MeCP2在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及意义

目的 探究甲基化CpG结合蛋白（Methyl-CpG-binding protein 2,MeCP2）表达对卵巢浆液性囊腺癌SKOV3细胞增殖的作用。方法 在TCGA数据库中获取卵巢浆液性囊腺癌患者组织的RNA测序数据与临床病理学信息,利用生物信息学方法分析MeCP2在健康者和卵巢浆液性囊腺癌患者中的表达及其与卵巢浆液性囊腺癌临床病理学分期、生存期的相关性;分别利用MTT实验、细胞克隆实验、细胞周期及细胞凋亡实验分析MeCP2表达对SKOV3细胞增殖的影响。基因集富集分析（Gene set enrichment analysis,GSEA）获取MeCP2表达调节的关键信号通路,利用Western blot进行相关蛋白的检测。结果 MeCP2在卵巢浆液性囊腺癌患者中的表达显著降低;MeCP2的表达与卵巢浆液性囊腺癌的病理学分期相关,而与组织学分级无关;生存期分析显示,MeCP2高表达患者的无病生存期显著长于低表达患者,而MeCP2的表达对于患者整体生存期、疾病特异性生存期、无进展间隔生存期没有影响;细胞功能实验显示过表达MeCP2能够抑制细胞增殖活性、细胞克隆形成能力及阻滞细胞周期G₁/S期的转化并诱导细胞发生凋亡。MeCP2表达调节的信号通路分析显示,MeCP2能够抑制ERBB信号通路相关蛋白（EGFR、AKT）、细胞周期相关蛋白CDK4表达,促进细胞凋亡蛋白BAX表达。结论 MeCP2在卵巢浆液性囊腺癌组织中低表达且与患者无病生存期相关,过表达MeCP2能够抑制卵巢浆液性囊腺癌SKOV3细胞的增殖。     

自发性早产孕妇血清中子宫平滑肌功能相关miRNA的表达及生物学功能分析

 目的 基于自发性早产子宫平滑肌中调控失常的miRNAs,寻找早产孕妇血清表达失常的miRNAs。方法 采用病例-对照研究募集2017年5月—2018年8月于复旦大学附属妇产科医院就诊的妊娠24+0周至36+6周的产妇。病例组为自发性早产的入院患者,对照组为同时期门诊产检的正常孕晚期妇女,遵循伦理原则收集和随访其临床资料和血清样本。采用定制Real-time PCR检测两组血清中子宫平滑肌功能相关的8个miRNA的表达水平,寻找早产血清中差异表达的miRNA,并通过生物信息学工具探索差异表达miRNA可能的生物学通路。结果 共募集42例自发性早产孕妇（病例组）和32例非早产孕妇（对照组）。与对照组相比,miR-26b-5p和miR-936在病例组血清中的相对表达显著升高（FDR均为0.036）。生物信息分析提示：miR-26b-5p和miR-936可能通过PCNA、JARID2、PTEN和GATA4等靶分子调控血管上皮生长因子生成、细胞周期调控、磷脂酰肌醇3-激酶活性的正调节和凋亡通路等生物学通路。结论 自发性早产孕妇血清中miR-26b-5p和miR-936表达失常,血清miR-26b-5p和miR-936异常升高可能与自发性早产有关。     

Twist基因对结肠癌细胞系侵袭转移能力影响的体外研究

目的 :探讨Twist基因在SW480、HCT116和HT29结肠癌细胞系上皮-间质转化（EMT）中的作用,明确其对恶性肿瘤侵袭转移能力的影响。方法:利用重组质粒pTracer-CMV/BSD-Twist 和pGenesil1.2-Twist-shRNA转染SW480、HT29和HCT116;流式细胞术检测转染率;Real time-PCR和Western blot检测Twist,E-cadherin和Vimentin转录及蛋白表达水平;Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果:转染高表达Twist质粒后,各结肠癌细胞系中Twist和Vimentin表达水平显著升高（P<0.05）,E-cadherin显著降低（P<0.05）;转染低表达Twist质粒后,SW480和HT29中各指标均无显著变化（P>0.05）,HCT116中Twist 和Vimentin表达水平显著降低（P<0.05）,E-cadherin无显著变化（P>0.05）;Transwell实验表明抑制HCT116细胞系Twist表达后,其侵袭和迁移能力明显减弱（P<0.01）。结论:上调Twist表达可以促进EMT;抑制HCT116 中Twist表达能减弱结肠癌细胞的侵袭和转移能力。     

上尿路尿路上皮癌Slit引导配体3的表达与临床病理特征以及预后的关系

目的 观察Slit引导配体3（Slit guidance ligand 3,Slit3）在上尿路尿路上皮癌（upper tract urothelial carcinoma,UTUC）中的表达及其与UTUC临床病理特征以及预后的关系。方法 采用免疫组织化学方法检测Slit3在UTUC中的表达,并运用相关统计学方法分析Slit3表达与UTUC临床病理特征（包括患者年龄、性别、组织学分级、分期和大片坏死等）以及预后的关系。结果 在UTUC患者中,Slit3表达随着肿瘤组织学分级和分期的增高而减低（P=0.014和P=0.006）,Slit3还与肿瘤膀胱复发具有相关性（P=0.011）。在单因素生存分析中,Slit3低表达与UTUC患者的较短无病生存期和癌特异性生存期均相关（P=0.006,P=0.015）,但在多因素生存分析中无统计学意义（P=0.213,P=0.332）。结论 Slit3的低表达与肿瘤高分级、高分期以及膀胱复发相关,但不影响UTUC的预后。     

Amotl2促进肝细胞肝癌血管生成拟态及EMT形成

目的:研究Amotl2对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响及其在诱导肝癌上皮间充质转化（EMT）及血管生成中的作用。方法:将Amotl2过表达质粒和干扰质粒分别转染至肝癌细胞系HepG2和Bel7402中,Western blot检测转染前、后HepG2和Bel7402中Amotl2、EMT相关蛋白（E-cadherin、Vimentin）表达变化情况;划痕、侵袭实验检测Amotl2对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响;三维培养检测Amotl2对HCC细胞形成血管样结构的影响。结果:促进Amotl2表达后HepG2表现出EMT样改变,E-cadherin表达下降、Vimentin表达上升、细胞迁移侵袭和三维成管的能力增强。抑制Amotl2表达后Bel7402由间质样表型转变为上皮样表型,E-cadherin表达上升、Vimentin表达下降、细胞迁移侵袭和三维成管的能力减弱。结论:Amotl2可能通过诱导EMT促进原发性肝癌的迁移侵袭能力和血管生成拟态的形成。     

结直肠癌中O-型糖基化相关差异基因的筛选及分析

目的 通过鉴定得出正常和异常O-型糖基化结肠癌细胞之间的差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）,即O-型糖基化相关差异基因,并探讨其促进肿瘤发生发展的潜在机制。方法 运用单色标记表达谱芯片技术对经Cosmc表达质粒或其空白对照质粒稳定转染的LS174T Tn（+）细胞进行检测,采用RNA杂交获得基因表达谱数据,通过Wegstalt平台的基因通路富集（gene set enrichment analysis,GESA）方法行GO基因本体（gene ontology,GO）分析和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）肿瘤相关通路分析,R语言行热图聚类分析,STRING在线软件对蛋白网络进行差异及整合分析。结果 通过分析获得了1 474个符合条件的DEGs,其中有502个基因上调,972个基因下调;GO分析显示DEGs主要参与细胞外基质组织及生长因子活性相关的生物学过程;KEGG分析DEGs主要富集在磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）和Wnt等经典信号通路上。结论 本研究首次着眼于结肠癌细胞中由O-型糖基化引起的转录组学变化,有助于揭示O-型糖基化修饰的结直肠癌分子特征,并为科学研究和临床治疗提供新的方向。     

DRD2启动子低甲基化通过ERK通路调控乳腺癌细胞增殖

目的 研究肿瘤干细胞标志物多巴胺受体D2（dopamine receptor D2,DRD2）对乳腺癌细胞增殖的影响。方法 采用850K芯片对乳腺癌组织进行检测,并分析DRD2甲基化状态。采用基因筛选、基因敲除和甲基化抑制等技术和方法,进行体外和体内实验,筛选和验证可能存在的分子信号通路。结果 DRD2启动子区在乳腺癌组织中相较于正常组织表现为低甲基化。上调DRD2的表达后,乳腺癌细胞增殖增强,而下调DRD2的表达,乳腺癌细胞增殖显著降低。裸鼠实验发现,过表达DRD2可促进肿瘤生长和Ki67、CD31表达,下调DRD2可抑制肿瘤生长。体内外实验表明,细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）的表达受DRD2表达水平的影响,提示DRD2通过ERK信号通路发挥作用。甲基化抑制剂5-aza-2-脱氧胞苷（5-aza-2-deoxycytidine,5-AzadC）在小鼠体内部分逆转了DRD2表达的下调,失去了对肿瘤细胞增殖的抑制作用,提示抑制DRD2甲基化促进了肿瘤的发展。结论 乳腺癌中DRD2启动子区发生低甲基化。DRD2通过ERK通路在乳腺癌细胞的增殖和迁移中发挥作用。     

Yes相关蛋白与结肠癌病理因素的相关性

目的 探讨新型转录共激活因子Yes相关蛋白(YAP)的表达与结肠癌临床病理因素及肿瘤转移的相关性。 方法 选取104例组织蜡块,其中80例为结肠癌组织,24例为结肠癌转移灶组织。应用免疫组织化学法检测结肠癌原发灶及其多器官转移灶中YAP及N-钙黏蛋白的表达,应用qRT-PCR和Western blotting检测YAP、N-钙黏蛋白及E-钙黏蛋白在6种结肠癌细胞中的表达。 结果 N-钙黏蛋白在结肠癌原发灶组织中的阳性表达率高于结肠癌转移灶组织(P<0.05),而 YAP阳性表达率的差异无统计学意义(P>0.05)。YAP与N-钙黏蛋白的共同表达仅在结肠癌原发灶中呈正相关(r=0.5003,P<0.001),在结肠癌转移灶中两者的表达没有相关性(r=0.0325,P>0.05)。YAP及N-钙黏蛋白的阳性表达与肿瘤浸润深度及远处转移有关(P<0.05),而与肿瘤发生部位、大体形态、组织学类型、分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移及脉管内癌栓无关(P>0.05)。在SW480、SW620、SW1116、DLD-1、HCT116和HT29这6种细胞中,YAP表达量的差异无统计学意义(P>0.05),E-钙黏蛋白在HT29和SW1116中的表达显著高于其他细胞,N-钙黏蛋白在HCT116和SW620中表达最高。 结论 YAP蛋白能够通过调控上皮-间质转化过程,促进结肠癌的发展及转移。     

NFAT2在非小细胞肺癌中的表达及预后关联研究

目的:研究NFAT2在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况及与患者生存预后的关系。方法:收集原发性NSCLC肿瘤组织315例及其配对的正常组织164例,免疫组织化学染色检测NFAT2蛋白表达情况,同时进行临床关联及预后分析。结果:NFAT2在NSCLC中高表达（P<0.001）。在女性及非吸烟早期NSCLC中,NFAT2表达上调与生存期缩短相关,差异具有统计学意义（P=0.003、P=0.001）。结论:NFAT2是NSCLC发生的危险因子,NFAT2高表达可能预示着不良预后结局。     

SCIN在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的 研究SCIN在上皮性卵巢癌中的表达情况,并分析其表达与临床病理特征的关系。方法 采用免疫组化及western blot比较SCIN在上皮性卵巢癌组织、正常卵巢组织中的表达情况。结果 SCIN在上皮性卵巢癌组织中的表达明显高于在正常卵巢组织中的表达,差异有统计学意义。SCIN的表达与患者的临床分期、分化级别、淋巴结转移、腹膜种植有关,而与年龄无关。SCIN在上皮性卵巢癌细胞中的表达灰度值显著高于在正常卵巢细胞中的表达灰度值,差异有统计学意义。结论 SCIN在卵巢癌中高表达,提示其可能参与了肿瘤的发生、发展,并有望成为卵巢癌早期诊断的标志物和治疗的靶基因。     

髓样锌指蛋白1在卵巢癌中的表达及其与预后的关系

目的 探索髓样锌指蛋白1(myeloid zinc finger 1,MZF1)在卵巢癌中的表达及其与预后的关系.方法 利用基因表达数据库(Gene Expression Ominus,GEO)GSE10971和GSE12172和癌症基因组数据库(The Cancer Genome Altas,TCGA),分析MZF1...     

IGF2BP2/m6A/ITGA5信号轴调控肾透明细胞增殖和迁移

目的 探讨N6-甲基腺嘌呤(m6A)“识别蛋白”胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的潜在作用。方法 通过分析癌症基因数据库(TCGA)、采用qRT-PCR法和Western blotting法检测IGF2BP2在肾癌中的表达水平,甲基化RNA免疫沉淀qPCR结合生物信息学鉴定整合素α5(ITGA5)mRNA的m6A修饰。采用基因敲低/过表达技术,采用qRT-PCR和Western blotting法检测IGF2BP2对ITGA5表达调控的作用。通过功能性获得和缺失实验确定IGF2BP2和ITGA5对肾癌细胞增殖和迁移的调控。结果 TCGA肾癌数据库显示,IGF2BP2在肾癌组织中高表达。同时高表达的IGF2BP2不利于患者的整体生存期(HR=1.6,P=0.005)和无病生存期(HR=1.9,P=0.014)。qRT-PCR法以及Western blotting法检测结果显示,IGF2BP2在肾癌组织中高表达。Western blotting检测结果显示,正常肾上皮细胞中IGF2BP2的表达低于其他几种肾癌细胞系。基因集合富集分析(G...     

乳腺原发癌和淋巴结转移癌中ALDH1A1和TGF-β1的表达及预后价值

目的 探讨乳腺原发癌和相应淋巴结转移癌中乙醛脱氢酶1(ALDH1A1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况及与患者预后的相关性,并探讨ALDH1A1与TGF-β1之间的相关性。方法 收集有淋巴结转移的乳腺非特殊型浸润性癌197例,采用免疫组化方法检测ALDH1A1和TGF-β1在原发癌及相应淋巴结转移癌中的表达情况,并对临床病理参数及预后进行统计学分析。结果 ALDH1A1和TGF-β1在乳腺原发癌和相应淋巴结转移癌中表达的一致率分别为87.82%和86.80%,两者呈明显的正相关(P＜0.05);Kaplan-Meier生存曲线结合Log-rank检验显示,在原发癌和淋巴结转移癌中,ALDH1A1和TGF-β1均为不良预后因素(P＜0.05);单因素Cox比例风险回归模型分析显示,组织学分级、肿块大小、阳性淋巴结个数、原发癌和转移癌中ALDH1A1和TGF-β1均是患者预后的危险因素(P＜0.05),多因素分析结果显示原发癌ALDH1A1、转移癌TGF-β1及阳性淋巴结个数是患者预后的独立危险因素(P＜0.05);Spearman相关性分析显示,在乳腺原发癌和相应淋巴结转移癌中,ALDH1A1和TGF-β1均呈明显正相关(P＜0.05)。结论 ALDH1A1和TGF-β1的表达在原发癌和相应淋巴结转移癌中呈正相关,且均与预后相关。ALDH1A1和TGF-β1的表达存在正相关,原发癌ALDH1A1和转移癌TGF-β1是判断乳腺癌预后的独立影响因素。     

斑菲素蛋白1调控免疫细胞浸润影响黑色素瘤患者预后研究

目的 探讨在上皮细胞连接中发挥重要作用的斑菲素蛋白 1（plakophilin 1, PKP1）对黑色素瘤患者预后及免疫细胞浸润的影响。方法 通过Oncomine、TIMER及GEPIA数据库分析了不同肿瘤组织中PKP1的基因表达水平及黑色素瘤组织与正常组织中PKP1的基因表达差异。利用TIMER数据库分析了PKP1对黑色素瘤患者预后及肿瘤免疫细胞浸润的影响。结果 与正常组织相比,PKP1在膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、肾癌及肺癌组织中表达显著升高,在脑和中枢神经系统肿瘤、颈椎肿瘤、食管癌、黑色素瘤及前列腺癌组织中表达显著下降（P<0.01）。PKP1与黑色素瘤组织中巨噬细胞、中性粒细胞及树突状细胞浸润呈显著负相关（P<0.05）。此外,PKP1表达水平不影响原发性黑色素瘤患者的预后,但对于发生转移的黑色素瘤患者来说,PKP1高表达预示着生存率显著降低（P=0.002）。结论 PKP1表达与黑色素瘤患者免疫细胞浸润具有显著相关性,同时可以预测转移黑色素瘤患者的预后,是潜在的免疫干预靶点。     

新抑癌基因GPD1在结肠癌细胞HCT-8中的作用及其预后潜力研究

目的 探究新抑癌基因甘油-3-磷酸脱氢酶1（glycerol-3-phosphate dehydrogenase 1,GPD1）在结肠癌发生、发展中的作用及其与临床预后的关系。方法 应用HCT-8结肠癌细胞系,以siRNA干扰GPD1表达后进行细胞功能实验,分别以MTS实验与集落形成实验检测细胞增生活力与集落形成能力,以划痕试验、Transwell实验探究GPD1对HCT-8细胞系迁移能力的影响。对TCGA数据库进行生物信息学分析,探究GPD1表达水平与结直肠癌患者临床预后的关系,并明确GPD1低表达与其编码基因甲基化之间的关系。结果 干扰GPD1基因表达后,HCT-8细胞增生活力明显增强,重复实验差异具有统计学意义（P<0.01）;集落形成实验结果显示,GPD1干扰后的HCT-8细胞集落数目增多且集落直径增大,差异具有统计学意义（P<0.01）。划痕实验与Transwell实验结果显示,敲低GPD1表达的HCT-8细胞迁移能力无显著变化,表明GPD1对结肠癌细胞迁移能力无影响。生物信息学分析结果显示,GPD1低表达的结直肠癌患者总存活率（χ²=4.1,P=0.040）及无病存活率（χ²=13.2,P<0.000 1）均明显低于GPD1高表达患者,且GPD1低表达水平是结直肠癌预后不良的独立风险因素（P<0.05）。甲基化分析结果显示,结直肠癌组织中GPD1低表达与其编码基因高甲基化呈负相关（P<0.05）。结论 GPD1在结肠癌中发挥抑制细胞增生与集落形成的作用,且GPD1低表达是结直肠癌患者不良预后的独立预测因素。     

NLE1在结肠癌中的表达及其对HT29细胞增殖凋亡的影响

目的 验证Notchless同源物1(Notchless homolog 1,NLE1)在结肠腺瘤及腺癌组织中的表达水平,评价其可能作用及机制。方法 通过免疫组化及实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法评价NLE1在结肠正常黏膜、腺瘤组织及腺癌组织中的表达水平。通过慢病毒转染,评价NLE1沉默对HT29细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。结果 免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色显示,NLE1在结肠正常黏膜、腺瘤及腺癌组织中的高表达率分别为14.3% (15/105),44.0% (11/25)及68.6% (72/105),在腺癌中明显高于腺瘤(P<0.05),在腺瘤中明显高于正常黏膜(P<0.001)。实时荧光定量PCR显示,结肠正常黏膜、腺瘤及腺癌组织三组的NLE1 mRNA表达分别为1.38±0.82,5.04±2.09,7.57±1.25。腺癌组织中NLE1表达水平明显高于腺瘤(P<0.05),腺瘤组织中明显高于正常黏膜(P<0.01)。NLE1沉默显著抑制HT29细胞增殖(P<0.05)及克隆形成能力(P<0.05),促进其凋亡(P<0.05),并可促进Bax及Fas的表达。结论 结肠腺癌中高表达的NLE1可能通过影响肿瘤细胞增殖凋亡从而发挥促进肿瘤发生的作用。     

甲基转移酶样蛋白27是结肠癌预后的生物标志物并与免疫浸润相关

目的 探讨甲基转移酶样蛋白27（METTL27）在结肠癌中的表达、基因功能、免疫浸润和临床预后意义。方法 运用R语言,通过公共数据库TCGA、GEO、HPA数据库分析33种癌谱METTL27表达水平,并鉴定结肠癌中METTL27的差异基因,通过基因功能注释和富集分析鉴定相关信号通路;应用GSVA中的ssGSEA算法进行免疫浸润分析;Wilcoxon秩和检验(连续变量)、Logistic分析评价METTL27表达与临床病理特征的相关性;Kaplan-Meier分析、单因素和多因素Cox回归分析,构建列线图和校准图分析评价METTL27表达与临床预后的相关性。qPCR及Western blot实验验证METTL27在肠癌细胞株以及16例肠癌组织中的表达水平。结果 METTL27在21种肿瘤中显著高表达,结肠癌中METTL27的表达明显高于癌周组织（P<0.001）;METTL27进行差异分析,并鉴定了METTL27相关的差异基因,绘制了差异表达正负相关前10基因（P<0.001）;通过鉴定了METTL27的差异表达基因,初步对其进行了基因功能注释,发现METTL27在跨膜物质转运以及脂质代谢进程中显著富集,进一步GSEA识别了与之相关的5条信号通路;同时分析了METTL27表达与辅助T细胞、辅助T细胞2型、中央记忆型T细胞呈负相关关系（P<0.001）;在临床特征与预后分析中,METTL27 mRNA高表达的患者OS、DSS较差,Cox回归分析显示,METTL27表达是OS的独立预后因素;修改为：在不同肠癌细胞株以及16例肠癌组织样本中,METTL27的mRNA表达水平高于正常细胞及组织（P<0.05）;配对的4例肠癌组织蛋白检测也证实这一结果（P<0.001）。结论 METTL27在结肠癌中异常高表达,并代表了不良的临床预后;高表达的METTL27显示了更少的T细胞免疫浸润,提示METTL27可能为结肠癌的预后标记物。     

DNA甲基化转移酶在胃癌中的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌中DNA甲基化转移酶(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)表达的临床意义与预后的相关性.方法 运用TCGA和GEO数据库分析DNA甲基化转移酶在胃癌和正常组织中的表达差异;运用生存期分析软件Kaplan-Meier plotter分析DNA甲基化转移酶对胃癌患者预后的影响;下载TCGA和GEO数据库中...     

原发卵巢癌及卵巢之转移性结肠癌组织中CDX-2与CK7和CK20的表达及其临床意义

目的探讨原发卵巢癌及卵巢之转移性结肠癌组织中CDX-2与CK7和CK20的表达及其临床意义,为卵巢癌的诊断治疗提供理论依据。方法回顾性分析我院2002年4月~2011年6月收治的均经临床和病理学确诊的卵巢癌患者40例临床资料。采用免疫组织化学（SP法）检测40例原发卵巢癌及卵巢之转移性结肠癌患者癌组织中CDX-2、CK7和CK20的表达,并进行对比分析。结果卵巢之转移性结肠癌与原发性卵巢癌患者血清中3种肿瘤标记物血清中水平均明显升高,CDX-2,CK7和CK20在原发卵巢上皮性癌组织中的阳性表达率分别为10%（2/20）、95%（19/20）、30%（6/20）,在结肠转移性卵巢癌组织中的阳性表达率分别为100%（20/20）、15%（3/20）、85%（17/20）。CDX-2、CK7和CK20在原发性与卵巢之转移性结肠癌组织中阳性表达率差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。结论采用SP法检测原发卵巢癌及卵巢之转移性结肠癌组织中CDX-2、CK7和CK20的表达,有助于提高原发卵巢癌与卵巢之转移性结肠癌鉴别诊断准确率,值得临床推广。