两株人成骨肉瘤克隆细胞株的建立及其生物学特性

通过克隆技术及体内移植,从自建的成骨肉瘤细胞 Ｌ Ｔ Ｈ Ｏ Ｓ（简称 Ｓ）中获得两株细胞克隆 Ｓ１ 和 Ｓ２,应用组织形态学观察、染色体分析、软琼脂克隆形成法以及裸小鼠体内成瘤试验研究癌细胞的生物学特性。结果发现 Ｓ１ 和 Ｓ２ 两株均保持人类染色体核型,所形成肿瘤显示人成骨肉瘤上皮样组织形态,其中 Ｓ１ 的细胞电泳率高达１．０, Ｓ２ 为０．７０, Ｓ１ 的群体倍增时间为２２．４ ｈ,软琼脂形成率为３３．５％ , Ｓ２ 群体倍增时间为２４．０ ｈ,软琼脂形成率为２３．１％ 。裸小鼠右后肢皮下接种 Ｓ１ 和 Ｓ２,发现 Ｓ１ 成瘤时间短,细胞增殖快,但在４ 周内两者均不发生转移;通过尾静脉注射 Ｓ１ 和 Ｓ２ 细胞,发现４ 周时,接种 Ｓ１ 细胞的裸鼠出现广泛的实验性肺转移,接种 Ｓ２ 细胞的裸鼠肺部仅见几个分散的癌细胞。     

不同转移潜能MG63骨肉瘤细胞亚株裸鼠肺转移模型的建立

目的 建立不同转移潜能的骨肉瘤 MG63 细胞亚株裸鼠肺转移模型,为探讨骨肉瘤发生发展机制奠定实验基础.方法 MTT 法检测不同转移潜能的人骨肉瘤 MG63 细胞亚株 M8、M6 细胞增殖情况,将生长良好的细胞制成 2×107/ml 细胞悬液注射裸鼠尾静脉,第 4 周起处死裸鼠,肉眼及镜下观察肺部转移灶形成情况,肺组织经过石蜡包埋切片后行苏木精一伊红染色观察病理变化,并采用免疫组化方法检测肿瘤相关指标 Cyclin E1 和 Bcl-2 的表达.结果 高转移潜能细胞 M8 组细胞增殖能力强于 M6 组.尾静脉注射瘤细胞后,M8 组 20 只裸鼠除 2 只死亡外,有 17 只发生肺转移;低转移潜能 M6 组 20 只裸鼠仅 1 只发生肺转移.免疫组化结果显示 M8 组裸鼠肺组织Cyclin E1和Bcl-2表达呈阳性,而 M6 组未见阳性细胞表达.结论 采用尾静脉注射入骨肉瘤细胞亚株 M8、M6 可成功建立高、低转移潜能的骨肉瘤裸鼠肺转移模型,为深入研究骨肉瘤侵袭和转移机制及寻求有效治疗方法提供了实验平台.     

高低不同转移特性人骨肉瘤克隆细胞株的建立

目的 建立高低不同转移特性的人骨肉瘤克隆重细胞株。方法 通过克隆技术和细胞电泳,从我们建立的骨肉细胞素ＬＴＨ－ＯＳ（简称Ｓ）中获得两株细胞Ｓ１和Ｓ２,测定两种细胞的率,利用软琼脂克隆重形成率和裸鼠体朵成瘤实验,比较细胞的转移特性。结果 Ｓ１的细胞电泳率高达１,０,Ｓ２最低为０,７０,Ｓ１的群体培增时间为３０,８ｈ,Ｓ２为４５．０ｈ,克隆形成率分别为５．２％和２．１％,裸鼷 中后以下接种Ｓ１和Ｓ２发     

质粒转染对细胞生物学特性的影响

目的 通过对乳腺癌细胞系T47D稳定转染,探讨真核表达载体质粒对细胞生物学特性的影响.方法 建立稳定转染细胞系,观察细胞形态学改变,检测细胞增殖能力、软琼脂内克隆形成率和细胞迁移能力.结果 一株转染细胞系（pcDNA-4）与对照组细胞比较,在形态上发生了明显改变,细胞在软琼脂内的克隆集落形成率显著增高,细胞体外迁移能力显著增强.结论 质粒载体DNA稳定转染,可能通过与宿主染色体随机整合,引起多种细胞生物学特性改变.     

人卵巢癌3AO细胞不同转移潜能克隆株的建立

目的:建立不同转移潜能的卵巢癌克隆细胞株。方法:通过克隆技术和细胞电泳,从卵巢癌细胞系3AO中筛选出3个电泳率差异较大的克隆亚系(A1、A5和A11)。并通过生长曲线、软琼脂集落形成实验、移动实验、体外侵袭实验,比较它们的生物学特性及其侵袭转移能力。结果:A1的电泳速度最快, 为(15.30±0.67)μm/s,细胞群体倍增时间为20.55 h,软琼脂集落形成数及侵袭人工基底膜的细胞数多于其他两者,为高转移潜能克隆株。A11的电泳速度为(6.20±0.72)μm/s,群体倍增时间为38.48 h,软琼脂集落形成数及侵袭人工基底膜的细胞数少于其他两者,为低转移潜能克隆株。结论:此异质性克隆系统来自同一肿瘤母系,遗传背景相似,却具有不同的转移潜能,为研究肿瘤转移机制和克隆肿瘤转移相关基因提供了良好模型。     

不同转移潜能骨肉瘤细胞株的建立与生物学性质的分析

目的:获得不同转移潜能的骨肉瘤细胞株. 方法:从我室建立的人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607中通过有限稀释法获得不同的单细胞克隆,经过侵袭试验初筛后获得5株转移潜能不同的细胞株,再通过裸鼠体内连续传代法筛选出具有不同转移能力的细胞系.并利用细胞生长曲线测定,软琼脂克隆形成试验,流式细胞仪,裸鼠体内自发转移试验分析了他们的生物学性质. 结果:获得两株转移潜能不同的骨肉瘤细胞株.其中,H9为具有低转移潜能的骨肉瘤细胞株, E10为具有高转移潜能的骨肉瘤细胞株,其染色体众数分布特征与母系SOSP-9607基本相似,保持人类染色体核型;所至皮下移植瘤及肺转移瘤均符合人成骨肉瘤组织学特征,它们具有差异明显的体外生长速度,软琼脂克隆形成率H9(22±5)明显高于E10(98±12) ,裸鼠体内试验性自发肺转移率分别为10%和100%,流式细胞仪测定H9和E10的S期细胞分别为16.8%和21.0%. 结论:这两株细胞株来源于同一亲本,他们之间的差异集中在转移表型上,为今后利用分子生物学的方法筛选出转移相关基因从而为成骨肉瘤的转移机制及临床研究奠定基础.     

c—erbB—2基因对小鼠成纤维细胞生长特性的影响

为探讨ｃ－ｅｒｂＢ－２基因对细胞增殖的影响。本实验通过构建ｃ－ｅｒｂＢ－２基因的表达载体一转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，观察了转染细胞的生长特性。发现其对数生长期提前，群体倍增时间缩短，并且其克隆形成率，软琼脂集落形成能力，及裸鼠致瘤能力均明显高于对照组。     

涎腺粘液表皮样癌高转移细胞克隆的筛选及其生物学特性

筛选人涎腺粘液表皮样癌高转移克隆细胞并研究其生物学特性。方法；采用裸鼠体内人工肺转移和体外细胞培养的方法筛选克隆细胞，应用细胞计数法，染色体显示法，软琼脂克隆形成法，流式细胞术及裸鼠体内试验法研究的生物学特性。     

高骨转移潜能人前列腺癌细胞亚株的生物学特性分析

目的利用人前列腺癌裸鼠骨转移模型筛选高骨转移潜能的细胞亚株,并分析其细胞生物学特性。方法采用人前列腺癌细胞系PC-3左心室注射法制作裸鼠骨转移模型,反复取骨转移灶肿瘤细胞体外培养和造模,筛选高骨转移倾向的细胞亚株。结果筛选出具有高骨转移潜能的细胞亚株T3B,骨转移率为80％,显著高于母系PC-3骨转移率（P〈0．05）;其细胞生物学特性与母系PC-3比较,其体外黏附和侵袭能力极显著增高（P〈0．01）,而细胞增殖率、软琼脂克隆形成率、裸鼠皮下成瘤率及瘤体大小的差别无显著性意义（P〉0．05）。结论运用裸鼠骨转移模型筛选,获得1株高骨转移潜能的人前列腺癌PC-3细胞系亚株。     

人成骨肉瘤高转移性细胞亚群的筛选及生物学特性的观察

目的　从低转移性人成骨肉瘤细胞系 SOSP- 96 0 7中筛选出高转移亚群 ,并且建立人成骨肉瘤裸鼠转移模型 .方法　采用裸鼠腹腔传代的方法 ,获得腹水型自发性肺转移细胞 ,经体外培养和体内再次接种后获得高转移亚群 .应用细胞计数法、染色体显示法、流式细胞术及裸鼠体内实验法研究细胞的生物学特性 .结果　筛选出的高转移亚群 SOSP- M在转移分析实验中达到10 0 %肺转移率 ,除肺转移外还出现其他器官的转移 .其染色体为 5 0余条 ,保持人类染色体核型 .细胞周期中 S期细胞所占比例为 48.5 % . SOSP- M的细胞形态、染色体数目、体外及体内…     

Identification of metastasis associated gene G3BP by differential display in human cancer cell sublines with different metastatic potentials G3BP as highly expressed in non-metastatic

Objective　To investigate genes involved in cancer metastasis, mRNA differential display was used to compare the levels of gene expression in two cell sublines derived from human giant cell carcinoma of lung (PG) which had different metastatic potentials. Methods　Using in vivo tumorigenicity and a spontaneous metastasis assay in nude mice, two sublines (BE1, LH7) from human giant cell carcinoma of lung (PG) with different metastatic potentials were isolated and characterized. mRNA differential display was used to compare the levels of gene expression between them and the obtained results were confirmed by Northern hybridization. Results　One differentially expressed band was nearly identical (99% homology) to Ras-GTPase-Activating protein SH3 domain binding protein (G3BP). G3BP displayed a strong expression in LH7 (non-metastatic in recipient nude mice) and a very weak expression in BE1 (100% metastatic frequency). The same different expression level of G3BP was detected in Northern hybridization with another panel of cell sublines with different metastatic potentials (established in our lab) derived from human prostate carcinoma cell line PC-3M. Conclusion　Our results indicate that G3BP was implicated in cancer metastasis because of its differential expressions in the two panels of cell sublines with different metastatic potentials.     

应用差异显示技术从高低转移癌系克隆出肿瘤转移相关基因G3BP

目的　克隆肿瘤转移相关基因。方法　应用倍比稀释法对人肺巨细胞癌PG进行单细胞克隆 ,并应用裸鼠异种接种及自发性转移体内实验对各亚系的转移潜能进行鉴定。以具有不同转移潜能的癌细胞亚系为研究对象 ,应用mRNA差异显示技术克隆差异片段 ,sanger双脱氧末端终止法测序及自动双向测序获得其碱基序列 ,与GenBank数据库进行同源性比较。在两组具有不同转移潜能的癌细胞亚系 (人肺癌 ,前列腺癌 )中Northern杂交验证表达差异。结果　两个具有不同转移潜能的亚系BE1和LH7,在完全相同的遗传背景下 ,亚系BE1在裸鼠体内 10 0 %成瘤 ,10 0 %转移 ;亚系LH7在裸鼠体内 10 0 %成瘤 ,无一例转移。二者转移表型的显著差异必然反映了转移相关基因表达与调控的差异。因此该系统是mRNA差异显示的良好模型。应用mRNA差异显示技术克隆差异片段 ,一个84 9bp片段在高转移亚系BE1中低表达 ,而在不转移亚系LH7高表达 ,二者差异显著 ,在重复实验中得到了验证。成功的回收该片段 ,连接入pGEM T载体 ,经sanger双脱氧末端终止法测序及自动双向测序获得其碱基序列 ,经GenBankBlastn检索 ,与G3BP(U32 519)同源性高达 99%。Northern杂交显示G3BP在LH7高表达 (约 3 3kb) ,而在BE1中低表达 ,验证了差异显示的结果 ,排除了假阳性的可能性     

不同转移潜能骨肉瘤细胞株的筛选与建立

目的获得不同转移潜能的骨肉瘤细胞株。方法从我室建立的人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607中通过有限稀释法获得不同的单细胞克隆,经过侵袭试验初筛后获得5株转移潜能不同的细胞株,再通过裸鼠体内连续传代法筛选出具有不同转移能力的细胞系。结果获得两株转移潜能不同的骨肉瘤细胞株。结论这两株细胞株它们来源于同一亲本,他们之间的差异集中在转移表型上,为今后利用分子生物学的方法筛选出转移相关基因,从而为成骨肉瘤的转移机制及临床研究奠定基础。     

Relationship between the Expression of MTA-1 Gene and the Metastasis and Invasion in Human Osteosarcoma

Summary：To compare the expression level of metastasis associated-1 （MTA 1 ） gene in high and low metastatic： human osteosarcoma cell lines and examine the relationship of MTA 1 expression and the metastasis potentiality of osteosarcoma cells, the expression of MTA 1 in MC-63 osteosarcoma cell lines with high and low metastasis potential was detected by semiquantitative TR-PCR. Boyden chamber invasion assay was used to evaluate the invasive capacity in vitro in two osteosarcoma cell lines, The low metastasis MG-63 cells were transfected with MTA 1 full-length cDNA expression plasmid by lipofectamine and the changes of MTA 1 expression and in vitro invasion potential were examined after the transfection. Our results showed that MG63 cell line with high metastasis potential expressed significantly higher MTA 1 than that of MG63 cells with low metastasis as reavealed by RT-PCR The invasion potential of low metastasis MG63 cell line was increased after MTA 1 gene transfection. It is concluded that there may be a relationship between MTA 1 and invasive potentiality of human osteosarcoma cells, and the mechanism of MTA 1 in osteosarcoma metastasis and its possible role in associated gene therapy deserve further study.     

鼻咽癌细胞肝转移亚株的建立

目的 建立鼻咽癌细胞肝转移亚株,研究鼻咽癌肝转移机制。方法 利用裸鼠体内传代的方法获得肝转移细胞亚株,并用体内和体外实验来观察其侵袭转移能力。结果 经体内反复筛选得到肝转移能力高的亚株5-8F-H3B-EGFP．其侵袭性、运动性以及形成肝转移灶的能力均大于母系5-8F-EGFP,并具有较高的肝脏亲和性。结论 该亚株的建立为今后研究鼻咽癌肝转移的分子机制奠定了基础。     

转移力不同的肺癌克隆细胞中nm23-H1基因产物NDPK的表达

【目的】比较转移抑制基因nm2 3 H1表达产物核苷酸二磷酸激酶 (nucleosidediphosphatekinase ,NDPK)在转移力不同的肺癌克隆株中的表达。【方法】通过单细胞克隆技术及裸鼠接种筛选出高转移及低转移的人肺巨细胞癌克隆细胞株及高转移的人肺腺癌克隆细胞株 ,用LSAB免疫组化法检测nm2 3 H1基因产物NDPK的表达。【结果】NDPK在高转移及低转移的人肺巨细胞癌克隆细胞移植瘤及转移瘤中均有表达 ,高转移株的阳性细胞数目及强度均高于低转移株和裸鼠正常肺组织 ;NDPK在高转移的肺腺癌克隆细胞移植瘤中有表达 ,表达强度低于裸鼠正常肺组织。【结论】nm2 3 H1基因对肺巨细胞癌并不具转移抑制基因的功能 ,而可能促进肿瘤的发生、发展和转移。     

具有肝转移倾向的结肠癌细胞亚系的筛选与鉴定

目的 筛选人结肠癌SW480细胞中具有特定肝脏转移倾向的亚克隆,比较它与母系生物学特性的差异,为结肠癌肝转移机制的研究提供基本的实验材料.方法 采用外科原位接种、组织块细胞培养法从裸鼠体内获得SW480细胞系中具有肝脏转移倾向的亚克隆SW480/M5;体内体外实验验证它与母系细胞在生物学特性上的差异.结果 体内实验证明SW480具有广泛转移的潜能,而SW480/M5细胞只具有向肝脏转移的潜能;SW480/M5细胞原位瘤的质量较SW480细胞大且皮下瘤生长速度较快:体外实验证明SW480/M5细胞的克隆形成能力,体外增殖能力、体外运动及侵袭能力较SW480细胞强,而对FN的粘附能力较SW480细胞弱.结论 从结肠癌细胞系SW480中筛选出的细胞亚系SW480/M5转移方向明确,是结肠癌肝转移机制研究的理想细胞模型.     

人鼻咽癌自发性高淋巴道转移模型的建立及生物学特性研究

目的在裸鼠体内建立人鼻咽癌自发性高淋巴道转移模型,并研究该癌细胞的有关生物学特性。方法将鼻咽癌单克隆细胞株（ＣＮＥ２ＺＨ５）移植于裸鼠皮下,待裸鼠发生转移时,取其淋巴结转移灶癌细胞再次移植裸鼠皮下传代,重复传９代后,观察各代裸鼠的转移率和转移途径;各代癌细胞体外增殖能力、癌细胞生长因子和受体表达的变化;裸鼠体内移植瘤增殖指数及瘤重和体积倍增时间的变化。结果癌细胞在裸鼠体内传９代后,各代裸鼠的淋巴结转移率一直稳定在８５％以上,且转移途径较为单一;各代癌细胞的体内外增殖能力不断增强。结论建立了人鼻咽癌自发性高淋巴道转移模型;鼻咽癌细胞在裸鼠体内演进中转移能力和增殖能力均不断增强,两者关系密切     

可调控型反义MMP-9表达与恶性肿瘤转移表型的相关性研究

目的探讨金属蛋白酶MMP-9与肿瘤转移的相关性。方法利用基因重组技术构建反义MMP-9cDNA四环素可调控表达载体,用脂质体法转染反义MMP-9至转移性人黑色素瘤细胞株WM451(高表达MMP-9)。检测转染后细胞MMP-9表达水平的改变以及裸鼠体内成瘤及自发转移能力的变化。结果转染反义基因后,WM451细胞MMP-9的表达及活性明显下降,体外侵袭能力及裸鼠体内成瘤性及自发转移能力均受到一定程度抑制;运用四环素可以抑制四环素负调控逆转录病毒载体上的外源基因的表达。结论反义MMP-9基因下调MMP-9的表达,可使人黑色素细胞转移能力受到一定程度的抑制,说明MMP-9在人黑色素瘤细胞转移过程中起重要作用。同时,四环素负调控逆转录病毒载体可以调控外源基因的表达。