人早孕绒毛滋养层细胞的体外分离与培养

目的 建立人早孕绒毛滋养层细胞有效的分离、培养方法.方法 利用成纤维细胞较滋养细胞贴壁早的特性,将滋养细胞与前者分离、纯化、培养.倒置显微镜观察滋养细胞的形态学特征;免疫细胞化学鉴定细胞来源及纯度.结果 倒置显微镜下可见细胞为上皮样细胞形态,呈片状铺展生长.细胞角蛋白染色阳性,波形蛋白染色阴性细胞达80%～85%,台盼蓝排斥试验示活细胞率超过90%.结论 采用差异贴壁法及体外培养条件,可简单、快捷地获得较高纯度的人早孕绒毛滋养细胞.     

瘦素对早孕绒毛滋养细胞分泌CXCR4及MMP9的影响

目的 研究瘦素对早孕绒毛滋养细胞分泌趋化因子受体4(CXCR4)及金属基质蛋白酶-9 (MMP9) 的调节作用.方法 分离、培养早孕期绒毛滋养细胞,添加不同浓度的瘦素,培养24h后,RT-PCR法检测滋养细胞中CXCR4及MMP9 mRNA表达水平.结果 添加了瘦素的滋养细胞表达CXCR4及MMP9 mRNA的量较空白对照组极显著增加(P＜0.01).结论 瘦素能增强滋养细胞分泌CXCR4及MMP9的能力.瘦素可能在孕早期参与了胎盘形成等病理生理过程.     

产科

正常妊娠 050091　早孕绒毛细胞滋养层细胞分离培养的实验 研究/蒋立艳…∥第三军医大学学报.—2004,26 (14).—1248～1251 目的:改善体外分离和培养人早孕绒毛细胞滋 养层细胞(CTB)的方法,探讨CTB的一些生物学特 性。方法:取人工流产6～8周妊娠绒毛,机械法分 离,酶消化,经Ficoll分离介质离心得到单个核细胞 进行培养并鉴定,测定其生长曲线并观察其体外转 化、细胞周期和激素合成。结果:分离培养的CTB 经免疫细胞化学染色…     

早孕绒毛细胞滋养层细胞分离培养的实验研究

目的改善体外分离和培养人早孕绒毛细胞滋养层细胞(cytotrophoblast,CTB)的方法,探讨CTB的一些生物学特性.方法取人工流产6～8周妊娠绒毛,机械法分离,酶消化,经Ficoll分离介质离心得到单个核细胞进行培养并鉴定,测定其生长曲线并观察其体外转化、细胞周期和激素合成.结果分离培养的CTB经免疫细胞化学染色鉴定,接种后2 h开始贴壁,第5天融合90%以上,细胞周期显示约有79%细胞处于G0/G1期,激素分泌表现出随CTB的转化而变化.结论成功分离培养了人早孕绒毛CTB,方法简便易行,获得的细胞形态单一、生长稳定、定向转化,为进一步研究CTB在生殖生理中的作用提供了实验基础.     

无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染对早孕绒毛滋养细胞表达CXCL12/CXCR4的影响

目的研究无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染患者趋化性细胞因子CXCL12／CXCR4在母胎界面的表达情况，探讨其对早孕绒毛滋养细胞侵蚀力的影响。方法采用免疫组化法观察正常早孕和无症状沙眼衣原体、解脲支原体感染患者早孕绒毛组织中的CXCL12／CXCR4的定位和分布，采用免疫印迹、RT—PCR法检测其蛋白和mRNA的表达情况；将无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染患者绒毛外滋养细胞进行分离培养和鉴定，应用免疫细胞化学法检测CXCL12／CXCR4的表达。结果免疫组化检测显示正常妊娠时CXCL12、CXCR4主要表达于绒毛滋养细胞、绒毛间质细胞以及蜕膜组织中；RT—PCR法和Western bolt检测显示：与正常妊娠相比，无症状沙眼衣原体和解脲支原体绒毛感染者的早孕绒毛组织中CXCL12、CXCR4 mRNA和蛋白表达减弱；正常早孕绒毛外细胞滋养细胞中CXCL12、CXCR4均呈强阳性表达，而无症状沙眼衣原体和解脲支原体绒毛感染者其绒毛外细胞滋养细胞中CXCL12、CXCR4表达减弱。结论CXCL12／CXCR4受体配体系统参与了绒毛外滋养细胞的侵蚀，无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染状态下可能影响早孕绒毛CXCL12／CXCR4受体配体系统表达，导致母胎界面出现免疫紊乱现象，从而对早孕绒毛滋养细胞侵蚀力造成影响。     

产科

正常妊娠071129流式细胞仪分离人早孕绒毛滋养细胞亚型及鉴定/侯蕾…∥中华围产医学杂志.—2007,10(3).—159~161,插图3-1目的:用流式细胞仪分离早期绒毛滋养细胞各细胞亚型,以便对各类型滋养细胞功能进行进一步研究。方法:用胰蛋白酶消化法得到早期绒毛滋养细胞,用流式细胞仪分离纯化各滋养细胞亚型。所得的细胞亚型用免疫细胞化学、光镜、透射电镜检测以及Western印迹方法鉴定。结果:使用流式细胞仪成功的分离了绒毛外滋养细胞与绒毛滋养细胞,纯度超过98%。结论:此方法可快速准确大量获得滋养细胞亚型。图8参6(原文摘要)071130妊娠期uNK…     

不同分离纯化法建立人早孕滋养细胞模型的效果比较

目的：对4种建立滋养细胞的方法进行比较,以期寻求一种简便高效的人早孕滋养细胞的体外培养方法,为相关研究提供基础。方法早孕绒毛通过胰酶联合胶原酶消化分离后,分别采用直接接种、差速贴壁联合差速消化法、人外周血淋巴细胞分离液分离纯化法、完整绒毛消化联合简化的 percoll 密度梯度分离法4种方法纯化培养,倒置显微镜观察细胞形态,应用 HE 染色、免疫组化和免疫细胞化学法检测细胞纯度。结果直接接种、差速贴壁联合差速消化法、人外周血淋巴细胞分离液分离纯化法得到的细胞细胞角蛋白7（CK －7）表达阳性率不足60％;简化的 percoll 密度梯度分离法得到的细胞 CK －7表达阳性率达90％以上。结论完整绒毛消化联合简化的 percoll 密度梯度分离纯化可以得到大量较高纯度的滋养细胞以供后期实验。     

人类白细胞抗原G和E在人早孕胎盘组织中的表达及其与反复自然流产的关系

目的 探讨人类白细胞抗原(HLA)-G、E在人早孕胎盘组织中的表达分布及其与反复自然流产(RSA)发生的关系.方法 选择15例正常早孕妇女及15例RSA患者为研究对象.分别采用原位杂交方法及免疫组织化学法检测HLA-G、E的mRNA和蛋白质在早孕胎盘组织中的表达.结果 在人早孕胎盘组织所有的滋养细胞,包括合体滋养细胞、绒毛细胞滋养细胞、绒毛外滋养细胞中均有HLA-G、E mRNA的表达.特异性针对HLA-G的单克隆抗体4H84仅在绒毛外滋养细胞中检测出HLA-G蛋白表达.HLA-E蛋白表达与其mRNA表达部位一致.RSA组-眦A-G、EmRNA的表达强度明显低于正常对照组.HLA-G、E蛋白的表达水平在RSA组也明显降低.结论 HLA-G mRNA与蛋白表达部位的不一致可能与单克隆抗体4H84有关.母胎界面的滋养细胞表面HLA-G、E mRNA及蛋白表达水平的下降与RSA的发生密切相关.     

妇产科概论 免疫学

061828人类白细胞抗原G、E在人胎盘组织中的表达及其意义/彭冰…∥现代妇产科进展·—2006,15(7)·—525~527,530用原位杂交法分别检测人类白细胞抗原G、E(HLA-G、E)mRNA及蛋白质在人正常早孕绒毛组织、晚孕胎盘组织中的表达。结果:在人正常早孕绒毛组织中的绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和绒毛外滋养细胞(EVCT)内均有HLA-G、E mRNA及HLA-E蛋白质表达,而HLA-G蛋白质仅在EVCT内表达;晚孕胎盘组织中HLA-G、E mRNA及蛋白质表达于蜕膜板内的EVCT及羊膜上皮细胞。结论:HLA-E表达于人正常早孕绒毛组织中所有类型的滋养细胞…     

细胞凋亡及Fas、Bcl-2 mRNA在早孕药物流产绒毛组织中的表达

目的 了解早孕药物流产局部绒毛组织中细胞凋亡及Fas、Bcl-2mRNA表达,进一步探讨米非司酮早孕药物流产机制.方法 选择40例早孕药物流产患者(实验组),采用3'-OH末端缺口标记法(TUNEL)显示绒毛滋养细胞中原位凋亡细胞的表达,原位杂交法显示绒毛滋养细胞中Fas、Bcl-2mRNA表达,利用计算机图象分析系统(CMIAS)分析每个统计场凋亡细胞个数(n)、凋亡细胞平均吸光度(OD)、凋亡细胞面密度(凋亡细胞面积/统计场面积,DS/TS)、Fas、Bcl-2mRNA原位杂交阳性表达细胞的平均光密度(D)及每个统汁场阳性细胞数(N/S).并与40例正常人工流产比较(对照组).结果 实验组绒毛滋养细胞中凋亡细胞表达显著增高,各指标两组比较差异显著.FasmRNA表达实验组高于对照组,Bcl-2mRNA表达实验组低于对照组,两组比较均有极显著性差异(P<0.01).结论 Fas、Bcl-2mRNA介导的细胞凋亡可能是米非司酮早孕药物流产的重要机理之一.