结核分枝杆菌重组蛋白Rv0222的表达及血清学鉴定

目的 构建Mtb重组蛋白Rv0222的重组质粒,评价其用于结核病血清学诊断的价值。方法 通过PCR从Mtb染色体基因组中扩增出Rv0222基因片段,插入pMD18-T载体后,再亚克隆入表达载体pET30a中,诱导表达重组菌,组氨酸标签（His-tag）亲和层析纯化蛋白,通过免疫印迹法分析重组蛋白的免疫反应性,通过间接ELISA方法检测142例血清样本,来自82例结核病患者（痰涂片或痰培养阳性,抗结核治疗症状减轻者）,28例非结核病患者（8例肺癌、15例肺炎和5例肺气肿）和32例健康体检者,检测数据通过专业医学软件MedCalc 11.5.0分析ROC曲线下面积和最佳阳性判定值。 结果 成功构建重组载体,重组蛋白Rv0222经电泳后显示相对分子质量约为27 000,镍柱纯化后蛋白纯度达95%以上,通过蛋白免疫印迹法证实重组蛋白Rv0222与结核病患者血清能特异性结合。酶联免疫检测ROC曲线下面积为0.893,最佳阳性判定值为0.12时,结核病患者组抗体检测敏感度为69.5%（57/82）,非结核病患者和健康体检者抗体检测特异度为90.0%（54/60）,结核病患者与非结核病患者及健康体检者相比,差异有统计学意义（t=25.78,P＜0.0001）。结论 成功构建pET30a-Rv0222表达载体,获得高纯度的重组蛋白Rv0222,ELISA结果显示Rv0222蛋白有望成为结核病血清学诊断的有效抗原之一。     

结核分枝杆菌12种抗原在结核病血清学诊断中应用价值的研究

摘要：目的 研究结核分枝杆菌11种重组蛋白和1种脂阿拉伯甘露糖(LAM)的抗原性,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法 将12种抗原包被于酶标板,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测470例血清中抗结核抗体IgG水平,分析不同抗原组合对结核检出的灵敏度与特异度。结果 单个抗原检测抗结核抗体的灵敏度介于13.3%（28/210）与40.5%（85/210）之间,特异度介于96.4%（185/192）与99.5%（191/192）之间,4种抗原联合检测的灵敏度和特异度分别达到65.2%（137/210）和92.2%（177/192）。结论 多种抗原联合应用可提高结核病血清学诊断的灵敏度和特异度,有助于结核病的临床诊断。     

重组结核分支杆菌38kD和16kD蛋白用于结核病血清学诊断的价值

目的　探讨国产重组结核分支杆菌蛋白38kD(rTPA38)和16kD(rTPA16)用于结核病的诊断价值。方法 以rTPA38和rTPA16为抗原,PPD为对照,用ELISA法检测血清中特异性抗结核抗体。结果 246例肺结核病组,rTPA38、rTPA16和PPD检测的灵敏度分别为66.3%、63.0%和72.3%。健康献血组、非结核呼吸疾病组和卡介苗接种阳转组血清同时用rTPA38、rTPA16和PPD检测,rTPA38特异性分别为97.6%、96.8%、86.0%。rTPA16特异性分别为94.7%、93.1%、75.0%。PPD特异性为93.4%、85.7%、67.9%。统计分析显示,rTPA38蛋白和PPD检测非结核呼吸疾病组,其阳性率有显著性差异 (P＜0.05)。两者检测卡介苗接种阳转组阳性率和血清抗体滴度有显著性差异 (P＜0.05)。rTPA38和rTPA16同时检测108例肺结核病组血清可提高11.1%的阳性率。结论 rTPA38蛋白抗原有较好的灵敏度和较高特异性,是ELISA的可靠抗原,与rTPA16联用可提高灵敏度,对结核病血清学诊断有较高参考价值。     

初治涂阳肺结核患者血清结核抗体IgG应用价值的再探讨

目的探讨初治肺结核患者血清结核抗体(TB-Ab)IgG检测的临床应用价值和其影响因素。方法回顾性调查1 911例初治涂阳肺结核患者血清TB-Ab IgG阳性率,并与同期涂阴患者健康人群进行对照;观察血清TB-Ab IgG阳性率与病灶范围大小,有无空洞,是否排菌及排菌量多少的关系,将所得数据作统计学处理;同时观察血清TB-Ab IgG与结核纯蛋白衍化物皮肤试验(PPD)二者之间有无相关性。结果初治涂阳肺结核患者血清结核抗体阳性率仅53.3%,初治涂阴者为20.5%,健康人群血清结核抗体阳性率0.4%;初治涂阳患者血清TB-Ab IgG的阳性率与病灶范围大小,空洞有无及排菌量多少均有密切关系。结论血清TB-Ab IgG检测在肺结核患者中的特异性和敏感性值得商榷,其临床应用和诊断价值有待进一步完善和提高。     

重组结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6融合蛋白的制备及应用研究

目的 制备重组培养滤液蛋白10和6000早期分泌性抗原靶的融合蛋白(rCFPlO-ESAT-6)，研究其免疫学特性，评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法 用基因拼接(Gene SOEing)法扩增lhp-ESAT-6融合基因、并克隆人pQE30质粒，表达、纯化rCFPl0-ESAT-6蛋白，通过Western blot分析其抗原性。建立豚鼠BCG免疫模型和结核分枝杆菌强毒株(H37Rv)感染模型，建立以融合蛋白为抗原的酶联免疫吸附测定(ELISA)法，检测豚鼠血清中的抗结核分枝杆菌抗体，并与以纯化蛋白衍生物(PPD)为抗原的ELISA法比较。结果 重组质粒pQE30-CFPl0-ESAT-6靶基因的测序结果与预计序列(lhp-linker-ESAT-6)完全一致。融合蛋白在DH5α菌中以可溶性非包涵体形式存在，表达量占菌体总蛋白的40％，分子质量为26000，纯化后的蛋白纯度为98％，浓度为1.2g／L。Western blot分析表明，融合蛋白与活动性肺结核患血清、兔抗CFP10血清和兔抗ESAT-6血清都能发生特异性免疫反应。以10只生理盐水处理豚鼠血清的平均吸光度(A)值 2s为正常界限值，以融合蛋白为抗原，11份H37Rv感染豚鼠血清全部呈阳性反应，11份BCG免疫豚鼠血清仅1份呈阳性反应；以PPD为抗原，11份H37Rv感染豚鼠血清全部呈阳性反应，11份BCG免疫豚鼠血清也全部呈阳性反应。结论 pQE30-CFPl0-ESAT-6 DH5α菌能高效表达rCFPl0-ESAT-6融合蛋白，该蛋白兼具CFPl0和ESAT-6两种蛋白的抗原性，能特异性区分豚鼠因H37Rv感染和BCG免疫后产生的抗结核分枝杆菌抗体。本研究为rCFPl0-ESAT-6融合蛋白在结核病血清学诊断中的应用奠定了基础。     

结核分枝杆菌38kD-16kD融合蛋白克隆表达及血清学诊断价值

目的构建重组结核分枝杆菌38kD-16kD融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的价值。方法通过聚合酶链反应扩增获得16kD和38kD基因片段,分别连接到表达载体pET21a中,同时将2片段两次连接到表达载体pET21a中,形成38kD-16kD(3816),16kD, 38kD重组载体;经表达、纯化和复性后,通过Western blot分析,以酶联免疫吸附试验检测184例血清抗体,肺结核患者96例、非结核肺部疾病患者50例,正常对照38例。结果成功构建重组质粒pET21a-3816,表达蛋白经SDS-PAGE后显示相对分子质量约为65kD,重组蛋白经镍柱纯化后,纯度均达90%以上;经Western blotting证实重组蛋白能与结核病患者血清反应;重组蛋白3816血清检测,其敏感性为80.2%(77/96),特异性为90.9%(80/88)。结论成功表达和纯化了3816融合蛋白,其对血清学检测证明重组融合蛋白有希望成为结核病血清学诊断的有效候选者之一。     

结核分枝杆菌特异性蛋白（TB-SA）抗体检测试剂在结核病诊断中的应用研究

目的 评价结核分枝杆菌特异性蛋白(tuberculosis specific antigen, TB-SA)抗体检测试剂在结核病中的应用价值。 方法 以天津市和平区结核病控制中心、山东省烟台芝罘区肺科医院和河南省南阳市卧龙区结核病防治中心为研究现场,连续纳入2012年4月至10月门诊就诊的所有肺结核疑似患者944例,同时纳入110名健康志愿者作为对照。对所有纳入患者及健康志愿者进行痰涂片、培养、结核菌素试验（PPD）和胸部X线检查,签署知情同意书后留取血清进行TB-SA抗体检测。痰涂片采用萋-尼（Ziehl-Neelsen）染色法,培养采用接种酸性罗氏固体培养基培养。现场数据由双人录入,在国家结核病参比实验室统一整理分析。 结果755例确诊的活动性结核病患者,TB-SA抗体检测法阳性率为74.8% (565/755,95%CI＝71.7%～77.9%),远高于涂片阳性率25.6%（193/755）(χ²=366.59,P<0.0001) 和培养阳性率39.6%（299/755）(χ²=190.12,P<0.0001)。在培养阳性结核病患者中,TB-SA抗体检查敏感度为88.5% (255/288,95%CI＝84.8%～92.2%)。在菌阴活动性结核病患者中,TB-SA抗体检查敏感度为68.0% (310/456,95%CI＝63.7%～72.3%)。TB-SA抗体检测法在活动性结核病患者中的阳性预测值为92.3% (565/612,95%CI＝90.2%～94.4%),在健康人群中检测特异度为97.3% (95%CI＝94.3%～100.3%)。 结论TB-SA抗体检测法在结核病患者中阳性检出率显著高于涂片和培养,适用于结核病,特别是菌阴结核病的诊断;TB-SA抗体检测法诊断结核病的特异度高,可用于人群健康体检。     

3种结核分枝杆菌特异性重组蛋白诊断价值的初步研究

目的评价重组38kD、Ag85B和16kD蛋白3种重组蛋白的诊断价值。方法采用蛋白免疫印迹方法观察本实验室克隆表达的结核分枝杆菌38kD、Ag85B和16kD蛋白抗原用于结核病血清学诊断的灵敏度,及3种抗原联合应用诊断的灵敏度。结果共对62例结核病人血清和19例健康人血清进行了IgG抗体检测,结果显示重组38kD检测灵敏度为51.6%,假阳性率为5.2%;重组Ag85B灵敏度为35.5%,重组16kD的灵敏度22.6%,无1例健康人血清与重组Ag85B及16kD蛋白反应。3种蛋白联合诊断的灵敏度为77.4%,假阳性率为5.2%。结论多种蛋白抗原联合应用将是结核病血清学诊断试剂的发展方向。     

5种结核分枝杆菌特异蛋白质的抗原性分析

目的评价14、16、38kD、mtb81和 ESAT-6等5种结核分枝杆菌特异蛋白质的抗原性。方法利用14、16、38kD、mtb81和 ESAT-6等5种重组蛋白建立ELISA方法,检测120份结核病人、30份非结核呼吸道感染病人和30份健康人血清中相应抗体。结果ELISA显示5种结核杆菌特异性蛋白质的特异性均高于95%;敏感性和准确性则不尽相同,其中38kD的检测敏感性最高,为80.8%;14、16kD、mtb81和 ESAT-6的检测敏感性分别为52.5%、68.3%、35.8%和44.2%。结论5种结核杆菌特异性蛋白质均具有不同程度的抗原性。进一步提高抗原或抗体的检测灵敏度将有利于结核病的诊断。     

重组Sj-Ts4样蛋白在日本血吸虫病免疫诊断中的初步应用

目的 评价重组Sj-Ts4样蛋白对日本血吸虫病的诊断价值.方法 取血吸虫病患者(急性、慢性、晚期)血清74份、华支睾吸虫病患者血清24份、钩虫病患者血清8份和健康人血清30份,利用纯化、重组rSj-Ts4样蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA),采用ELISA法分别检测血清中抗,Sj-Ts4样蛋白特异性抗体和SjAWA抗体,比较两种检测方法的敏感性和特异性.结果 rSj-Ts4-ELISA和SjAWA-ELISA法检测急性、慢性和晚期血吸虫病患者血清的阳性率分别为97.1%(33/34)、100.0%(16/16)、87.5%(21/24)和100.0%(34/34)、100.0%(16/16)、75.0%(18/24),经校正X2检验,两种检查方法比较差异无统计学意义(x2=1.23.P＞0.05);健康人血清两种检测方法的假阳性率分别为6.7%(2/30) 3.3%(1/30),经校正x2检验,差异无统计学意义(X2=0.35,P＞0.05);华支睾吸虫患者和钩虫病患者血清阳性率分别为12.5%(3/24)、20.8%(5/24)和12.5%(1/8)、37.5%(3/8),经校正x2检验,两种检查方法比较差异无统计学意义(x2值分别为0.60、1.33,P＞0.05).结论 rSj-Ts4样蛋白作为抗原,对免疫检测日本血吸虫病患者血清中的抗体具有较好的敏感性和特异性,对日本血吸虫病患者的诊断有较大的应用价值.     

结核分枝杆菌Rv2352c基因的克隆表达及其抗原活性鉴定

目的构建含结核分枝杆菌(M.tb)rv2352c基因原核表达载体,经转化E.coli以表达Rv2352c融合蛋白,并研究其抗原性。方法用PCR扩增M.tb rv2352c基因,克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):rv2352c重组质粒,阳性克隆测序验证正确后转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导Rv2352c蛋白表达。经Ni+-NTA层析柱纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE和结核患者血清Western blot进行鉴定。将纯化的重组蛋白分别免疫家兔,制备抗Rv2352c抗血清,抗血清的效价测定采用酶联免疫吸附试验法(ELISA),取兔抗血清与纯化蛋白Rv2352c通过Western blot方法,检测抗体特异性。结果经酶切鉴定和测序分析证实rv2352c原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE和Western blot结果显示,在45 kD处呈现单一蛋白条带。用重组蛋白Rv2352c免疫接种后可诱导出高滴度的特异性抗体。纯化蛋白通过Western blot鉴定证实为目的蛋白,有较强的免疫原性。结论成功构建原核表达重组质粒pET30a(+):rv2352c,制备和纯化的Rv2352c融合蛋白具有较好的纯度和生物学功能,为进一步研究结核病的潜在分子标志物奠定基础。     

广州市依赖药物结核分枝杆菌分离率的初步调研

目的 了解和分析广州市依赖药物结核分枝杆菌的分离率,为临床第一线治疗结核病提供科学依据。 方法 对临床分离出的3 911株经实验室鉴定确证为结核分枝杆菌,采用罗氏药敏方法对临床常用的11种药物（包括利福平R、异烟肼H、链霉素S、乙胺丁醇E、环丙沙星C、左氧氟沙星Lfx、硫酸阿米卡星Am、丙硫异烟胺Pto、莫西沙星Mfx、克拉霉素Clr、力克菲蒺D）进行结核分枝杆菌的药物依赖性测定。 结果 3 911株结核分枝杆菌中,有159例患者共分离出192株对上述11种药物中的其中10种有程度不同的药物依赖性,依赖药物分离率为4.9%（192/3 911）;其中依赖R分离率为 2.7%（104/3 911）、其次H 2.4%（92/3 911）、S 1.0%（38/3 911）、C 0.4%（16/3 911）、Lfx 0.3%（12/3 911）、Am 0.3%（10/3 911）、E 0.2%（8/3 911）和Pto 0.1%（5/3 911）以及Mfx、Clr各0.1%（3/3 911）;暂未见力克菲蒺有结核分枝杆菌依赖现象;在159例患者中,有25例为广泛耐多药结核（XDR-TB）患者,110例为耐多药结核（MDR-TB）患者,二者占依赖药物结核分枝杆菌感染的84.9%（135/159）。 结论 结核分枝杆菌对药物的依赖性,以R、H为主,对Mfx、Clr的依赖率最低;而依赖药物结核分枝杆菌感染患者中,绝大部分均为MDR-TB和XDR-TB患者,这是值得临床第一线关注的严重问题。     

抗结核抗体及结核感染T细胞斑点试验在结核病诊断中的应用

目的探讨抗结核抗体(38kD-IgG)及结核感染T细胞斑点试验（T SPOT-TB）在结核病临床诊断中的价值。方法以上述2种方法单项及联合检测活动性结核病患者83例（菌阳结核患者43例,菌阴结核患者40例）,非结核对照者50例（其中有呼吸系统疾病者15例,健康查体者35例）,共计133例。结果38kD-IgG及T SPOT-TB试验检测菌阳结核的阳性率分别为79.1%和93.0%,联合检测阳性率为97.7%;2种方法单项检测菌阴结核的阳性率均为72.5%,联合检测阳性率提高到92.5%。50名非结核对照中,2种试验特异性分别为70.0％和94.0%,联合检测特异性为66.0％。结论对于菌阳患者,T SPOT-TB试验敏感性较高（93.0%）,但与38kD-IgG方法相比,统计学上差异无统计学意义（χ²=3.49, P>0.05）;T SPOT-TB试验的特异性明显高于38kD-IgG试验（χ²=9.76, P<0.01）;2种方法联合检测能显著提高菌阴结核患者阳性检出率,与单项检测方法相比,差别有统计学意义（χ²=5.54, P<0.05）因此,联合检测对于菌阴结核患者的诊断,具有实用价值。     

应用免疫磁珠分离-改良罗氏培养技术检测痰结核分枝杆菌的研究

目的通过免疫磁珠分离技术(immunomagnetic beads separation techniques,IMBS)富集痰液中的结核分枝杆菌,提高痰液培养的阳性率,以期用于结核病的快速诊断。方法制备兔抗结核杆菌IgG抗体,并将其结合于免疫磁珠表面。采集71例确诊结核病患者的痰液标本,通过免疫磁珠分离技术捕获、富集吸附结核分枝杆菌后用改良罗氏培养基培养,并与传统改良罗氏(L-J)培养法和痰涂片抗酸染色法作比较。结果 71例结核病患者痰涂片抗酸染色检查阳性26例,阳性率36.6%;传统改良L-J培养阳性34例,阳性率47.9%;免疫磁珠分离技术捕获、富集结核分枝杆菌后进行改良L-J培养阳性48例,阳性率67.6%。三者阳性率差异有统计学意义(P<0.05),改良L-J培养和痰涂片检查阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用免疫磁珠分离技术捕获、富集痰液中的结核分枝杆菌后进行培养,可显著提高痰培养的阳性率,该方法可用于结核病的快速诊断。     

厦门市肺结核耐药流行情况及相关因素分析

目的了解近年来厦门市肺结核患者耐药现状,分析影响耐药结核病产生的因素,以期为制定本地区行之有效的结核病防控措施提供科学的参考依据。方法采用横断面调查,对2011年7月1日至2012年6月30日在厦门市各结核病定点医院门诊登记的所有痰涂片阳性的肺结核患者共776例进行调查。收集患者的基本情况和诊疗信息。收集痰标本培养,培养阳性菌株采用比例法进行药物敏感性试验（异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇等）;采用对硝基苯甲酸（PNB）培养法鉴定结核分枝杆菌复合群。排除痰菌培养阴性,菌株污染和非结核分枝杆菌感染47例,最终获得药物敏感性试验结果的729例。利用SPSS18．0软件中非条件logistic回归模型分析结核病耐药发生的可能影响因素。结果厦门市总耐药率为27．2％（198／729）,总耐多药率为9．7％（71／729）,初治耐药率为23．4％（134／573）,复治耐药率为41．0％（64／156）,初治耐多药率为7．3％（42／573）,复治耐多药率为18．6％（29／156）;对四种抗结核药物的耐药率最高的为异烟肼16．5％（120／729）,最低的为乙胺丁醇6．9％（50／729）;复治患者的耐药率显著高于初治患者（X2值为19．286,P〈0．01）,是耐药结核病的危险因素（OR=2．154,95％CI=1．467-3．163,Wald X^2=15．319,P〈0．001）。结论厦门市耐药结核病疫情不容乐观,复治化疗史是耐药结核病产生的重要影响因素。     

Rv1656重组蛋白在结核病辅助诊断中的应用价值研究

目的研究结核分枝杆菌Rv1656重组蛋白在结核病辅助诊断中的应用价值。方法以痰涂片、痰培养及3个商品化的结核杆菌抗体试剂盒为对照,应用化学发光酶免疫分析法检测42例结核病患者和54例非结核肺部疾病患者尿液中抗Rv1656抗体水平;绘制抗Rv1656抗体检测工作特征曲线(ROC曲线),确定其诊断结核病的临界值,并评价其诊断效能。结果结核病组患者尿液抗Rv1656抗体为(39517.2±11802.7pg/ml),非结核呼吸病组为(11416.3±1145.4pg/ml),差异有统计学意义(t=3.002,P<0.01);痰菌阴性结核病患者尿液中抗Rv1656抗体为(47011.4±1529.9pg/ml),痰菌阳性结核患者为(15535.7±1629.7pg/ml),差异有统计学意义(t=2.035,P<0.05)。尿Rv1656抗体诊断结核的灵敏度为42.8%,上海奥普血清结核抗体试剂盒为71.4%,差异有统计学意义(χ2=63.87,P<0.01)。尿Rv1656抗体诊断结核的特异性为83.3%,上海奥普血清结核抗体试剂盒为38.9%,差异有统计学意义(χ2=76.15,P<0.01)。结论结核分枝杆菌Rv1656重组蛋白具有抗原特异性可作为尿液结核抗体检测的组合抗原之一。     

结核分枝杆菌融合抗原38F和64F诊断活动性肺结核的价值

目的 探讨结核分枝杆菌融合抗原38F和64F对活动性肺结核患者血清中IgG、IgM和IgA抗体检测的诊断价值。 方法 利用结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38F和64F,通过ELISA法对223例活动性肺结核患者进行结核分枝杆菌特异性IgG、IgM和IgA抗体水平检测。223例活动性肺结核患者分为三组,第一组为涂片和培养共同阳性组（86例）,第二组为涂片阴性且培养阳性组（51例）,第三组为涂片和培养共同阴性组（86例）。 结果223例活动性肺结核病患者,第一组IgG、IgM和IgA的联合检出率为79.07%（68/86）;第二组IgG、IgM和IgA的联合检出率为62.75%（32/51）;第三组IgG、IgM和IgA的联合检出率为69.77%（60/86）。全部样本血清学方法的检出率为71.75%（160/223）。结论 结核分枝杆菌融合抗原38F和64F对于活动性肺结核具有较高的辅助诊断价值,并且IgG、IgM和IgA抗体联合检测可以提高检出率。     

结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测的建立和初步应用

目的建立结核分枝杆菌特异性IFN-γ酶联免疫斑点（Elispot）检测技术,初步评价其在诊断结核分枝杆菌感染的敏感性和特异性。方法采用以早期分泌抗原靶6kDa蛋白（ESAT-6）抗原为主的重组蛋白库、多肽库为抗原,建立结核分枝杆菌特异性IFN-γElispot检测技术（简称Elispot）;应用该技术对32例肺结核病患者、205例健康对照者和18例肺部其他疾病对照的外周血结核菌特异性IFN-γ水平进行检测;结核病人和部分健康对照同时采用全血干扰素试剂（Quantiferon-TB-Gold,QFT-G）进行平行检测。结果采用Elispot检测,结核患者的阳性率最高（75.0%）,显著高于健康对照（7.3％）和其他肺部疾病患者（11.1%）,结核患者反应水平与其他两组比较均差异有统计学意义（P<0.05,P<0.05）。采用QFT-G在结核病人中的IFN-γ应答阳性率为78.1%,与Elispot检测结果进行配对比较无显著性差别（χ²=1.6,P>0.05）。 结论建立了结核菌特异性IFN-γ Elispot检测技术,该技术在诊断结核菌感染的初步应用显示出较好的特异性和敏感性,但仍需进一步扩大样本数观察。     

结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-CFP21融合蛋白克隆表达及全血IFN-γ的检测

目的构建结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6-CFP21(CE21)融合蛋白的重组质粒,通过IFN-γ的检测探讨CE21在结核病检测中的价值。方法通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得CFP21和CFP10-ESAT-6(CE)基因片段,分别连接到pMD18-T,并将两片段2次连接到表达载体pET21a(+)中,获得pET21a-CFP10-ESAT-6-CFP21重组质粒;经表达纯化和复性后,去除内毒素,利用酶联免疫吸附试验检测48例结核病患者、30例非结核肺部疾病患者及32例健康对照者全血中IFN-γ的释放量。结果CE21经SDS-PAGE分析后相对分子质量为45,与预期大小一致。CE21融合蛋白全血标本IFN-γ的检测,结核组阳性率为72.9%,非结核疾病对照组和健康对照组阳性率分别为3.3%和3.1%。结论成功获得CE21融合蛋白,IFN-γ的检测证明该融合抗原具有良好的结核病检测价值。