封闭端粒酶活性基因治疗对瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响

目的 研究封闭端粒酶活性基因治疗对瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响,以寻找新的瘢痕疙瘩治疗方法.方法 选取深圳蛇口人民医院烧伤整形科12例耳垂瘢痕疙瘩患者的瘢痕组织,将其进行细胞培养,并随机分为对照组和实验组,实验组在对照组的基础上采用重组腺病毒Ad-TPTD进行处理,然后比较两组的细胞活性检测结果、细胞周期分析、端粒酶活性.结果 实验组的成纤维细胞活性检测结果、细胞周期分析G0+G1期、S期及G2+M期)、端粒酶活性分别为(0.4317±0.0272)、(60.53±4.21)、(15.45±3.23)、(24.11±3.17)及(0.3235±0.0274),对照组分别为(0.7342±0.0236)、(45.63±3.67)、(21.61±3.12)、(32.74±3.34)及(0.5473±0.0331),实验组的成纤维细胞活性、细胞增殖、端粒酶活性受到明显抑制,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 Ad-TPTD可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,封闭端粒酶活性基因治疗有望成为一种新的更为有效的瘢痕疙瘩防治方法.     

干扰素在瘢痕形成过程中对成纤维细胞的调节作用

为了研究干扰素对成纤维细胞的作用,应用了光镜和电镜的方法,观察了创面应用干扰素后对肉芽组织形成的影响。结果显示,创面局部应用于干扰素后,光镜下可见新生肉芽组织中的成纤维细胞受到抑制,电镜观察成纤维细胞内合成蛋白质和多糖的细胞器减少。并且应用于干扰素后,创面面积较对照组明显缩小。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成及其调节因素的实验研究

瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成及其调节因素的实验研究Ａｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｃｏｌｌａｇｅｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｔｈｅｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｂｙｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｓｉｎｋｅｌｏｉｄｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ何威，刘荣卿...     

增殖细胞核抗原在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达及意义

探讨瘢痕和正常皮肤成纤维细胞原位增殖情况。方法对２４例瘢痕疙瘩组织和周围正常皮肤行增殖细胞核抗原免疫组织化学染色，比较瘢痕瘩和正常皮肤增殖指数。结果２４例颜痕疙瘩ＰＩ平均值为１．４４，两者经配对ｔ检验，Ｐ〈０．００１，两者具有显著性差异，表明瘢痕疙瘩成纤维细胞增活跃，结论成纤维细胞异常增殖在瘢痕瘩发生，发展中起重要作用。     

periostin在人瘢痕成纤维细胞中的表达及氢化可的松对其表达的影响

目的:通过检测periostin在人过度增生性瘢痕成纤维细胞中的表达及其对氢化可的松作用的反应,探讨periostin在瘢痕形成中的作用.方法:采用组织块培养法体外培养原代成纤维细胞,以RT-PCR及免疫细胞化学技术分别检测24例人瘢痕和正常皮肤成纤维细胞中periostin的mRNA和蛋白的表达,氢化可的松(0.1g /L)的作用时间为96h.结果:periostin的mRNA在瘢痕疙瘩成纤维细胞(1.645±0.549)和增生性瘢痕成纤维细胞(1.084±0.396)中的表达均高于正常皮肤成纤维细胞(0.274±0.215;P<0.05),两者分别增加83%和75%.氢化可的松作用后,瘢痕疙瘩成纤维细胞中和增生性瘢痕成纤维细胞中periostin的mRNA表达量分别减少32%和47%,两者与氢化可的松作用前相比差异均有统计学意义.Periostin蛋白主要分布在成纤维细胞核周围的胞浆中,它在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的成纤维细胞中的表达(分别为91.815±0.961和70.166±2.250)高于在正常皮肤成纤维细胞中的表达(41.011±1.576,P<0.01),两者分别增加55%和42%.结果:periostin在过度增生性瘢痕成纤维细胞中的表达增高,氢化可的松可能抑制其基因的表达;periostin可能影响过度增生性瘢痕成纤维细胞的功能,它可能是一种瘢痕相关基因.     

异常瘢痕成纤维细胞凋亡研究

目的：明确异常瘢痕成纤维细胞的凋亡特性及激素的机理。方法：以瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤（各６例）为材料,在体外对低血清和氟美松对不同成纤维细胞的细胞凋亡及怀凋亡有关的蛋白Ｂａｘ和Ｂｃｌ－２的表达的影响进行了研究;同时,对６例增生性瘢痕局部注射康宁克通后３ｄ和７ｄ的细胞凋亡和相关基因ｃ－ｍｙｃ的表达进行了在体研究。结果：在低血清中发生细胞凋亡正常皮肤成纤维细胞多于增生性瘢痕,增生性瘢痕多于瘢痕疙     

芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖作用.方法 应用瘢痕疙瘩组织诱导成纤维细胞;芦丁分为0、50、100、200、300μmol/L等5个浓度梯度, 通过CCK-8及Ed U实验观察芦丁对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响, 通过Western blot检测芦丁对TGF-β/Smad信号通路的影响.结果 当浓度低于300μmol/L时, 芦丁对瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞增殖产生明显抑制作用 (P<0.01) , 并且呈剂量依赖性;Ed U实验结果显示, 瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞DNA合成受到芦丁的抑制作用;50、100、200μmol/L条件下, 芦丁可以明显地抑制瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞TGF-β1及Smad2的表达.结论 芦丁通过调控TGF-β/Smad信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖.     

五倍子瘢痕膏水溶液对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的探讨五倍子瘢痕膏治疗瘢痕疙瘩的作用机制。方法采取瘢痕疙瘩成纤维细胞原代培养,用四甲基偶氮唑盐比色法测定不同浓度药物对原代培养的第4~8代瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响。结果各不同浓度的药物组对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖都有一定的抑制作用(P<0.01),并且有时间和剂量依赖。对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞周期研究表明,各药物组S期的细胞百分比显著高于对照组,其间有显著性差异(P<0.01);而各药物组G2 M期细胞百分比却明显低于对照组,其间有显著性差异(P<0.01),并且这种对S期的阻滞作用和对G2 M期细胞的抑制作用随药物浓度的增加而增强(P<0.05)。结论不同浓度的五倍子瘢痕膏水溶液对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖都有一定的抑制作用,其重要的作用途径是使瘢痕疙瘩成纤维细胞S期的细胞数上升,出现S期阻滞,分裂期的细胞数下降,从而抑制了瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,并且这种抑制作用有一定的时间和剂量依赖。     

秋水仙碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及细胞周期的影响

目的：研究秋水仙碱对体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞（keloid Fibroblast,KFB）的毒性作用及细胞周期的影响。方法：体外培养人KFB,不同浓度秋水仙碱（1、2、4、8、16、32 μg/ml）处理细胞。采用MTT比色法检测KFB的毒性作用;采用流式细胞仪检测秋水仙碱对KFB的细胞周期（G2期）的影响。结果：MTT法结果显示1 μg/ml组（12.56±0.79）%,2 μg/ml组（27.35±0.50）%,4 μg/ml组（34.36±0.25）%,8 μg/ml组（39.38±0.57）%,16 μg/ml组（40.38±0.23）%,32 μg/ml组（44.65±0.60）%（F=2440.178,P=0.000）;流式细胞仪检测结果显示空白对照组（0.67±0.46）%,1 μg/ml组（4.26±1.51）%,2 μg/ml组（24.51±4.69）%,4 μg/ml组（45.12±2.75）%,8 μg/ml组（55.81±5.04）%,16 μg/ml组（69.90±3.61）%,32 μg/ml组（85.53±2.06）%,F=491.609,P=0.000。秋水仙碱能抑制细胞的生长,对细胞分裂前期（G2期）产生影响,并呈时间依赖性和药物浓度依赖性。结论：在24 h时间点,秋水仙碱在1～32 μg/ml浓度范围内可调控细胞的生长及细胞周期,可以抑制瘢痕疙瘩的形成。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞中有关传导分子mRNA水平的实验研究

目的比较转化生长因子βSmad蛋白（TGF-β／Smads）信号传导通路中有关传导分子mRNA在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达。方法切取确诊为瘢痕疙瘩患者的部分瘢痕疙瘩组织,正常者的皮肤作为对照组;细胞总RNA提取;反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测TIEG、Smad2、Smad7mRNA的表达。结果瘢痕疙瘩中成纤维细胞TIEG、Smad2 mRNA表达远高于正常皮肤,Smad7 mRNA表达低于正常皮肤（P〈0．05）。结论瘢痕疙瘩中的成纤维细胞表达TIEG增高,使表达Smad2增强,Smad7减弱,促使瘢痕生成。     

人瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad2特异siRNA的制备和活性鉴定

目的:探讨应用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)特异性抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞内Smad2基因表达,筛选高效特异性siRNA.方法:根据siRNA设计原则,针对人Smad2基因序列特征设计Smad2 特异siRNA(1-3),转染瘢痕疙瘩成纤维细胞,RT-PCR检测siRNA对Smad2基因的抑制效果.结果:Smad2 siRNA-3可有效抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad2基因的表达.随siRNA-3终浓度由50 nmol/L增加到100 nmol/L 及200 nmol/L,抑制效率逐渐增强(P<0.05);siRNA-3以终浓度200 nmol/L转染后24 h抑制效果最强,48 h逐渐减弱,但仍明显抑制(P<0.05).结论:应用RNA干扰技术可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad2 基因的表达,其抑制作用具有明显的时间、浓度依赖性.     

Fas介导下瘢痕成纤维细胞中死亡信号传导的研究

目的 研究和比较增生性瘢痕疙瘩成纤维细胞经Ｆａｓ单抗（ＦａｓＭｃａｂ）诱导产生调亡的能力，同时探讨Ｃａ＾２＋、氢过氧化物（ＬＰ０）在其相应开遍信号通道中的作用。方法 取手术切除的增生性瘢痕和瘢痕疙瘩患者的瘢痕及瘢痕疙者组织各６例，通过细胞６￣８代后，以ＦａｓＭｃａｂ为自理因素作用于增生性瘢痕及瘢痕疙瘩成纤维细胞２４ｈ，应用透射电镜证实凋亡现象的发生；应用流式仪检测及比较两者凋亡率。同时，应用粘附式     

瘢痕疙瘩不同部位成纤维细胞增殖凋亡的比较

目的 比较瘢痕疙瘩不同部位成纤维细胞生物学活性,以进一步探讨瘢痕疙瘩形成发展机制。方法 采用体外培养成纤维细胞技术对所有标本进行细胞培养,取6－8代细胞作为实验对象。噻唑蓝（MTT）比色法比较细胞接种后不同时间瘢痕疙瘩不同部位成纤维细胞的增殖活性和碘化丙啶（PI）染色、流式细胞仪比较它们在无血清培养条件下和在不同浓度Fas单克隆抗体（Fas mAb)作用下的细胞凋亡率。结果 瘢痕疙瘩边缘成纤维细胞增殖活性高于中央、两者均高于正常皮肤（P＜0．01）;无血清培养24h后,瘢痕疙瘩边缘及中央细胞凋亡率均有所增加,但两者之间无显著性差异（P＞0．05）;Fas mAb作用下,瘢痕疙瘩边缘及中央细胞均不能正常凋亡,两者之间无显著性差异（P＞0．05）。结论 瘢痕疙瘩不同部位成纤维细胞生物学活性不尽相同,瘢痕疙瘩边缘成纤维细胞增殖活性过高可导致其向周围不断增生并浸润生长。     

Fas基因转染瘢痕疙瘩成纤维细胞并诱导其凋亡的实验研究

目的 探讨瘢痕疙瘩成纤维细胞抗Fas单克隆抗体(mAb)诱导的凋亡，是否能通过正常Fas基因转染使凋亡率得以提高。方法利用分子克隆技术将人FaseDNA插入真核表达载体pcDNA3．1多克隆位点之间，以脂质体介导法将目的基因导人瘢痕疙瘩成纤维细胞，FasmAb诱导凋亡；通过琼脂糖凝胶电泳、HE染色和流式细胞仪检测瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的情况。结果 转基因的瘢痕疙瘩成纤维细胞经FasmAb作用后，在形态学上出现典型的细胞核固缩、碎裂；琼脂糖凝胶电泳显现特征性的“梯状”带；流式细胞仪检测凋亡率明显增加。对照组未见上述结果。结论瘢痕疙瘩成纤维细胞Fas诱导的凋亡异常，是由于Fas凋亡通道的“上游事件”无功能Fas蛋白造成，与通道下游无关。瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡异常可能是Fas基因突变引起．其与瘢痕疙瘩形成有密切关系。     

基质金属蛋白酶促进瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移及其意义

目的 通过研究瘢痕疙瘩中基质金属蛋白酶(MMPs)与成纤维细胞迁移的关系,探索从抑制成纤维细胞迁移角度治疗瘢痕疙瘩的新方案.方法 切取21例已确诊的瘢痕疙瘩组织为实验组,同例标本附带的正常皮肤组织为对照组,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法,定量检测成纤维细胞上清中Ⅰ型前胶原肽(PINP),基质金属蛋白酶-1、-2(MMP-1,MMP-2)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的含量;向实验组或对照组上清中分别添加MMPs抑制剂(GM 6001),利用Transwell细胞小室实验对成纤维细胞的迁移情况进行评估.结果 与正常皮肤成纤维细胞相比,瘢痕疙瘩组织MMP-1、MMP-2、TIMP-1和PINP表达均较高,有显著差异(P＜0.01);瘢痕疙瘩成纤维细胞迁徙活动与正常皮肤成纤维细胞相比,有显著差异(P＜0.01),而这些成纤维细胞的迁徙活动可被广谱MMPs抑制剂(GM 6001)所抑制,有显著差异(P＜0.01).结论 瘢痕疙瘩成纤维细胞高表达基质金属蛋白酶,产生的的基质金属蛋白酶增加了瘢痕疙瘩成纤维细胞的迁徙活动.     

细胞因子对瘢痕成纤维细胞影响的研究进展

瘢痕组织是创伤修复的必然产物，由于某些异常因素的调控，导致成纤维细胞过度增殖，同时过度分泌胶原形成瘢痕。最新研究表明，细胞因子介导的免疫应答对瘢痕形成起到了调控作用，这标志着创伤修复的研究已进入了一个全新的阶段。     

瘢痕疙瘩组织中胶原合成情况的研究

目的 探讨瘢痕疙瘩中胶原过度积累的形成原因。方法 用透射电镜观察瘢痕疙瘩的超微结构。用ABC法免疫组化检测瘢痕疙瘩中新合成的胶原。用地高辛标记的人Ⅰ型前胶原al(Ⅰ）cDNA探针与从瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中提取RNA进行斑点杂交。结果 在超微结构上,多数瘢痕疙瘩成纤维细胞拥有丰富的高度发达的粗面内质网。斑点杂交结果显示瘢痕疙瘩组织中Ⅰ型胶原mRNA水平升高。免疫组化染色显示瘢痕疙瘩中成纤维细胞有丰富的Ⅰ型前胶原表达。结论 在活跃增生的瘢痕疙瘩中,成纤维细胞胶原合成功能处于活化状态,胶原合成增加是瘢痕疙瘩中胶原过度积聚的重要原因。     

干扰素在瘢痕形成过程中对成纤维细胞的调节作用

为了研究干扰素对成纤维细胞的作用,应用了光镜和电镜的方法,观察了创面应用干扰素后对肉芽组织形成的影响。结果显示,创面局部应用干扰素后,光镜下可见新生肉芽组织中的成纤维细胞受到抑制,电镜观察成纤维细胞内合成蛋白质和多糖的细胞器减少。并且应用干扰素后,创面面积较对照组明显缩小（Ｐ＜００５）。结果提示,干扰素在创伤修复中可抑制肉芽组织中成纤维细胞的生长,对瘢痕形成及其异常增生有重要的意义。