局部分泌的血管抑素K（1—3）蛋白抑制人脑胶质瘤生长的实验研究

目的 探讨局部分泌血管抑素Ｋ（１￣３）蛋白〔ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ Ｋ（１￣３）,ＡＫ（１￣３）〕治疗人脑胶质瘤的可行性。方法 构建ＡＫ（１￣３０基因的真核表达载体ｐｃＤＮＡ－ＳＡＫ（１￣３）,经脂质体法将该载体转染入人脑胶质瘤细胞ＳＨＧ４４、行Ｇ４１８筛选。用电镜和流式细胞仪测定转染细胞的生物学性状,以内皮细胞抑制实验和免疫荧光实验检测该细胞表达的ＡＫ（１￣３）蛋白。应用裸鼠皮下致瘤性实验,结合     

不同转移潜能人前列腺癌细胞KAI1基因的表达

目的：探讨人前列腺癌细胞转移潜能与ＫＡＩ１基因表达的关系。方法：运用Ｎｏｒｔｈｅｍ印迹杂交检测ＫＡＩ１基因在不同转移潜能人前列腺癌细胞中的表达，以甲基化分析与聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）研究ＫＡＩ１低表达的机制。结果：在转移性人前列腺癌细胞系ＰＣ３和ＰＣ３Ｍ中不论其转移潜能强弱，ＫＡＩ１ ｍＲＮＡ表达均降低。甲基化分析未发现ＫＡＩ１基因５’－启动子部位ＣＣ＾ｍ５ＧＧＧＧ甲基     

肿瘤坏死因子α基因转染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的实验研究

采用脂质体转染技术将能表达肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）基因的重组逆转录病毒质粒ｐＬ（ＴＮＦ－α）ＳＮ导入病毒包装细胞ＰＡ３１７，在细胞培养上清液中得到重组病毒，滴度为１．４×１０９ＣＦＵ／Ｌ。将此病毒上清液感染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），用Ｇ４１８筛选出能表达标记基因ＮｅｏＲ的阳性克隆，ＥＬＩＳＡ法测得ＮｅｏＲ阳性ＴＩＬ培养上清液中存在ＴＮＦ－α，可达５３０ｎｇ／Ｌ，Ｌ９２９依赖细胞法并测出上清液中有ＴＮＦ－α生物学活性。结果表明，我们构建的重组逆转录病毒可介导ＴＮＦ－α基因在人脑胶质瘤ＴＩＬ中的表达     

HSV1—TK／GCV系统对人肺腺癌细胞S549生物学特性的影响

目的 观察转ＴＫ基因肺癌细胞对丙氧鸟苷（ＧＣＶ）的敏感性及ＴＫ／ＧＣＶ系统杀灭肿瘤机制。方法 观察转ＴＫ基因，转空载体Ａ５４９细胞（下分别简称Ａ５４９－ＴＫ、Ａ５４９－ｐＬＸＳＮ）和Ａ５４９细胞形态学改变、生长增殖特性。ＧＣＶ对３种细胞生长抑制（ＭＴＴ法）。电镜、流式细胞仪观察Ａ５４９－ＴＫ、Ａ５４９细胞经５０μｍｏｌ／Ｌ ＧＣＶ作用３ｄ后细胞凋亡。结果 转基因细胞变为不规则，呈多角型，透亮度下降     

白介素—1受体相关激酶—2和磷脂酰肌醇3—激酶协同调控白 …

目的 研究白介素１受体相关激酶２（ＩＲＡＫ－２）和磷脂酰肌醇－３－激酶（ＰＩ３－激酶）在白介素－１（ＩＬ－１）诱导核因子－ＫＢ（ＮＦ－ＫＢ）活化中的作用。方法 Ｌｉｐｏｆｃｃｔｉｎ介导反义ＩＲＡＫ－２寡核苷酸或反义ＰＩ－３－激酶寡核苷酸转染ＨｅｏｐＧ２细胞后,用逆转录ＰＣＡＫ－２ｍＲＮＡ和ＰＩ－３－激酶ｍＲＮＡ表达水平,以Ｓａｎｄｗｉｃｈ ＥＬＩＳＡ法检测ＮＦ－ＫＢ的活化。结果 （１）反义ＩＲＡＫ     

细胞外基质及凝集素受体在胃癌细胞株的表达

应用免疫酶ＳＰ法和凝集素亲和组化技术对４株不同分化程度的胃癌细胞进行细胞外基质和凝集素受体的初步研究。结果显示：（１）ＦＮ染色：ＦＧＣ８５＞ＭＧＣ８０－３＞ＳＧＣ－７９０１＞ＭＫＮ２８。（２）ＬＮ染色：ＦＧＣ８５＜ＭＧＣ８０－３＜ＳＧＣ－７９０１＜ＭＫＮ２８。（３）ＰＮＡ染色：ＦＧＣ８５＝ＭＧＣ８０－３＞ＳＧＣ－７９０１＞ＭＫＮ２８。（４）ＰＨＡ染色无差异。提示ＦＮ，ＬＮ及ＰＮＡ受体的表达与细胞的分化程度密切相关。     

肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82在不同转移潜能癌细胞中的表达

目的 探讨新发现的肿瘤转移抑制基因ＫＡＩ１／ＣＤ８２与人癌细胞转移潜能的关系,方法 应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交及聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法,检测３组８种不同转移具有转移性的前列腺癌细胞系ＰＣ３和ＰＣ３Ｍ及高转移性的人肺ＰＧ细胞,ＫＡＩ１ｍＲＮＡ的表达降低（积分吸光度分别为０．０３１９,０．０２６６和０．０５４９）而在无转移性的人肺ＰＡａ细胞则为高表达（积分吸光度     

单克隆抗体SZ—39识别的人脑胶质瘤细胞SHG—44膜蛋白的提取

目的：提取ＭｃＡｂ ＳＺ－３９识别的人脑胶质瘤细胞ＳＨＧ－４４膜抗原蛋白,为其进一步研究作准备。方法：分别以两组去污剂（１）２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１１４;（２）１％ＳＤＳ、１％去氧胆酸钠、１％ＮＰ－４０、１ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ裂解ＳＨＧ－４４细胞,提取细胞蛋白,再以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法分离蛋白,并以Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ法分析鉴定。结果：ＭｃＡｂ ＳＺ－３９识别的蛋白呈一条区带,分子量为６０ｋＤ     

不同转移潜能人肺癌细胞系KAI1基因的表达

目的：探讨ＫＡＩ１基因与人肺癌细胞系转移潜能的关系。方法：利用逆转录－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｍ ｂｌｏｔ杂交法分析不同转移潜能人肺癌细胞系中ＫＡＩ１ ｍＲＮＡ的表达,并用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测与突变的关系。结果：在高转移潜能细胞系ＰＧ中ＫＡＩ１ ｍＲＮＡ表达降低,在无转移潜能的ＰＡａ细胞中ＫＡＩ１的表达量比ＰＧ细胞高１０倍以上（积分光密度比值分别为０．７３１和０．０     

脑胶质瘤N－GSL的表达

脑胶质瘤Ｎ－ＧＳＬ的表达鞘糖脂（ＧＳＬ）是细胞表面的重要标志物之一。ＧＳＬ的研究已成为当前生物学和肿瘤研究中的重要课题。本实验取人脑胶质瘤组织（Ⅲ～Ⅳ级）、瘤周边脑组织（病理检验确定）、胎脑组织（４月胎龄）及正常人脑组织各１ｇ，经总糖脂抽提，ＤＥＡＥ...     

Endostatin裸DNA对人脑胶质瘤的抑瘤效应

目的：探讨endostatin裸DNA对裸鼠皮下脑胶质瘤生长的影响特点。方法：用脂质体包埋法将endostatin基因的真核表达载体pcDNA-S-Endo注入裸鼠皮下SHG44人脑胶质瘤内,观察肿瘤生长情况并计算抑瘤率,结合免疫组化、电镜、微血管和瘤体坏死区计数,确定endostatin裸DNA治疗人脑胶质瘤的特点。结果：Endostatin裸DNA在荷瘤裸鼠体内获得表达,裸鼠皮下胶质瘤血管生成能力显下降,肿瘤生长受到抑制,抑瘤率达到41．6％。结论：Endostatin裸DNA能够抑制人脑胶质瘤生长41．6％。结论：Endostatin裸DNA能够抑制人脑胶质瘤生长,它是通过抑制肿瘤血管生成,导致肿瘤坏死实现的。本研究为应用裸DNA药物治疗人脑质瘤奠定了初步基础。     

Angiostatin K(1-3) gene for treatment of human gliomas: an experimental study

Objective To discuss the feasibility of gene therapy of human glioma by antiangiogenesis method.
Methods Angiostatin K(1-3) cDNA with secretive signal was inserted into the polylinker s ites of eukaryotic expression vector pcDNA3 to construct pcDNA-SAK(1-3).The vector was transfected into human SHG44 glioma cells by lipofectamine and the po sitive clone was screened by G418.The biological characteristics of glioma cel ls were examined by electronmicroscope and flow cytometry.The activity of angi ostatin K(1-3) protein expressed by SHG44 cells was examined by the bovine micr a ngium endotheliocyte inhibition assay and immunofluorescence assay.When SHG44 cells were implanted into the strata subcutaneum of nude mice, tumor necrosis an d micrangium were calculated immunohistochemically and electronmicroscopically f or determining their charac-teristics and validity in gene therapy of human glio ma by antiangiogenesis method.
Results The eukaryotic expression vector pcDNA-SAK(1-3) was successfully constructed and transfected into glioma cells.The cells expressed angiostatin K(1-3) prote i n, and their tumorigenesis and angiogenesis in nude mice were greatly reduced.
Conclusion Angiostatin K(1-3) gene is feasible to treat human glioma.This experiment lay s a foundation for gene therapy of the other solid tumors by antiangiogenesis method.     

血管内皮生长因子_(165)反义RNA治疗人脑胶质瘤的实验研究

目的　探讨应用血管内皮生长因子165(VEGF165)反义RNA治疗人脑胶质瘤的可行性。方法　构建和鉴定反义VEGF165真核表达载体 ;将其转染入人脑胶质瘤细胞SHG44 ,检测其转染前、后的生物学性状 ;比较转染前、后SHG44细胞的裸鼠皮下致瘤性 ;分别应用免疫印迹、免疫组织化学、微血管计数、电镜和流式细胞仪检测上述改变。结果　成功构建反义VEGF165真核表达载体并在SHG44细胞获得表达 ,该细胞生物学性状不受外源基因表达影响 ,其在裸鼠皮下致瘤性和血管生成能力明显下降。肿瘤终体积 :实验组 2 12mm3,对照组 7897mm3(P <0 .0 1) ;血管计数 :实验组 5 .5 0 ,对照组11 2 2 (P <0 .0 1)。结论　VEGF165反义RNA能有效抑制人脑胶质瘤血管生成和肿瘤生长 ,为基因治疗实体瘤奠定了基础     

反义VEGF165真核表达载体的构建和表达

目的 进行抗血管生成治疗人脑胶质瘤实验,构建和鉴定携带人反义VEGF165基因的真核表达载体。方法 将VEGF165cDNA反向克隆入pcDNA3,构建CMV启动子控制的真核表达载体pcDNA-AVEGF165,用酶切鉴定结果;应用该载体转染人脑胶质瘤细胞SHG44,G418筛选阳性克隆;Western blot和免疫组化检测转染前、后瘤细胞的VEGF表达。检测转染前、后瘤细胞的生物学性状。结果 获得反向构建的pcDNA-AVECF165真核表达载体,VEGF165反义RNA阻断了SHG44细胞的VEGF表达,该细胞生物学性状不受外源基因的表达影响。结论 成功构建的反义VEGF165真核表达载体,为人脑胶质瘤的反义基因治疗提供了必要的条件。     

人骨形成蛋白-2对人脑胶质瘤细胞周期和增殖的影响

目的 探讨人骨形成蛋白（ｒｈＢＭＰ－２）对体内,外人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞周期和增殖的影响。方法 体外培养人脑胶质瘤细胞,绘制ｒｈＢＭＰ－２作用前、后的ＳＨＧ４４细胞生长曲线,ＭＴＴ法测定ｒｈＢＭＰ－２对ＳＨＧ４４细胞的增殖影响;以流式细胞仪、电镜和琼脂糖凝胶电泳分别检测其细胞周期、超微结构和ＤＮＡ片段改变,观察局部注射ｒｈＢＭＰ－２对裸鼠皮下ＳＨＧ４４胶质瘤增长的影响,结果 ｒｈＢＭＰ－２可抑制     

Inhibitory effects and mechanism of rhBMP-2 on the proliferation of SHG44 human glioma cells

Bone morphogenetic protein (BMP) has been denominated by its artivity of inducing bone formation. Re-cently, it was found to be a multifunctional factor andhave a key role in the regulation of elnbmpis andembryo deVelopment, hssue and cell ~ation andPndiferation. BMP could also inhibit many kinds of tumorcell growth and induce their apoptOSisL',']. the of BMPgenes were successop cloned and ~ssed in aam,such as BMP-2, BMP4 and BMP-7. The bone ~C Pmtein-2 is a htllnan P~ exPansed in vi…     

人骨形成蛋白-2诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨重组人骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）对体内、外人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞生物学特性的影响。方法 绘制ｒｈＢＭＰ－２作用前、后的ＳＨＧ４４细胞生长曲线,ＭＴＴ法测定ｒｈＢＭＰ－２对ＳＨＧ４４细胞增殖的作用;以流式细胞仪、电镜和琼脂糖凝胶电泳分别检测其细胞周期、超微结构和ＤＮＡ片段改变;观察局部注射ｒｈＢＭＰ－２对裸鼠皮下ＳＨＧ４４胶质瘤增长的影响。结果 流式细胞检测显示,ｒｈＢＭＰ－２可抑     

外源性p16基因稳定转染对胶质瘤细胞周期和增殖的影响

目的：研究外源性ｐ１６基因对胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４的抑制作用,探索胶质瘤基因治疗的新途径。方法：利用携带４９０ｂｐ的人ｐ１６全长ｃＤＮＡ真核表达载体,采用脂质体介导法将其导入人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４中,用Ｇ４１８筛选阳性克隆,以原位杂交,免疫组化方法检测ｐ１６基因在细胞转染前后的表达情况。,应用流式细胞仪,电子显微镜,生长曲线测定等方法研究ｐ１６基因对胶质瘤细胞周期,形态,生长等的影响.     

血管内皮生长因子165反义RNA治疗人脑胶质瘤的实验研究

目的 探讨应用血管内皮生长因子１６５（ＶＥＧＦ１６５）反义ＲＮＡ治疗人脑胶质瘤的可行性。方法 构建和鉴定反义ＶＥＧＦ１６５真核表达载体;将其转染入人脑胶质瘤细胞ＳＨＧ４４,检测其转染前、后的生物学性状;比较转染前、后ＳＨＧ４４细胞的裸鼠皮下致瘤性;分别应用免疫印迹、免疫组织化学、微血管计数、电镜和流式细胞仪检测上述改变。结果 成功构建反义ＶＥＧＦ１６５真核表达载体并在ＳＨＧ４４细胞获得表达,该细胞