肾上腺髓质素在大鼠急性脊髓损伤中的表达及其意义

目的 观察肾上腺髓质素(AM)在大鼠损伤脊髓中的表达及甲基强的松龙(MP)干预对AM表达的影响,并探讨脊髓损伤的保护作用机制.方法 Allen's WD法制成大鼠急性脊髓损伤模型.免疫组化观察脊髓损伤后AM表达的变化;HE染色观察脊髓损伤情况.观察MP干预对脊髓损伤后AM表达、神经功能和组织学的影响.设假手术组、脊髓损伤非MP干预组(非干预组)作为对照.结果 免疫组化各组中均有AM的表达,其中假手术组AM持续低表达;MP组及非干预组AM表达增高,8h均达峰值,以后渐低,但伤后3d仍高于假手术组(P＜0.05);MP组AM表达于伤后8 h、1 d、2 d、3 d高于非干预组(P＜0.05),3组间在伤后2 h、6d时差异无显著性(P＞0.05).形态学显示假手术组无明显异常,MP组病理变化轻于非干预组.假手术组神经功能评分均高于非干预组和MP组(P＜0.01),MP组伤后3 d,6 d的神经功能评分高于非干预组(P＜0.05).结论 AM表达增高可能是脊髓损伤自身保护机制之一.通过药物上调AM的表达可起到保护脊髓的作用,这为AM治疗脊髓损伤的临床应用提供了实验依据.     

甲基强的松龙对大鼠损伤脊髓BDNF、NMDA受体表达及神经行为学的影响

目的研究甲基强的松龙(MP)对脊髓损伤大鼠神经行为学、脑源性神经营养因子(BDNF)和N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的影响。方法建立脊髓损伤(SCI)大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、SCI组和MP治疗组,每组16只。MP治疗组在SCI术后8h内肌注50mg/kg MP,此后肌注量每天减少10mg/kg,1次/d,共5d。各组取8只大鼠在术后1d、7d、28d行后肢运动功能BBB评分,并于术后28d用免疫组织化学染色观察各组BDNF在脊髓的分布、阳性细胞定位及数量变化;术后13d用[3 H]MK-801放射性配基测定各组另8只大鼠脊髓中NMDA受体亲和力(Kd)和最大结合容量(Bmax)。结果 SCI后MP治疗组中BDNF阳性细胞数较SCI组增加(P<0.05),但亚细胞定位仍分布在细胞浆,且BBB评分亦较SCI组高;NMDA受体Kd高于SCI组,Bmax较SCI组低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MP能改善脊髓损伤大鼠后肢功能,增加BDNF含量和降低NMDA受体表达。     

大鼠急性脊髓损伤中肾上腺髓质素的表达规律及意义

目的：观察肾上腺髓质素（AM）在大鼠损伤脊髓中的表达,探讨其表达规律及意义。方法：实验动物随机分为空白组、假手术组、脊髓损伤组,Allen’s WD法制成大鼠急性脊髓损伤模型。免疫组化观察脊髓损伤（spinal cord injury SCI）后AM的表达;HE染色观察脊髓损伤情况。结果：免疫组化各组中均有AM的表达,其中空白组、假手术组AM持续低表达;损伤组AM表达伤后4h既有升高,8h达峰值,以后渐低,至48h均高于同期空白组、假手术组（P〈0．01）;3组AM表达于伤后2h、72h差异无统计学意义（P〉0．05）。形态学显示空白组、假手术组无明显异常,损伤组随损伤后时间推移出现轻重程度不同的病理变化。结论：急性脊髓损伤后AM表达增高并存在动态变化,AM参与了SCI的发生发展过程并在其中起着重要作用;适时应用AM或用药物调控AM表达可能会减轻脊髓的继发性损伤。     

汉防己甲素对大鼠急性脊髓损伤后 bcl-2 和 bax 表达的影响

目的 观察汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2和bax表达的影响,探讨其对脊髓损伤的作用机制. 方法 成年SD大鼠100只,分为4组:假手术组10只,损伤对照组、甲基强的松龙(methylprednisolone, MP)治疗组、Tet治疗组各30只.胸8、9椎板切除后,损伤对照组,MP、Tet治疗组用加速压迫型Allen's打击法制成脊髓损伤模型,后2组动物于制模前,伤后24、48 h尾静脉分别注射MP 90 mg/kg和1% Tet 22.5 mg/kg.各组大鼠于术后8 h,1、3、7、14 d行运动功能BBB评分,取损伤段脊髓行石蜡切片HE染色,观察脊髓组织的形态结构变化,免疫组织化学染色检测细胞凋亡因子bcl-2、bax表达. 结果 伤后7、14 d MP、Tet治疗组大鼠运动功能评分显著高于损伤对照组(P<0.05),各时间点MP、Tet治疗组评分无统计学意义(P>0.05);MP、Tet治疗组脊髓组织损害较损伤对照组轻,术后8 h至14 d动态观察,3～7 d损伤表现最为严重,达到损伤高峰期;假手术组中bax、bcl-2阳性细胞数较少,MP、Tet治疗组bax阳性细胞数少于损伤对照组(P<0.05),而bcl-2阳性细胞数多于损伤对照组(P<0.05). 结论 Tet可通过增加bcl-2表达和降低bax表达来抑制急性脊髓损伤后神经细胞的凋亡,有益于脊髓组织的保护,促进运动功能的恢复.     

Caspase-1及其激活的IL-18在大鼠急性脊髓组织损伤后的表达及意义

目的 探讨Caspase-1及其激活的细胞因子白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)在大鼠急性脊髓组织损伤(SCI)后的表达及意义.方法 成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠48只随机分为对照组和脊髓损伤组,每组24只.两组依据损伤后取材时间各再分4个亚组.脊髓损伤组应用改良的Allen's重物打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型,对照组只做T9全椎板切除术.分别于术后6h、1d、3d、7d处死各组大鼠,以损伤部位为中心取材,HE染色观察脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测Caspase-1、IL-18的表达情况.结果 对照组大鼠脊髓组织中少量细胞Caspase-1、IL-18表达阳性.脊髓损伤后6h,损伤组Caspase-1、IL-18的表达高于对照组,1d继续增高,3d表达最多,7d略有降低,但仍高于对照组.脊髓损伤组各时间点脊髓组织中Caspase-1和IL-18表达阳性的细胞数较对照组显著增高(P＜0.01).结论 正常大鼠脊髓组织内存在少量Caspase-1、IL-18的表达.大鼠脊髓损伤后,Caspase-1和IL-18的表达迅速增强.Caspase-1和IL-18的表达增强表明其可能参与了脊髓继发性损伤,并可能是损伤性因素之一.     

大鼠脊髓损伤后MMP-9表达和细胞凋亡的研究

目的 探讨MMP-9在SCI后继发性细胞凋亡中的作用,为继发性脊髓损伤的治疗提供新的思路.方法 成年雄性SD大鼠84只,随机分为假手术组与损伤组(spinal cord injury group,SCI group),两组大鼠均于SCI后1 h、6 h、12 h、1 d、3 d、5 d、7 d(每个时间点n=6)处死大鼠取材.免疫组织化学染色观察损伤脊髓组织MMP-9表达并测平均光密度值(optical density,OD),原位缺口末端标记法(TUNEL法)观察损伤脊髓组织细胞凋亡并计算凋亡指数(apoptotic Index,AI).分别对各时间点损伤脊髓组织MMP-9平均光密度和细胞凋亡指数进行组间、组内比较,并对损伤组各时间点MMP-9平均光密度和细胞凋亡指数进行相关性分析.结果 大鼠SCI后损伤节段脊髓组织中MMP-9表达和细胞凋亡指数明显增多,24 h达高峰,持续至3 d后逐渐下降,7 d仍有表达.结论 大鼠SCI后损伤节段脊髓组织的MMP-9表达与细胞凋亡呈正相关关系(相关系数r=0.936,P<0.05).     

金腰带治疗对大鼠损伤脊髓BDNF、NMDA受体表达及行为学的影响

目的研究中草药金腰带治疗对脊髓损伤(SCI)大鼠行为学、脑源性神经营养因子(BDNF)表达及N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体水平的影响。方法 SD成年雄性大鼠,随机分为假手术组、脊髓挫伤组(SCI组)、脊髓挫伤后金腰带治疗组〔每日1次胃内灌服金腰带50mg/(kg.d),共7次〕。各组大鼠均在术后(0d、3d、10d、28d)进行后肢行为学评价(BBB运动功能评分)。术后13d,每组取8只大鼠麻醉后取损伤脊髓T10液氮中保存,采用[3 H]MK-801放射性配基分析法测定NMDA受体亲和力(Kd)和最大结合数量(Bmax);取术后28d组大鼠损伤脊髓进行免疫组织化学染色,观察BDNF在脊髓的定位及表达变化。结果 BBB评分SCI组大鼠各时间点均低于假手术组(P均<0.05),而金腰带治疗组术后各时间点均高于SCI组(P均<0.05)。SCI后13d,脊髓内NMDA受体Bmax较假手术组增高(P<0.05),金腰带组较SCI组减少(P<0.05);SCI后28d损伤处脊髓腹角、背角BDNF阳性神经元数量较假手术组增加(P<0.05),金腰带治疗组BDNF阳性神经元数量较SCI组进一步增加(P<0.05)。结论金腰带治疗能有效改善SCI大鼠后肢运动功能,增加脊髓组织中BDNF的表达和通过影响脊髓NMDA受体减轻脊髓继发性损伤,对SCI有一定的治疗与保护作用。     

利拉鲁肽对脊髓损伤修复作用的探讨

目的探讨利拉鲁肽对大鼠脊髓损伤(SCI)神经的修复作用及机制。方法将雌性大鼠分为利拉鲁肽干预组、正常对照组,每组24只。采用大鼠脊髓动脉瘤夹夹伤法建立大鼠脊髓损伤模型。术后分别给予利拉鲁肽(0.12 mg/kg,0.5 m L)、生理盐水(0.5 m L)。术后2 d应用细胞凋亡技术检测神经细胞损伤程度,术后3 d采用Western blotting蛋白印迹技术检测损伤脊髓组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)表达水平,术后14 d对损伤脊髓组织行HE染色观察组织形态变化并计算损伤空洞面积,术后3 d至28 d定期记录大鼠后肢行为学BBB评分。结果 SCI后利拉鲁肽干预组细胞凋亡、炎性因子表达、空洞面积计算均较正常对照组降低(P<0.05),利拉鲁肽干预组双后肢BBB评分同期较正常对照组高(P<0.05)。结论脊髓损伤后给予利拉鲁肽可降低细胞凋亡及急性炎症反应,有利于后期神经组织修复以及运动功能恢复。     

高压氧对大鼠脊髓损伤后Bcl-2表达的影响

目的 探讨高压氧对脊髓损伤后Bcl-2蛋白表达的影响及意义.方法 将54只健康成年雌性Wister大鼠随机分为假手术组6只、损伤组和实验组各24只.采用Allen's法制作大鼠脊髓损伤模型,术后实验组进行高压氧治疗,损伤组和假手术组动物常规饲养.分别在各个时间点取材,进行常规HE和免疫组织化学染色,观察脊髓组织学及Bcl-2蛋白表达情况.结果 HE染色可见损伤组脊髓组织结构紊乱,组织出血、水肿、空泡变性.实验组脊髓结构相对完整,组织水肿程度减轻.免疫组化染色可见假手术组偶见Bcl-2阳性表达,损伤组和实验组均可见Bcl-2表达,实验组Bcl-2阳性表达较高,与损伤组相比具有显著性差异(P＜0.05).结论 高压氧可能通过增加脊髓损伤后Bcl-2蛋白表达抑制神经细胞凋亡,从而对脊髓损伤起到治疗作用.     

电针对大鼠脊髓损伤后损伤处远端少突胶质细胞的影响

目的 探讨电针对大鼠脊髓损伤后损伤处少突胶质细胞的影响,为探索电针治疗脊髓损伤提供实验依据.方法 将60只SD大鼠随机分为3组,即电针治疗组(EA)、脊髓损伤组(SCI)、对照组(SHAM),每组各20只大鼠.EA组接受SCI手术+EA治疗;SCI组接受SCI手术;SHAM组仅接受椎板切除术.在术后24 h,术后7d、14d、21d、28 d取脊髓损伤处组织行免疫组化染色,测定APC阳性细胞数的表达变化.结果 同一时间点不同组之间,少突胶质细胞数目比较,电针组明显高于其他组;组之间的对比差异有统计学意义(P＜0.05).电针组之间不同时间点对比,随着电针时间的增长,细胞数不断增长;不同时间点之间的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 电针能促使大鼠脊髓损伤后损伤处远端少突胶质细胞的增殖与分化.     

rHuEPO与MP干预对急性脊髓损伤大鼠影响的对比研究

目的:对比性观察甲基强的松龙(MP)与重组人红细胞生成素(rHuEPO)对急性脊髓损伤(ASCI)大鼠的神经保护作用以及对损伤后脊髓组织中IL-10表达的影响。方法:以改良Allen’s撞击法制作ASCI大鼠模型后随机分为实验对照组、rHuEPO干预组、MP干预组,28d后测量大鼠斜板试验临界角度与运动诱发电位(MEP),并进行脊髓组织病理形态学观察与IL-10的免疫组织化学染色观察。结果:与实验对照组相比,rHuE-PO干预组、MP干预组大鼠斜板试验临界角度出现明显增加,MEP波幅变化率明显增加,脊髓组织病理损伤减轻、IL-10表达明显上调,结果均有统计学意义(P<0.05)。结论:应用rHuEPO干预实验性大鼠脊髓损伤可上调脊髓组织中抗炎性细胞因子IL-10的表达,但与MP干预相比其结果仍有一定差距;二者对ASCI后大鼠的神经功能损伤均有一定的保护作用。     

褪黑素对大鼠脊髓损伤后iNOS表达的影响

目的：探讨褪黑素对大鼠脊髓损伤后诱生型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用改良Allen’S撞击法制备脊髓损伤模型;成年SD大鼠110只随机分为假损伤组、损伤组和药物治疗组3组,其中损伤组和药物治疗组各50只,分5个时间点（8小时、24小时、72小时、7天、14天）处死;假损伤组10只,于手术后14天处死,采用HE染色和免疫组化检测脊髓损伤后脊髓组织中iNOS蛋白的表达。结果：与损伤组比较,药物治疗组大鼠损伤后脊髓组织iNOS表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：褪黑素可通过抑制iNOS蛋白表达对大鼠脊髓损伤起保护作用。     

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素(minocycline)对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及细胞凋亡的影响.方法成年大鼠随机分为脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组(A组)和应用生理盐水对照组(B组),损伤后不同时间点取材,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化;用免疫组化染色检测iN-OS的表达变化;原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞;采用开放场地试验BBB评分和斜板试验,评价神经功能.结果HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组.A、B两组均发现凋亡细胞及iNOS表达,神经细胞凋亡指数及iNOS表达均为B组＞A组(P＜0.05).治疗组神经功能改善优于B组.结论二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡.     

不同强度减重步行训练对脊髓损伤模型大鼠脊髓组织中TrkB和BDNF蛋白表达水平的影响及其对运动功能恢复的促进作用

目的：观察减重步行训练（BWSTT）对脊髓损伤（SCI）大鼠脊髓组织中受体酪氨酸蛋白激酶B （TrkB）及脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白表达水平和运动功能的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：50只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、SCI组、BWSTT-A组（低强度训练）、BWSTT-B组（中强度训练）和BWSTT-C组（高强度训练）,每组10只。应用自制的打击器制备SCI模型。假手术组大鼠仅行椎板切除术暴露硬脊膜,不予打击,直接缝合,术后不给予任何治疗;SCI组大鼠造模后不给予任何治疗;BWSTT组大鼠在SCI后给予康复锻炼,3组大鼠步行速度分别为7、15和21 cm·s^-1。在造模后35 d采用Basso、Beattie和Bresnahan （BBB）评分评定SCI大鼠后肢功能恢复情况,免疫蛋白印记法检测各组大鼠脊髓组织中TrkB和BDNF蛋白表达水平,尼氏染色法检测各组大鼠脊髓尼氏小体的形态和数量。结果：与SCI组比较,BWSTT-B组和BWSTT-C组大鼠BBB评分升高（P<0.01）;与BWSTT-A组比较,BWSTT-B组和BWSTT-C组大鼠BBB评分升高（P<0.01）。免疫蛋白印记法检测,与假手术组比较,SCI组大鼠脊髓组织中TrkB蛋白表达水平降低（P<0.01）;与SCI组比较,BWSTT-B组和BWSTT-C组大鼠脊髓组织中TrkB蛋白表达水平升高（P<0.01）;与假手术组比较,SCI组大鼠脊髓组织中BDNF蛋白表达水平降低（P<0.01）;与SCI组比较,BWSTT-B组和BWSTT-C组大鼠脊髓组织中BDNF蛋白表达水平均升高（P<0.01）。尼氏染色法检测,与SCI组比较,BWSTT组细胞尼氏小体数量较多,细胞形态较好。结论：中和高强度的BWSTT可在一定程度上促进SCI大鼠运动功能恢复,其机制可能与上调脊髓组织中TrkB和BDNF蛋白的表达有关。     

内毒素预处理激活大鼠急性脊髓损伤Nrf2蛋白抑制Caspase-3的表达

目的 研究大鼠急性脊髓损伤及经内毒素预处理后损伤脊髓中转录因子Nrf2及凋亡蛋白Caaspase-3的表达.方法SD大鼠132只,随机数字表法分为假手术组、模型组和LPS预处理组.采用改良Allen's打击法制作SD大鼠急性脊髓损伤(acute spinal cord injury,ASCI)模型,在术后1、3、5、7...     

黄芪注射液对大鼠急性脊髓损伤的神经保护作用及机制研究

目的 基于细胞凋亡Fas和TRAIL死亡受体信号通路探讨黄芪注射液对大鼠急性脊髓损伤(SCI)的神经保护作用及机制。方法 40只健康的雄性SD大鼠随机分为假手术组,SCI模型组,黄芪注射液低、中、高剂量(1、2、4 mL·kg^-1)组,每组8只。采用改良的重物打击法构建大鼠急性SCI模型;按照BBB评分和Rivlin斜板实验评价大鼠运动功能;苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin, HE)染色检测脊髓组织病理变化;尼氏染色法检测脊髓神经元细胞损伤程度;高通量转录组测序分析差异表达基因;qPCR验证基因转录水平的表达量;利用TUNEL试剂盒检测各组脊髓细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡通路关键蛋白表达水平。结果 BBB评分和斜板试验结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠表现出明显的运动功能障碍;HE染色显示模型组脊髓组织病理病变严重;模型组尼氏染色着色较浅,神经元细胞损伤严重;与假手术组比较,模型组脊髓中4 597个基因差异表达,Fas、TRAIL、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Bax蛋白表达显著上调(P<0....     

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后caspase-3、p53表达的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素（minocycline）对caspase-3、053表达及细胞凋亡的影响。方法成年大鼠随机分为脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组（A组）和应用生理盐水对照组（B组）,损伤后不同时间点（4h、8h、1d、3d、7d、14d、21d）取材,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测caspase-3、053表达阳性细胞,原位末端标记法（TUNEL法）标记凋亡细胞,及荧光酶联测定法测定caspase-3的活性。结果HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组。A、B两组均发现凋亡细胞及caspase-3、053表达,神经细胞凋亡指数及caspase-3、053表达均为B组〉A组（P〈0．05）。结论二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后caspase-3、053表达及细胞凋亡。     

预防使用米诺环素对胸段脊髓全横断大鼠运动功能恢复的影响

目的：观察预防使用米诺环素对脊髓全横断大鼠运动功能的作用。方法：30只雄性Wistar大鼠随机分为3组,假手术组、脊髓横断模型组和米诺环素预处理组,每组10只大鼠。米诺环素预处理组大鼠术前腹腔注射米诺环素（90mg/kg）。各组大鼠于术后1、7、14、21d应用改良Tarlov评分和BBB评分方法对大鼠后肢行为功能进行评价。第22d将所有实验大鼠处死后取损伤段脊髓,行HE染色。结果：术后第1d,脊髓横断模型组和米诺环素预处理组大鼠Tarlov评分障碍率、BBS评分比较无明显差别（P〉0.05）;米诺环素预处理组术后第7d到第21dTarlov评分障碍率明显低于脊髓横断模型组,BBB评分明显高于脊髓横断模型组（P〈0.01）。HE染色结果显示,脊髓横断模型组大鼠脊髓出现明显病理变化,米诺环素预处理组大鼠脊髓的病理变化明显减轻。结论：预防使用米诺环素可明显促进胸段脊髓横断大鼠运动功能的恢复。     

SCI大鼠脊髓前角细胞自噬相关蛋白Beclin-1表达的变化

目的：：观察脊髓全横断损伤对脊髓前角细胞Beclin-1表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠随机分为模型组和假手术组,建立大鼠第2腰髓全横断损伤模型,分别于损伤后6h、1d、3d、7d、14d、21d取3-4腰髓,采用免疫荧光染色法观察大鼠脊髓前角细胞自噬相关蛋白Beclin-1的表达情况。结果：与假手术组相比,模型组损伤后各时间点大鼠脊髓前角Beclin-1免疫阳性细胞数明显升高(P＜0.01,P＜0.05）。脊髓损伤后3d脊髓前角细胞Beclin-1免疫阳性细胞数达到高峰,21d最低。结论：Beclin-1可能参与了神经元自噬状态的改变。     

甲基强的松龙对脊髓半横断大鼠腓肠肌乙酰胆碱酯酶表达的影响

 目的 探讨注射甲基强的松龙(MP)对大鼠脊髓半横断后运动终板乙酰胆碱酯酶(AChE)表达的影响。方法 Wistar雄性大鼠96只,包括假手术组(A组,n=16)、脊髓半横断组(B组,n=40)和脊髓半横断后MP治疗组(C组,n=40),B、C组分别作右侧脊髓半横断术,C组术后MP干预;术后1 d、3 d、1周、2周、4周分别取右下肢腓肠肌制作冰冻切片,铜-铁氰化物改良染色法检测AChE的表达,比较各组标本阳性表达区的平均光密度值。结果 3组大鼠腓肠肌冰冻切片中均有表达AChE的棕色染色区;脊髓半横断术后1 d,3组大鼠腓肠肌切片中AChE染色区的平均光密度值无统计学差异(P > 0.05);术后3 d,B、C组AChE染色区平均光密度值均低于A组,差异有统计学意义（P 0.05);术后1周、2周,B组AChE染色区平均光密度值低于C组,B、C组均低于A组,差异均有统计学意义（P 0.05),B组仍维持低水平,平均光密度值低于A、C组（P<0.05）。结论 脊髓半横断后运动终板AChE水平下降,MP早期干预有助于骨骼肌运动终板AChE表达水平的恢复。