新生大鼠缺氧缺血性脑损伤激活素A表达变化及其意义

【目的】探讨激活素A(activin A,ACT A)在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemic brain damage,HIBD)中的表达规律及其意义。【方法】将80只新生7日龄Wistar大鼠随机分为10组(即正常对照组、假手术组和HIBD模型组-1、3、7、10、12、24、48、72 h),每组8只。应用HE染色及SP免疫组化方法,检测新生大鼠HIBD后不同时间点ACT A的表达。【结果】缺氧缺血(hypoxia-ischemia,HI)1h,首先在左侧扣带皮质区出现ACT A的表达,分别与右侧及对照组比较差异均有显著性(2.50±1.51)个/mm2vs(1.13±0.64)个/mm2,(2.50±1.51)个/mm2vs(1.00±0.76)个/mm2(P均<0.05);ACT A表达峰值出现在HI 10h,左侧额顶皮质、扣带皮质、纹状体、齿状回可见大量阳性细胞,与右侧比较差异有非常显著性[(19.75±2.19)个/mm2vs(1.25±0.71)个/mm2,P<0.01],且与对照组同侧比较差异亦有显著性[(19.75±2.19)个/mm2vs(1.00±0.76)个/mm2,P<0.01]。至HI 72 h左侧额顶皮质区仍可见阳性细胞,与右侧及对照组比较差异均有显著性[(12.75±3.62)个/mm2vs(1.38±0.74)个/mm2,(12.75±3.62)个/mm2vs(1.00±0.76)个/mm2,P均<0.05)。【结论】HIBD可强烈诱导ACT A的表达增加,提示激活素在新生大鼠HIBD的病理过程中可能发挥重要作用。     

银杏叶提取物对新生大鼠缺氧缺血性脑病的保护作用

【目的】　探讨银杏叶提取物 (EGB)对新生大鼠缺氧缺血性脑病 (HIE)的影响。　【方法】　建立HIE新生大鼠模型 ,给予腹腔注射EGB后 ,通过氨基酸分析法、分光光度法以及原位末端标记法对比观察EGB对HIE模型鼠脑组织谷氨酸 (Glu)、天门冬氨酸 (Asp)、一氧化氮 (NO)含量及凋亡细胞百分数的影响。　【结果】　干预组 :Glu( 6 84.3± 5 1.0 ) μg/g ,Asp( 198.4± 34.2 ) μg/g ,NO( 9.5± 4.1) μmol/L ,凋亡细胞百分数 ( 16 .4± 4.2 ) %。对照组 :Glu( 897.5± 82 .6 ) μg/g ;Asp( 2 84.7± 5 3.1) μg/g ;NO( 36 .7± 8.3) μmol/L ;凋亡细胞百分数对照组 ( 35 .7± 4.6 ) %。两组之间差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。　【结论】　EGB对HIE有保护作用。     

无症状高尿酸血症老年人群的行为干预效果

【目的】对社区65岁及以上无症状高尿酸血症老年人群进行生活方式干预,并对干预结果进行效果评价。【方法】将上海市打浦桥社区2013年65岁及以上体检人群中227例无症状高尿酸血症者随机分为干预组和对照组。干预组通过家庭医生团队进行为期2年的行为干预,包括建立电子健康档案,进行健康评估、生活方式指导,随访干预组和对照组的血尿酸水平及相关指标,并进行比较。【结果】干预前,不同性别两组研究对象的年龄、BMI、腰围、血压、血生化指标等差异无统计学意义[血尿酸:男性组(444.00±18.03)、(442.48±14.60)μmol/L,t=0.432,P=0.667;女性组(385.36±16.05)、(389.39±17.48)μmol/L,t=-1.309,P=0.193]。干预1、2年后,干预组血尿酸浓度均低于对照组,差异有统计学意义[血尿酸:1年后,男性组(419.45±24.83)、(437.01±24.44)μmol/L,t=-3.420,P=0.001;女性组(354.68±30.26)、(374.35±29.53)μmol/L,t=-3.588,P=0.000。2年后,男性组(408.73±34.30)、(435.49±41.31)μmol/L,t=-3.381,P=0.001;女性组(317.47±35.81)、(364.58±43.63)μmol/L,t=-6.420,P=0.000]。同时,干预组的空腹血糖、三酰甘油水平较对照组更低,差异有统计学意义(P均0.05)。【结论】对无症状高尿酸血症者的行为干预,对高尿酸血症的控制具有一定的积极作用。     

地塞米松预处理对新生鼠缺氧缺血脑损伤的保护作用

【目的】观察地塞米松(dexamethasone,DXM)预处理对缺氧缺血新生鼠脑组织兴奋性氨基酸(excitatory amino acid,EAA)和C-fos蛋白表达的影响,探讨不同剂量DXM对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxia-ischemia braindamage,HIBD)的保护作用。【方法】60只新生鼠随机分为4组,假手术组,HIBD组,小剂量DXM预处理组及大剂量DXM预处理组,每组15只。所有动物均于造模后2h断头处死,应用高效毛细管电泳和免疫组化方法,分别检测假手术组、HIBD组、小剂量DXM预处理组(0.5mg/kg)及大剂量DXM预处理组(10mg/kg)的脑组织兴奋性氨基酸(谷氨酸、天门冬氨酸、甘氨酸)含量及C-fos蛋白表达水平。【结果】HIBD组的各种EAA含量及C-fos蛋白表达均较假手术组明显升高(P<0.01);小剂量DXM预处理组的各种EAA含量及C-fos蛋白表达较HIBD组无明显变化(P>0.05);大剂量DXM预处理组EAA含量较HIBD组明显减少(P<0.01),较小剂量DXM预处理组减少(P<0.05);大剂量DXM预处理组C-fos蛋白表达较HIBD组及小剂量DXM预处理组均明显降低(P<0.01)。【结论】缺氧缺血促进脑组织EAA的释放,诱导C-fos蛋白表达;大剂量DXM预处理可能通过抑制EAA释放,降低C-fos蛋白表达而对HIBD起保护作用。     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用及远期影响

【目的】探讨早期应用神经生长因子(neural growth factor,NGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的近、远期影响。【方法】7日龄(spraqut Dawley,SD)大鼠90只随机分为对照组(n=30,假手术处理),缺氧缺血性脑损伤(hy-perxic-ischemic brain damage,HIBD)组(n=30),NGF组(n=30),HIBD模型后即刻开始NGF治疗,每次1 000 U/kg,间隔24 h,连续7次。以近期海马形态组织学及细胞凋亡数和远期学习记忆功能判断干预效果。【结果】HIBD组大鼠近期海马区细胞形态变化明显,结构严重受损,远期学习记忆功能不良。与对照组比较,凋亡细胞增加,水迷宫实验中潜伏期延长(P均<0.01)。与HIBD组比较,NGF组治疗后凋亡细胞于各时间点明显减少,潜伏期缩短,站台停留时间延长(P均<0.01)。【结论】早期NGF治疗可减轻HIBD程度,改善HIBD引起的远期学习记忆功能障碍。     

缺氧缺血新生大鼠脑组织超氧化物歧化酶、丙二醛的变化及高压氧的保护作用

【目的】 探讨高压氧对宫内缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠脑组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malonyldiade-hyde,MDA)的影响及病理影响。 【方法】 按Bjelke法制作HIBD新生大鼠动物模型,随机分为HIBD组、HIBD+HBO组、对照鼠+HBO组和对照组4组,每组30只。HBO组大鼠于术后24 h开始给予2ATA的高压氧治疗,1 h/d,持续14 d。于出生后12 h、第15天各组大鼠随机取10只,分别处死取脑,制作脑组织匀浆,检测脑组织中SOD、MDA水平,并于第15天作HE和尼氏染色观察大鼠脑组织病理学变化。 【结果】 经HBO治疗后,HIBD+HBO组大鼠脑组织SOD升高[(90.43±10.83) U/mgprot]、MDA降低[(16.76±3.80) nmol/mgprot]、海马存活神经元数目增多[(122±10.52)个/0.2 mm²],与HIBD组[(74.18±8.52)U/mgprot、(28.05±4.28)nmol/mgprot、(92±6.51)个/0.2 mm²]比较差异均有统计学意义(P<0.05)。 【结论】 高压氧可通过拮抗氧自由基、减轻脑水肿和减少神经细胞死亡,发挥对HIBD新生鼠脑组织的保护作用。     

脑发育不同阶段丰富环境刺激对大鼠海马突触素表达的影响

【目的】探讨脑发育不同阶段丰富环境刺激对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生鼠神经可塑性的影响及机制。【方法】7日龄SD大鼠通过结扎左侧颈总动脉,吸入8%氧氮混合气,制成HIBD模型,分为早期干预组、晚期干预组、非干预组,另设假手术组。早期干预组于脑发育关键期内,即建模后第2 d开始进行丰富环境(environmental enrichment,EE)干预。晚期干预组于脑发育关键期后,即建模后第23 d(日龄30 d)开始进行EE干预。两组干预条件一致,总干预时间为20 d。各组大鼠饲养至日龄100 d时用免疫组织化学法检测患侧海马突触素(synaptophysin,p38)的表达水平。【结果】早期干预组患侧海马p38的表达明显高于晚期干预组和非干预组(P<0.01),早期干预组与假手术组差异无显著性(P>0.05),晚期干预组p38的表达高于非干预组(P<0.05)。【结论】EE干预可增强神经可塑性。p38在海马表达的变化,可能参与了脑发育不同阶段EE对HIBD神经可塑性的影响机制。     

谷氨酸受体阻滞剂对缺氧缺血性脑病神经细胞凋亡的影响

目的 探讨谷氨酸受体阻滞剂(GYKI52466)对缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)新生大鼠脑细胞凋亡的抑制作用。 方法 体内实验:将新生大鼠随机分为空白对照组(N组)、缺氧缺血性脑损伤组(H组)与GYKI52466干预组(G组)。造模后给药,观察各组大鼠的神经行为学异常及超微结构变化。体外实验: 将各组新生大鼠的脑细胞制成单细胞悬液,培养4 d后,N 组给予正常环境培养,H组给予缺氧缺糖环境,G组给予缺氧缺糖环境后添加GYKI52466培养,6 h后比较各组细胞生长状态,采用流式细胞仪进行脑细胞凋亡分析。 结果 体内实验:神经行为学观察,G组与H组相比,异常神经行为学有所改善;电镜下观察,H组神经元细胞核结构破坏,核膜破裂、核仁轻度皱缩,而G组结构趋向完整。体外实验:与模型组相比,G组的细胞凋亡数明显减少,数值差异有高度统计学意义(P<0.001)。 结论 谷氨酸受体阻滞剂GYKI25466有效的减轻新生大鼠缺氧缺血性脑病时异常的神经行为学表现和病理学改变,抑制神经细胞细胞凋亡,证实GYKI25466具有一定的神经保护作用。     

纳米氧化铈对48小时睡眠剥夺雄性小鼠认知功能的影响

目的研究纳米氧化铈(cerium oxide nanoparticles,CeO_2NPs)对48 h睡眠剥夺小鼠认知功能的影响,并探讨其作用机制。方法将36只4周龄雄性健康清洁级ICR小鼠分为6组:空白对照组,溶剂对照组,睡眠剥夺对照组,CeO_2NPs低、中、高剂量组。空白对照组灌胃1 mL蒸馏水,溶剂对照组和睡眠剥夺对照组灌胃1 mL 1%羧甲基纤维素钠溶液,CeO_2NPs低、中、高剂量组分别灌胃1 mL 4、8和16 mg/kg的纳米氧化铈溶液,连续30天。第31天,采用单平台水环境法进行48 h睡眠剥夺。继之,利用Y-型迷宫试验确定各组小鼠的认知能力,同时测定小鼠大脑过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)水平及一氧化氮(NO)和谷氨酸(Glu)含量。结果与溶剂对照组比较,48 h睡眠剥夺小鼠的认知能力[(36±2)次vs.(20±2)次,P=0.0006;10.753%±0.031%vs.24.927%±0.972%,P=0.00000045]、大脑CAT酶活性[(78.151±17.683)nmol/mg prot vs.(198.155±14.437)nmol/mg prot,P=0.0008]、T-AOC水平[(103.630±24.209)U/mg prot vs.(264.599±50.223)U/mg prot,P=0.007]降低,大脑MDA含量[(9.499±1.249)nmol/mg prot vs.(6.157±0.373)nmol/mg prot,P=0.0113]、NO水平[(11.608±1.281)μmol/mg prot vs.(3.628±1.064)μmol/mg prot,P=0.001]和Glu含量[(4.731±0.131)μg/mg prot vs.(4.476±0.126)μg/mg prot,P=0.03]增加。与睡眠剥夺对照组比较,CeO_2NPs低、中、高剂量组48 h睡眠剥夺小鼠的认知能力均有所改善,其中中剂量组小鼠的认知能力改善最显著[(27±2)次vs.(36±2)次,P=0.005;18.743%±0.245%vs.10.753%±0.031%,P=0.0000006],同时在提高大脑CAT活性[(238.065±19.393)nmol/mg prot vs.(78.151±17.683)nmol/mg prot,P=0.00045]、T-AOC水平[(210.516±11.339)U/mg prot vs.(103.630±24.209)U/mg prot,P=0.002],降低大脑MDA[(6.528±1.162)nmol/mg prot vs.(9.499±1.249)nmol/mg prot,P=0.039]、NO[(5.651±0.239)μmol/mg prot vs.(11.608±1.281)μmol/mg prot,P=0.001]和Glu[(4.358±0.016)μg/mg prot vs.(4.731±0.131)μg/mg prot,P=0.008]含量方面的影响也最显著。结论纳米氧化铈可以改善睡眠剥夺雄性小鼠的认知能力,这可能与其提高了大脑抗氧化能力,降低了自由基对脑部神经的损伤,调节了大脑的神经递质有关。     

丙酸睾酮预处理对HIBD新生鼠脑细胞神经生长因子表达的影响

【目的】观察丙酸睾酮预处理对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)大脑皮质和海马区神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的表达及神经细胞凋亡的影响,并探讨其保护作用机制。【方法】新生3日龄SD大鼠随机分为3组:正常对照组(n=24),HIBD组(n=24),T预处理组(n=24)。T预处理组大鼠于3日龄时给予T预处理。HIBD组和T预处理组大鼠于7日龄时进行HIBD模型制作。于HI后12、24、72h、7d观察各组脑组织病理形态及应用Nissl染色法测定神经元数目而间接检测神经细胞坏死和凋亡。并于HI后24、72h、7d制作石蜡切片,用免疫组化SABC法观察NGF在各组大鼠大脑皮质和海马表达的动态变化。【结果】HI后24、72h和7d,正常对照组和HIBD组大鼠脑皮质和海马区仅见极少量阳性细胞表达,而T预处理组大鼠于HI后24h和72h NGF表达水平明显增高(P<0.05)。正常对照组和HIBD组大鼠海马区偶尔可见NGF免疫阳性细胞表达,T预处理组大鼠海马区于HI后72h出现NGF免疫阳性细胞表达轻微增多,与正常对照组和HIBD组比较差异均有显著性(P<0.01)。【结论】丙酸睾酮预处理可明显见减轻大脑皮质神经细胞凋亡、增加HIBD新生大鼠脑皮质和海马区NGF表达,从而发挥神经保护作用。     

rhEPO对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用

目的探讨重组人促红细胞生成素（rhEP0）对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用。方法57只7天龄新生鼠随机分为假手术对照（正常对照组）、缺氧缺血性脑损伤动物模型组（HIBD模型）、rhEP0治疗组。在建立HIBD模型后,rhEPO治疗组立即一次性腹腔注射3000IU／kg剂量的rhEPO;HIBD模型组注射等量生理盐水;于处置后24h电镜观察脑组织病理形态学变化,流式细胞计检测脑受损局部神经元细胞凋亡情况,实验7天进行短期感觉运动反射评价。结果与正常对照组相比,HIBD模型组光镜下左侧大脑病理损伤明显;HIBD模型组神经细胞凋亡与正常对照组相比增加（28．30±4．80VS47．14±6．97,P〈0．05）,存活细胞减少（72．42±7．93VS48．33±8．39,P〈0．05）;rhEPO治疗组细胞凋亡与HIBD模型组相比减轻（47．14±6．97VS36．88±9．43,P〈0．05）,存活细胞增多（48．33±8．39VS60．06±8．32,P〈0．05）;HIBD模型组悬吊测试、翻正反射、悬崖逃避反射、趋地反射这四项反射与正常对照组相比成绩均较差,提示神经功能受损;rhEPO治疗组翻正反射及悬崖逃避反射时间与HIBD模型组相比缩短,（4．59±0．11VS2．84±0．13,10．84±1．26VS8．49±1．03,均P〈0．05）,以上差异均有统计学意义。结论外源性给予rhEP0能够减轻HIBD大鼠脑组织病理损伤,稳定细胞结构,抑制细胞凋亡,改善短期行为学评价,从而发挥其神经保护作用。     

新生鼠脑缺氧缺血损伤时血红素加氧酶与细胞红蛋白表达的关系研究

【目的】 探讨血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)与细胞红蛋白(cytoglobin,CYGB)表达的关系,为缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的防治提供实验依据。 【方法】 将7日龄新生SD大鼠170只随机分为正常对照组、假手术组、HIBD组、HIBD+Hemin组、HIBD+ZnPP组5组。其中HIBD组、HIBD+Hemin组及HIBD+ZnPP组在HIBD模型制备前12 h,分别腹腔注射生理盐水、Hemin及ZnPP,然后制备HIBD模型。术后于0、24、48 h采用免疫组化染色法分析HO -1及CYGB蛋白表达特点。 【结果】 缺氧后HO -1及CYGB表达随时间增长而递增,而且对于同一时间点HIBD+Hemin组HO -1及CYGB的表达均明显高于HIBD+ZnPP组,HIBD组居中,各组间比较差异有统计学意义;5组海马HO -1及CYGB表达均高度相关,0 h的r为0.687~0.916、24 h的r为0.473~0.903、48 h的r为0.659~0.962,皮质两者的表达亦有相同结果。 【结论】 Hemin诱导HO-1能使CYGB高表达,而ZnPP抑制HO-1则使CYGB表达减少;HO -1及CYGB的表达在HIBD时存在极明显的正相关性;实验证明脑缺氧缺血损伤时HO -1对CYGB的表达可能具有一定的正性调控作用。     

不同持续时间亚低温对缺血新生鼠脑的保护作用

目的 研究亚低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）形成后,其保护作用的干预最短有效持续时间。方法 建立HIBD新生大鼠模型,通过HE染色、电镜、原位末端标记手段对比观察HIBD新生大鼠亚低温干预后不同时间各脑区的凋亡细胞等。结果 常温组HIBD后24小时为凋亡细胞表达高峰,亚低温组HIBD后24小时凋亡细胞数目减少,凋亡高峰延迟出现,持续时间6、15小时比3小时保护作用明显,持续6小时与15小时脑保护作用相近。结论 HIBD后31℃亚低温干预可明显抑制凋亡的表达,保护脑神经,持续时间越长保护作用越明显,超过6小时之后延长干预时间无意义。     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤海马、皮层MAG表达变化研究

【目的】 探讨新生鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemic brain damage, HIBD)海马齿状回、皮层髓鞘相关糖蛋白(myelin associated glycoprotein, MAG)表达的变化及其意义。 【方法】 7日龄SD大鼠64只,随机分为假手术组(n=32)、HIBD组(n=32);HIBD组参照Rice法制作HIBD新生大鼠模型,两组动物分别于缺氧缺血(hypoxic ischemic, HI)后24 h、48 h、72 h、7 d四个时间点断头取脑制作免疫组化切片,对比观察各组不同时间点海马齿状回和皮层神经元MAG蛋白表达的变化。 【结果】 两组海马齿状回和皮层均有MAG蛋白表达。HIBD组HI后24 h、48 h海马齿状回MAG表达较假手术组显著性升高(P＜0.01或0.05),HI后72 h、7 d海马齿状回MAG表达较假手术组显著性下降(P均＜0.05)。HIBD组HI后24 h、48 h、72 h皮层MAG表达较假手术组显著升高(P＜0.001或0.05),在HI后7 d皮层MAG表达较相同时间点假手术组显著性下降(P＜0.05)。 【结论】 MAG蛋白的表达量因鼠脑的区域不同而有所差异,随着日龄的增加,各有其变化规律。当受到缺氧缺血损伤时,MAG蛋白的表达强度以及波动规律也发生改变。因此推论MAG测定将会对新生儿缺氧缺血性脑病的早期诊断(HI后24 h、48 h)、病程判断方面具有应用价值。     

亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损害不同脑区p16和Bcl-2表达的影响研究

【目的】 探讨亚低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)后脑灰质、室周白质的保护作用。 【方法】 建立新生大鼠HIBD模型,31 ℃、34 ℃亚低温全身干预3 h,观察缺氧缺血(hypoxic-ischemic, HI)后24 h、72 h、7 d脑皮质、海马、室周白质细胞凋亡、p16、bcl-2表达。 【结果】 1)p16灰度:模型组表达高于假手术组,HI后24 h达高峰,31 ℃组表达减少,34 ℃组总表达不减少,但在HI后24 h表达减少,高峰延迟;2)凋亡细胞灰度:与p16结果一致;3)bcl-2灰度:也与p16结果一致,34 ℃组术后24 h、HI后72 h表达均减少;4)相关关系:p16、凋亡细胞、bcl-2灰度在各脑区表达一致,两两比较,有相关关系(P<0.01)。 【结论】 新生大鼠HIBD后亚低温干预通过降低p16、bcl-2的表达、减少细胞凋亡或延缓其高峰对脑灰质、室周白质组织起到保护作用。     

晚发性维生素K缺乏症与维生素D缺乏症相关性探讨

【目的】　探讨晚发性维生素K(VK)缺乏症的血钙水平及与维生素D(VD)缺乏症的相关性。　【方法】　临床确诊的晚发性VK缺乏症所致颅内出血 (病变组 ) 43例 ,正常对照组 2 4例 ,测定血清钙、磷和碱性磷酸酶 (AKP) ,结果进行统计学分析。　【结果】　病变组血清钙 (1.76± 0 .2 9)mmol/L ,磷 (1.70± 0 .3 6)mmol/L ,AKP(3 0 8.98± 79.64 )U/L。对照组血清钙 (2 .19± 0 .2 6)mmol/L ,磷 (1.98± 0 .2 9)mmol/L ,AKP(2 2 5 .88± 3 7.87)U/L。差异有非常显著性意义(P <0 .0 1。　【结论】　晚发性VK缺乏症血清钙、磷明显降低 ,AKP明显升高 ,提示存在VD缺乏 ,血钙降低的原因与同时缺乏VD有关 ;晚发性VK缺乏症患儿血钙降低到一定程度发生惊厥时 ,可诱发或加重其颅内出血。因此 ,治疗时应注意适当补充VD与钙剂     

甲基汞致人肝细胞株HL-7702凋亡及相关机制

目的 研究甲基汞对体外培养的人肝细胞株HL-7702的凋亡作用及其机制.方法 实验分为阴性对照组及甲基汞受试物组,甲基汞的浓度分别为10、20、30、40、50 μmol/L.采用丫啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)染色法和流式细胞技术检测甲基汞对细胞凋亡的影响;流式细胞技术检测甲基汞对细胞线粒体膜电位的影响;免疫细胞化学方法 检测甲基汞对凋亡相关蛋白表达的影响.结果 不同浓度氯化甲基汞作用24 h均可诱导细胞凋亡,AO/EB染色法检测阴性对照组细胞凋亡率为(2.62±0.19)%,10～50μmol/L 甲基汞受试物组细胞凋亡率分别为(7.97±0.64)%、(12.66±0.76)%、(19.16±0.87)%、(18.42±0.88)%、(11.52±0.63)%,各剂量组细胞凋亡率明显高于对照组(q值分别为17.057、32.009、52.732、50.373、28.375;P＜0.05).随着作用浓度的升高细胞线粒体膜电位明显下降,阴性对照组线粒体膜电位为(10.23±3.43)mV,10～50 μmol/L 甲基汞受试物组线粒体膜电位分别为(3.25±0.66)、(3.03±0.35)、(1.68±1.26)、(1.69±1.13)、(1.77±0.88)mV,各剂量组明显低于对照组(q值分别为9.569、9.871、11.722、11.708、11.598;P＜0.05).随着甲基汞作用浓度的升高 Bax、Bel-2、CytC、Caspase-3 及AIF表达有上升的趋势,且Bax/Bcl-2值升高.阴性对照组Bax表达的积分吸光度值(IOD)为21 295.86±1969.81,10、20、30μmol/L 组Bax表达的IOD分别为42 807.87±4416.64、55 651.65±4662.72、72 708.56±910.10,各剂量组明显高于对照组(g值分别为14.191、14.320、33.917;P＜0.05);阴性对照组Bcl-2表达的IOD为12 588.33±4091.02,10、20、30μmol/L组Bel-2表达的IOD分别为20 539.16±4906.09、23 689.97±2281.42、28692.80±4655.86,各剂量组明显高于对照组(g值分别为4.322、6.035、8.754;P＜0.05);阴性对照组AIF表达的IOD为12 942.72±457.94、10、20、30、40μmol/L组AIF表达的IOD分别为16 973.57±1922.87、29 998.91±6803.58、52 467.16±1916.25、106 342.53±1273.19,20、30及40 μmol/L组明显高于对照组(q值分别为11.449、26.530、62.692;P＜0.05).结论 甲基汞可以通过线粒体通路诱导体外培养的人肝细胞株HL-7702发生凋亡.     

氧化应激对蛋氨酸负载后大鼠肝细胞同型半胱氨酸代谢的影响

目的 研究氧化应激对蛋氨酸负载后BRL大鼠肝细胞同型半胱氨酸及相关氨基酸代谢的影响.方法 体外培养BRL大鼠肝细胞,将大鼠肝细胞分为对照组、氧化应激组(100 μmol/L H2O2作用2 h)、蛋氨酸组(50 mmol/L蛋氨酸作用1h)、氧化应激±蛋氨酸组(100 μmol/L H2O2作用2h+50 mmol/L蛋氨酸作用1h),实验结束收集各组培养液上清.采用高效液相法测定同型半胱氨酸、半胱氨酸和谷胱甘肽的含量,采用全自动氨基酸分析仪测定相关氨基酸的含量.结果 与对照组比较,蛋氨酸组同型半胱氨酸[(3.76±0.22)比(1.54±0.05)μmol/L,P=0.000]、半胱氨酸[(199.80±8.75)比(99.11 ±2.47)μmol/L,P=0.000]的含量显著增加,氧化应激+蛋氨酸组同型半胱氨酸[(3.84±0.34)比(1.54±0.05)μmol/L,P=0.000]、半胱氨酸[(200.66±8.60)比(99.11±2.47)μmoL/L,P=0.000]的含量显著增加.与氧化应激组比较,蛋氨酸组同型半胱氨酸[(3.76±0.22)比(1.67±0.13)μmol/L,P=0.000]、半胱氨酸[(199.80±8.75)比(82.64±15.88)μmol/L,P=0.000]、谷胱甘肽[(1.50±0.14)比(1.00±0.11)μmol/L,P=0.011]含量均显著增加,H2 O2+蛋氨酸组的同型半胱氨酸[(3.84±0.34)比(1.67±0.13)μmol/L,P=0.000]、半胱氨酸[(200.66±8.60)比(82.64±15.88)μmol/L,P=0.000]、谷胱甘肽[(1.40±0.30)比(1.00±0.11)μmoL/L,P =0.028)]含量均显著增加.氧化应激+蛋氨酸组Hcy含量较蛋氨酸组有增加的趋势,但差异无统计学意义(P =0.628).与对照组比较,氧化应激组丝氨酸[(12.41±1.51)比(24.00±2.54)mg/L,P =0.000]、谷氨酸[(33.31±0.17)比(43.10±0.52)mg/L,P=0.000]和甘氨酸[(6.23±0.18)比(24.66±10.87)mg/L,P=0.003]的含量均显著降低,而牛磺酸的含量显著增加[(7.99±0.16)比(6.17±0.15)mg/L,P=0.000];与氧化应激组比较,蛋氨酸组丝氨酸[(16.98±0.39)比(12.41±1.51)mg/L,P=0.006]和谷氨酸[(35.44±0.82)比(33.31±0.17)mg/L,P=0.002]含量显著增加,而牛磺酸含量[(3.77±0.16)比(7.99±0.16)mg/L,P=0.000]显著减少;与蛋氨酸组比较,氧化应激+蛋氨酸组丝氨酸[(12.59±0.66)比(16.98±0.39)mg/L,P=0.008]、谷氨酸[(30.87±0.60)比(35.44±0.82)mg/L,P=0.000]的含量均显著降低,而牛磺酸的含量[(4.37±0.12)比(3.77±0.16)mg/L,P=0.001]显著增加.结论 氧化应激对蛋氨酸负载后BRL大鼠肝细胞的同型半胱氨酸代谢可能具有一定的促进作用,不过主要体现的是蛋氨酸负载的影响.