米非司酮影响早孕滋养细胞的信号传导和凋亡的机？…

目的 探讨米非司酮（ＲＵ４８６）在早孕滋养细胞信号传导及其凋亡的影响。方法 ２１９例服用ＲＵ４８６早孕药物流产者,对其有效组３０例,失败组２３例,人流组对照１６例,以免疫组化法分别标记孕激素受体（ＰＲ）、雌激素受体（ＥＲ）、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）、酪氨酸蛋白激酶Ｃ（αＰＫＣ）、分裂激活蛋白激酶（ＭＥＫ－１）、细胞转化分裂介质（ｒａｆ－１）和抗凋亡蛋白（Ｂｃｌ－２）。三组均计数凋亡指数（ＡＩ）     

曲古霉素A对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨组蛋白乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(TSA)对人宫颈癌Hela细胞增殖和调亡的作用及其机制.方法:不同浓度的TSA处理Hela细胞,应用Western blot法检测细胞内组蛋白H4(Ac-H4)乙酰化水平,荧光定量PCR方法检测p21 mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:随着TSA浓度增加,人宫颈癌Hela细胞内Ac-H4乙酰化水平增加(P＜0.05),p21 mRNA表达增加(P＜0.05),细胞增值率减少(P＜0.05),细胞凋亡率增加(P＜0.05).结论:TSA通过提高组蛋白乙酰化水平,增加p21基因表达,抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖和诱导细胞凋亡,且呈浓度依赖性.     

酪氨酸激酶受体B介导的信号传导通路与肿瘤的失巢凋亡抑制

酪氨酸激酶是细胞分化、凋亡、增殖和浸润的信号传导途径中的中心调控因子，受体型酪氨酸激酶是酪氨酸激酶家族的主要成员。原癌基因Trk编码的神经营养因子受体——酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptor B，TrkB），有抑制失巢凋亡、诱导癌细胞转移的作用，为失巢凋亡抑制与恶性肿瘤浸润的关系研究提供了实验依据。     

芬太尼通过PI3 K/Akt信号通路调控宫颈癌细胞增殖迁移

目的:探究芬太尼对宫颈癌细胞增殖迁移的作用及分子机制.方法:将宫颈癌细胞系C33 A分为对照组和芬太尼组(使用不同浓度芬太尼处理),分别采用CCK-8、Transwell法、流式细胞术检测芬太尼对C33 A细胞增殖、迁移及凋亡的影响.Western blot法检测活化Caspase 3、PARP1含量,MMP-2、MM...     

IL-24对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨抑癌基因IL-24对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响。方法将携带有目的基因IL-24的穿梭质粒pAd track CMV转染入体外培养的宫颈癌Hela细胞,用MTT法检测细胞的增殖情况,用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率。同时以转染空载体pAd track CMV的Hela细胞和野生型Hela细胞作为空载体对照和阴性对照。结果经MTT法测定,三组之间OD值总体上有差异（P〈0.001）,IL-24组OD值明显低于空质粒组和阴性对照组（P〈0.001）,而空质粒组和阴性对照组的OD值无明显差异（P=0.661）;经流式细胞仪测定,三组之间的细胞早期凋亡率总体上有差异（P〈0.05）,IL-24组细胞早期凋亡率明显高于空质粒组和阴性对照组（P〈0.05）,而空质粒组和阴性对照组的细胞早期凋亡率无明显差异（P〉0.05）;与空质粒组和阴性对照组相比,IL-24组G0/G1期细胞增多（P〈0.05）,S期细胞减少（P〈0.05）,而空质粒组和阴性对照组无明显差异（P〉0.05）。结论IL-24对宫颈癌Hela细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用。     

Wnt信号传导通路与妇科肿瘤

Wnt信号传导通路是一条十分保守的信号通路,由一系列癌基因和抑癌基因编码的蛋白质组成,各种蛋白质之间彼此联系、相互制约,在细胞增殖、分化、运动、黏附及机体发育等过程中起着重要调节作用。目前研究表明,在乳腺癌、结直肠癌、胃癌、肝癌、黑色素瘤及子宫内膜癌、卵巢癌中都存在Wnt途径异常。现就Wnt信号传导通路与妇科肿瘤的关系作一综述。     

青蒿素衍生物对宫颈癌HeLa细胞体外增殖及凋亡能力的影响及其分子机制研究

目的:观察青蒿素衍生物(双氢青蒿素和青蒿琥酯)对宫颈癌细胞体外增殖及凋亡能力的影响,并探讨其对有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平的影响。方法:以未加药的He La细胞作对照,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测加青蒿素衍生物前后两种细胞的体外增殖效应的差异,Western blot法检测两种细胞MAPK[即细胞外信号调节激酶(ERK)1/2和p38蛋白激酶]磷酸化水平。结果:双氢青蒿素和青蒿琥酯对He La细胞48h的IC50分别为(8.9±1.1)μmol/L和(10.5±1.2)μmol/L。双氢青蒿素和青蒿琥酯导致He La细胞ERK1/2磷酸化水平分别降低(70.5±2.6)%(P0.05)和(65.8±2.9)%(P0.05),p38磷酸化水平分别升高(57.3±2.4)%(P0.05)和(47.0±3.0)%(P0.05)。加入双氢青蒿素和青蒿琥酯12h后,He La细胞的凋亡指数分别增加(51.0±3.6)%(P0.05)和(38.4±3.2)%(P0.05)。结论:青蒿素衍生物可抑制宫颈癌细胞的体外增殖,促进癌细胞的早期凋亡,这可能分别与下调癌细胞内ERK1/2磷酸化水平和上调癌细胞内p38磷酸化水平相关。     

microRNA-99b表达调控对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨上调microRNA-99b(miR-99b)表达对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的作用及可能的机制。方法:利用转染试剂将Pre-miR-hsa-miR-99b miRNA Precursor转染宫颈癌HeLa细胞,荧光实时定量PCR方法检测miR-99b表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测其靶基因CDC-25A蛋白的表达。结果:转染Pre-miR-hsa-miR-99b miRNA Precursor的HeLa细胞,miR-99b表达增高86.45倍,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率增加,同时细胞CDC-25A蛋白表达降低。结论:上调miR-99b表达可通过降低靶基因CDC-25A表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-99b可能成为治疗宫颈癌的靶基因。     

宫颈癌WNT与SOX-2传导通路蛋白表达分析

目的探讨宫颈癌WNT信号通路与干细胞相关基因SOX-2传导通路蛋白在宫颈癌组织中的表达意义。方法选择浙江省永康市第一人民医院病理科收集的正常子宫颈组织标本20例(对照组)、宫颈鳞癌组织标本40例(宫颈癌组),检测两组标本的SOX-2、β-catenin、C-myc的表达并进行比较。结果宫颈癌组的SOX-2、C-myc、β-catenin高表达率分别为82.50%、7.50%、80.00%,均显著的高于对照组的15.00%、22.00%、15.00%(P0.05)。宫颈癌组织中SOX-2、C-myc、β-catenin的阳性高表达与肿瘤组织的分化程度具有一定的关系(P0.05)。结论宫颈癌组织中的SOX-2、C-myc、β-catenin高表达率显著的高于正常宫颈组织,SOX-2、C-myc、β-catenin高表达与宫颈癌的分化程度具有一定的关系。     

青藤碱与卡铂对宫颈癌Hela细胞增殖的协同抑制研究

目的:研究选择性环氧合酶-2(COX-2)押制剂青藤碱(sinomenine,SIN)对宫颈癌Hela细胞生长的影响及其与卡铂联合对宫颈癌Hela细胞的协同抑制作用,初步探讨SIN在宫颈癌中的作用机制.方法:MTT法检测SIN及其与卡铂联合对宫颈癌Hela细胞增殖的影响;流式细胞仪检测处理后宫颈癌Hela细胞周期及凋亡的变化.结果:SIN以时间和剂量依赖性特点抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,其与卡铂联合对宫颈癌Hela细胞的增殖具有协同抑制作用.流式细胞仪细胞周期分析表明,SIN处理组G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少;卡铂处理组结果相反.细胞凋亡分析表明,SIN处理组细胞凋亡率较对照组升高,呈时间和剂量依赖性特点;两药联合处理组细胞凋亡率较单药处理组升高.结论:SIN以时间和剂量依赖性抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,其作用机制与改变细胞周期分布、促进细胞凋亡有关.SIN与卡铂联合对宫颈癌Hela细胞的增殖具有协同抑制作用,其机制可能与共同影响细胞周期分布、促进细胞凋亡有关.     

PinlsiRNA对宫颈癌细胞SiHa增殖和凋亡的影响

目的：通过小干扰RNA（siRNA）栽体介导抑制肽基脯氨酰同分异构酶（Pinl）表达,探讨Pinl对宫颈癌细胞SiHa增殖与凋亡的影响。方法：构建pGPU6／GFP／Neo—PinlsiRNA表达载体,脂质体介导将其转染至宫颈癌细胞SiHa中;实验设3组：实验组（SiHa／pGPU6-PinlsiRNA组）、阴性对照组（SiHa／pGPU6-con组）和空白对照组（Si-Ha）。采用RT—PCR、Western blot法检测Pinl的表达;M1Tr法检测细胞增殖活性;原位末端标记法（TUNEL）和流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡。结果：转染SiHa／pGPU6．PinlsiRNA的SiHa细胞中,PinlmRNA和蛋白表达分别下调68．1％和54．8％,细胞增殖显著抑制。TUNEL显示典型细胞凋亡特征,SiHa／pGPU6-PinlsiRNA组的凋亡指数（AI）为（29．6±14．58）％,显著高于SiHa／pGPU6-con组[（8．44±5．65）％]和空白对照组[（5．34±4．47）％]（P〈O．05）。SiHa／pGPU6．PinlsiRNA组的细胞凋亡率为（30．95±16．47）％,显著高于SiHa／pGPU6-COIl组[（6．18±6．10）％]和空白对照组[（5．95±4．99）％]（P〈0．05）。结论：RNA干扰技术能特异高效的抑制Pinl基因的表达,Pinl基因的下调能抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡,提示Pinl可能成为治疗宫颈癌的新靶点。     

正交设计优化光动力治疗宫颈癌的作用参数

目的:采用正交实验设计,探讨姜黄素作为光敏剂介导的光动力治疗诱导宫颈癌Me180细胞凋亡的最佳作用参数。方法:选定光敏剂姜黄素的药物浓度、激光剂量、照射时间、孵育时间四个因素,分别按姜黄素浓度2.5、5、10μmol/L,激光剂量50、100、200J/cm~2,照射时间90、180、360s,孵育时间12、24、36h。每因素3个水平设计正交设计表,按正交设计表进行姜黄素作为光敏剂介导的光动力治疗。治疗后细胞继续培养,MTT法测定细胞生存率。通过双因素方差分析三个水平的姜黄素剂量和激光剂量的估计边缘平均值,寻找最佳治疗参数。结果:对细胞凋亡的影响因素:姜黄素剂量孵育时间照射时间激光剂量;各因素水平影响:姜黄素浓度:10μmol/L5μmol/L2.5μmol/L;激光剂量:200J/cm~2100J/cm~250J/cm~2;照射时间:360s180s90s;孵育时间:24h12h36h。双因素方差分析表明,姜黄素浓度2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L三组之间两两比较,差异均有统计学意义(P0.05);100J/cm~2、200J/cm~2与50J/cm~2组间比较,差异均有统计学意义(P0.05),但100J/cm~2与200J/cm~2组间比较差异无统计学意义。结论:姜黄素介导光动力治疗诱导宫颈癌细胞凋亡最佳参数组合为姜黄素浓度5μmol/L,激光剂量100J/cm~2,照射时间180s,孵育时间24h。     

细胞外信号调节激酶信号通路对蛋白酶体抑制剂MG262诱导卵巢上皮性癌细胞凋亡的调控作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对蛋白酶体抑制剂MG262诱导卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞凋亡的调控作用.方法 不同浓度(1、10、20、40、60、80 nmol/L)的MG262分别处理卵巢癌细胞株SKOV3细胞24、48 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测SKOV3细胞的存活率.MG262及ERK抑制剂PD98059分别及联合处理24 h后,流式细胞仪检测SKOV3细胞及胚肾上皮细胞株293T细胞的凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)及蛋白印迹法分别检测SKOV3细胞培养上清液中血管内皮生长因子(VEGF)的浓度及细胞内VEGF蛋白的表达.MG262处理不同时间(3、6,9、12 h)后,蛋白印迹法检测SKOV3细胞内磷酸化ERK(p-ERK)及野生型p53蛋白的表达.以上实验以未加药物者为对照.结果 MTT比色法检测发现,随着MG262浓度的增加,SKOV3细胞的存活率明显下降(P＜0.05).流式细胞仪检测发现,MG262、PD98059分别或联合处理SKOV3细胞后,其细胞凋亡率分别为(30.7±4.3)%、(26.8±8.6)%、(50.3±10.6)%,与对照细胞的(7.9±1.9)%比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);两药单独处理者分别与联合处理者比较,差异也均有统计学意义(P＜0.01).而两药分别或联合处理293T细胞后,其细胞凋亡率分别为(14.5±5.3)%、(16.2±7.5)%、(10.8±7.3)%,与对照细胞的(12.2±6.3)%比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).ELISA及蛋白印迹法检测显示,MG262处理后SKOV3细胞培养上清液中VEGF的浓度及细胞内VEGF蛋白的表达水平均明显下降(P＜0.05).MG262处理不同时间后,SKOV3细胞内p-ERK蛋白的表达水平明显下降(P＜0.05);但SKOV3细胞内野生型p53蛋白在MG262处理前、后均无表达.结论 MG262可通过ERK信号通路诱导卵巢癌细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞的增殖及血管生成.     

MicroRNA miR-886-5p inhibits apoptosis by down-regulating Bax expression in human cervical carcinoma cells

Objective

MicroRNA (miRNA) plays an essential role in the progression of a variety of cancers, but its role in cervical cancer progression is not well defined. We aimed to test whether special miRNAs and their target mRNAs contribute to cervical cancer progression.

Methods

The expression profiles of 1145 microRNAs in cervical squamous cell carcinomas (CSCC) and adjacent non-tumor tissues were investigated using an Illumina microRNA microarray platform. Differentially expressed miRNAs were validated by RT-PCR. Downstream target validation was performed for miR-886-5p.

Results

We found that the expression levels of seven miRNAs differed significantly between CSCC tissues and adjacent non-tumor tissues. Forced expression of one miRNA, miR-886-5p, over-expressed in CSCC tissues lowered expression of the pro-apoptotic protein Bax, reduced apoptosis and promoted cell proliferation in H8, an HPV16-immortalized human cervical squamous epithelial cell line. Knockdown of miR-886-5p increased Bax protein and apoptotic cell death in cells of the cervical squamous carcinoma cell line, SiHa.

Conclusion

MicroRNA miR-886-5p inhibits apoptosis of cervical cancer cells by down-regulating the production of Bax.     

子宫与卵巢异位内膜细胞凋亡和增殖特性的研究

目的　探讨子宫腺肌病与卵巢异位囊肿异位内膜的细胞凋亡和增殖特性及发病机制。方法　 2 0 0 2年 6月至 2 0 0 3年 6月南方医科大学珠江医院采用免疫组化S P法 ,检测子宫腺肌病 (46例 )和卵巢异位囊肿 (6 0例 )的在位及异位子宫内膜中凋亡调控基因蛋白bcl 2、bax及细胞增殖标记物Ki 6 7蛋白的表达。结果　bcl 2蛋白、bax蛋白及Ki 6 7蛋白在两症的在位内膜以及子宫腺肌病异位内膜中均呈现周期性改变 ,而bcl 2蛋白及Ki 6 7蛋白在卵巢异位囊肿异位内膜中呈持续性增强 ,较在位内膜差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。结论　子宫腺肌病异位内膜的细胞凋亡和增殖受卵巢性激素周期性的调节 ,卵巢异位囊肿异位内膜则相反 ,两者细胞凋亡和增殖特性有着明显的不同 ,是两种不同的疾病。     

MiRNA-199a-3p通过mTOR通路与阿霉素联合抑制子宫内膜癌细胞的增殖和促凋亡作用

目的:探讨阿霉素对转染miRNA-199a-3p的子宫内膜癌(EC)的作用及机制。方法:构建pSIREN-miRNA-199a-3p过表达质粒并稳定转染内膜癌细胞系Ishikawa、SPEC-2细胞。应用逆转录PCR(RT-PCR)检测miRNA-199a-3p的表达;MTT、克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测mTOR信号通路相关蛋白表达。结果:上调miRNA-199a-3p可显著抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa、SPEC-2的克隆形成能力(P0.01,P0.05);miRNA-199a-3p可增强阿霉素对Ishikawa、SPEC-2细胞的生长抑制(P均0.05)和凋亡诱导作用(P均0.05);Western blot证实,miRNA-199a-3p可显著下调mTOR及其效应蛋白p70S6K的磷酸化水平。结论:miRNA-199a-3p可能通过mTOR通路与阿霉素联合抑制子宫内膜癌细胞的增殖并促进其凋亡,为联合应用miRNA和阿霉素治疗EC提供了实验依据。     

磷脂酰肌醇3激酶通路在胰岛素调节子宫内膜癌细胞增殖凋亡中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信号通路在胰岛素调节子宫内膜癌细胞生长中的作用.方法 2006年5月至2006年10月于中国医学科学院血液病学研究所临床药物室完成试验,即将子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞进行无血清饥饿培养,分成不同处理组,即空白对照组、胰岛素刺激组(Ins组)、PI3K抑制剂--LY294002预处理后再以胰岛素刺激组(LY Ins组).以四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验和流式细胞仪观察细胞增殖和凋亡情况.不同处理组分别培养24h、48h和72h,观察各组570nm波长吸光度(OD570nm).结果 Ins组细胞OD570nm值高于空白对照组(P＜0.01);LY Ins组细胞OD570nm低于Ins组(P＜0.01),LY294002拮抗了胰岛素对内膜癌细胞的增殖促进作用.流式细胞仪检测凋亡发现Ins组细胞凋亡率低于空白对照组[(2.02±0.39)%对(14.45±2.70)%,P＜0.01];LY Ins组细胞凋亡率高于Ins组[(18.73±2.11)%对(2.02±0.39)%,P＜0.01].结论 PI3K信号通路在胰岛素引起的促内膜癌细胞增殖、抑制凋亡中起重要作用,胰岛素对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的调节作用是PI3K依赖性的.