三维立体培养中H460细胞MMP-2、MMP-9的表达

目的：建立肺癌细胞的三维立体培养模型,测定肺癌细胞在三维立体培养中的基质金属蛋白酶（MMPs）的表达,研究MMPs在肺癌侵袭与转移中的作用。方法：采用非小细胞肺癌H460细胞系建立肺癌细胞三维立体培养模型,观察癌细胞的生长,同时设置平面培养对照组,用明胶酶谱法测定两组不同时间点MMP-2、MMP-9。结果：H460细胞在立体胶原内生长良好,分泌有MMP-2、MMP-9,且分泌量多于平面培养组。结论：三维立体培养肺癌细胞能清晰地表达MMPs,是研究MMPs在癌细胞的侵袭与转移作用机制的一种可行方法。     

在细胞三维立体培养模型中观察VEGF对H460细胞MMP-2表达的影响

目的：建立H460细胞三维立体培养模型，探讨VEGF对H460细胞、MMP-2表达的影响。方法：采用非小细胞肺癌（NCLC）H460细胞系建立肺癌细胞三维立体培养模型，随机分成3组，给与不同浓度的VEGF，明胶酶谱法测定3组MMP-2的表达情况。结果：各组H460细胞生长良好；各实验组的H460细胞在不同浓度的VEGF和不同时间的作用下，细胞内的MMP-2的表达有差异。结论：VEGF能上调11460细胞MMP-2表达，且促进作用具有剂量一时间依赖性；三维立体培养模型有利于观察和研究基质金属蛋白酶在肿瘤侵袭和转移的作用。     

在细胞三维立体培养模型中观察VEGF对H460细胞MMP-2表达的影响

目的:建立H460细胞三维立体培养模型,探讨VEGF对H460细胞、MMP-2表达的影响.方法:采用非小细胞肺癌(NCLC)H460 细胞系建立肺癌细胞三维立体培养模型,随机分成3组,给与不同浓度的VEGF,明胶酶谱法测定3组MMP-2的表达情况.结果:各组H460细胞生长良好;各实验组的H460细胞在不同浓度的VEGF和不同时间的作用下,细胞内的MMP-2的表达有差异.结论:VEGF能上调H460细胞MMP-2表达,且促进作用具有剂量-时间依赖性;三维立体培养模型有利于观察和研究基质金属蛋白酶在肿瘤侵袭和转移的作用.     

TNF-α对三维立体培养的肺癌H460细胞MMP-2和MMP-9表达的影响

目的：研究肿瘤坏死因子-α对三维立体培养中的肺癌H460细胞基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的影响。方法：在天然活性Ⅰ型胶原中建立肺癌H460细胞三维立体培养模型,分为干预组和空白对照组,干预组加入肿瘤坏死因子-α,明胶酶谱法测定各组培养基中MMP-2、MMP-9的表达,采用Bergman法测定其中的羟脯氨酸含量,计算胶原降解量。结果：在肺癌H460细胞三维立体培养模型中,肿瘤坏死因子-α干预组MMP-2、MMP-9的表达高于空白对照组,胶原降解量高于空白对照组（P〈0.05）。结论：肿瘤坏死因子-α能上调MMP-2、MMP-9的表达,从而促进肺癌的侵袭与转移。     

TNF-α对三维立体培养的肺癌H460细胞MMP-2和MMP-9表达的影响

目的:研究肿瘤坏死因子-α对三维立体培养中的肺癌H460细胞基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的影响。方法:在天然活性Ⅰ型胶原中建立肺癌H460细胞三维立体培养模型,分为干预组和空白对照组,干预组加入肿瘤坏死因子-α,明胶酶谱法测定各组培养基中MMP-2、MMP-9的表达,采用Bergman法测定其中的羟脯氨酸含量,计算胶原降解量。结果:在肺癌H460细胞三维立体培养模型中,肿瘤坏死因子-α干预组MMP-2、MMP-9的表达高于空白对照组,胶原降解量高于空白对照组(P<0.05)。结论:肿瘤坏死因子-α能上调MMP-2、MMP-9的表达,从而促进肺癌的侵袭与转移。     

肺癌细胞与成纤维细胞、炎症细胞相互作用对MMP-1,-2,-9表达的影响

目的：研究单个核细胞、胚肺成纤维细胞和肺癌H460细胞三维立体混合培养对MMP-1、MMP-2和MMP-9表达的影响,并观察MMPs对胶原的降解作用。方法：活性胶原立体培养分为空白对照组（CG）、H460细胞组（HG）、单个核细胞组（MG）、胚肺成纤维细胞组（FG）、H460与单个核细胞混合组（HMG）、H460与胚肺成纤维细胞混合组（HFG）、三种细胞联合培养组（HMFG）共7组,观察癌细胞的生长状况,用明胶酶谱法测定MMP-2和MMP-9表达,Western blotting法测定MMP-1。结果：各组细胞在立体胶原内生长良好;CG与MG未明显分泌MMP-1、MMP-2和MMP-9,其余各组均分泌MMP-1、MMP-2和MMP-9,但HMFG分泌的基质金属蛋白酶明显多于其他各组。结论：单个核细胞、成纤维细胞和癌细胞混合培养后,细胞间相互作用促进MMPs分泌;基质金属蛋白酶可降解细胞外基质（extraclluar matrix,ECM）和其它间质组织,进而促进肺癌的侵袭和转移。     

肺癌细胞与成纤维细胞、炎症细胞相互作用对MMP-1,-2,-9表达的影响

目的:研究单个核细胞、胚肺成纤维细胞和肺癌H460细胞三维立体混合培养对MMP-1、MMP-2和MMP-9表达的影响,并观察MMPs对胶原的降解作用.方法:活性胶原立体培养分为空白对照组(CG)、H460细胞组(HG) 、单个核细胞组(MG) 、胚肺成纤维细胞组(FG)、H460与单个核细胞混合组(HMG)、H460与胚肺成纤维细胞混合组(HFG)、三种细胞联合培养组(HMFG)共7组,观察癌细胞的生长状况,用明胶酶谱法测定MMP-2和MMP-9表达,Western blotting 法测定MMP-1.结果:各组细胞在立体胶原内生长良好;CG与MG未明显分泌MMP-1、MMP-2 和MMP-9,其余各组均分泌MMP-1、MMP-2和MMP-9,但HMFG分泌的基质金属蛋白酶明显多于其他各组. 结论: 单个核细胞、成纤维细胞和癌细胞混合培养后,细胞间相互作用促进MMPs分泌;基质金属蛋白酶可降解细胞外基质(extraclluar matrix,ECM)和其它间质组织,进而促进肺癌的侵袭和转移.     

MMP-2和MMP-9在食管癌中表达的研究

目的 分析基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9在食管癌患者血清中的表达与食管癌临床病理因素之间的关系.方法 应用酶联免疫吸附法检测60例食管癌患者血清中MMP-2、MMP-9的含量与患者年龄、性别、组织学类型、临床分期及区域淋巴结转移等临床病理因素之间的关系.结果 对照组血清中MMP-2和MMP-9的浓度均值分别为61.31、87.67 ng/ml,而食管癌患者血清中MMP-2和MMP-9的浓度均值分别121.66、169.73 ng/ml,均高于正常者血清中含量,差异有统计学意义(t=3.015,P=0.007;t=2.037,P=0.04).MMP-2的含量与有无淋巴结转移(t=2.150,P=0.04)及临床分期(t=2.186,P=0.03)有关,MMP-9的含量与有无淋巴结转移(t=2.390,P=0.02)及临床分期(t=2.149,P=0.03)有关.MMP-2和MMP-9的含量均与食管癌患者的年龄、性别、组织学类型无关(均P＞0.05).结论 MMP-2和MMP-9可能与食管癌的侵袭转移有关.     

乳腺癌组织中MMP-2、MMP-9表达与其预后的相关性

基质金属蛋白酶家族中的MMP-2、MMP-9被认为可以促进乳腺癌的浸润、转移和血管生成，并与骨转移和骨破坏有关。但MMP-2和MMP-9与乳腺癌患者预后的相关性研究报道很少。为此，我们针对乳腺癌组织中的MMP-2、MMP-9的表达情况与患者的预后状况进行了分析。     

非小细胞肺癌MMP-2、MMP-9、TIMP-1表达及与预后关系研究

目的　研究非小细胞肺癌中MMP 2、MMP 9、TIMP 1蛋白和mRNA的表达 ,探讨其与淋巴结转移及预后的关系。方法　应用免疫组织化学和原位杂交方法检测非小细胞肺癌患者石蜡包埋肺癌组织中MMP 2、MMP 9、TIMP 1蛋白和mRNA表达。结果　MMP 2、MMP 9、TIMP 1的表达在不同年龄、性别、组织学类型及分化程度间无显著性差异 ,在淋巴结转移与否组间有显著性差异 (P值均 <0 .0 1)。患者术后生存期与淋巴结转移与否、MMP 2及MMP 9的表达强度显著相关 (P值分别为 0 .0 13 0、0 .0 175及 0 .0 0 10 )。MMP 2、MMP 9、TIMP 1mRNA与蛋白表达具有一致性 (P <0 .0 1,P <0 .0 0 5 ,P <0 .0 2 5 )。结论　MMP 2、MMP 9是影响预后的独立指标 ;TIMP 1是影响预后的有意义的指标。     

单核细胞与肺癌 H460 细胞及肺成纤维细胞三维立体混合培养 IL -1β 与TNF - α 的表达

目的：探讨外周血单核细胞和肺癌H460细胞及肺成纤维细胞相互作用对产生IL-1B与TNF—a的影响。方法：三维胶原立体培养条件下,分为单核细胞、H460细胞、肺成纤维细胞单独培养组,单核细胞和H460细胞共同培养组,单核细胞和肺成纤维细胞共同培养组,H460细胞和肺成纤维细胞共同培养组,单核细胞、H460细胞和肺成纤维细胞共同培养组。培养24、72、96h,收集上清液,用酶联免疫法检测不同时间点各组IL-1B与TNF—a的含量。结果：各组细胞在三维立体胶原培养条件下生长良好,单独培养时,仅单核细胞组分泌少量IL-1B和TNF-a,而H460细胞组、肺成纤维细胞组没有检测到IL-1B和TNF-a。单核细胞和H460细胞共同培养组分泌IL-1B与TNF—a量增高,单核细胞和肺成纤维细胞共同培养组分泌IL-1B与TNF—a．量也有轻微增高,而H460细胞和肺成纤维细胞共同培养组仅检测到少量IL-1B与TNF-仅的表达,单核细胞、H460细胞和肺成纤维细胞共同培养组分泌IL-1B与TNF-0l量明显高于其它组。结论：单核细胞和肺癌H460细胞及肺成纤维细胞相互作用可以促进IL-1B与TNF-a的表达。     

Radiotherapy diagnostic biomarkers in radioresistant human H460 lung cancer stem-like cells

Tumor cell radioresistance is a major contributor to radiotherapy failure, highlighting the importance of identifying predictive biomarkers for radioresistance. In this work, we established a radioresistant H460 (RR-H460) cell line from parental radiosensitive H460 lung cancer cells by exposure to fractionated radiation. The radiation-resistant, anti-apoptotic phenotype of RR-H460 cell lines was confirmed by their enhanced clonogenic survival and increased expression of the radioresistance genes Hsp90 and Her-3. RR-H460 cells displayed characteristics of cancer stem-like cells (CSCs), including induction of the surface marker CD44 and stem cell markers Nanog, Oct4, and Sox2. RR-H460 cells also exhibited sphere formation and malignant behavior, further supporting a CSC phenotype. Using proteomic analyses, we identified 8 proteins that were up-regulated in RR-H460 CSC lines and therefore potentially involved in radioresistance and CSC-related biological processes. Notably, 4 of these—PAI-2, NOMO2, KLC4, and PLOD3—have not been previously linked to radioresistance. Depletion of these individual genes sensitized RR-H460 cells to radiotoxicity and additively enhancing radiation-induced apoptosis. Our findings suggest the possibility of integrating molecular targeted therapy with radiotherapy as a strategy for resolving the radioresistance of lung tumors.     

秦皮乙素对人肺癌H460细胞体外增殖与凋亡的影响

目的 探讨秦皮乙素对人肺癌H460细胞体外增殖与凋亡的影响.方法 将体外培养人肺癌H460细胞分为4组:空白对照组、秦皮乙素0.2 mg/ml组、秦皮乙素0.4 mg/ml组、秦皮乙素0.8 mg/ml组.给药干预48 h后,MTT法观察细胞增殖抑制率;流式细胞仪分析细胞凋亡率和周期;比色法检测Caspase-3的活性.结果 不同浓度的秦皮乙素均能抑制人肺癌细胞H460的体外增殖,并使细胞阻滞于S期,Caspase-3的活性上升,上述结果均呈剂量依赖性.结论 秦皮乙素能抑制人肺癌H460细胞的体外增殖,并能诱导H460细胞的凋亡,具有良好的抗肿瘤作用.     

非类固醇类抗炎药NS398对肺癌H460细胞MT1-MMP表达的影响

目的：探讨非类固醇类抗炎药NS398对肺癌H460细胞增殖及其膜型基质金属蛋白酶-1（membrane type 1-matrix metalloproteinase,MT1-MMP）表达的影响。方法：应用MTT法检测细胞生长抑制率,免疫荧光法检测MT1-MMP蛋白质表达,酶联免疫吸附法（enzyme—linked immunosorbentassay,ELISA）检测细胞培养液中活性基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）的浓度。结果：NS398可抑制H460细胞的增殖及MT1-MMP蛋白质的表达,减少H460细胞培养液中活性型MMP-2的含量,并呈剂量依赖关系。结论：NS398可能通过抑制肺癌细胞MT1-MMP表达及MMP-2的激活而抑制肺癌细胞的侵袭转移。     

MMP-2 and MMP-9 activity is regulated by estradiol and tamoxifen in cultured human breast cancer cells

Sex steroids play a dominant role in breast carcinogenesis by still largely unknown mechanisms. Matrix metalloproteinases (MMPs) have been extensively studied in the context of matrix biology but it is not known if sex steroids affect MMPs in breast cancer. MMPs degrade extracellular matrix components enabling tumor cell invasion and metastasis, but may also regulate the bioavailability of a variety of biologically active molecules such as anti-angiogenic fragments, which may be beneficial for the host. This study shows that estradiol and tamoxifen regulate MMP-2 and MMP-9 as well as TIMP-1 and TIMP-2 in ER + PR + human breast cancer cells. The main finding was a significant effect of tamoxifen exposure, which increased intracellular and secreted protein levels whereas estradiol induced a significant decrease. The overall net effect of these alterations resulted in increased MMP-2/MMP-9 activity by tamoxifen treatment, which also significantly increased extracellular endostatin levels. We conclude that estradiol and tamoxifen have the ability to modulate MMP-2/MMP-9 activity, and endostatin levels in human breast cancer in vitro. The results suggest a possible role of MMP modulation associated with a generation of anti-angiogenic fragments in the therapeutic effect of tamoxifen in breast cancer.     

非类固醇类抗炎药NS398对肺癌H460细胞MT1-MMP表达的影响

目的:探讨非类固醇类抗炎药NS398对肺癌H460细胞增殖及其膜型基质金属蛋白酶-1(mem-brane type 1-matrix metalloproteinase,MT1-MMP)表达的影响。方法:应用MTT法检测细胞生长抑制率,免疫荧光法检测MT1-MMP蛋白质表达,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)检测细胞培养液中活性基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)的浓度。结果:NS398可抑制H460细胞的增殖及MT1-MMP蛋白质的表达,减少H460细胞培养液中活性型MMP-2的含量,并呈剂量依赖关系。结论:NS398可能通过抑制肺癌细胞MT1-MMP表达及MMP-2的激活而抑制肺癌细胞的侵袭转移。