制备GP73多克隆抗体并建立GP73胶乳增强免疫比浊法

目的运用胶乳微球标记抗高尔基体蛋白73(GP73)抗体,并初步建立GP73的胶乳增强免疫比浊法。方法用人工重组GP73蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,并将纯化成功后的抗体蛋白共价偶联到胶乳微球上;优化偶联条件,制备免疫胶乳,建立GP73胶乳增强免疫比浊测定法。结果制备的纯化抗GP73多克隆抗体的效价达到16 000,用其致敏的胶乳微球在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐(EDAC/NHS)浓度为10 mg/m L、反应溶液为PBS(p H=6)、室温反应3 h,偶联率最高。所建立的颗粒增强免疫比浊法灵敏度和特异性良好,线性范围在(6.25~200)ng/m L,检测下限在10 ng/m L。结论成功纯化出GP73多克隆抗体,制备GP73免疫胶乳微球颗粒,建立GP73胶乳增强免疫比浊法。     

口服幽门螺杆菌苗免疫小鼠后胃粘膜的免疫应答

目的 观测Hp全菌抗原和粘膜佐剂LT口服免疫Balb/c小鼠后的胃肠粘膜免疫反应。方法 采用ELISPOT法检测了胃粘膜、肠粘膜相关淋巴组织PP结抗原特异性形成细胞（AFC）。结果 抗原免疫组、抗原 佐剂组胃肠粘膜抗原特异性sIgA-AFC、IgG-AFC数量明显增加,尤以sIgA-AFC为甚。并且抗原 佐剂组明显高于单纯抗原组和对照组。结论 口服菌苗可有效诱导胃肠道粘膜免疫应答。局部sIgA可能在抗Hp感染中具有重要作用。     

生化分析仪检测胶乳免疫比浊法AFP的性能验证评价

目的:对生化分析仪检测胶乳免疫比浊法AFP的分析性能进行验证和评价.方法:参照中国合格评定国家认可委员会(China National Accreditation Service,CNAS)最新的性能验证指南和美国临床和实验室标准协会(American Clinical and Laboratory Standards...     

人幽门螺杆菌尿素酶抗体诊断试剂盒的研制

幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ)为慢性胃炎、消化性胃溃疡的致病菌 ,并且与胃癌的发生密切相关 ,世界卫生组织 (ＷＨＯ)将其列为一级致癌因子 ,早期诊断Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ感染并对其治疗和预后的观察具有重要意义。目前 ,临床上用于诊断Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ感染的方法主要有胃镜下组织活检、细菌培养、13 Ｃ呼气试验等 ,前者需活检组织 ,病人痛苦大 ,且阳性率低 ,后者需特殊性设备 ,不易推广 ,细菌培养则阳性检出率低 ,而血清学诊断具有灵敏、快速、准确、简便、费用低等优点 ,易在临床上广泛使用。但是 ,…     

幽门螺杆菌全菌抗原口服免疫BLAB／c小鼠的免疫应答机理研究

目的 分析幽门螺杆菌全菌抗原的口服免疫应答反应。方法 ELISA分析免疫小鼠血清、唾液、粪便提取物特异抗体水平,ELISPOT分析胃粘膜、派伊尔小结（PP）抗原行异性抗体分泌细胞（ASC）,RT－PCR分析PP T细胞因子mRNA表达水平。结果 ①口服免疫可诱导强烈的血清IgG反应和唾液、粪便提取物特sIgA反应;②胃粘膜、PP结产生大量抗原特异性抗体分泌细胞（ASC）,尤以sIgA-ASC型居多,PP结抗原特异性形成细胞（ASC）数量与特异抗体水平密切相关;③加佐剂免疫组小鼠PP T细胞,体外抗原刺激下,早期高表达IFN－γ晚期高表达IL－4。结论 全菌抗原和粘膜佐剂免疫可诱导H.pylori特异的系统、粘膜免疫应答,局部sIgA可能在抗H.pylori感染中具有重要作用,肠粘膜免疫主要诱导部位PP早期表现为TH1型优势应答,晚期则转为TH2型优势应答。     

胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测癌胚抗原结果比对

目的探讨胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测血清中癌胚抗原的结果差异性。方法随机抽取门诊体检标本204例,用胶乳增强透射免疫比浊法和电化学发光免疫分析法同时检测血清中癌胚抗原的浓度,比较两者间差异及相关性。结果两方法学检测结果具有高度相似性,Sprerman相关性检验,相关系数为0.998。结论胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测值的相关性良好,胶乳增强透射免疫比浊法值得在临床上推广使用。但建议各地区基层医院实验室建立本实验室参考范围。     

胶乳增强免疫比浊法检测糖化血红蛋白的性能评价

目的 对应用胶乳增强免疫比浊法在日立7600-020全自动生化分析仪上检测糖化血红蛋白(HbA1c)的性能进行评价.方法 应用胶乳增强免疫比浊法在日立7600-020全自动生化分析仪上检测HbA1c,对其精密度、空白检测限、线性、携带污染率进行评价,并与BIO-RAD(D-1 0N)高效液相色谱法(HPLC)检测HbA1c进行相关性分析,同时对参考区间进行验证.结果 日立7600-020全自动生化分析仪上检测HbA1c的低高水平的CV％批内分别为1.6％、0.5％;CV％批间分别为2.6％、1.3％;CV％总分别为3.5％、2.6％.检测限为0.1％.在2.0％～17.6％范围内线性良好(y=1.0046X-0.0619,R2=0.9996).携带污染率为1.03％,样本间交叉污染小.日立7600-020分析仪与BIO-RAD(D-10N)分析仪检测HbA1c的结果呈明显相关(y=1.0064X-0.0769,R2 =0.9942),95％置信区间为(-0.41～0.52)且百分偏倚的绝对值均小于6％.20名健康人群的HbA1c测定结果为4.0％ ～5.5％,在厂家提供的参考区间内.结论 应用胶乳增强免疫比浊法在日立7600-020全自动生化分析仪上检测HbA1c的性能良好,可供临床使用.     

抗幽门螺杆菌rHpaA鸡蛋黄抗体的研制

目的：采用基因工程技术表达重组幽门螺杆菌黏附素rHpaA，以此蛋白为抗原制备抗rHpaA的高特异性鸡蛋黄抗体。方法：诱导重组质粒pQE30-HpaA在大肠杆菌中大量表达rHpaA蛋白，用rHpaA免疫鸡，以水稀释法联合盐析法提取纯化IgY，采用Bradford法测定含量，SDS—PAGE电泳分析纯度，Western blot鉴定抗原特异性，ELISA测定效价和巴氏消毒后的活性。结果：IgY提纯后含量为24．6mg／ml，纯度约为90％，Western blot显示在相对分子量30000处出现单一条带，ELISA效价为1：12800，巴氏消毒后未见效价损失。结论：成功获得了高浓度、高纯度、高效价、耐巴氏消毒的特异性IgY，为进一步制备预防幽门螺杆菌感染的特异性IgY制剂奠定了基础。     

胶体金与胶乳增强免疫比浊法测定心肌肌钙蛋白Ⅰ的比较

目的 用北京九强公司的胶体金法与胶乳增强免疫比浊法定量测定我院60例血清肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)水平.方法 结合临床最后诊断,评价两种测定方法的分析性能.比较胶体金法与胶乳增强免疫比浊法测定cTn Ⅰ总符合率、灵敏度、特异性、误诊率和漏诊率.结果 胶体金法与胶乳增强免疫比浊法与临床诊断总符合率好,灵敏度高,特异性强,误诊率和漏诊率低.两种检测方法测定结果之间差异无统计学意义,P＞0.05.结论 胶乳增强免疫比浊法定量测定cTn Ⅰ方法简便、快速,具有较高的灵敏度和精密度,可用全自动分析仪进行测试,适用于大批量及临床常规使用.胶体金法方便快速,适合临床科室床旁检测.     

幽门螺杆菌疫苗免疫机制的研究进展

幽门螺杆菌(H.pylori)是定植于人体胃粘膜的重要致病菌,而粘膜疫苗以其有效的保护性免疫成为防治H.pyiori的热点,但对相应的免疫机制的认识目前尚不明确.故本文对H.pyiori疫苗的保护性免疫机制中的抗原递呈机制,抗体的作用以及TH细胞反应的作用等研究进展做一概要介绍.     

检测抗疟原虫抗体的胶乳凝集试验及胶体金免疫试验

用化学合成的二个疟原虫多肽致敏聚苯乙烯胶乳及胶体金,建立了胶乳凝集试验(LAT)、胶体金凝集试验(CGAT)及浸测式试验(CGDRT)。三法对镜检为疟原虫感染的血清标本的阳性检出率分别为90.6％(29/32)93.8％(30/32)和100％(35/35);对阴性血清标本的假阳性率分别相应为5.8％(3/52),0％(0/40)和0％(0/43)。     

含幽门螺杆菌特异性抗体牛奶清除幽门螺杆菌效果的临床随机试验

目的:比较观察抗幽门螺杆菌抗体牛奶根除幽门螺杆菌的效果。方法:用4 株幽门螺杆菌(1 株为标准菌株,3 株为本地流行菌株)免疫奶牛,制备出抗幽门螺杆菌抗体牛奶。本次试验共筛选148 例患者,C-14 呼气试验阳性的患者为72 例,最后符合入选标准的为39 例,将符合标准的患者随机分为试验组和对照组,分别为21 例和18 例,试验组饮用含特异性幽门螺杆菌抗体的牛奶,对照组饮用普通牛奶,连续饮用2 个月后,观察结果。结果:试验组的21 名对象中,9 人C-14 呼气试验转为阴性,10 人降低。有效清除率达42.86%,而对照组未有清除,两组清除率有统计学意义(P =0.005,P<0.05)。结论:抗幽门螺杆菌抗体牛奶具有多克隆性和很高的效价,能够有效清除胃内幽门螺杆菌。     

血清总25-羟基维生素D胶乳免疫比浊法检测的方法学评价

目的 验证及评估一种体外定量测定人血清中总25-羟基维生素D[25(OH)D]水平的方法学性能.方法 使用贝克曼AU5800全自动生化分析仪对血清25-羟基维生素D采用胶乳免疫比浊分析法进行检测,并对建立的方法进行准确度、精密度、灵敏度、线性范围、携带污染、抗干扰以及方法学比对等性能评价.结果 该方法准确度偏差和批内、批间精密度均小于10％;空白限及检测限的灵敏度验证在要求范围内,功能灵敏度为3.26ng/mL;在试剂线性范围验证的线性方程中,相关系数R2为0.9983,斜率为1.0152;在抗干扰能力验证中,当胆红素浓度不大于40mg/dL、三酰甘油浓度不大于1000mg/dL、血红蛋白浓度不大于150mg/dL时,对样本检测结果不产生明显的干扰作用;携带污染率经过公式计算为零,在与西门子ADVIA CentaurXP全自动化学发光分析仪进行方法学比对后,两种方法的线性相关方程的相关系数R2为0.972,斜率为0.737,一致性比对中有97％的结果在95％的一致性置信区间内.结论 该方法检测性能良好,具有较好的重复性及精确性,可满足临床需求.     

PELA幽门螺杆菌口服疫苗微球黏膜免疫研究

目的：应用复乳挥发法制备PELA泛影葡胺显影微球与缨门螺杆菌超声上清口服疫苗微球，并进行靶向与黏膜免疫研究。方法：采用CT技术，研究显影微球的靶向，PELA幽门曙杆菌超声上清口服疫苗微球口服免疫小鼠后，运用ELISA法检测血清，唾液，肠粘液的抗体改变情况，ELISPOT法分析派伊尔氏结（PP结）抗原特异性抗体形成细胞（ASC）的数量增减，结果；口粒径在10um以下的微球，首先粘附在胃肠黏膜表面，后投递于PP结；H.pylori疫苗微球免疫后可诱导较高的唾液sIgA水平和肠道sIgA反应，PP结抗原特异性抗体形成细胞（ASC）数量与肠道 sIgA水平密切相关，结论：可生物降解的PELA微球可用于靶向口服疫苗的研究。     

幽门螺杆菌微球疫苗免疫诱导的免疫应答

目的通过对幽门螺杆菌微球免疫后Balbc小鼠血清IgG、IgA、胃肠sIgA的检测及脾脏IL4、IFNγ的mRNA表达水平、IgGASC、IgAASC数量的比较观察,探求疫苗的免疫保护机理。方法取Balbc小鼠口服免疫疫苗,剂量为150μg/(只·次),免疫时间为0、14、30d。2周后取血清及胃肠洗液进行抗体检测,同时取脾脏检测细胞因子mRNA表达水平及ELISPOT检测抗体分泌细胞数量变化。结果免疫后小鼠以上检测指标与对照组比较均有不同程度的升高。结论微球疫苗所诱发的免疫保护是细胞免疫、体液免疫两者共同作用的结果。     

幽门螺杆菌oipA DNA重组质粒的构建及免疫保护作用

目的:探讨幽门螺杆菌(Hp)oipADNA重组质粒在防御Hp感染中的作用。方法:将HpoipA基因的开放读码框架定向克隆入pVAX1载体,获得的重组子pVAX1oipA转染SGC7901细胞,用RTPCR及ELISA方法检测细胞oipA转录及翻译水平的表达。抽提纯化重组质粒pVAX1oipA,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠(100μg/只)每周1次,共3次,以质粒pVAX1(空载组)和生理盐水(空白组)做对照,分别于末次注射1个月和2个月后ELISA法检测血清中相应抗体。在证实有免疫应答的基础上,以HpSS1攻击小鼠(0.5×1090.5ml/只)3次,于末次攻击4周后,取胃黏膜组织作细菌学(包括胃黏膜快速尿素酶试验、细菌培养鉴定)和组织学检测。结果:pVAX1oipA转染的SGC7901细胞在转录水平和翻译水平均有相应的表达;免疫小鼠产生抗oipA抗体。免疫小鼠经细菌攻击后,实验组、空载组和空白组胃黏膜组织快速尿素酶实验阳性率分别为0(0/10)、90%(9/10)和100%(5/5),细菌培养阳性率分别为20%(2/10)、90%(9/10)和100%(5/5),组织学检测结果:空载组和空白组小鼠胃黏膜均出现轻度或重度糜烂,而实验组小鼠胃黏膜80%(8/10)正常,显示oipADNA重组子具有免疫保护作用。结论:oipADNA重组子能有效诱导抗Hp保护性免疫反应。     

免疫比浊法检测梅毒螺旋体抗体的方法评价

目的评价免疫比浊法在梅毒螺旋体抗体检测中的临床应用价值。方法分析免疫比浊法的精密度、线性、稳定性、干扰因素、携带污染指标,并与化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)进行阳性率比较。结果免疫比浊法批内CV为1.64%~2.22%、批间CV为3.57%~3.74%;黄疸、脂血及溶血对本方法无明显干扰;阳性率均为16.8%,差异无统计学意义(x^2=0,P>0.05)。结论免疫比浊法检测结果与CMIA法检测结果相关性良好,可以满足临床诊断需要。     

微粒子酶免疫分析法和胶乳增强免疫比浊法测定β2-微球蛋白的评价

对微粒子酶免疫分析法和胶乳增强免疫比浊法测定血清和尿液β2-微球蛋白（β2-MG）结果偏差进行评估。按照美国国家实验室标准委员会（NCCLS）EP9-A文件,以微粒子酶免疫分析法为实验方法,胶乳增强免疫比浊法为比较方法进行对比及偏差评估,将测定数据进行相关分析,并对两种分析系统之间的预期偏差进行评估。结果发现,除高浓度（〉10mg/L）尿液样本外,其余各浓度的血清和尿液β2-MG用两种方法的测定结果的偏差均在可接受的范围。在使用性能较好的全自动生化分析仪和相配套试剂的前提下,微粒子酶免疫分析法和胶乳增强免疫比浊法对血清和尿液β2-MG的测定结果基本一致。