质粒DNA抗原酶联免疫吸附试验检测抗双链DNA抗体的研究

目的 建立以质粒DNA为抗原的检测血清抗双链DNA(ds-DNA)抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法及探讨其临床应用价值。方法 将原核表达载体质粒pBV220用碱裂解法提取纯化DNA后，按1：150稀释包被在多聚-L-赖氨酸处理的微孔板上，以辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)为酶标记物，建立检测血清抗双链DNA抗体的ELISA方法。并以短膜虫为底物的间接免疫荧光法(IIF)为参比方法，对6_4例系统性红斑狼疮(SLE)、8例混合性结缔组织病、17例类风湿性关节炎患者的血清抗ds-DNA抗体进行对比检测。结果 紫外分光法于波长260nm测DNA浓度为1．54g/L。ELISA抗ds-DNA法和IIF法检测3组患者阳性率分别为23．4％和17．2％、12．5％和12．5％、11．8％和5．9％，符合率分别为93．8％、100％、94．1％。以经典IIF法为金标准，ELISA检测抗ds-DNA抗体的特异性为93．4％，敏感性为100％。结论 用质粒DNA作抗原建立的检测血清抗ds-DNA抗体具有良好的精密度、敏感性和特异性，检出率高于IIF法，有助于对SLE的诊断和病情活动程度进行监测。     

酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法检测抗dsDNA抗体方法的比较

目的 比较酶联免疫吸附法(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测抗dsDNA抗体的检出情况及符合率.方法 用酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法同时检测286份临床疑为系统性红斑狼疮(SLE)的病人血清.结果 286份样本中ELISA法检出31例抗dsDNA抗体阳性,255例抗dsDNA抗体阴性,而在ELISA法检出31例抗dsDNA抗体阳性中IIF法检测仅有13例阳性,阳性符合率仅为41.94%.ELISA法检出的255例抗dsDNA抗体阴性标本中IIF法检测有255例阴性,阴性符合率100%.ELISA法和IIF法检测抗dsDNA抗体的阳性检出率有显著性差异.结论 ELISA法和IIF法检测抗dsDNA抗体的阳性检出率差异有统计学显著性意义(P＜0.05),ELISA法检测抗dsDNA抗体简便、快速、设备要求不高,可以用于大批量的抗dsDNA筛查,但因为特异性不高,假阳性较多,因此有条件的实验室最好采用IIF法对阳性结果进行复检确认.     

以合成肽作抗原的酶联免疫吸附法检测抗精子抗体

血清、精浆和宫颈粘液中的抗精子抗体 (AsAb)是导致不孕和自然流产的原因之一。现常用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测AsAb ,但该法以正常生育者的精子直接或制成包被抗原来包被酶标板[1] ,受抗原来源限制 ,且稳定性和重复性不理想。本研究用人工合成的特异性精子肽作包被抗原 ,以ELISA检测AsAb ,取得较满意结果。一、材料和方法1.标本来源 :本院特检中心不明原因不育患者血清 2 83份 ,男 75份 ,女 2 0 8份 ;对照组为本院未婚男女血清各 5 0份。冰冻保存待测。2 .合成肽抗原 :采用固相法Fmoc策略 ,人工合成[2 ] 具有免疫原性、能与人…     

酶联免疫吸附法检测血清抗内皮细胞抗体

培养人脐带静脉内皮细胞并制备内皮细胞膜，以内皮细胞膜为抗原，经酶联免疫吸附法（Ｍ－ＥＬＩＳＡ）检测系统性红斑狼疮患者血清抗内皮细胞抗体，并将结果与细胞ＥＬＩＳＡ作比较。实验表明，两方法符合率为９２％，抗内皮细胞抗体阳性率两法差异无显著性（Ｘ￣２＝０．０６，Ｐ＞０．０５），抗体活性呈明显正相关（ｒ＝０．５１，Ｐ＜０．０１），但Ｍ－ＥＬＩＳＡ可检测ＩｇＧ、ＩｇＭ两型抗体，能节省大量试剂及血清，省时省力，便于推广，也适于制作药盒。     

多种自身抗体检测在狼疮肾炎中的临床意义

目的通过检测系统性红斑狼疮（SLE）、狼疮肾炎（LN）患者血清抗nRNP、抗Sm、抗dsDNA、ANCA及ANuA等自身抗体，探讨几种自身抗体在狼疮肾炎患者中的临床意义。方法狼疮肾炎患者55例，非狼疮肾炎的SLE患者60例为对照组，血清抗dsDNA、ANCA采用间接免疫荧光法测定，ANCA间接免疫荧光法阳性者用免疫印迹法进一步确认，抗nRNP、抗Sm及ANuA采用欧蒙斑点法测定。结果两组病程差异有统计学意义（P〈0．001），LN发病率为SLE患者的47．8％，抗nRNP及抗Sm阳性率LN组较对照组高，但无统计学意义（P=0．395、P=0．483）；LN组抗dsDNA、ANCA及ANuA阳性率较对照组高且差异有统计学意义（P=0．028、P=0．024，P〈0．001）。结论SLE病程是合并LN的重要因素之一，血清抗dsDNA、ANCA及ANuA等自身抗体检测均有助于LN的诊断。     

系统性红斑狼疮患者4种抗体检测的临床意义

自身免疫性疾病病种较多,其中有些疾病至今尚无有效的治疗方法,对人类健康及生命有很大威胁,因而临床上十分重视这类病的诊断及治疗[2]。系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus,SLE）是自身免疫性疾病中常见的一种。现代免疫学研究发现SM患者血清中存在着多种自身抗体,因此通过自身抗体的检测,可对临床诊断提供重要依据,还对患者病情变化,预后及疗效观察,有重要意义。本文对70例SLE患者同时进行4种抗体检测,对其结果及临床意义进行评价。报告如下。1材料和方法1．1材料1．1．1患者来自中山医科大学附属第一医院1998年10…     

酶联免疫吸附测定法检测H CV抗原与抗体的结果分析

目的：探讨应用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测丙型肝炎病毒（HCV）抗原、抗体。方法将 HCV-RNA PCR法检测的50例标本分为阳性组（34例,HCV-RNA阳性）、阴性组（16例,HCV-RNA阴性）,对所有标本应用ELISA法进行HCV抗原与抗体检测,对结果进行统计分析。结果阳性组 HCV 抗体阳性率、抗原阳性率均显著高于阴性组,差异均有统计学意义（P＜0．05）。阳性组中,HCV抗原及抗体联合检测与 HCV-RNA检测结果的符合率为94．12％（32/34）,与 HCV抗原、抗体单独检测比较,差异有统计学意义（χ2＝20．4424,P＝0．0000）。结论 ELISA法检测HCV抗原与抗体,有助于临床准确诊断丙型病毒性肝炎。     

以合成肽作抗原的酶联免疫吸附法诊断戊型肝炎病毒感染

建立了用合成多肽抗原测定戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）抗体的酶联免疫吸附法。合成多肽Ｅ３３（ｃ）（２μｇ／ｍｌ），Ｅ１５（Ｍ）（１μｇ／ｍｌ）混合包被，测定了４８份ＨＥＶ抗体阳性血清，阳性符合率为９５．８％。４１份阴性血清均为阴性。此方法灵敏度高，，特异中，简便快速，适合临床应用。     

神经精神性狼疮相关抗体及其诊断价值

神经精神性狼疮(neuropsychiatric systemic lupus erythematosus, NPSLE)是系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)病变累及神经系统而产生神经和/或精神症状的一组预后差、死亡率高的严重并发症, SLE患者血清或脑脊液中检测到的独特的自身抗体与神经精神疾病相关。在SLE患者中, NPSLE的患病率从17%至75%不等。本文论述国内外最新研究结果, 着重探讨抗核糖体P抗体、抗磷脂抗体、抗神经元抗体等相关抗体在中枢神经受累的NPSLE中的研究现状及其临床价值。     

系统性红斑狼疮患者抗磷脂抗体与视网膜血管病关系的研究

目的：研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)抗磷脂抗体等血清免疫学标志物与患视网膜血管病的关系。方法：从2002年6月至2003年1月，对164例SLE患作最佳矫正视力检查、眼压测量、裂隙灯检查和眼底检查，血清免疫学检查指标包括抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACL、狼疮抗凝物(lupus anticoagulant,LA)、抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)和抗ds—DNA抗体等。结果：164例SLE患中26例(16则检查到有视网膜血管病，其中19例(73%)检测到抗磷脂抗体(17例ACL和2例LA)。结论：SLE患易发生视网膜血管病变，抗磷脂抗体的存在可能与其有较高的相关性。     

免疫相关指标及核抗原抗体在系统性红斑狼疮患者中的诊断价值

[目的]探讨免疫相关指标及核抗原(ENA)抗体在系统性红斑狼疮(SLE)患者中的诊断价值.[方法]SLE患者80例,根据患者病情分为活动期组(35例)和非活动期组(45例).选取健康志愿者40例作为对照组.检测比较三组对象外周血免疫相关指标(IgA、IgM、IgG、C3、C4)以及ENA抗体(抗ds-DNA、抗Sm、抗...     

系统性硬皮病患者血清抗内皮细胞抗体水平检测及临床意义

目的研究抗内皮细胞抗体(AECA)测定在系统性硬皮病(SSc)中的临床意义。方法采用细胞酶联免疫吸附实验(cell-ELISA),对24例SSc患者血清AECA水平进行检测,并与50例健康对照组进行比较。结果SSc患者的血清AECA水平(0.686±0.178)明显高于健康对照组(0.404±0.128)(P<0.01);SSc患者AECA阳性率[50.00%(12/24)]明显高于健康对照组[2.00%(1/50)](P<0.01)。结论对SSc患者AECA水平进行检测,有助于阐明AECA在SSc发病中的重要意义。     

儿童系统性红斑狼疮患者血中自身抗体联合检测的临床意义

目的研究抗组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)抗体、抗干燥综合征(SS)-A抗体、抗SS-B抗体等非特异性抗体及抗核糖核蛋白(RNP)抗体、抗双链DNA(dsDNA)抗体、抗Sm抗体等特异性抗体在儿童系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的意义,并与抗核抗体(ANA)的敏感性和特异性进行比较。探讨特异性自身抗体联合检测在儿童SLE诊断中的意义。方法选取60例SLE患儿作为疾病组,40例非SLE自身免疫性疾病患儿作为对照组。利用间接荧光法测定ANA抗体,免疫印迹法测定抗Jo-1抗体、抗SS-A抗体、抗SS-B抗体、抗RNP抗体、抗dsDNA抗体、抗Sm抗体。结果 ANA抗体、抗dsDNA抗体、抗RNP抗体、抗Sm抗体、抗SS-A抗体、抗SS-B抗体在儿童SLE患者中的阳性率分别为96.7%、48.3%、31.7%、30.0%、20.0%、18.3%,与对照组比较(22.5%、10.0%、7.5%、5.0%、5.0%、5.0%),差异均有统计学意义(P<0.01)。ANA的敏感性显著高于其他3种抗体,而其他3种抗体的特异性明显高于ANA;抗dsD-NA抗体、抗RNP抗体、抗Sm抗体的特异性分别为95.0%、92.5%、95.0%,差异有统计学意义(P<0.05);抗dsDNA抗体与抗RNP抗体、抗Sm抗体均无相关性。自身抗体的联合检测对儿童SLE敏感性的提高有明显的改善,但对特异性的提高则无明显改变。结论抗dsDNA抗体、抗RNP抗体、抗Sm抗体在儿童SLE诊断中特异性较高,而敏感性差异较大,其中抗dsDNA抗体的敏感性最高。此3种特异性抗体在SLE诊断中的互补作用显著。自身抗体的联合检测可明显提高SLE诊断的敏感性。     

SLE患者淋巴细胞核基质蛋白的变化及临床意义

目的 :比较SLE患者与正常人及SLE患者静止期与活动期淋巴细胞核基质蛋白的变化 ,观察活动期SLE患者特有的淋巴细胞核基质蛋白对SLE患者骨髓CFU -GM生成的影响。方法 :用高盐法提取核基质蛋白 ,SDS -PAGE电泳比较核基质蛋白的差异 ,体外甲基纤维素法培养骨髓CFU -GM。结果 :SLE患者的淋巴细胞核基质在分子量为 2 5kd、45kd、75kd、80kd处出现正常人所没有的蛋白带 ,分子量为 40kd、70kd的核基质蛋白为活动期SLE患者淋巴细胞特有 ,培养体系中加入 70kd核基质蛋白的SLE患者骨髓CFU -GM产率为 38.2 1± 18.70 ,显著低于对照组 (P <0 .0 0 1)。结论 :SLE患者的淋巴细胞核基质蛋白与正常人相比有明显差异 ,分子量为 2 5kd、45kd、75kd、80kd的核基质蛋白可能与SLE的发生发展有关 ,分子量为70kd的核基质蛋白抑制SLE患者骨髓CFU -GM的生成 ,可能与SLE的活动有关。     

Clinical SLEDAI-2K zero may be a pragmatic outcome measure in SLE studies

Objectives: Development of therapies for systemic lupus erythematosus (SLE) has in part been limited by the lack of suitable outcome measures in clinical trials. In the present post-hoc analysis of two clinical trials of belimumab, we investigated two potential outcomes, the Lupus Low Disease Activity State (LLDAS) and clinical SLE disease activity index 2000 (cSLEDAI-2K) zero, in relation to SLE responder index 4 (SRI-4).

Methods: A total of 1684 SLE patients from the BLISS-52 (n = 865) and BLISS-76 (n = 819) trials were surveyed. Physician’s Global Assessment (PGA) scores <0.5 (3-point scale) were used for comparisons. We used the chi-square test for comparisons and the phi coefficient for correlations.

Results: At week 52, LLDAS was achieved by 8.6% of patients, cSLEDAI-2K = 0 by 34.5% and SRI-4 by 45.1%. cSLEDAI-2K = 0 showed the strongest correlation with PGA <0.5 (r_φ = 0.36, P < 0.001). cSLEDAI-2K = 0 unveiled the superiority of belimumab 10 mg/kg over placebo (P = 0.003) with a magnitude which was comparable to that of SRI-4 (P < 0.001). LLDAS displayed a more moderate separation (P = 0.033).

Conclusions: LLDAS was a stringent measure. cSLEDAI-2K = 0 showed the strongest correlation with the clinician-based evaluation. Being based on the SLEDAI-2K only, cSLEDAI-2K = 0 may be considered a more pragmatic outcome measure in SLE studies compared with composite tools.     

尿中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白检测对SLE肾病的临床意义

目的探讨尿中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白(NGAL)在系统性红斑狼疮(SLE)患者肾脏损伤中的临床意义。方法收集124例SLE患者和30名健康体检者尿液,采用速率散射比浊法检测尿微量白蛋白(Albu),并依据尿中Albu将SLE患者分为A、B、C 3组。30名健康体检者为对照组,用酶免疫法定量测定各组NGAL。结果 SLE患者A、B、C 3组和对照组尿NGAL分别为3.51±0.49、5.48±0.987、.89±1.71、3.37±0.31μg/L;A组(Albu<30mg/L)和对照组间差异无统计学意义(P>0.05);B组(Albu 30～100 mg/L)和对照组间差异有统计学意义(P<0.01);C组(Albu 100～500 mg/L)和对照组间差异有统计学意义(P<0.01);A、B、C3组间差异有统计学意义(P<0.05)。SLE患者尿NGAL与Albu之间呈正相关性(r=0.84)。结论当Albu增高时尿NGAL随之增高,尿NGAL可用于判断SLE患者肾小管间质功能损伤情况。     

系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及补体变化分析

【摘要】目的探讨T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及补体在系统性红斑狼疮（SLE）患者中的变化及临床意义。方法对55例SLE患者外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞、免疫球蛋白及补体进行检测分析,另选取50名健康体检者作为对照组。CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞用流式细胞仪检测,免疫球蛋白及补体采用透射比浊法在全自动生化仪上检测。结果研究组外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞绝对值及CD4＋／CD8＋比值、C3、C4明显低于对照组,IgG、IgA、IgM明显高于对照组（P〈0．01）。结论SLE患者T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及补体水平变化明显,三者联合检测,有利于病情监测及指导治疗。     

系统性红斑狼疮患者sCD40L水平变化及临床意义

目的对系统性红斑狼疮（SLE）患者血清中可溶性CD40配体（sCD40L）的含量变化及临床意义进行讨论。同时分析血小板减少组SLE患者与血小板正常组SLE患者血清中sCD40L的含量差别。初步探讨血清和血浆中sCD40L浓度有无差异。分析SLE患者血清中sCD40L的含量与系统性红斑狼疮疾病活动度评分（SLEDAI评分）有无相关性。方法用酶联免疫吸附法检测25例SLE患者和15例正常人血清中及18例正常人血浆中sCD40L的浓度。结果①血小板正常组SLE患者血清中的sCD40L浓度明显高于正常对照组和血小板减少组SLE患者。②SLE患者血清sCD40L浓度、血小板正常组SLE患者血清中sCD40L浓度、血小板减少组SLE患者血清中sCD40L浓度与SLEDAI评分均无相关性。③SLE患者血清中sCD40L浓度与血小板计数呈正相关。④发现正常人血清中sCD40L的浓度明显高于血浆中的sCD40L的浓度。结论 SLE患者血清中sCD40L浓度较正常人高可能参与SLE的发生发展过程。血小板计数对血清中sCD40L浓度有一定程度的影响,且SLE患者血清中sCD40L与SLEDAI评分无相关性,在临床上sCD40L不适合作为监测SLE疾病的活动度的指标。     

抗核小体抗体在系统性红斑狼疮中的临床应用

目的 探讨抗核小体抗体（AnuA）在系统性红斑狼疮（SLE）中的临床应用价值。方法 选择SLE患者60例。其中狼疮性肾炎（LN）36例,SLE非肾炎者24例。采用免疫印迹法检测SLE患者组的血清AnuA,同时进行抗-dsDNA抗体、抗-Sm抗体的检测。结果 AnuA对SLE诊断的特异性为98．6％,敏感性为55．0％,显著高于抗-Sm抗体（P〈0．01）,但与抗-dsDNA抗体的差异无显著性（P〉0．05）,SLE患者组AnuA与抗-Sm抗体之间无相关性（P〉0．05）,但与抗-dsDNA抗体显著相关（P〈0．01）,联合检测AnuA、抗-dsDNA抗体、抗-Sm抗体诊断SLE的敏感性达76．7％;LN组的AnuA和抗-dsDNA抗体的阳性率分别为75．0％和63．9％,均显著高于SLE非肾炎组（P〈0．01）。结论 AnuA对SLE具有高度特异性和较高敏感性,是SLE的另一标志性抗体,联合检测AnuA、抗-dsDNA抗体、抗-Sm抗体能有效提高SLE的实验诊断率;血清AnuA的检测有助于LN的诊断。