电磁辐射对大鼠睾丸P450scc mRNA表达及睾酮合成的影响和防护

目的:探讨电磁辐射对大鼠睾丸合成睾酮(T)的影响及其机制,评价铜丝网的防护效果。方法:采用Wistar雄性大鼠,随机分为对照组(n=60)、无屏蔽电磁辐照组(n=60)和铜丝网全身屏蔽辐射组(n=60),电磁辐照后分别取3、6、24、72h各时相点各组大鼠15只;采用放射免疫法(RIA)分别测定电磁辐照后3、6、24、72h及对照组血清T含量,反转录聚合酶链反应(RTPCR)测定各组睾丸组织中细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)mRNA水平。结果:无屏蔽辐照组辐照后3h血清T含量和P450sccmRNA水平均明显低于对照组(分别较对照组降低83.9%,56.9%;P均<0.01),6h略有回升,但仍明显低于对照组(分别较对照组降低54.8%,27.3%;P均<0.01),24h恢复到正常水平,72h再次出现明显降低(分别较对照组降低60.1%,56.1%;P均<0.01);采用铜丝网全身屏蔽后,血清T和睾丸组织P450sccmRNA表达均未见明显变化。结论:电磁辐射能在转录水平影响睾丸间质细胞P450sccmRNA的表达,从而降低T的合成;铜丝网屏蔽具有较好的防护效果。     

卵泡抑制蛋白对大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响

目的 :探讨卵泡抑制蛋白 ( follistatin,FS)对离体大鼠睾丸间质细胞 ( L eydigcell)分泌睾酮的影响。方法 :用 Percoll梯度分离法分离和培养 Wistar雄鼠 ( 2 2 0～ 2 50 g)睾丸的 L eydig细胞。分别观察 FS( rh FS-2 88)、Ca2 +以及 FS加 Ca2 +在基础状态 (不加h CG)和刺激状态 ( h CG 1 .0 IU/ L )对 Leydig细胞分泌睾酮的影响。结果 :FS抑制基础和刺激状态的睾酮分泌 ,并与剂量相关。 Ca2 +亦有抑制作用 ,但在 1 0 0 mmol/ L时出现逸脱现象。FS加 Ca2 +表现为与剂量相关的抑制作用。结果 :FS呈剂量依赖性抑制睾酮分泌 ,Ca2 +可能是 FS的第二信使 ,单独高浓度 Ca2 +出现抑制逸脱的机制未明。     

非酶糖基化终末产物抑制大鼠睾丸Leydig细胞睾酮的生成

目的:研究非酶糖基化终末产物受体(RAGE)在大鼠睾丸Leydig细胞上的表达及非酶糖基化终末产物(AGEs)对大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的抑制作用。方法:原代培养大鼠睾丸Leydig细胞,RT-PCR和免疫荧光技术检测RACE在大鼠Leydig细胞上表达,不同浓度AGEs处理Leydig细胞(25、50、100、200μg/ml),ELISA法测定睾酮分泌量。结果:RT-PCR和免疫荧光结果表明RAGE在大鼠睾丸Leydig细胞上表达,不同浓度AGEs处理后,人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导的Leydig细胞睾酮合成量呈剂量浓度依赖性下降,与对照组相比,50、100、200μg/ml AGEs处理组差异显著(P0.01)。结论:大鼠Leydig细胞上存在RAGE受体,AGEs显著抑制原代培养大鼠Leydig细胞睾酮的分泌。     

c-jun对离体睾丸间质细胞睾酮分泌作用的机理研究

目的本研究拟通过c-jun反义寡脱氧核苷酸(ASODNs)观察c-jun在调节hCG促进睾丸间质细胞(leydigcells,LC)睾酮分泌中的作用机制。方法用c-junASODNs拮抗c-jun,再加用cAMP观察其对睾酮分泌的影响,用放射免疫方法检测睾酮水平。结果hCG可刺激LC睾酮分泌,是LC功能研究的有用模型。c-junASODNs呈剂量依赖性地抑制hCG诱导下的离体LC的睾酮分泌(P<0.01)。加用cAMP后睾酮分泌增加。结论c-jun促进hCG诱导的大鼠LC的睾酮分泌,c-jun表达可能与cAMP相关。     

壬基酚对体外培养大鼠睾丸间质细胞分泌雄激素影响的研究

目的:探讨壬基酚(NP)对大鼠睾丸间质细胞分泌雄激素的影响。方法:建立体外培养大鼠睾丸间质细胞原代培养体系,并采用3β-HSD染色对间质细胞进行鉴定;以不同浓度的NP(分别为较低浓度0.005、0.015、0.025、0.05、0.1μmol/L及稍高浓度0.5、5.0、10.0、15.0、25.0μmol/L)作用于间质细胞,采用3β-HSD染色观察间质细胞形态的变化,并检测间质细胞分泌睾酮含量的变化。结果:间质细胞经NP处理后,细胞形态发生变化,细胞密度降低,NP作用浓度达到25μmol/L时,细胞发生裂解。0.005及0.015μmol/L NP处理后,间质细胞睾酮分泌量增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。NP浓度达到0.5μmol/L后,睾酮分泌量与对照组相比显著下降(P<0.05),且当NP浓度为5,10,15,25μmol/L时睾酮分泌量下降极为明显(P<0.01)。结论:低浓度NP能促进间质细胞分泌睾酮,而高浓度NP抑制睾酮分泌,且高浓度NP能诱导间质细胞坏死。     

内源性睾酮抑制对大鼠睾丸内α-catenin表达的影响

目的:检测十一酸睾酮注射致内源性睾酮抑制的大鼠睾丸内α-caten in的表达情况。方法:成年雄性SD大鼠10只,随机分为对照组(肌注生理盐水)和睾酮组[肌注十一酸睾酮19 mg/(kg.15 d)],共130 d。制作睾丸石蜡切片,采用抗α-caten in多克隆抗体进行免疫组化染色。结果:在对照组中,α-caten in主要表达于精子细胞顶体、管周肌样细胞和Leyd ig细胞胞质。睾酮组的Leyd ig细胞明显萎缩,-αcaten in的表达明显减弱或消失,而精子细胞顶体和管周肌样细胞胞质的-αcaten in表达无明显改变。结论:内源性睾酮抑制所致生精细胞排列疏松或脱落与粘附分子-αcaten in的表达无关。-αcaten in有可能成为识别Leyd ig细胞的标记物。     

内皮素-1对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌影响的可能作用机理

目的 :了解内皮素 1(ET 1)影响大鼠睾丸离体间质细胞睾酮分泌的可能作用机理 ,为男性不育症治疗提供一定的理论基础。　方法 :采用大鼠睾丸间质细胞体外孵育技术以及12 5I 睾酮放射免疫法 ,观察ET 1对间质细胞睾酮分泌的影响及其可能作用机理。　结果 :内皮素受体A(ETA)、内皮素受体B(ETB)受体拮抗剂均可逆转ET 1对大鼠离体间质细胞睾酮分泌的抑制作用 ,但Ca2 +通道阻滞剂维拉帕米 (VER)未表现此作用。　结论 :ET 1通过与ETA及ETB结合而发挥作用。其Ca2 +的动员可能不是细胞外Ca2 +进入细胞内。     

邻苯二甲酸单乙基己基酯对原代培养大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)的代谢产物邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对SD大鼠体外培养睾丸间质细胞(Leydigcells)睾酮合成的影响。方法:建立SD大鼠睾丸Leydig细胞体外原代培养模型,MEHP染毒剂量组分为对照(0μmol/L)、62.5、125、250、500、1000μmol/L,通过噻唑蓝(MTT)法观察线粒体活性,放射免疫法测定睾酮浓度,RTPCR法测定Leydig细胞类固醇合成急性调节蛋白(StAR)mRNA表达。结果:MEHP染毒24h后,Leydig细胞线粒体活性在250μmol/L时显著上升,1000μmol/L时显著下降,与对照组比较,差异均有显著性(P<0.01)。基础状态及人绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激状态下,Leydig细胞睾酮合成水平均呈上升趋势,与对照组相比,250、500μmol/L剂量组差异均有显著性(P<0.01)。Leydig细胞StARmRNA的表达在62.5、125、250μmol/L时与对照组相比均未见有显著性改变,在500、1000μmol/L时显著下降(P<0.01)。结论:MEHP直接影响原代培养Leydig细胞线粒体活性及睾酮合成,胆固醇跨膜转运的调节因子StAR与MEHP引起睾酮合成上升的原因可能无关。     

Cox7a2对睾酮合成及StAR、P450scc和3β-HSD蛋白表达影响研究

目的研究Cox7a2在TM3小鼠睾丸Leyidg细胞中过农达对LH诱导的睾酮合成及对StAR(睾酮合成调节关键蛋白),P450scc(胆同醇侧链裂解酶),3β—HSD(3β-羟基甾脱氢酶)蛋白表达的影响。方法构建Cox7a2荧光表达载体,转染TM3小鼠睾丸Leydig细胞,融合蛋白表达及LH诱导刺激后,ELISA测定细胞上清液中睾酮含量,Western blot检测StAR蛋白、P450scc和3β-HSD酶的表达变化。结果Cox7a2在TM3小鼠睾丸Leydig细胞中过表达抑制LH诱导的睾酮合成,降低StAR蛋白的表达,对P450scc和3β-HSD的蛋白表达没有明显影响。结论在TM3小鼠睾丸Leydig细胞中,Cox7a2至少通过抑制类固醇快速调节蛋白StAR的表达,进而抑制LH诱导的睾酮合成。     

雄蚕益肾方对LOH大鼠Leydig细胞胆固醇转运蛋白、睾酮合成酶和SF-1表达的影响

目的:探讨雄蚕益肾方对LOH大鼠Leydig细胞胆固醇转运蛋白、睾酮合成酶和SF-1表达的影响。方法:25只18月龄雄性SD大鼠随机均分为模型组、丙酸睾酮组、雄蚕益肾方-低、中、高剂量组,2月龄雄性SD大鼠5只设为正常组。雄蚕益肾方-低、中、高剂量组分别给予10.4、20.8、41.6 g/(kg·d)体重剂量的雄蚕益肾方配方颗粒剂灌胃;丙酸睾酮组大鼠肌注5.21 mg/(kg·d).体重剂量的丙酸睾酮,每周3次;正常组和模型组给予相同体积的蒸馏水灌胃,均连续28 d。实验结束后取睾丸组织进行Western印迹检测StAR、TSPO、CYP11A1、HSD3B7、HSD17B4和SF-1蛋白表达。结果:模型组大鼠睾丸组织StAR、TSPO、CYP11A1、HSD3B7、HSD17B4蛋白和SF-1表达均显著低于正常组(P<0.05);与模型组相比,雄蚕益肾方-低、中、高各剂量组大鼠睾丸组织StAR、TSPO、CYP11A1、HSD3B7、HSD17B4蛋白和SF-1显著增高(P<0.05)。结论:雄蚕益肾方能上调LOH大鼠睾丸组织胆固醇转运蛋白(StAR、TSPO)、睾酮合成酶(CYP11A1、HSD3B7、HSD17B4)以及上游转录因子SF-1表达水平,可能是其干预LOH的机制之一。     

Bromocriptine, a Dopamine Agonist, Directly Inhibits Testosterone Production by Rat Leydig Cells

We investigated the direct effects of bromocriptine (BR) on both basal and hCG-stimulated testosterone production by rat collagenase-dispersed Leydig cells. In a final volume of 2.2 ml, 2.10(6) Leydig cells were incubated at 33 degrees C for 3 h either alone or with various amounts of hCG (1. 10. 10(2). 10(3). 10(4) mUI/vial) and BR (1.5 10(-9), 1.5 10(-7), 1.5 10(-5) M); BR was dissolved in 20 microliters of ethanol. BR (1.5 10(-5) M) decreased significantly both basal and hCG-stimulated testosterone production whereas at lower doses, BR had no effect. These results suggest that the dopamine itself may regulate rat Leydig cell function and that there is room for criticism of BR-induced hypoprolactinemia as an experimental model to study the effect of prolactin on the androgenic function.     

老年大鼠睾丸间质细胞结构和功能变化的实验研究

目的:研究老年SD大鼠(PADAM动物模型)睾丸间质细胞形态、分泌功能变化,探讨老年大鼠睾丸间质细胞的功能状态。方法:分别取青年SD大鼠和老年各20只,静脉血测定血清总睾酮和游离睾酮的浓度,并通过组织切片和透射电镜观察两个年龄组大鼠睾丸间质细胞形态学变化;此外,分别用hCG、Forskolin刺激体外培养的两个年龄组大鼠的睾丸间质细胞,比较培养基中睾酮和孕酮的浓度。结果:老年大鼠的血清总睾酮[(3.07±0.75)nmol/L]和游离睾酮[(0.71±0.65)nmol/L]均比青年大鼠[(10.89±6.11)nmol/L和(2.42±1.02)nmol/L]显著降低(P<0.05);细胞形态有较显著差异;体外培养的大鼠睾丸间质细胞分泌能力显著降低(P<0.05)。结论:老年SD大鼠血清睾酮和游离睾酮浓度显著低于青年SD大鼠,原因在于睾酮合成酶系统整体功能衰退。     

睾丸Leydig细胞干细胞研究进展

Leyd ig细胞是机体合成和分泌雄激素的主要细胞,利用Leyd ig细胞干细胞的体外定向诱导分化扩增至具有雄激素合成功能的成熟细胞再植入机体中,对雄激素缺乏的治疗具有非常广阔的临床应用前景。     

Morphometric and Functional Investigation on the Leydig Cells in Experimental Unilateral Cryptorchism in the Rat

By distal gubernaculotomy on one side in newborn rats testicular descent was prevented on that side, and unilateral cryptorchid rats were obtained. Leydig cell structure and function was studied at 20, 30 and 100 days of age, using both morphometric and biochemical techniques. Up to 30 days of age no differences in structure of the interstitium and Leydig cells, or testicular testosterone concentration were observed between the scrotal and the abdominal testicles. In contrast the tubular cells in the abdominal testicle were highly damaged already at 30 days of age. The abdominal testicles of the 100-day-old rats contained the same total number of Leydig cells as the scrotal testicles, but the size of these cells, and the testicular testosterone concentration were highly reduced. Thus Leydig cell function in the cryptorchid testicle was maintained at 30 days but highly impaired at 100 days of age. Tubular damage occurred prior to the Leydig cell malfunction.     

大鼠睾丸间质细胞移植的实验研究

目的:观察大鼠同种异体睾丸间质细胞移植后的血清睾酮变化水平。方法:采用Percoll方法分离提取SD大鼠两侧睾丸间质细胞,异体移植后每月测定受体血清睾酮1次,连续3次。结果:睾丸间质细胞移植后,受体动物血清睾酮含量逐渐升高。移植术后3个月,血清睾酮水平明显上升,与出生后2个月内的动物比较,差异具有显著性。结论:异体睾丸间质细胞移植治疗男性原发性性腺功能低下症可能具有良好的应用前景。     

银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠睾丸间质细胞雄激素合成的影响

目的:研究银杏叶提取物(EGB)对2型糖尿病大鼠睾丸间质细胞雄激素合成的影响。方法:雄性SD大鼠30只,随机均分成3组:正常对照组、2型糖尿病组、EGB治疗组。用光镜和透射电镜观察EGB对2型糖尿病大鼠睾丸的形态学改变;ELISA法检测血清LH、T水平;半定量RT-PCR检测睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素P450侧链裂解酶(P450scc)、细胞色素P45017a-羟化酶(P450c17)、3β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型(3β-HSD1)、17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅲ型(17β-HSD3)的mRNA水平。结果:糖尿病组光镜下睾丸间质细胞较正常对照组缩小;透射电镜下见到间质细胞核固缩,胞质内内质网减少。糖尿病组血清LH及T水平显著低于正常对照组(P<0.05);睾丸组织P450scc的mRNA水平显著低于正常对照组(P<0.01),StAR、17β-HSD3及3β-HSD1的mRNA水平也明显低于正常对照组(P<0.05),P450c17基因表达呈下降趋势(P>0.05);EGB治疗12周与糖尿病组比较睾丸组织病理改变较轻,血清LH、T含量升高(P<0.05),StAR、P450scc的mRNA水平升高(P<0.05),P450c17、17β-HSD3及3β-HSD1的mRNA水平呈上升趋势(P>0.05)。结论:EGB能减轻糖尿病大鼠睾丸损害并使2型糖尿病大鼠睾丸间质细胞合成和分泌T能力增强。     

大鼠睾丸Leydig细胞的培养和鉴定

目的:研究体外培养大鼠睾丸Leyd ig细胞的有效方法。方法:原代培养大鼠睾丸Leyd ig细胞,用4 U/m l人绒毛膜促性腺激素(hCG)作用细胞,对照组未用hCG,放射免疫法测定培养液中睾酮浓度,3β羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)免疫组化染色观察睾丸Leyd ig细胞形态和生物学特性。结果:培养细胞成分均一、增殖旺盛、分化率高。接种72 h后大鼠睾丸Leyd ig细胞纯度达95%。接种后24 h内,hCG刺激组较对照组睾酮分泌量明显提高(P<0.05)。结论:体外培养的睾丸Leyd ig细胞可分泌高浓度的睾酮;睾丸Leyd ig细胞的纯化和培养方法的建立,可为中老年男性雄激素部分缺乏综合征睾酮替代治疗的基础和临床研究提供一条可行的思路。