珍珠层聚乳酸人工骨的细胞毒性实验

目的 研究珍珠层聚乳酸人工骨的细胞毒性。方法 将人成骨细胞与珍珠层聚乳酸人工骨浸提液复合培养作为实验组，对照组单纯加细胞培养液。通过MTT法检测成骨细胞代谢活性；考马斯亮蓝测定细胞蛋白含量；金氏比色法检测细胞碱性磷酸酶活性。结果 与人工骨材料浸提液复合培养的成骨细胞在细胞增殖状况、蛋白质含量、碱性磷酸酶活性等指标与正常组相比较差异无显著性。结论 珍珠层聚乳酸人工骨材料对成骨细胞未产生毒性反应。     

珍珠层人工骨对成骨细胞在体内外增殖的作用

目的:通过成骨细胞与珍珠层/聚乳酸人工骨复合后在体内外增殖的研究,探讨珍珠层/聚乳酸人工骨的生物相容性。方法:将新西兰大白兔成骨细胞种植到珍珠层/聚乳酸人工骨材料上,用四唑盐(MTT)比色法、扫描电镜研究成骨细胞在体外增殖情况;在体外用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记成骨细胞,并将标记的同种异体成骨细胞接种于珍珠层/聚乳酸人工骨表面,复合培养1周后植入体内,采用免疫组化法,与体外检测孔对比,检测成骨细胞在体内的存活、增殖情况。结果:MTT法显示随培养时间的延长,细胞在材料表面不断增殖;电镜显示,体外细胞在材料表面及孔隙中附着、生长良好,存在接触抑制现象;成骨细胞与珍珠层/聚乳酸人工骨复合后能在体内继续存活并增殖。结论:珍珠层/聚乳酸人工骨对成骨细胞在体内外增殖无明显影响,具有良好的生物相容性。     

珍珠层人工骨对成骨细胞在体内外增殖的作用

目的：通过成骨细胞与珍珠层／聚乳酸人工骨复合后在体内外增殖的研究，探讨珍珠层／聚乳酸人工骨的生物相容性。方法：将新西兰大白兔成骨细胞种植到珍珠层／聚乳酸人工骨材料上，用四唑盐(MTT)比色法、扫描电镜研究成骨细胞在体外增殖情况；在体外用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记成骨细胞，并将标记的同种异体成骨细胞接种于珍珠层／聚乳酸人工骨表面，复合培养1周后植入体内，采用免疫组化法，与体外检测孔对比，检测成骨细胞在体内的存活、增殖情况。结果：MTT法显示随培养时间的延长，细胞在材料表面不断增殖；电镜显示，体外细胞在材料表面及孔隙中附着、生长良好，存在接触抑制现象；成骨细胞与珍珠层／聚乳酸人工骨复合后能在体内继续存活并增殖。结论：珍珠层／聚乳酸人工骨对成骨细胞在体内外增殖无明显影响，具有良好的生物相容性。     

聚乳酸/羟基磷灰石纳米复合物对MC3T3-E1细胞增殖活性的影响

背景：研究表明聚乳酸/羟基磷灰石复合材料与自然骨结构和性能相似,具有骨传导性和良好的生物相容性。 目的：观察聚乳酸/羟基磷灰石纳米复合物与成骨细胞株MC3T3-E1的生物相容性。 方法：分别采用普通完全培养基（对照组）与聚乳酸/羟基磷灰石纳米复合物浸提液（实验组）培养第3代成骨细胞株MC3T3-E1,培养3,5,7 d,采用CCK-8法检测细胞的吸光度值;在培养第7,14天检测细胞碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型胶原、核心结合因子α1/成骨特异性转录因子表达。将聚乳酸/羟基磷灰石纳米复合物与第3代成骨细胞株MC3T3-E1共培养,培养7,14 d细胞骨架染色及扫描电镜观察细胞在支架材料上的形态。 结果与结论：随着时间的延长,成骨细胞株MC3T3-E1的吸光度值明显增加,两组细胞吸光度值比较差异无显著性意义。实验组培养第7天细胞碱性磷酸酶活性高于对照组（P ＜0.05）,培养第14天细胞碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、核心结合因子α1/成骨特异性转录因子表达高于对照组（P ＜0.05）。种植7 d后细胞在材料上贴附生长,细胞呈多角形;种植14 d 后细胞较7 d 前数目明显增多,且完全伸展,呈多角形和梭形。表明聚乳酸/羟基磷灰石纳米复合物对成骨细胞有良好的生物相容性,无细胞毒性。     

新型壳聚糖－胶原支架与牙周膜细胞的生物相容性

背景：目前胶原作为牙周组织工程支架材料仍具有机械强度差、降解速度快等缺点,将其与壳聚糖复合可改善上述问题。 目的：评估新型壳聚糖-胶原支架材料的体外生物相容性。 方法：通过 MTT 法评估100%,75%,50%,25%壳聚糖-胶原支架材料浸提液对人牙周膜细胞的毒性。选择第4-6代生长状态良好的人牙周膜细胞与壳聚糖-胶原支架共培养,观察细胞在支架上的生长情况,并检测与壳聚糖-胶原支架复合培养前后人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的变化。 结果与结论：新型壳聚糖-胶原支架具有双层结构,一侧表面致密,一侧表面疏松多孔。MTT 法检测不同浓度材料浸提液毒性评级为0或1级。扫描电子显微镜及组织学观察可见细胞在壳聚糖-胶原支架上增殖良好,且致密层可起屏障膜作用,阻挡细胞进入支架内部;复合培养24 h后,人牙周膜细胞的碱性磷酸酶活性与复合培养前无明显差异（P 〉0.05）,复合培养48,72 h后人牙周膜细胞的碱性磷酸酶活性高于复合培养前（P 〈0.05）。以上结果提示新型壳聚糖-胶原支架具有良好的生物相容性及屏障功能,可进一步应用于牙周组织工程的研究。     

医用新型Mg-Li-Ca合金材料体外生物相容性及生物活性评价

背景：新型Mg-Li-Ca合金是否具有生物相容性和生物活性,目前还未被证实。目的：通过体外实验评价新型医用Mg-Li-Ca合金的组织相容性及生物活性,初步探讨其作为医用植入材料的可行性。方法：分别采用Mg-Li-Ca合金浸提液、纯Mg浸提液、AZ31B合金浸提液与α-MEM培养液培养第3代小鼠胚胎成骨细胞,培养1,3,5 d,采用MTT法检测细胞A值并计算相对增殖率;培养5,7 d,使用碱性磷酸酶试剂盒检测细胞碱性磷酸酶活性。将第3代小鼠胚胎成骨细胞与Mg-Li-Ca合金、纯Mg、AZ31B合金分别共培养于24孔板,培养1 d后扫描电镜观察材料表面黏附及增殖情况。结果与结论：Mg-Li-Ca合金、纯Mg和AZ31合金对成骨细胞的细胞毒性为Ⅰ级,无细胞毒性,且Mg-Li-Ca合金对细胞毒性明显小于纯Mg和AZ31B合金,对成骨细胞生长增殖无显著影响,呈现出良好的生物相容性。Mg-Li-Ca合金和纯Mg对成骨细胞正常合成碱性磷酸酶无影响,具有良好的生物活性;AZ31B对成骨细胞正常合成碱性磷酸酶有显著影响。成骨细胞可在Mg-Li-Ca合金、纯Mg和AZ31合金表面正常黏附生长。表明新型Mg-Li-Ca合金有望成为新型骨科植入材料。     

胶原-生物衍生骨材料与兔成骨细胞的相容性及其体外附着特点

目的:观察胶原-生物衍生骨复合材料与兔成骨细胞的相容性及体外附着规律,为进一步的体内实验提供参考数据。方法:实验于2003-10/2005-02在华西医科大学组织工程实验室进行。①材料制备:新鲜捐献骨(人),经脱脂、脱蛋白等工艺制成单纯生物衍生骨材料,以Ⅰ型胶原通过真空吸附法修饰单纯生物衍生骨材料表面,构建出胶原生物衍生骨材料。②实验方法:将体外培养的兔骨膜成骨细胞分别复合于单纯生物衍生骨材料和胶原生物衍生骨材料,共同培养7d。③观察指标:分别于培养第1,3,5和7天取材,扫描电镜观察成骨细胞形态及附着情况;用紫外/荧光/可见光高效分析仪测定成骨细胞产生的碱性磷酸酶活性;MTT检测成骨细胞增殖情况;用流式细胞仪检测兔成骨细胞的细胞周期、DNA含量及倍体水平。结果:①扫描电镜结果:胶原生物衍生骨材料组成骨细胞黏附和增殖优于生物衍生骨材料组。②碱性磷酸酶活性:生物衍生骨材料组低于胶原生物衍生骨材料组(0.019±0.003,0.038±0.004,P<0.05)。③细胞增殖情况:在培养第1,3,5,7天胶原生物衍生骨材料组成骨细胞A值均高于生物衍生骨材料组(P<0.05)。④流式细胞检测生物衍生骨材料、胶原生物衍生骨材料对兔成骨细胞的细胞周期影响不大,各组细胞皆为正常的二倍体细胞,未见异倍体细胞形成,胶原修饰后无细胞毒性。结论:以单纯生物衍生骨作为载体,其表面经胶原修饰后的复合材料与成骨细胞有良好的细胞相容性,无细胞毒性。     

松质骨基质材料应用于牙周组织工程的可行性

背景：松质骨基质材料具有骨诱导性和骨传导性双重特性,已被成功应用于骨再生及骨组织工程研究。目的：分析松质骨基质材料的细胞相容性与毒性,探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法：采用改良组织块法体外培养人牙周膜细胞,将其接种于松质骨基质三维支架上复合培养,采用细胞计数方法和扫描电镜观察人牙周膜细胞在松质骨基质支架上的附着、生长情况,并通过MTT测试法和碱性磷酸酶活性检测法观察松质骨基质浸提液对人牙周膜细胞增殖及功能表达的影响。结果与结论：扫描电镜可见松质骨基质具有良好的多孔网状结构,人牙周膜细胞在松质骨基质上贴附紧密,生长旺盛,伸展充分,而人牙周膜细胞在不同浓度材料浸提液中的生长、增殖及碱性磷酸酶活性与阴性对照组相比差异无显著性意义。表明松质骨基质具有良好的三维空间结构和细胞相容性,且无细胞毒性,有望应用于牙周组织再生及牙周组织工程研究。     

乙二胺改性聚乳酸对成骨细胞的影响

目的:研究乙二胺改性聚乳酸(EMPLA)对成骨细胞的影响作用,并与聚乳酸(PLA)和玻璃(对照)作了对比。方法:采用体外细胞培养法,直接在基质材料上培养细胞,从细胞形态学、细胞增殖和碱性磷酸酶活性几个方面检测不同基底材料对成骨细胞的影响作用。结果:与PLA和玻璃相比,成骨细胞在EMPLA上具有较为成熟的细胞形态,增殖能力强(与PLA组,对照组相比P<0.01),碱性磷酸酶活性大(与PLA组相比P<0.05)。结论:EMPLA比PLA表现出更好的生物相容性,有望成为骨修复临床材料,在骨组织工程中存在广泛的潜在实用前景。     

乙二胺改性聚乳酸对成骨细胞的影响

目的：研究乙二胺改性聚乳酸(EMPLA)对成骨细胞的影响作用，并与聚乳酸(PLA)和玻璃(对照)作了对比。方法：采用体外细胞培养法，直接在基质材料上培养细胞，从细胞形态学、细胞增殖和碱性磷酸酶活性几个方面检测不同基底材料对成骨细胞的影响作用。结果：与PLA和玻璃相比，成骨细胞在EMPLA上具有较为成熟的细胞形态，增殖能力强(与PLA组，对照组相比P&;lt;0．01)，碱性磷酸酶活性大(与PLA组相比P&;lt;0．05)。结论：EMPLA比PLA表现出更好的生物相容性，有望成为骨修复临床材料，在骨组织工程中存在广泛的潜在实用前景。     

帕米磷酸钠对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的观察二磷酸盐类药物帕米磷酸钠对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化的影响。方法取新生SD大鼠头盖骨分离成骨细胞体外培养 ;不同浓度帕米磷酸钠刺激后 ,四甲基偶氮唑盐 (MTT)法检测细胞增殖能力 ;取细胞上清液 ,碱性磷酸酶试剂盒检测细胞培养液中碱性磷酸酶活性。结果在 10 6M— 10 12 M时 ,帕米磷酸钠能促进大鼠成骨细胞增殖 (P <0 .0 5 ) ,10 4M则抑制细胞增殖 (P <0 .0 5 ) ;帕米磷酸钠抑制大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性。结论帕米磷酸钠能直接作用于大鼠成骨细胞 ,促进其增殖 ,但抑制分化     

重组人胰岛素样生长因子I对成骨细胞的影响

背景：人胰岛索样生长因子I在成骨细胞中含量丰富,与骨密度有密切关系。目的：观察重组人胰岛素样生长因子I对体外培养大鼠成骨细胞的增殖、凋亡及碱性磷酸酶合成的影响。方法：不同质量浓度重组人胰岛素样生长因子I刺激体外培养的大鼠成骨细胞,噻唑蓝法测定活细胞数量;肿瘤坏死因子a单独或与重组人胰岛素样生长因子I共同刺激成骨细胞,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,采用对硝基酚磷酸盐法测定细胞裂解液中碱性磷酸酶活性。结果与结论：与对照组相比,一定剂量的重组人胰岛素样生长因子I能明显增加大鼠成骨细胞数量（P〈0．05）,在质量浓度为0．1-100pg／L时,成骨细胞数量的增加与质量浓度呈正相关;肿瘤坏死因子a在0．1-100pg／L范围内呈剂量依赖性地促进成骨细胞凋亡（户〈0．05）,并使S期细胞减少（尸〈0．05）,而重组人胰岛素样生长因子I能抑制肿瘤坏死因子a对成骨细胞的促凋亡作用（P〈0．05）：与对照组相比,重组人胰岛素样生长因子I刺激的成骨细胞碱性磷酸酶的活性明显增高（尸〈0．05）。重组人胰岛素样生长因子I对大鼠成骨细胞有明显的促增殖作用,且能明显抑制肿瘤坏死因子a诱导的大鼠成骨细胞凋亡,提示增加成骨细胞数量可能是重组人胰岛索样生长因子I促进骨形成的机制之一：重组人胰岛素样生长因子I能促进大鼠成骨细胞碱性磷酸酶的合成,提示重组人胰岛素样生长因子I有可能促进骨基质的合成和钙化。     

珊瑚羟基磷灰石与成人骨髓源成骨细胞的相容性研究

背景传统的骨缺损修复方法,如自体骨移植、异体骨移植、人工合成替代品等,由于存在种种弊端,难以满足临床需要.组织工程学的建立和迅速发展为骨缺损的修复带来了新的希望,这一技术完全摆脱了以往的模式,通过体外构建、体内重组技术使传统的植骨术具有更广阔的前景.目的研究成人骨髓成骨细胞与珊瑚羟基磷灰石(carolline hydroxyap-atite,CHA)在体外培养条件下的生物相容性,为骨组织工程选择适宜的种子细胞载体.设计随机对照实验研究.地点、材料和干预本实验在解放军第一军医大学南方医院全军创伤骨科中心组织工程实验室进行.抽取健康成年志愿者骨髓组织,置于含100 g/L胎牛血清的DMEM培养基(Dulbecco's modified Eagle's medium)中培养,传代后改用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的条件培养基培养,分为CHA复合细胞的实验组和单纯细胞的对照组,两组细胞用倒置相差显微镜、苏木精-伊红染色及扫描电镜进行形态学观察,四甲基偶氮唑盐(MTT)法进行细胞增殖测定、考马斯亮蓝G250法进行细胞蛋白含量测定、碱性磷酸酶试剂盒进行细胞内碱性磷酸酶定量检测.主要观察指标成人骨髓成骨细胞体外培养时复合或不复合CHA的成骨细胞生长状况观察及复合培养细胞功能检测.结果实验组和对照组成人骨髓来源的成骨细胞体外培养时均生长良好,表现出典型成骨细胞的形态特征和生物学特性,CHA有利于细胞贴附、生长与增殖.不同时间点两组细胞的增殖情况、细胞蛋白含量和碱性磷酸酶活性差异无显著性意义(P＞0.05).结论CHA是较理想的骨组织工程支架材料;成骨细胞复合CHA可用于骨缺损的修复.     

脱钙牙基质与成骨细胞的生物相容性

背景:目前研究最广泛的骨诱导材料为骨诱导蛋白及其载体,但来源有限,制备工艺复杂.脱钙牙基质是一种富含多种骨诱导蛋白及其载体的天然复合产物,被认为是应用前景很大的同种异体骨移植替代材料.目的:实验将MC-3T3成骨细胞与脱钙牙基质进行联合培养,通过测定成骨细胞的增殖情况和碱性磷酸酶活力评估脱钙牙基质的生物相容性.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察实验,于2007-11/2009-05在兰州大学口腔医学院和广州市荔湾区口腔医院完成.材料:脱钙牙本质基质由深圳市创博生物制品发展有限公司提供;羟基磷灰石由南京埃普瑞纳米材料有限公司提供.方法:将羟基磷灰石和脱钙牙基质粉末各0.1 g加入24孔板,每种样品平均3孔,加入对数生长期MC-3T3成骨细胞,培养2,4,6 d后,采用MTT法计算细胞增殖数,采取酶联免疫法检测细胞碱性磷酸酶活性.主要观察指标:脱钙牙基质对成骨细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响.结果:脱钙牙基质组细胞增殖数明显高于羟基磷灰石组,随培养时间延长各组细胞碱性磷酸酶活性都有所增加,脱钙牙基质组碱性磷酸酶活性高于羟基磷灰石组,差异有显著性意义(P<0.05).结论:脱钙牙基质能够提高成骨细胞的黏附和增殖能力,促进成骨细胞的生长,具有较好的生物相容性.     

低频振动对人成骨细胞生物学特性的影响

背景:成骨细胞对载荷的反应在骨细胞重建中起着重要作用,通过分析不同载荷作用下成骨细胞的力学反应,可从细胞学水平了解骨重建的机制。目的:分析低频振动对人成骨细胞增殖分化及基质分泌的影响。设计:对比观察。单位:南方医科大学南方医院骨科。材料:实验于2002-01/12在南方医科大学南方医院实验室完成。取成人的髂骨松质骨,获得人成骨细胞。方法:将获得的人成骨细胞在培养48h后,施加0.1,0.2,0.5,2和5Hz的低频微振动,通过流式细胞仪检测成骨细胞增殖状况,通过化学比色法和放射免疫法检测碱性磷酸酶活性和骨钙素含量。主要观察指标:①低频振动对成骨细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌的影响。②流式细胞仪检测低频振动对成骨细胞增殖的影响。结果:①加载0.2和0.5Hz振动可使成骨细胞的碱性磷酸酶活性明显增高(P<0.01),5Hz振动则明显降低碱性磷酸酶活性(P<0.01)。0.1和2Hz振动后其碱性磷酸酶活性与对照组差异无显著性意义。②加载0.2和0.5Hz振动的成骨细胞,S期细胞从10.40%增加至12.45%和16.12%,增殖指数从20.14%增加到26.21%和28.75%;5Hz使细胞增殖指数明显降低至13.22%(P<0.05);0.1和2Hz低频振动则显示对细胞增殖指数无明显影响(P>0.05)。③加载0.2和0.5Hz振动可明显增加成骨细胞骨钙素分泌量至1.87μg/L和2.47μg/L(P<0.05),加载2和5Hz振动相应降低骨钙素分泌量(P<0.05)。而加载0.1Hz对骨钙素分泌量无明显影响(P>0.05)。结论:0.2～0.5Hz的低频振动能促进成骨细胞增殖分化和成骨活性物质分泌,对低频振动应用于骨折治疗有指导作用。     

Cells responding to surface structure of calcium phosphate ceramics for bone regeneration

Surface structure largely affects the inductive bone‐forming potential of calcium phosphate (CaP) ceramics in ectopic sites and bone regeneration in critical‐sized bone defects. Surface‐dependent osteogenic differentiation of bone marrow stromal cells (BMSCs) partially explained the improved bone‐forming ability of submicron surface structured CaP ceramics. In this study, we investigated the possible influence of surface structure on different bone‐related cells, which may potentially participate in the process of improved bone formation in CaP ceramics. Besides BMSCs, the response of human brain vascular pericytes (HBVP), C2C12 (osteogenic inducible cells), MC3T3‐E1 (osteogenic precursors), SV‐HFO (pre‐osteoblasts), MG63 (osteoblasts) and SAOS‐2 (mature osteoblasts) to the surface structure was evaluated in terms of cell proliferation, osteogenic differentiation and gene expression. The cells were cultured on tricalcium phosphate (TCP) ceramics with either micron‐scaled surface structure (TCP‐B) or submicron‐scaled surface structure (TCP‐S) for up to 14 days, followed by DNA, alkaline phosphatase (ALP) and quantitative polymerase chain reaction gene assays. HBVP were not sensitive to surface structure with respect to cell proliferation and osteogenic differentiation, but had downregulated angiogenesis‐related gene expression (i.e. vascular endothelial growth factor) on TCP‐S. Without additional osteogenic inducing factors, submicron‐scaled surface structure enhanced ALP activity and osteocalcin gene expression of human (h)BMSCs and C2C12 cells, favoured the proliferation of MC3T3‐E1, MG63 and SAOS‐2, and increased ALP activity of MC3T3‐E1 and SV‐HFO. The results herein indicate that cells with osteogenic potency (either osteogenic inducible cells or osteogenic cells) could be sensitive to surface structure and responded to osteoinductive submicron‐structured CaP ceramics in cell proliferation, ALP production or osteogenic gene expression, which favour bone regeneration. Copyright © 2017 John Wiley & Sons, Ltd.     

生物骨替代材料成骨活性的体外测定

背景：传统骨替代材料成骨活性的检测方法为体内检测，在可靠性、时效性、直观性等方面存在着不足，特别是在检测大批量生物替代材料时其缺点尤为突出。 目的：探索一种能够在体外检测骨移植替代材料成骨活性的方法。 设计：对比观察的细胞学实验。 时间及地点：实验于2006—08／2007—05在解放军总医院全军骨科研究所进行。 材料：C2C12细胞由北京协和医科大学细胞中心提供，人脱钙骨基质、人骨提取的骨蛋白由解放军总医院骨科研究所提供，牛腱Ⅰ型胶原由北京益尔康生物工程开发中心提供，重组人骨形态发生蛋白2由杭州华东基因研究所提供。 方法：将重组人骨形态发生蛋白2、人脱钙骨基质、复合材料（人骨提取的骨蛋白与人脱钙骨基质、牛腱Ⅰ型胶原以透析的方法复合）3种材料与小鼠肌肉C2C12细胞共培养72h，阴性对照为单纯细胞，不加任何材料。细胞裂解后用比色法分别检测裂解液中成骨细胞特异性标记物碱性磷酸酶及总蛋白的吸光度值，以两者的比值表示单位数量的C2C12细胞所含有的碱性磷酸酶含量，以此衡量待测生物材料成骨活性的高低。 主要观察指标：碱性磷酸酶与总蛋白的吸光度值。 结果：重组人骨形态发生蛋白2材料中碱性磷酸酶含量最高，人脱钙骨基质材料合复合材料次之，阴性对照最低。3种材料中碱性磷酸酶含量与阴性对照比较差异均有显著性意义（P〈0．05）。 结论：体外检测生物材料诱导C2C12细胞产生碱性磷酸酶含量，可作为评定材料成骨活性的指标。     

Evidence that IGF-binding protein-5 functions as a growth factor

Recent studies support the concept that IGF-binding protein-5 (IGFBP-5) stimulates bone formation, at least in part, via IGF-independent mechanisms. To evaluate this hypothesis further, we evaluated in vitro and in vivo effects of IGFBP-5 on bone formation parameters using the IGF-I knockout (KO) mouse. Treatment of serum-free cultures of osteoblast clones derived from IGF-I KO mice with recombinant human IGFBP-5 increased both proliferation and alkaline phosphatase (ALP) activity in a dose-dependent manner, an effect comparable to that seen with IGF-I. IGF-II levels from media conditioned by osteoblasts derived from IGF-I KO mouse were below those detectable by RIA. To eliminate possible actions of IGF-II, if any was produced by osteoblasts derived from IGF-I knockout mice, the IGFBP-5 effect was studied in the presence of exogenously added IGFBP-4, a potent inhibitor of IGF-II actions in bone cells. Addition of IGFBP-4 blocked IGF-I- but not IGFBP-5-induced cell proliferation in osteoblasts derived from IGF-I knockout mice. Consistent with in vitro results, a single local injection of IGFBP-5 to the outer periosteum of the parietal bone of IGF-I KO mice increased ALP activity and osteocalcin levels of calvarial bone extracts. The magnitudes of IGFBP-5-induced increases in ALP and osteocalcin in parietal bone extracts of IGF-I KO mice were comparable to those seen in C3H mice. In contrast to IGFBP-5, local administration of IGFBP-4 had no significant effect on bone formation in C3H and IGF-I KO mice. These results provide the first direct evidence to our knowledge that IGFBP-5 functions as a growth factor that stimulates its actions in part via an IGF-independent mechanism.     

缺氧对大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的：探讨缺氧对体外培养成骨细胞的影响。方法：应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察缺氧对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶（ALP）表达及矿化结节形成的影响。结果：缺氧具有抑制成骨细胞增殖，降低ALP活性及矿化结节形成的数量的作用，并随缺氧时间的增加而更加明显。结论：缺氧具有抑制体外培养成骨细胞增殖、分化成熟及延缓矿化的作用。