肌球蛋白活化的T淋巴细胞诱导心肌自身免疫反应

目的研究心肌肌球蛋白活化的T淋巴细胞能否介导心肌的自身免疫反应。方法分离、提纯大鼠脾脏树突状细胞(DC)和T淋巴细胞,分为两组在体外混合培养活化组加入大鼠心肌肌球蛋白;未活化组不加大鼠心肌肌球蛋白。将活化组或未活化组的T淋巴细胞分别经尾静脉转输入大鼠体内。在转输后3d、1周和4周末处死大鼠,观察心肌的病理改变。结果转输活化T细胞的大鼠,于转输后3d即出现心肌的淋巴细胞浸润,1周末达到高峰伴有少许心肌坏死,4周末心肌的淋巴细胞浸润明显减轻,各组间差异有显著性(P<0.01)。转入活化T细胞大鼠的肝、肺、肾、脑和甲状腺等组织均未见淋巴细胞浸润。转输未活化T淋巴细胞的大鼠心肌未见淋巴细胞浸润。结论肌球蛋白活化的T淋巴细胞能够介导心肌的自身免疫反应。     

转染FasL基因树突状细胞诱导异基因小鼠脾脏T细胞凋亡的研究

目的 制备稳定表达FasL蛋白的小鼠骨髓源树突状细胞(dendritic cell,DC)并探讨其诱导异基因小鼠脾脏T细胞凋亡的机理.方法 采用培养基选择法体外培养小鼠骨髓源DC,脂质体法转染FasL基因至小鼠成熟DC,实时定量PCR检测转染前后FasL mRNA的表达,流式细胞仪和免疫蛋白印迹检测转染前后FasL蛋白的表达.异系小鼠静脉分别输注未转染DC、转染空质粒DC和转染FasL的DC,7 d后TdT介导的原位末端标记法(TUNEL)和流式细胞仪检测脾脏中T淋巴细胞凋亡.结果 体外培养可获得成熟的小鼠骨髓源DC,转染FasL基因的DC较未转染DC FasL mRNA和FasL蛋白表达明显升高.对脾脏中T淋巴细胞凋亡的检测发现,转染FasL的DC组凋亡指数(11.67±1.53)明显高于未转染DC组(2.67±0.58)和转染空质粒组(3.33±0.58),P＜0.01.结论 培养基选择法可收获大量骨髓源DC,脂质体转染FasL基因至小鼠骨髓源DC,可以使DC高表达FasL蛋白.转染FasL的DC输注能明显诱导异系小鼠脾脏T淋巴细胞凋亡.     

小鼠肝癌总RNA转染的树突状细胞体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞的研究

目的 :探讨小鼠骨髓树突状细胞 (dendriticcell,DC)体外经Hepa 1 6肝癌细胞株总RNA转染后 ,对特异性细胞毒T淋巴细胞 (CTL)的诱导作用。方法 :自小鼠骨髓分离DC前体细胞 ,经GM CSF IL 4培养、扩增 ;制备Hepa 1 6小鼠肝癌细胞株总RNA ,体外转染DC ,检测DC诱导同基因型小鼠T细胞增殖及其特异性CTL的反应能力。结果 :经Hepa 1 6肝癌细胞总RNA转染的DC ,其组织相容性分子 (MHC I、II)及共刺激分子 (B7 1 、B7 2 )表达明显增高 ,刺激同基因型小鼠T细胞增殖能力增强 ,且能诱导Hepa 1 6特异性CTL。结论 :以肝癌总RNA转染DC ,构造肝癌疫苗为肝癌的临床治疗提供了新的策略。     

半乳糖凝集素3对树突状细胞及T淋巴细胞功能影响的研究进展

半乳糖凝集素3(Gal-3)是半乳糖凝集素家族成员之一,它是半乳糖凝集素家族中唯一的嵌合型凝集素,存在于正常细胞和肿瘤细胞的胞核、胞质和细胞外基质中,能调节树突状细胞(DC)和T淋巴细胞的免疫功能,调节机体免疫应答和炎症反应。研究发现DC分泌Gal-3具有抑制自身凋亡、调节细胞因子生成以及调节T细胞应答等多种功能。同时Gal-3位于胞外和胞内对T淋巴细胞分别具有相反作用,胞外Gal-3诱导T细胞凋亡,胞内Gal-3抑制其凋亡。此外Gal-3在调节炎症反应中的起重要作用。     

超抗原SEB和SEC诱导的树突状细胞对T细胞的影响

目的：阐明超抗原葡萄球菌肠毒素B（SEB）和葡萄球菌肠毒素C（SEC）诱导树突状细胞(dendritic cells，DC)促进T细胞活化、增殖、分泌及其对肝癌HcaF细胞的杀伤作用。 方法： 以SEB或SEC诱导DC刺激T细胞，免疫组化染色检测DC表达S-100蛋白；流式细胞术检测DC表达I-Eκ和CD80分子水平，检测T细胞受刺激后CD69的表达、IL-2和TNF-α的生成；用MTT法检测T细胞增殖及其对HcaF细胞的杀伤效应。 结果： 体外试验表明，DC高表达S-100蛋白，SEB或SEC诱导的DC高表达I-Eκ和CD80分子；SEB或SEC能诱导DC促进T细胞活化，其浓度以100 μg/L时作用最强；SEB或SEC能诱导DC促进T细胞增殖、大量分泌IL-2和TNF-α, 被激活的T细胞对HcaF细胞的杀伤率高达83.2%±12.8%，明显优于肿瘤抗原诱导的DC所激活的T细胞对HcaF细胞的杀伤作用；SEB与SEC的诱导作用无明显差异。 结论： 超抗原SEB或SEC能诱导DC显著增强T细胞活化、增殖、分泌和杀伤肿瘤细胞，并优于肿瘤抗原的诱导作用，SEB和SEC的作用相似，为超抗原SEB或SEC与DC联合应用于临床肿瘤的治疗提供了证据。     

趋化因子在树突状细胞和T细胞迁移活化中的作用和意义

趋化因子是机体内一群能使细胞发生趋化运动的细胞因子，通过与表达于细胞表面的趋化因子受体结合而发挥其生物学作用。树突状细胞是一种专职的抗原递呈细胞。树突状细胞的成熟和功能与趋化因子和其受体介导的体内迁移密切相关，从而有效的将抗原递呈给初始T细胞并使之活化和分化，发挥其调节免疫应答的作用。     

树突状细胞对调节性T细胞的调控作用

树突状细胞(DCs)是目前已知的体内功能最强大的专职性抗原提呈细胞,具有启动免疫应答和诱导免疫耐受的双重特性.近年来树突状细胞对调节性T细胞的调控作用是免疫学领域的一个研究热点.Foxp3+ Tregs是一群同时具有免疫低反应性和免疫抑制性功能两大特征的T淋巴细胞,它在维持机体内环境稳定、预防自身免疫性疾病、抑制移植排斥反应等病理生理过程中发挥着重要作用.越来越多的研究结果证实DCs和Tregs二者在维持外周免疫耐受中存在着紧密联系,DCs可以诱导抗原特异性Tregs的生成并增加后者的抑制活性,其中参与该调节机制的分子主要包括相关细胞因子、Toll样受体、共刺激分子及维甲酸等.对DCs在接触共生和致病微生物时诱导和调控Tregs细胞有了一些新发现.     

趋化因子在树突状细胞和T细胞迁移活化中的作用和意义

趋化因子是机体内一群能使细胞发生趋化运动的细胞因子 ,通过与表达于细胞表面的趋化因子受体结合而发挥其生物学作用。树突状细胞是一种专职的抗原递呈细胞。树突状细胞的成熟和功能与趋化因子和其受体介导的体内迁移密切相关 ,从而有效的将抗原递呈给初始T细胞并使之活化和分化 ,发挥其调节免疫应答的作用。     

早期凋亡的T淋巴细胞诱导生成耐受性树突状细胞的实验研究

目的： 探讨早期凋亡T淋巴细胞的抑制性免疫调节性能。方法： 采用定时紫外线照射诱导T淋巴细胞早期凋亡，深低温反复冻融获得坏死T淋巴细胞。体外诱导、纯化并培养骨髓源性不成熟树突状细胞（imDCs）,imDCs分别和早期凋亡或坏死T淋巴细胞共培养。用流式细胞仪、双夹心ELISA、［³H］掺入混合淋巴细胞反应等方法分析imDCs吞噬早期凋亡或坏死T淋巴细胞后，在不同处理条件下，MHC-Ⅱ、CD40、CD80、CD86的表达水平、分泌IL-12 p70以及刺激T淋巴细胞增殖能力的差异。结果： imDCs和坏死细胞碎片共培养后明显趋于成熟，其MHCⅡ和CD40、CD80、CD86的表达水平显著上调；分泌较高水平的IL-12 p70；和同种异体处女T淋巴细胞混合培养后显著刺激处女T淋巴细胞增殖。 imDCs和早期凋亡的T淋巴细胞共培养后,其MHC-Ⅱ、CD40、CD80和CD86的表达维持较低水平；仅分泌较低水平IL-12 p70；和同种异体处女T淋巴细胞混合培养后不能刺激淋巴细胞增殖。此外，早期凋亡的T淋巴细胞孵育上清显著抑制了吞噬坏死细胞碎片后的imDCs表达共刺激分子CD40、CD80、CD86。当TGFβ₁中和抗体和早期凋亡T淋巴细胞同加入imDCs，在表达MHC-Ⅱ、CD40、CD80、CD86，分泌IL-12 p70，刺激处女T淋巴细胞增殖等方面和吞噬坏死T淋巴细的DCs相比无显著差异。结论： 早期凋亡T淋巴细胞通过释放免疫抑制性细胞因子TGFβ₁，诱导imDCs呈现出耐受性DCs（TolDCs）的免疫表型及生物学特征，从而发挥抑制性免疫调节作用。     

Interplay between human cytomegalovirus and dendritic cells in T cell activation

Control of human cytomegalovirus (HCMV) infection and prevention of associated diseases in immunocompetent hosts are ensured mainly by CD8+ T cells, in spite of numerous viral tricks to impair antigen presentation and activation of T cells. At sites of primary infection, dendritic cells (DCs) are in the forefront to ensure capture of viral antigens and their capacity to bypass the effects of viral immunoevasins is crucial in moulding CD8+ T cell repertoire. In HCMV-seropositive donors, the spectrum of CD8+ T cells specificities was shown to include immediate-early (IE), early (E) and late (L) gene products, a surprising finding if we consider that expression of immunoevasins could paralyse infected DCs from the IE phase of infection. In the present report, we suggest that uninfected dendritic cells could acquire HCMV-antigens derived from input virus or neosynthesis, either in soluble forms or in association with infected dead cells resulting from death-ligand-mediated apoptosis and necrosis. Activation of naïve CD8+ T cells could then occur in lymph nodes through cross-presentation by antigen-loaded DCs, providing an explanation for shape and size of the memory compartment.     

Dendritic cells transfected with the nef genes of HIV-1 primary isolates specifically activate cytotoxic T lymphocytes from seropositive subjects

The HIV-1 Nef protein down-modulates surface expression of MHC class I proteins. Primary infected T lymphocytes thus escape lysis by cytotoxic T lymphocytes (CTL). In contrast, during HIV-1 infection there are strong CTL responses to several HIV proteins, and there is mounting evidence that CTL are critical for controlling the virus. The present study was carried out to assess Nef protein-cell interaction as it occurs in naturally infected antigen-presenting cells. To evaluate the presentation of peptides derived from viral antigen to CTL, we transfected nef genes obtained from peripheral blood mononuclear cells of HIV-1-seropositive subjects into dendritic cells isolated from monocytes of healthy donors. We demonstrate that expression and subsequent processing of Nef by transfected dendritic cells did not alter the presentation of an immunodominant epitope of Nef to CTL of HIV ⁺ subjects. However, mutations in nef gene sequences from primary isolates may abolish this presentation by a mechanism that probably interferes with protein processing.     

PD-L1阻断改善酵母多糖致伤小鼠脾脏耐受性 DC对T淋巴细胞活性的影响

目的：探讨酵母多糖致伤小鼠脓毒症病程发展过程中脾脏耐受性树突状细胞( dendritic cell, DC)的形成对脾脏T淋巴细胞免疫活性的影响,并通过程序性死亡受体-1(programmed death-1,PD-L1)抗体阻断PD-L1/PD-1途径改善耐受性DC对T淋巴细胞活性的抑制作用。方法采用酵母多糖腹腔注射的方法复制小鼠脓毒症模型。用磁珠法分离致伤小鼠脾脏DC和T淋巴细胞,测定脾脏组织中DC上PD-1、PD-L1、PIR-B的表达水平和分泌IL-12、IL-10的能力;检测脾脏T淋巴细胞增殖活性和IL-2的分泌水平。进一步将致伤组小鼠脾脏DC与正常小鼠脾脏T淋巴细胞混合培养,并加入PD-L1抗体,检测T淋巴细胞增殖活性及混合培养上清中IL-2、IL-12和IL-10含量。结果酵母多糖致伤后5天和12天组小鼠脾脏DC上PD-1、PD-L1及PIR-B的表达大幅上调,IL-12p70分泌减少,IL-12p40和IL-10分泌增加;脾脏T淋巴细胞增殖活性降低、IL-2分泌减少。在致伤组DC与正常T淋巴细胞混合培养体系中加入PD-L1抗体可减轻致伤组DC对T淋巴细胞增殖活性和分泌IL-2的抑制作用,并改善DC上IL-12p70、IL-12p40和IL-10的分泌能力。结论酵母多糖诱导小鼠脓毒症的病程晚期,脾脏耐受性DC的形成导致T淋巴细胞活性降低;PD-L1抗体通过干预PD-1/PD-L1途径改善T淋巴细胞和DC的免疫活性。     

小鼠树突状细胞表面PD-L1分子对T淋巴细胞协同刺激效应的研究

目的：琛讨小鼠髓系DCs表面PD-L1分子在树突状细胞介导T细胞免疫应答中的作用。方法：采用流式细胞术分别检测未成熟DCs和凋亡肿瘤细胞负载并经CD40配基化的成熟DCs表面免疫分子的表达；混合淋巴细胞反应(MLR)和抗PD-L1单抗阻断试验分析未成熟DCs和成熟DCs表达的PD-L1分子对T淋巴细胞的协同刺激／抑制效应；^3H-TdR掺入试验检测未成熟DCs和成熟DCs对T淋巴细胞的促增殖效应；ELISA测定各组MLR反应上清中IL-10、IFN-γ的分泌水平；MTT比色法检测成熟DCs激发的肿瘤抗原特异性CTL对肿瘤细胞的杀伤效应。结果：未成熟DCs表面高表达PD-L1，负性调节未成熟DCs对自体T淋巴细胞的促增殖作用，抑制T细胞分泌IL-10、IFN-γ；凋亡肿瘤细胞负载并经CD40配基化的成熟DCs中等水平表达PD-L1，具有显著增强对自体T细胞的体外激发、扩增和细胞毒效应的作用，并可增加T细胞的IFN-γ分泌。结论：未成熟DCs高表达PD-L1抑制了对T细胞共刺激效应；CD40配基化成熟的DCs中度表达。PD-L1有助于激发T细胞介导免疫应答。     

Peptide-pulsed dendritic cells induce tumoricidal cytotoxic T lymphocytes from healthy donors against stably HLA-A*0201-binding peptides from the Melan-A/MART-1 self antigen

The melanoma antigen Melan-A/MART-1 was screened for the presence of potential HLA-A*0201-binding cytotoxic T lymphocytes (CTL) epitopes. The immunodominant nonamer epitope AAGIGILTV demonstrated weak binding to T2 but a significant half-life of binding to HLA-A*0201 in contrast to the decamer EAAGIGILTV. In addition to the immunodominant CTL epitope, we describe two peptides, GILTVILGV and ALMDKSLHV, that display stable binding to HLA-A*0201. Using cultured autologous dendritic cells pulsed with these peptides, CTL lines were induced from peripheral blood lymphocytes that displayed reactivity with HLA-A2⁺, Melan-A/MART-1⁺ melanoma cells. CTL reactivity against the immunodominant epitope could be induced with the nonamer epitope alone, but not with the decamer variant. CTL clones generated from an (EAAGIGILTV + AAGIGILTV)-induced CTL line recognize the appropriate melanoma cells and normal melanocytes. Upon further characterization of one of these CTL clones, it was found to be of surprisingly high affinity considering that it is directed against a self antigen. This study demonstrates that immunogenic peptides can be selected based on stability (half-life) of peptide/HLA binding. In addition, cultured DC were found to efficiently induce CTL responses in vitro against such selected peptides, and some of these CTL were capable of recognizing endogenously processed antigen.     

人癌胚抗原重组痘苗病毒转染树突状细胞体外诱导的抗肿瘤免疫

目的：研究人癌胚抗原重组痘苗病毒（rV-CEA)转染外周血树突状细胞（DC）后在外体诱导的抗CEA分泌性肿瘤免疫。方法：分离晚期结肠癌患者的外周血单核细胞，在体外用人重组粒－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）及白细胞介素4（IL－4）培养成DC，再用rV-CEA转染DC后激发自体T细胞，观察其体外激发自体T细胞的增殖能力及其诱导的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对自体CEA分泌性肿瘤细胞的杀伤活性，并与野生型痘苗病毒（W－VV）及无病毒转染的DC所激发的T细胞进行比较。结果：经rV-CEA转染的DC能显著刺激自体T细胞的增殖，其激活的T细胞对CEA分泌性自体肿瘤细胞具有特异性杀伤作用。结论：rV-CEA转染的DC可以诱导体CEA分泌性肿瘤免疫。     

致敏树突状细胞活化细胞毒性T细胞抗肿瘤作用的研究

目的：研究树突状细胞（DCs）激活的细胞毒性T细胞的抗肿瘤及预防肿瘤发生的作用。 方法： 细胞因子诱生人PBMC未成熟DCs，加入肿瘤细胞抗原提取物致敏DCs产生成熟DCs；通过细胞形态、表面标记鉴定成熟DCs，MTT法测成熟DCs活化的细胞毒性T细胞(CTL)的体外杀伤活性；裸鼠体内注射活化CTL观察其抑制移植瘤生长及发生的作用。 结果： 经过7 d培养，获得大量形态典型、具有强烈刺激增殖能力、高表达CD80(63.5%)、CD83（67.6%）和CD3/ HLA-DR(83.2%)的DCs。其活化的CTL在20∶1效靶比时对抗原来源细胞株自身的杀伤率达75%以上，对同系细胞株的杀伤活性为35%-45%，对其它种系肿瘤细胞仅有微弱杀伤力（P<0.01）。CTL对裸鼠结肠癌HT-29移植瘤有特异性的生长抑制和预防生成作用（P<0.05）。CTL治疗组肿瘤组织中PCNA表达水平显著低于对照组（P<0.05）。 结论： 肿瘤细胞抗原活化的DC诱导CTL对肿瘤有特异性的杀伤作用，体内应用可特异性抑制移植结肠癌的生长或预防小鼠结肠癌移植瘤的发生。     

SP2/0细胞膜抗原负载DC诱导体外特异性CTL效应

目的 研究SP2／0细胞膜抗原负载树突状细胞（DC）诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对肿瘤细胞的杀伤活性。方法 密度梯度离心法分离SP2／0细胞膜，负载经rmGM-CSF和rmIL-4诱导扩增的小鼠骨髓来源的DC，活化T淋巴细胞获得肿瘤特异性CTL，MTT法检测对SP2／0细胞的杀伤效果。结果 骨髓单个核细胞在rmGM-CSF和rmIL-4作用下获得了高表达CDS0、CD86和MHC-Ⅱ分子的DC，致敏的CTL对SP2／0骨髓瘤细胞具有高杀伤率，显著高于对I5178Y淋巴瘤细胞的杀伤活性（P〈0．01）。结论 SP2／0细胞膜抗原负载DC能诱导明显的特异性抗肿瘤免疫应答。     

Structure and duration of contact between dendritic cells and T cells are controlled by T cell activation state

The adaptive immune response is initiated when naive T cells interact with dendritic cells (DC). However, the physicodynamics as well as the molecules that constitute the contact plane (immunological synapse) between DC and T cells are not well understood. We show here that for the formation of stable conjugates, T cells need to be preactivated by DC in a CD80/86- and antigen dose-dependent manner. When activated, T cells induce cytoskeletal reorganization within DC via CD40-CD40L signaling. Polarization of the actin and fascin cytoskeleton in DC is associated with sustained DC-T cell contacts, strong T cell proliferation and a Th1 response. Organized contact planes with clearly separated patches containing TCR or CD11a are also formed. Thus, DC-T cell interactions take place in a sequential, interdependent fashion: first, DC "license" naive T cells to engage DC in an antigen dose- and CD80/86-dependent fashion. Then, these preactivated T cells induce cytoskeletal reorientation in DC, resulting in sustained DC-T cell contacts and subsequent T cell activation. These results demonstrate that T cells control the mode of interaction based on information gathered from DC.