effect of the improved minimum inhibitory concentration test on detection of drug-resistantMycobacterium tuberculo

目的 利用经改良的最低抑菌浓度法（IMIC）检测结核分枝杆菌临床分离株对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素和氧氟沙星的药物敏感性，观察其对耐药结核分枝杆菌检出的影响。 方法 利用改良的最低抑菌浓度法检测135株临床分离株对INH、RFP、EMB、SM及OFLX的敏感性。 结果在相同的药物浓度中,与接种1×10⁵/ml菌量的试验管相比135株接种1×10⁷/ml活菌数的试管中有68.89%的结果与之相同，有31.1%的结果与之不相同。判断结果由阴性转阳性的标本共有20株，（其中耐RFP的1株、耐INH的3株、耐OFLX的3株、耐EMB的5株以及耐SM的8株）约占135株受试菌株总数的14.8%。 结论 利用改良的最低抑菌浓度法可发现潜在的耐药结核病患者，提高耐药菌的检出率。     

抗结核药物联合使用对耐多药结核分枝杆菌抗菌效力的研究

目的 研究常用抗结核药物与其它抗结核药物联合使用对多耐药结核菌 (MDR-MTB)的抗菌效力。方法 按照部分耐药浓度 (FIC)方法测定 (MDR-MTB)单独用药及联合用药时标准结核分枝杆菌的最低抑菌浓度 (MIC),临床分离株的最低抑菌浓度 (MICs),按照FIC公式,计算其是否有协同作用。结果 INH、RFP、EMB、CAM和INH、RFP、PZA、OFLX组合对13株临床分离的MDR-MTB的FIC＜05,有协同作用。结论 本体外实验证实,INH、RFP、EMB、CAM和INH、RFP、PZA、OFLX两种组合形式对实验所用的13株MDR-MTB有协同作用。     

耐药基因芯片对初治菌阳肺结核治疗指导价值研究

目的研究结核分枝杆菌(Mtb)耐药基因芯片法检测对初治菌阳肺结核治疗指导价值。方法应用Mtb耐药基因芯片检测100例初治肺结核感染菌株对利福平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)的耐药性,并与BACTEC MGIT960系统检测结果比对,经鉴别罗氏培养基(PNB)除外非结核分枝杆菌(NTM)结果 Mtb耐药基因芯片法检测耐RFP、INH、SM、EMB的敏感性和特异性分别为64.29%、75.00%、52.94%、62.5.%;93.02%、82.5%、93.98%、97.83%。结论结核分枝杆菌耐药基因芯片对于5种基因相关突变所致耐药性的敏感性略低,特异性较高,对初治菌阳肺结核临床治疗有一定参考价值。     

比例法与绝对浓度法测试结核分枝杆菌药物敏感性探讨

目的探讨比例法与绝对浓度法测试结核分枝杆菌药物敏感性结果的一致性。方法用绝对浓度法和比例法同时对2946株结核分枝杆菌进行4种抗结核药物（RFP、EMB、SM、INH）的耐药性测定。结果RFP、EMB、SM、INH用绝对浓度法与比例法药敏测试结果一致率分别为：97.8%、96.7%、94.3%、92.3%。经统计学检验,两种方法测试2946株菌株4种药物敏感性结果差异有统计学意义（P<0.05）。结论绝对浓度法与比例法进行结核分枝杆菌测定总的一致率较高,但差别有统计学意义,在进行耐药性评价时应考虑药敏方法是否一致。     

174株结核分枝杆菌耐药情况分析

目的分析我所183株痰培养阳性菌株的耐药情况。方法采用药敏比例法对183株阳性菌株进行菌种鉴定及药物敏感性试验。结果共分离出174株结核分枝杆菌,且4种一线抗结核药物异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM)的总耐药率为25.3%,耐多药率为8.0%。4种抗结核药物的耐药率由高到低依次为SM、INH、EMB、RFP。结论陕西省结核耐药情况仍较严重。     

结核分枝杆菌临床分离株耐药性与耐药基因突变关系的研究

目的分析临床分离结核分枝杆菌耐药性与耐药基因突变的关系。方法用绝对浓度法和基因测序技术检测临床分离的22株结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、卡那霉素(KM)、氧氟沙星(OFLX)、对氨基水杨酸(PAS)耐药性和相应耐药基因kat G、rpo B、rpsl、rrs、gyr A、thy A的突变。结果 22株结核分枝杆菌中耐药菌株占45.5%。INH耐药率为18.2%,RFP耐药率为27.3%,SM耐药率9.1%,KM耐药率为18.2%,OFLX的耐药率为13.6%,PAS耐药率为4.5%。敏感菌株中均未检测到耐药基因突变。耐药菌株中除2株外均检测到相应耐药基因突变。结论结核分枝杆菌对抗结核药物耐药性与相关耐药基因突变密切相关。     

结核分枝杆菌西安分离株北京家族基因型检测及其耐药相关性研究

目的了解西安市结核分枝杆菌临床分离株的耐药情况及其与北京家族基因型(Beijing Family)的相关性,为有效防治结核病提供依据。方法对临床分离结核分枝杆菌采用绝对浓度法进行药物敏感性检测。间隔寡核苷酸分型(Spoli-gotyping)方法进行北京家族基因型鉴定。结果统计学分析采用χ2检验。结果104株结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物,异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB),全部敏感的菌株为71株(68.3%);耐药菌株33株(31.7%),其中,单耐药菌株12株(11.5%),耐多药菌株21株(20.2%)。结核分枝杆菌对4种一线药物INH、RFP、SM和EMB的耐药率分别为24.04%(25/104)、18.69%(19/104)、16.34%(17/104)和2.88%(3/104)。104株结核分枝杆菌中北京家族基因型(BeijingFamily)占全部菌株的83.7%,非北京家族基因型占16.3%。87株北京家族基因型菌株中耐药菌株28株(32.18%),敏感菌株59株(67.82%),而17株非北京家族基因型菌株中耐药菌株5株(29.41%),敏感菌株为12株(70.59%)。经统计学分析其差异无统计学意义(χ2=0.05,P>0.05)。结论西安市分枝杆菌的耐药情况较为严重。结核分枝杆菌北京家族基因型与耐药性之间无明显相关性。     

应用硝酸盐还原试验快速检测结核分枝杆菌药物敏感性

目的评价硝酸盐还原试验(Nitrate Reducrase Assay,NRA)方法检测结核分枝杆菌分离株的药物敏感性的应用价值。方法通过应用NRA方法和绝对浓度法同时检测了492株结核分枝杆菌临床分离株和30株质控菌株对INH、RFP、SM、EMB的药物敏感性,以牛结核分枝杆菌标准株、结核分枝杆菌标准菌株H37Rv做阴阳性对照。并随机选择62株菌株进行重复试验。结果与绝对浓度法比较,NRA检测对INH、RFP、SM、EMB的耐药性的敏感性分别为91.6%、96.5%、92.2%、90.7%;特异性分别为96.0%、98.2%、97.3%、97.3%;一致率分别为95.0%、97.9%、96.2%、96.7%。重复试验符合率为100%。结论NRA是一种成本低、操作简单、快速、与绝对浓度法有较高一致率的药敏试验方法,具有良好的临床应用前景。     

应用硝酸盐还原试验快速检测结核分枝杆菌药物敏感性

目的评价硝酸盐还原试验(Nitrate Reducrase Assay,NRA)方法检测结核分枝杆菌分离株的药物敏感性的应用价值。方法通过应用NRA方法和绝对浓度法同时检测了492株结核分枝杆菌临床分离株和30株质控菌株对INH、RFP、SM、EMB的药物敏感性,以牛结核分枝杆菌标准株、结核分枝杆菌标准菌株H37Rv做阴阳性对照。并随机选择62株菌株进行重复试验。结果与绝对浓度法比较,NRA检测对INH、RFP、SM、EMB的耐药性的敏感性分别为91.6%、96.5%、92.2%、90.7%;特异性分别为96.0%、98.2%、97.3%、97.3%;一致率分别为95.0%、97.9%、96.2%、96.7%。重复试验符合率为100%。结论NRA是一种成本低、操作简单、快速、与绝对浓度法有较高一致率的药敏试验方法,具有良好的临床应用前景。     

结核分枝杆菌接种菌量对异烟肼和利福平药敏试验的影响

目的比较接种不同菌量结核分枝杆菌（MTB）绝对浓度法药物敏感性（药敏）与比例法药敏的差异程度,为MTB药敏检测准确性提供参考。方法选择临界敏感或临界耐药MTB菌株53株,用比浊法制作MTB菌悬液,10倍梯度稀释,10^-4、10^-510^-6mg/ml菌悬液0.1 ml接种于改良L-J培养基上作活菌计数,10^-2、10^-3mg/ml菌悬液0.1 ml接种于含INH、RFP改良L-J培养基上作绝对浓度法药敏,10^-3、10^-5mg/ml菌悬液0.1 ml接种于含INH、RFP改良L-J培养基上作比例法药敏。结果MTB活菌计数值多在5×1065×10⁷CFU/ml。10^-2、10^-3mg/ml菌悬液绝对浓度法药敏一致率INH、RFP分别达98.1%、100.0%;绝对浓度法与比例法药敏符合率INH、RFP均达90.6%100.0%。结论不同菌量MTB绝对浓度法药敏结果与比例法药敏结果比较一致性好,在常规药敏检测中不会影响结果的准确性。     

磺胺类药物对结核分枝杆菌的体外抑菌作用及与其他抗结核药物相互作用的研究

目的 评价磺胺甲噁唑（sulfamethoxazole,SMX）和甲氧苄啶（trimethoprim,TMP）对结核分枝杆菌的体外抑菌作用,并探讨SMX与其他抗结核药物的体外相互作用。 方法 采用微孔板Alamar blue法测定TMP联合SMX对121株结核分枝杆菌临床株的最低抑菌浓度(MIC)。同时采用分层整群抽样设计方法,抽取18株结核分枝杆菌临床分离株观察SMX在与利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、卡那霉素、氧氟沙星、利福布丁联用时MIC值的影响,以H37Rv为对照,通过计算分级抑菌浓度指数（FICI）,观察SMX与其他抗结核药物之间是否存在协同作用。采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,MDR菌株、非MDR菌株、敏感菌株间MIC的比较采用非参数秩和检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果90.08%(109/121)的结核分枝杆菌临床分离株可以被MIC为1/19（TMP∶SMX）μg/ml的复合制剂抑制生长, 5株菌株的“TMP∶SMX＝1∶19”的MIC为2/38 μg/ml,仅有7株“TMP∶SMX＝1∶19”的MIC≥2/38μg/ml,包括敏感株5株,MDR菌株2株。“TMP∶SMX＝1∶19”对敏感株、MDR菌株及非MDR菌株MIC间的差异没有统计学意义（χ²=0.111,P=0.946)。对于H37Rv,SMX与其他抗结核药联合用药后,除了利福布丁表现出协同作用（FICI为0.281）外,其余药物均表现为无关作用。对18株临床分离株,SMX与其他抗结核药联合用药后,77.78%（14/18）表现为与利福布丁协同,FICI范围为0.205～1.063。 结论TMP联合SMX有较好的抗结核分枝杆菌活性,并且这种活性与细菌对其他药物是否耐药无关;SMX与其他常用抗结核药的相互作用主要表现为无关。     

39株对克拉霉素耐药的结核分枝杆菌临床分离株23SrRNA检测结果分析

目的 分析对克拉霉素耐药的结核分枝杆菌临床分离株23S rRNA的A2058位点的变化。 方法 选择我院菌株库的结核分枝杆菌临床分离株64株,其中10株为对全部抗结核药物敏感的结核分枝杆菌临床分离株;14株为单耐克拉霉素的结核分枝杆菌临床分离株;15株为耐多药,同时耐克拉霉素的结核分枝杆菌临床分离株;15株为耐多药,同时对克拉霉素敏感的结核分枝杆菌临床分离株;10株为广泛耐药菌株,同时对克拉霉素耐药的结核分枝杆菌临床分离株;此外,还有结核分枝杆菌标准株H37Rv 1株。对结核分枝杆菌23S rRNA行PCR检测和测序。 结果 经检测,H37Rv标准株没有A2058突变,只有1株广泛耐药临床分离株检测有A2058A-G的突变,其他临床分离株均没有突变,在耐克拉霉素的结核分枝杆菌临床分离株中占2.56%（1/39）,在广泛耐药结核分枝杆菌临床分离株中占1/10。 结论 结核分枝杆菌临床分离株对克拉霉素耐药的机制中, A2058突变可能不是产生对克拉霉素耐药的主要机制。结核分枝杆菌产生对克拉霉素耐药的机制有待进一步研究。     

利福平和异烟肼结核分枝杆菌药敏表型和基因型的关系

目的 对利福平（RFP）和异烟肼（INH）进行药敏检测,分析相应的结核分枝杆菌药敏表型与基因型的关系。 方法 对2009年至2012年深圳市第三人民医院结核病门诊和住院的137例结核病患者晨痰标本进行结核分枝杆菌培养,利用膜基因芯片法检测结核分枝杆菌耐药基因的突变情况（基因型检测）,同时以绝对浓度法进行异烟肼和利福平药敏试验（表型检测）,计算两种方法检测结果间的符合率,验证膜基因芯片方法的准确性,用Kappa检验分析两种方法的一致性。 结果137株结核分枝杆菌标本,表型检测利福平和异烟肼耐药率分别为27.01%（37/137）和22.63%（31/137）;基因型检测利福平和异烟肼耐药率分别为26.28%（36/137）和23.36%（32/137）;以绝对浓度法药敏结果为金标准,膜基因芯片检测利福平耐药的敏感度为83.78%(31/37),特异度为94.06%(95/101),符合率为91.97% (126/137),Kappa值为0.79,P<0.05;异烟肼耐药的敏感度为80.65%(25/31),特异度为94.29%（99/105）,符合率为90.51%(124/137),Kappa值为0.73,P<0.05;两种药物药敏结果总符合率为91.24%(250/274)。 结论 结核分枝杆菌耐药性基因型检测和表型检测结果高度一致,且基因型的检测方法能快速准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,有望在临床治疗中广泛应用。     

临床分枝杆菌培养中同步筛检依赖利福平菌的应用价值探讨

目的 探讨分枝杆菌培养中同步筛检依赖利福平结核分枝杆菌（依R菌）的临床应用价值,以期为临床依R菌早期发现提供帮助。 方法 采用临床典型依R菌株在罗氏（L-J）培养基上的最佳生长利福平药物浓度100μg/ml（简称“L-J R100”）,建立临床依R菌初代筛检模式,即在临床分枝杆菌BD960快速分离培养中,平行接种L-J R100 管和罗氏空白对照管（L-J对照）培养;按照其模式对重庆市公共卫生医疗救治中心2011年3月7日至2012年2月15日期间共5362份临床标本平行培养结果进行统计分析（实验结果录入瑞美检验网络LIS系统）。 结果BD960、L-J R100和L-J对照管3种方法平行培养的总阳性检出率为43.92% (2355株/5362份),其中BD960阳性检出率39.56%（2121株/5362份）,L-J对照管阳性检出率25.57%（1371株/5362份）。BD960阴性但L-J对照管培养阳性者234份;L-J R100阳性703株,占检出阳性的29.85%(703株/2355株）;发现有依R菌现象的258株（合计221例,其中重复出现依R菌现象2次的33例、3次的1例、4次的3例,另外有14株L-J R100阳性而对照为阴性的绝对依赖株）,占L-J对照管阳性的18.82%（258株/1371株）,占L-J R100阳性的36.70%（258株/703株）。 结论 临床分枝杆菌培养中同步筛检依R菌能分离到绝对依赖株,可提早为临床提示分离阳性株是否为利福平依赖菌或耐药菌;同时可提高分枝杆菌培养阳性检出率;其方法简单易行,有较好的临床应用价值。     

结核分枝杆菌临床分离株对四种注射用抗结核药物耐药及交叉耐药分析

目的 探讨链霉素（S）、卡那霉素(Km)、阿米卡星(Am)和卷曲霉素(Cm)对结核分枝杆菌的耐药及交叉耐药情况,为耐药结核病的化学治疗提供理论依据。 方法 对首都医科大学附属北京胸科医院2004年1月至2010年12月间4247株临床分离株的药物敏感试验结果进行分析。采用绝对浓度法进行药物敏感试验。4种药物之间总耐药率的差异采用配对χ²检验及χ²分割法,以P<0.007 14为差异有统计学意义。4种药物之间交叉耐药率的差异采用两个样本率比较的χ²检验,以P<0.05为差异具有统计学意义。 结果 4247份临床分离株标本中,S的耐药率为45.11%(1916/4247),Km的耐药率为17.93%(718/4005),Am的耐药率为19.02%(792/4164),Cm的耐药率为9.44%(401/4247)。经配对χ²检验,Cm与S、Am、Km之间耐药率差异有统计学意义,χ²值分别为1349.34、281.54、193.16,P值均小于0.007 14。经配对χ²检验,S与Am、Km之间耐药率差异有统计学意义,χ²值分别为821.10、869.28,P值均小于0.007 14。经配对χ²检验, Am与Km之间耐药率差异有统计学意义,χ²值为13.98,P值小于0.007 14,耐药率从高到低依次为S、Am、Km和Cm。S在其他3种药物的耐药株中的耐药率分别为82.59%（耐Km株,593/718）、77.78%（耐Am株,616/792）、76.81%（耐Cm株,308/401）,χ²值分别为502.959、453.911、626.654,P值均小于0.05。Km在另外3种药物耐药株中的耐药率分别为33.13%（耐S株,593/1790）、83.31%（耐Am株,634/761）、67.89%（耐Cm株,260/383）,χ²值分别为502.959、12.079、100.536,P值均小于0.05。Am在另外3种药物耐药株的耐药率分别为32.78%（耐S株,616/1879）、89.55%（耐Km株,634/708）、77.95%（耐Cm株,304/390）,χ²值分别为453.911、12.079、163.761,P值均小于0.05。Cm在其他3种药物的耐药株中的耐药率分别为16.08%（耐S株,308/1916）、36.21%（耐Km株,260/718）和38.38%（耐Am株,304/792）,χ²值分别为626.654、100.536、163.761,P值均小于0.05。 结论 4种注射用抗结核药物的耐药率从高到低依次为S、Am、Km和Cm。4种药物之间均表现出交叉耐药,但程度不同。S与其他3种药物之间为单向耐药,Km和Am两个药物之间近似完全交叉耐药,Cm是其他3种药物耐药时的选择药物。     

结核分枝杆菌利福平依赖株与耐药株的耐药状况比较

目的 调查结核分枝杆菌利福平依赖株和耐药株对临床常用抗结核药物的耐药性差异,并探讨其临床意义。 方法 采用匡氏双相琼脂培养基分离痰结核分枝杆菌并作耐药性和依赖性测定。 结果依赖组菌株对8种药物的耐药率均高于耐药组菌株,2组菌株对链霉素(S)、乙胺丁醇(E)、对氨基水杨酸 (PAS)、阿米卡星(Am)的耐药率差异有统计学意义(P<0.05),对左氧氟沙星(Lfx)的耐药率差异有统计学意义(P<0.01);100%依赖株和98.6%耐药株为MDR株;依赖株和耐药株中XDR菌株的比例分别为14.6%和5.8%,P=0.05。 结论 结核分枝杆菌利福平依赖株均为MDR株,对一线和二线抗结核药物耐药率高,XDR株比例高,应予高度警惕和关注。     

单耐利福平结核分枝杆菌耐药分子机制研究

目的 探讨单耐利福平结核分枝杆菌中耐药相关基因突变以及药物外排泵两种不同耐药机制的功能。 方法 从国家结核病参比实验室2007-2008年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐利福平的菌株23株。采用直接测序法检测利福平耐药相关基因rpoB突变情况。提取rpoB无突变菌株的RNA后反转录并采用real-time PCR方法检测20个药物外排泵基因的表达量,对比菌株最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）实验结果,筛选可能与利福平药物外排相关的基因,并选用大肠埃希菌为模式生物,构建表达载体,检测过表达目的外排泵的大肠埃希菌对利福平的耐药程度以验证。结果 在23株单耐利福平的菌株中,有16株（69.6%）检测到rpoB突变,其中包括531位点突变9株,526位点突变6株及533位点突变1株。Ser531Leu、His526Asp表现为高浓度耐药,其MIC分别为192 μg/ml和256 μg/ml;而突变类型His526Gly、His526Leu、His526Arg和Leu533Pro表现为低浓度耐药,其MIC分别为0.75 μg/ml、4 μg/ml、2 μg/ml和0.5 μg/ml。在rpoB未突变菌株中,通过real-time PCR发现Rv2936、Rv0783和Rv0933的转录水平与MIC呈正相关。在对照组和转入pEASY-E1-Rv0933的大肠埃希菌中MIC均为 8 μg/ml,而转入pEASY-E1-Rv2936和 pEASY-E1-Rv0783的大肠埃希菌的MIC均有不同程度的提高,分别为32 μg/ml和16 μg/ml。结论 不同耐药突变类型导致的耐药程度不同,Rv2936和Rv0783可能是与利福平耐药相关的的药物外排泵基因。     

宁夏回族自治区结核分枝杆菌基因分型及与耐药性关系的研究

目的 利用间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)方法对宁夏回族自治区（简称“宁夏”）结核分枝杆菌流行株进行分型研究,并分析北京基因型与耐药性的相互关系。 方法 搜集宁夏结核分枝杆菌临床分离株115株,应用Spoligotyping方法进行基因分型研究,采用BioNumerics软件将分型结果进行基因聚类分析。应用比例法药物敏感性试验对115株结核分枝杆菌进行检测,最后将药敏结果结合基因型及流行病学资料进行分析。采用卡方检验比较不同组间结果的差异。 结果 在分离培养的115株菌株中,具有特异Spoligotyping指纹图谱的北京基因型菌株90株,占78.3%（90/115）,25株为非北京基因型,占21.7%（25/115）。 90株北京基因型菌株中,41株为古代基因型（45.6%,41/90）,任意耐药株为16株（17.8%,16/90）;49株为现代基因型（54.4%,49/90）,任意耐药株为33株（36.7%,33/90）,两者间差异无统计学意义（χ²=1.27,P>0.05）。 结论 宁夏结核分枝杆菌以北京基因型流行为主,结核分枝杆菌北京基因型与耐药性之间无明显相关性。