方法：取MMTV-PyMT小鼠自发成瘤的乳腺癌组织（n=3）,采用酶解贴壁培养法进行原代细胞分离并传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态特征;采用CCK-8检测细胞的增殖能力;通过Western印迹检测细胞的雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体2(HER2)表达以鉴定细胞分子亚型。将分离培养的细胞接种于C57BL/6雌性小鼠（n=4）乳腺脂肪垫,观察细胞成瘤能力和生长特性;取肿瘤组织和内脏器官,制备组织切片后采用苏木精-伊红（HE）染色,观察组织形态学特点;采用免疫组织化学（IHC）染色检测ER、PR、HER2及Ki-67蛋白表达,分析分子分型。结果：成功分离得到MMTV-PyMT转基因小鼠自发成瘤的乳腺癌细胞（MMTV-PyMT细胞）并可稳定生长和传代,细胞倍增时间为56.0 h;MMTV-PyMT细胞可在C57BL/6雌性小鼠乳腺脂肪垫成瘤并生长,但未见远处内脏转移。该细胞在细胞学和组织学中的分子分型皆为HER...     

绿茶提取物EGCG对人肝癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨绿茶提取物EGCG对人肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖和凋亡的影响,预测其对人肝癌的抗癌作用。方法体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,采用不同浓度的EGCG对其进行干预,用MTT法观测其对肝癌细胞增殖能力的影响;用免疫细胞化学法检测肝癌细胞中Ki67的表达变化;用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响。结果在EGCG的作用下,SMMC-7721细胞增殖能力明显受到抑制（P〈0．05）,Ki67表达水平下调（P〈0．05）,细胞凋亡明显增加（P〈0．05）。结论EGCG可能通过增加细胞凋亡,抑制Ki67表达达到抗癌作用。     

层粘连蛋白及其受体67KDLn-R在直肠癌中的表达及意义

目的探讨直肠癌中层粘连蛋白（laminin，Ln）及其受体（Lamininreceptor，Ln-R）表达的特征及与直肠癌临床病理参数的关系。方法应用免疫组化法检测68例直肠癌、20例正常直肠组织的Ln和67KDLn-R蛋白表达。结果Ln的表达在直肠癌的阳性率为60．3％，明显高于直肠正常组织的0％（P〈0．05）。Ln表达与浸润深度及分化程度密切相关（P〈0．05）。Ln在基膜和胞浆同时表达的患者中，有无淋巴结转移者，二者差异无统计学意义（P〉0．05）。在直肠癌中67KDLn．R表达阳性率为47．06％，明显高于直肠正常组织的5％（P〈0．05）。67KDLn-R在浸润深度及分化程度组中的表达上差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Ln、67KDLn-R的表达与肿瘤良恶性有关，与直肠癌的分化程度、浸润深度相关，且Ln、67KDLn-R表达的阳性率随肿瘤分化程度的降低、浸润深度的增加而增高。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响。方法 体外培养HeLa细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同浓度的EGCG处理24、48、72 h,对照组加入等体积的培养基。采用MTT法测定EGCG对HeLa细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;EGCG(浓度分别为20、40、80μg/mL)处理HeLa细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期、分光光度计检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Casepase-3)相对活性、Western blot法检测bcl-2/bax蛋白表达情况。结果 EGCG(浓度10~100μg/mL)能抑制HeLa细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;浓度为20、40、80μg/mL的EGCG作用HeLa细胞48 h后,细胞凋亡率逐渐上升,分别为12.4%、23.4%、35.4%,明显高于对照组(3.3%);细胞周期结果显示EGCG能抑制细胞的G1期行进和G1/S转换,降低S期细胞比例;实验组HeLa细胞Caspase-3相对活性分别为(1.36±0.07)、(1.85±0.06)、(2.45±0.07),均高于对照组(0.93±0.06),差异均有统计学意义(P<0.05);bax蛋白表达量升高,而bcl-2蛋白表达量降低,呈剂量依赖性。结论EGCG能抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Casepase-3活性、下调bcl-2基因的表达及上调bax基因有关。EGCG是一种前景广阔的抗肿瘤药物。     

小儿腹部恶性实体瘤术前介入治疗的临床与病理研究

目的：通过研究小儿腹部恶性实体瘤（abdominalmalignanttumors,AMT）术前介入治疗的临床及病理改变,探讨术前介入治疗在本病的应用价值。方法：对20例AMT患儿行介入治疗（介入组）,观察分析其介入前后临床症状的变化及介入反应,同时与20例单纯手术（对照组）的AMT患儿进行手术前后临床症状的变化、疗效对照研究。对两组40例手术肿瘤标本进行多种方法的病理学对照研究,采用末端DNA转移酶dUTP缺口末端标记法（TUNEI。）对两组手术标本组织切片进行细胞凋亡的检测以及用链球菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法（S-P）测定Ki一67蛋白的表达。结果：介入组较对照组手术出血量明显减少;介入组与对照组肿瘤细胞平均凋亡指数分别为50．55±48．06和19．73±2．84,介入组显著高于对照组（P〈0．001）;介入组与对照组肿瘤组织Ki-67蛋白的平均表达指数分别为20．56±7．58和38．78±9．35,介入组显著低于对照组（P〈0．001）。结论：术前介入治疗,能有效地提高肿瘤完整切除率,促进肿瘤细胞凋亡,降低Ki-67表达,抑制肿瘤细胞增殖活性,对防止肿瘤复发、转移及改善预后有积极意义。     

EGCG抑制口腔鳞癌Tca8113细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的：研究绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对人口腔鳞癌Tca8113细胞生长抑制及促凋亡的作用。方法：应用MTT法检测不同浓度的EGCG对Tca8113细胞体外增值抑制作用;采用HE染色、Hochest33258染色法检测EGCG对Tca8113细胞凋亡的影响。结果：MTT法检测显示EGCG对Tca8113细胞有明显增殖抑制作用并呈现时间及浓度依赖性（P〈0.05）;HE、Hochest33258染色显示,EGCG处理Tca8113细胞中出现了典型的凋亡形态学改变如核碎裂、核浓缩。结论：EGCG对Tca8113细胞的生长具有显著的抑制及促凋亡作用,且呈现时间及浓度的依赖性。     

胃癌HER-2及Survivin蛋白表达与临床病理的相关性

目的 观察表皮生长因子受体2(HER-2)及凋亡抑制蛋白Survivin在胃癌组织中的表达,探讨其与临床病理的相关性及其临床意义.方法 使用免疫组织化学法检测2002～2011年江苏盛泽医院79例未经放、化疗的胃癌患者组织中HER-2及Survivin蛋白的表达.并分析两者与胃癌患者临床病理学参数之间的关系.结果 79例胃癌患者,男女比例为2.59:1,中位年龄为67岁,HER-2蛋白在胃癌中的阳性表达与肿瘤分化程度、Lauren分型、淋巴结转移及临床分期相关(p＜0.05),与性别、年龄、肿瘤直径、浸润深度不相关.Survivin与肿瘤分化程度相关(p＜0.05),与性别、年龄、肿瘤直径、Lauren分型、浸润深度、淋巴结转移及临床分期不相关.HER-2在Survivin阳性的表达率(70.59％)明显高于在Survivin阴性表达组(9.09％)(P＜0.05)结论 胃癌HER-2蛋白的阳性表达与肿瘤分化程度、Lauren分型、淋巴结转移及临床分期相关,可用于指导临床用药;Survivin表达可作为判断胃癌恶性程度和预后的重要指标,其与HER-2表达正相关,可促进胃癌细胞增殖.     

T1期乳腺癌患者发生同侧腋窝淋巴结转移风险列线图的建立

目的：建立T1期（原发肿瘤最大直径 2?cm及以下）乳腺癌患者发生同侧腋窝淋巴结转移风险的列线图。 方法：收集2010年1月至2015年6月在浙江大学医学院附属第二医院及浙江大学丽水医院接受手术治疗的T1期乳腺癌患者的临床病理资料。共入组907例患者,其中浙江大学医学院附属第二医院患者作为建模组（ n=573）,浙江大学丽水医院患者作为验证组（ n=334）。运用单因素Logistic回归分析风险因素,多因素Logistic回归进一步筛选独立影响因素,利用影响因素建立预测T1期乳腺癌患者同侧腋窝淋巴结转移风险的列线图。运用C指数、受试者操作特征曲线、校准曲线以及临床决策曲线分析模型的校准度、预测能力和临床效益。 结果：单因素分析结果显示,T1期乳腺癌患者发生同侧腋窝淋巴结转移与原发肿瘤大小、脉管癌栓、Ki-67、组织病理学分级和分子分型相关（ P<0.05或 P<0.01）。多因素Logistic回归分析显示,T1期乳腺癌患者发生同侧腋窝淋巴结转移的独立影响因素为原发肿瘤大于0.5 cm、有脉管癌栓、Ki-67阳性、雌激素受体（ER）阳性以及组织病理学分级2~3级（ P<0.05或 P<0.01）。基于上述5个独立影响因素构建列线图预测模型,建模组和验证组C指数分别为0.739（95% CI：0.693~0.785）和0.736（95% CI：0.678~0.793）,模型预测能力良好。建模组和验证组校正曲线、临床决策曲线提示模型一致性和临床获益良好。 结论：原发肿瘤大小、组织病理学分级、脉管癌栓、Ki-67和ER状态是T1期乳腺癌患者发生同侧腋窝淋巴结转移的重要预测因素。建立的风险预测列线图可以有效预测患者发生同侧腋窝淋巴结转移的风险,为临床医生制订个体化的腋窝管理方案提供参考。