反义NF-κBp65寡核苷酸对食管鳞癌细胞EC9706增殖及凋亡的影响

目的:探讨反义NF-κB p65寡核苷酸对食管鳞癌细胞EC9706增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法:利用转染试剂KeyGenl介导将反义NF-κB p65寡核苷酸片段体外转染人人食管鳞癌EC9706细胞株.转染72 h后.应用RT-PCR、流式细胞术检测EC9706细胞中NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞增殖周期.以单纯转染试剂为阴性对照,未转染的EC9706细胞为空白对照.结果:转染72 h后,反义组EC9706细胞中NF-κB p65 mRNA的表达及蛋白标记率与阴性对照和空白对照组比较,下降明显.差异具有统计学意义(P<0.05);反义组EC9706细胞的增殖能力与阴性对照和空白对照组相比明显受抑,抑制率为15.0%;反义组EC9706凋亡细胞数较阴性对照、空白对照组升高,差异具有统计学意义(P<0.05);反义组G.期的EC9706细胞数较阴性对照、空白对照组升高,而S期细胞数较阴性对照、空白对照组降低,差异均具有统计学意义(P均<0.05).结论:特异性阻断NF-κB p65的转录.可以抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡,参与细胞周期调控.NF-κB p65有望成为肿瘤基因治疗的靶点.     

辣椒素对食管鳞状细胞癌细胞凋亡和NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨辣椒素对食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)细胞凋亡和NF-κB信号通路的影响。方法:采用Westernblot法检测食管鳞癌EC9706和Eca109细胞中IκBα、磷酸化IκBα(pIκBα)、p50和p65蛋白的表达及0、50、100和200μmol/L辣椒素作用后pIκBα和Bcl-2蛋白的表达;凝胶滞留实验检测2种食管鳞癌细胞胞核中NF-κB与DNA的结合活性及0、100和200μmol/L辣椒素作用对NF-κB与DNA结合活性的影响。2种食管鳞癌细胞分别分为对照组、5-FU组、辣椒素组和联合组,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果:2种食管鳞癌细胞胞质均表达IκBα和pIκBα蛋白,胞核均表达p50和p65蛋白;随辣椒素作用浓度的增加,pIκBα和Bcl-2蛋白的表达逐渐下降,NF-κB与DNA的结合活性也逐渐下降。辣椒素可促进2种食管鳞癌细胞的凋亡,与5-FU联合使用时,凋亡细胞显著增加(EC9706:F辣椒素=2535.497,F交互=113.034,P<0.001;Eca109:F辣椒素=5984.040,F交互=5.150,P<0.05)。结论:辣椒素可能通过抑制IκBα的磷酸化阻断NF-κB信号通路,促进食管鳞癌细胞凋亡。     

小白菊内酯对EC9706细胞增殖及VEGF、NF-κB P65蛋白表达的影响

目的:探讨小白菊内酯(PTL)对食管癌EC9706细胞的增殖、血管内皮生长因子(VEGF)及核转录因子-κB P65(NF-κB P65)蛋白表达的影响.方法:倒置显微镜下观察不同浓度(20、40和80 μmol/L)的PTL作用48 h后EC9706细胞的形态学变化;MTT法检测20、40和80 μmol/L PTL及20 μmol/L PTL与25 mg/L 5-氟尿嘧啶(5-FU)联用对EC9706细胞增殖的影响;免疫细胞化学法检测20和40 μmol/L的PTL作用72 h后EC9706细胞VEGF和NF-κB P65蛋白表达的改变.结果:①PTL作用EC9706细胞48 h后,细胞数量减少,细胞固缩变圆,核浓缩、核质分布不清,细胞溶解碎裂.②PTL及联合组作用于EC9706细胞24、48和72 h后,相同时间段各组细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(χ224 h=31.420,P<0.001;χ248 h=34.590,P<0.001;χ272 h=38.190,P<0.001).PTL对EC9706细胞的增殖有抑制作用;细胞培养72 h后PTL与5-FU联合组对EC9706细胞的抑制作用与50 mg/L 5-FU组相当.③PTL作用EC9706细胞后,与对照组比较VEGF和NF-κB P65蛋白表达均降低(χ2NF-κB P65=25.120,P<0.001;χ2VEGF=22.190,P<0.001).结论:PTL能抑制EC9706细胞的增殖,增加EC9706对5-Fu的敏感性;PTL的抗肿瘤机制可能与抑制NF-κB传导通路有关.     

RNAi抑制NF—KB基因增强肺癌细胞对TRAIL敏感性的研究

目的:探讨RNAi靶向沉默NF-κB基因对TRAIL诱导肺癌细胞凋亡的影响.方法:使用NF-κB p65 siRNA转染肺癌A549细胞48 h,实验分为空白对照、脂质体对照以及干扰实验3组.采用RT-PCR法测定肺癌A549细胞内NF-κB p65 mRNA的表达,MTT法检测siRNA转染前后TRAIL对A549细胞生长抑制作用的变化.结果:与空白对照和脂质体对照组相比,siRNA组具有明显抑制肺癌A549细胞NF-κB p65mRNA表达的作用(P<0.01).MTT实验表明,转染siRNA后TRAIL对A549细胞的生长抑制作用明显增强,但在同一浓度,转染NF-κB p65 siRNA的细胞与未转染组相比,细胞增殖活性明显下降(P<0.05).结论:应用RNAi技术可有效干扰NF-κB p65的表达,抑制肺癌A549细胞的增殖,并可增加肺癌细胞对TRAIL的敏感性.     

siRNA阻断NF—κB信号通路对肝癌细胞增殖的影响

目的：通过阻断肝癌细胞中NF—kappaB（NF—κB）信号通路，研究它与肿瘤细胞增殖、耐药的关系。方法：利用RNA干扰（RNAi）技术阻断NF—κB亚单位p65的表达，RT—PCR和Westernblotring法检测p65的mRNA及蛋白表达，MTT法检测细胞的增殖情况，以及联合应用不同浓度化疗药5-Fu对肿瘤细胞增殖的影响。结果：NF—κB的亚单位p65在肝癌细胞质中高表达，p65siRNA可有效地阻断蛋白表达。结论：应用RNAi技术可以有效地干扰p65表达，抑制肝癌细胞增殖，增强对化疗药5-Fu的敏感性。     

发卡样NF-κB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究

目的采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,通过构建人NF-κB p65基因的特异性siRNA真核表达载体,体外观察对NF-κB基因的沉默作用,以及对内毒素(LPS)刺激后NF-κB活性的调控作用.方法采用基因克隆技术,将合成的发卡样特异性p65 RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体(pPUR/U6),构建p65 siRNA的表达载体,转染体外ECV-304细胞,48h后观测胞内NF-κB p65亚单位蛋白水平(Western blotting)、及对LPS(10 μg/ml)刺激后NF-gB活化的抑制作用.结果①成功构建发卡样p65 siRNA(small interfere RNA)真核表达载体(pPUR/U6-p65 siRNA);②pPURyU6-p65 siRNA转染(脂质体法)ECV-304细胞,48 h后明显下调胞内P65蛋白水平;③转染pPUR/U6-p65 siRNA的细胞,明显抑制LPS(10μg/ml)刺激后NF-κB的活化.结论该RNA干扰真核表达载体能明显干扰p65蛋白的表达、释放,进而抑制NF-κB的活化,可望进一步抑制细胞的过度炎症反应,减轻创伤组织的受损程度,促进创伤后组织的修复.     

Rab3D对食管鳞状细胞癌细胞系增殖及细胞周期素D1表达的影响

目的探讨Rab3D对人食管鳞状细胞癌细胞系增殖及细胞周期素D1(Cyclin D1)表达的影响。方法采用Western blot法从8株人食管鳞状细胞癌细胞系KYSE410、KYSE450、TE-1、TE-7、KYSE510、KYSE150、EC9706、EC109中筛选出Rab3D表达较低的2株食管鳞状细胞癌细胞株KYSE410、KYSE450及Rab3D表达较高的2株食管鳞状细胞癌细胞株EC109、EC9706,将KYSE410、KYSE450细胞株分别分为转染Rab3D质粒的Rab3D组和转染空载体的对照组,将EC109、EC9706细胞株分别分为转染Rab3D小干扰RNA(siRNA)的Rab3D siRNA组和转染阴性对照的阴性对照组,MTT法检测Rab3D对食管鳞状细胞癌细胞的增殖及Cyclin D1表达的影响,Western blot检测Cyclin D1蛋白的表达。结果 KYSE410、KYSE450食管鳞状细胞癌细胞株转染Rab3D组细胞的吸光度与本细胞株对照组比较,在转染后12 h差异无统计学意义(P>0.05),转染后24、48、72 h均高于本细胞株对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。EC109、EC9706食管鳞状细胞癌细胞株转染siRNA组细胞的吸光度在转染后12、24 h与本细胞株阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),转染后48、72 h均低于本细胞株阴性对照组(P<0.05)。KYSE410、KYSE450细胞转染Rab3D组Cyclin D1蛋白表达水平较本细胞株对照组增高(P<0.05);EC109、EC9706细胞转染siRNA组的Cyclin D1蛋白表达水平较本细胞株阴性对照组降低(P<0.05)。结论 Rab3D促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖,机制可能与促进Cyclin D1的表达有关。     

siRNA阻断NF—κB通路抑制HepG2细胞增殖及NK杀伤抵抗性

目的利用小于扰RNA（siRNA）阻断肝癌细胞HepG2中的NF—κB信号通路,研究其对肝癌细胞增殖活性及NK杀伤敏感性的影响。方法利用NF—κB p65 siRNA转染HepG2细胞,48h后分别进行Western blotting及ELISA检测NF—κB p65蛋白的表达;MTT法检测转染后细胞的增殖变化及对NK-92细胞杀伤敏感性的变化。结果转染NF—κB p65 siRNA后肝癌细胞中NF—κB p65蛋白表达的水平明显下降;MTT检测发现,与对照组相比,NF—κB p65 siRNA能够明显抑制HepG2细胞的增殖活性,同时使其对NK-92细胞介导的杀伤敏感性增加（P〈0．05）。结论siRNA阻断NF—κB通路能够抑制肝癌细胞增殖及对NK细胞杀伤的抵抗性。     

肝素酶特异性RNAi对人食管癌EC9706细胞肝素酶基因表达的影响

目的:探讨RNAi技术对人食管癌EC9706细胞肝素酶(heparanase,Hpa)基因表达的影响.方法:针对Hpa不同基因位点设计合成寡核苷酸,然后转录为小分子干扰RNA(siRNA),分别用浓度为10 μmol/L、15 μmol/L、20 μmol/L的siRNA经LipofectamineTM 2000脂质体介导转染EC9706细胞72 h,同时设无关序列组及不转染组.采用完整细胞原位杂交技术观察各组EC9706细胞中Hpa基因的表达.结果:siRNA可有效抑制人食管癌EC9706细胞Hpa基因的表达,以15 μmol/L的siRNA作用效应最强,但不同浓度siRNA两两相比,差异均无统计学意义(P＞0.05),不同浓度siRNA对Hpa基因表达的抑制效应均显著强于无关序列组及不转染组(P＜0.05).结论:RNAi技术可有效抑制人食管癌EC9706细胞Hpa基因的表达.     

姜黄素抑制耐紫杉醇食管癌细胞的上皮间质转化作用及机制探讨

目的 建立耐紫杉醇食管癌(EC)细胞系EC9706/PTX,观察姜黄素对EC9706/PTX细胞上皮间质转化(EMT)的抑制作用并探讨其机制,为耐药EC的治疗提供理论依据.方法 用中等浓度间歇作用法建立耐紫杉醇EC细胞EC9706/PTX,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞耐药指数及交叉耐药性,检测不同浓度姜黄素对EC9706/PTX细胞增殖的抑制.使用细胞骨架染色、划痕实验、Transwell侵袭实验检测姜黄素对EC9706/PTX细胞形态变化、迁移和侵袭能力的影响.荧光定量PCR及蛋白免疫印迹(Western blot)检测姜黄素对EC9706/PTX细胞中EMT相关分子标志物E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维连接蛋白在mRNA和蛋白水平的表达影响.Western blot检测姜黄素对EC9706/PTX细胞中转录因子NF-κB p65及Snail在蛋白水平的表达影响.结果 EC9706/PTX对紫杉醇的耐药指数为28.4,对顺铂、阿霉素产生交叉耐药性,姜黄素能够抑制EC9706/PTX细胞的增殖.在20 μmol/L浓度的姜黄素作用下,EC9706/PTX细胞的迁移和侵袭能力明显降低.荧光定量PCR及West-ern blot检测显示,细胞耐药后E-钙黏蛋白的表达明显下调,而N-钙黏蛋白表达则明显上调,姜黄素逆转了这一现象.Westernblot检测提示,EC细胞发生耐药及EMT后,NF-κB p65及Snail蛋白的表达增强,姜黄素阻断了这一作用.结论 姜黄素能够抑制紫杉醇耐药EC细胞的增殖并且能够逆转紫杉醇耐药EC细胞的EMT现象,其机制可能是通过抑制NF-κB-Snail信号通路实现的.     

小白菊内酯诱导人食管癌细胞凋亡的研究

目的 探讨小白菊内酯(Parthenolide,PN)对人食管癌细胞EC9706增殖和凋亡的影响及PN的作用机制.方法 MTT法检测PN(20、40和80μmoL/L)作用EC 970624、48和72 h细胞增殖活性的变化;流式细胞术和免疫细胞化学法分别检测PN处理的EC9706细胞凋亡和NF-K Bp65蛋白表达的变化.结果 ①PN抑制EC 9706的增殖活性,呈时间和剂量依赖性.②PN作用EC 970648 h后,NF-κ Bp65蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).③PN作用EC 970672h后,细胞早期和晚期凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 PN抑制EC9706细胞的增殖,诱导其凋亡,作用机制与抑制NF-κB有关.     

NF-κB信号通路的阻断对皮肤鳞癌SCL-1细胞凋亡的影响

目的：利用siRNA技术抑制核因子-kappa B（nuclear factor-kappa B,NF-κB）亚单位p65基因的表达,研究其对p65表达的抑制作用,并探讨其对皮肤鳞癌SCL-1细胞凋亡的影响。方法：将终浓度为50 nmol/L的p65 siRNA转染皮肤鳞癌SCL-1细胞,通过RT-PCR检测p65 mRNA的表达;利用Western blotting检测p65、bcl-2和bax蛋白表达,利用Caspase-Glo^®-3/7,8和9检测试剂盒检测caspase-3/9的活性;最后通过流式细胞术检测细胞凋亡。结果：p65 siRNA转染SCL-1细胞后的48 h,p65 mRNA的表达水平最低,与0 h相比, 差异有统计学意义（0.23±0.10 vs. 0.66±0.05, P<0.05）;转染48 h后,p65和bcl-2蛋白表达水平下调,而促凋亡蛋白bax的表达上升,进一步caspase-3/9的活性也显著升高。流式细胞术结果表明,p65 siRNA能明显诱导SCL-1细胞发生凋亡,其早期凋亡的比率为20.28%±1.87%,显著高于未处理组和对照siRNA组（凋亡率分别为9.13%±1.51%和9.37%±1.38%,F=47.532,P<0.01）。结论：p65 siRNA能够阻断皮肤鳞癌细胞中NF-κB信号通路,并下调抑凋亡蛋白bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白bax的表达以及提高caspase的活性,提示NF-κB信号通路有望成为皮肤鳞癌基因治疗的分子靶点。     

重组腺病毒介导siRNA抑制大鼠肝细胞NF-κB p65的表达

目的构建重组腺病毒Ad-NF-κB p65-siRNA，并观察其抑制大鼠肝细胞NF-κB p65表达的效果。方法（1）筛选针对大鼠NF-κB p65特异性siRNA靶序列，设计合成其对应的双链DNA，插入到pShuttle—H1中，得到psiRNA—NF-κB p65质粒。将构建好的psiRNA—NF-κB p65质粒与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行重组，酶切鉴定、293A细胞包装、扩增，得到重组腺病毒Ad—NF-κB p65-siRNA。（2）将构建好的Ad—NF-κB p65-siRNA转染大鼠肝细胞株BRL，48h后，采用RT-PCR和Western blot检测NF-κB p65表达。结果成功地构建了重组腺病毒Ad—NF-κB p65-siRNA；Ad—NF-κB p65-siRNA转染大鼠肝细胞48h后，NF—κB的mRNA水平下降了81％，细胞内的NF—κB蛋白浓度下降了71％。结论腺病毒介导的RNAi技术体外显著地抑制大鼠肝细胞NF-κB p65的表达。     

Notch1-NICD胞内结构域真核表达载体的构建及其初步功能分析

目的:构建包含Notch1胞内结构域的Notch1-NICD真核表达载体及绿色荧光蛋白载体并转染食管鳞状细胞癌细胞株EC9706及Eca109,并对Notch1-NICD1在食管鳞状细胞癌中的功能进行初步探索.方法:根据Gen-Bank上的Notch1-NICD序列设计扩增引物,由RT-PCR扩增NICD片段,测序鉴定,并通过Blast进行序列比对,然后回收目的片段并与真核表达载体pcDNA3.1(+)相连,构建Notch1-NICD真核表达载体pNotch1-NICD1,同时将扩增的NICD与pEGFP-C1载体相连构建绿色荧光蛋白表达载体pENotch1-NICD1,并转染EC9706及Eca109,观察Notch1在细胞巾的定位及其途径的激活状态.同时将pNotch1-NICD1真核表达载体转染EC9706及Eca109,用MTT法分别在24 h、48 h、72 h、96 h及120 h观察外源性Notch1片段的导入对EC9706及Eca109细胞增殖的影响.结果:通过RT-PCR获得1个Notch1胞内区片段,并成功构建了包含Notch1胞内区结构域的绿色荧光蛋白载体及真核表达载体.转染pENotch1-NICD1后,Notch1在胞质和胞核内均有表达,表明Notch1信号通路被激活.此外,MTT结果表明转染Notch1-NICD1片段的食管鳞状细胞癌细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05).结论:成功构建了Notch1绿色荧光蛋白表达载体及pcDNA3.1(+)真核表达载体.外源Notch1片段的引入能够明显抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖,提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞状细胞癌的一个潜在的分子靶点.     

EC9706和Eca109细胞中雷帕霉素靶蛋白信号通路激活状态观察

目的:观察低分化的食管鳞癌细胞EC9706和高分化的食管鳞癌细胞Eca109中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路的激活状态.方法:采用细胞免疫组织化学方法检测EC9706和Eca109细胞中mTOR及其下游靶分子p70S6K的表达和定位,并采用RT-PCR和Western blot方法分别从mRNA及蛋白水平检测此通路的活性.结果:在2种细胞中mTOR均有表达,且在EC9706细胞中的表达水平高于Eca109(P＜0.05);EC9706细胞中mTOR下游靶点的磷酸化水平高于Eca109细胞(P＜0.05).结论:在2种食管鳞癌细胞中,mTOR信号通路均特异性激活;但激活状态与细胞的分化程度有关,细胞分化程度低者通路的激活水平较高.     

硒酸酯多糖对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响

目的研究硒酸酯多糖(KSC)对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法甲基噻唑基四唑(MTT)法检测不同浓度KSC对Eca109细胞增殖的影响;流式细胞术观察KSC对Eca109细胞凋亡的影响;Westernblot技术检测KSC对Eca109细胞核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平的影响。结果 KSC可明显抑制Eca109的增殖(P<0.05),并呈时间及浓度依赖性;经KSC作用后,Eca109细胞的凋亡率随KSC作用时间的延长(24、48、72h)及KSC浓度的增加(30、60、120μg/mL)而明显升高(P<0.01);KSC(60、120μg/mL)显著下调Eca109细胞核中NF-κB蛋白水平(P<0.01)。结论 KSC对Eca109细胞具有抑制增殖、诱导凋亡作用,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

应用RNA干扰技术沉默NF—κB基因对肺癌A549细胞的影响

目的：运用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术阻断肺癌细胞株A549中NF-κB p65基因表达,并研究该基因沉默后对细胞增殖的影响。方法：实验以肺癌A549细胞株为材料,分为空白对照、脂质体对照以及siRNA干扰实验共3组。以体外转录法合成dsRNA,并用脂质体转染A549细胞株,RT-PCR法测定肺癌A549细胞内NF-κBp65mRNA的表达。ELISA法检测NF—κB亚单位p65的DNA结合活性的改变。MTT检测细胞增殖情况。结果：与空白对照和脂质体对照组相比,SiR—NA组具有明显抑制肺癌A549细胞NF-κBp65mRNA表达的作用（P〈O．01）,同时ELISA结果显示,siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于空白对照和脂质体对照组（P〈0．05）。MTT法显示siRNA组中细胞增殖减慢,生长受到抑制。结论：应用RNAi技术可以有效干扰肺癌A549细胞NF-κBp65的表达。     

核因子-κB亚单位p65 siRNA对胃癌细胞端粒酶活性的影响

目的:采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默胃癌细胞核因子-kappa B(nuclearfactor-κB,NF-κB)亚单位p65后,观察其对细胞端粒酶活性的影响.方法:采用p65小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染胃癌细胞后,分别采用western blot和凝胶迟滞电泳检测胃癌细胞p65蛋白水平和NF-κB活性,采用MTT检测胃癌细胞增殖,采用TRAP-ELISA方法检测对胃癌细胞端粒酶活性.结果:转染组细胞p65蛋白和NF-κB活性明显被抑制,且成浓度依赖性.转染组胃癌细胞增殖明显受到抑制,呈浓度依赖性.TRAP-ELISA检测显示,转染组胃癌细胞端粒酶活性明显被抑制,且呈浓度依赖性.结论:针对NF-κB重要亚单位的p65 siRNA可抑制胃癌细胞端粒酶活性.     

小干扰RNA沉默NF-κB P65基因表达对胰腺癌细胞株PANC-1增殖与凋亡的影响

目的:运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术阻断胰腺癌细胞株PANC-1中NF-κB P65基因表达,并研究该基因沉默后对细胞增殖与凋亡的影响.方法:利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的人NF-κB P65的小干扰RNA转染入胰腺癌细胞株PANC-1中.RT-PCR法测定胰腺癌细胞内NF-κB P65mRNA与细胞周期素D1(cyclinD1)mRNA的表达.ELISA法检测NF-κB亚单位P65的DNA结合活性的改变.MTT法测定细胞生长曲线观察细胞增殖的抑制情况.流式细胞仪测定细胞凋亡率及细胞周期的变化.结果:化学合成的人NF-κB P65 siRNA能有效地抑制PANC-1细胞中NF-κB P65与cyclinD1基因在mRNA水平上的表达(P＜0.01),同时ELISA结果显示,RelA siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).RelA siRNA组中细胞增殖减慢,凋亡率较对照组明显增加(P＜0.01),同时G1期细胞所占的比例较对照组增加了10%,S期和G2/M期细胞则分别减少了4%与6%.结论:体外实验初步证明NF-κB P65基因在胰腺癌细胞株增殖分化与凋亡方面扮演重要角色,通过沉默其表达可抑制胰腺癌细胞株PANC-1增殖并诱导其凋亡.     

EC9706、Eca109细胞系中S100A4及基质金属蛋白酶-2的表达

目的:检测食管鳞状细胞癌EC9706、Eca109细胞系中S100A4及基质金属蛋白酶-2(MMP-2,的表达.方法:采用免疫细胞化学法和Western blotting法检测EC9706、Eca109中S100A4蛋白及MMP-2蛋白的表达,采用RT-PCR法检测EC9706和Eca109细胞中S100A4与MMP-2的mRNA表达.结果:EC9706、Eca109细胞系中均存在S100A4与MMP-2蛋白及mRNA的表达,S100A4蛋白及MMP-2蛋白的阳性表达主要定位于胞浆中,Eca109细胞系中偶见胞核着色.Eca109细胞系中S100A4与MMP-2蛋白和S100A4 mRNA的表达量高于EC9706(P<0.05).结论:在EC9706、Eca109细胞系中均有S100A4、MMP-2的表达,提示S100A4可能在食管鳞状细胞癌的发生、发展中起重要作用.