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目的 探讨木犀草素(LU)对H9c2心肌细胞的保护作用及与内质网应激-线粒体凋亡通路的关系。方法 使用棕榈酸(PA)建立H9c2心肌细胞脂毒性损伤的模型,将实验组分为正常组、模型组及木犀草素组(15μmol/L)。采用CCK8法测定体外培养的细胞增殖水平,利用试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,使用DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)含量,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位变化,Annexin V-FITC/PI测定细胞凋亡程度,Westren blot法检测细胞在内质网应激-线粒体凋亡通路中相关基因的表达。结果 用PA(0.2mmol/L)直接刺激24h,可明显降低H9c2心肌细胞增殖率,增加细胞氧化应激水平,降低线粒体膜电位,使p-PERK、p-IRE1、GRP78、CHOP、Bax、caspase-3蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达降低,但使用木犀草素处理后,明显逆转了以上结果,降低了PA诱导的H9c2心肌细胞氧化应激水平,减轻细胞凋亡程度,逆转了在PA影响下细胞内内质网应激-线粒体凋亡通路相关蛋白的表达。结论 木犀草素可减轻PA诱导的脂毒性心肌... 相似文献
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目的 探讨木犀草素对3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶(3,5-diethoxycarbonyl-1,4-dihydrocollidine,DDC)诱导的原发性硬化性胆管炎(primary sclerotic cholangitis,PSC)的治疗作用及可能机制。方法 将6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机均分成空白对照组、DDC组、DDC+木犀草素组和木犀草素组,每组各6只。DDC组和DDC+木犀草素组小鼠使用0.1% DDC饲料喂养2周,造模成功后改用正常饲料喂养。自第15天起,DDC+木犀草素组和木犀草素组小鼠给予木犀草素40mg/kg连续灌胃20d,每天一次。其余组在此期间正常饲料喂养。比较各组小鼠血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆汁酸(total bile acid,TBA)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)水平;苏木精–伊红染色(hematoxylin and eosin staining,HE染色)观察肝组织病变程度;检测小鼠肝组织炎症因子[白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]和纤维化相关因子[α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、基质金属蛋白酶抑制剂1(matrix-metalloproteinase inhibitor 1,Timp1)]mRNA表达情况;蛋白质印迹法检测p65和p-p65蛋白活化情况。结果 DDC组小鼠的血清ALT、AST、TBA及ALP均显著高于空白对照组(P<0.05),DDC+木犀草素组小鼠的血清ALT、AST、TBA及ALP均显著低于DDC组(P<0.05)。HE染色病理切片可见,空白对照组小鼠的肝细胞排列规则,形态正常,无胆汁淤积及炎细胞浸润;DDC组小鼠的肝细胞排列紊乱,胆管周围出现炎症浸润,大量胆汁淤积并伴有小胆管增生;DDC+木犀草素组小鼠的肝组织相较于DDC组胆汁淤积程度减轻,炎症浸润面积减小,且小胆管增生情况得到抑制。DDC组小鼠的IL-1β、IL-6、TNF-ɑ、α-SMA、collagen Ⅰ、Timp1的mRNA表达均显著高于空白对照组(P<0.05),DDC+木犀草素组小鼠的IL-1β、IL-6、TNF-ɑ、α-SMA、collagen Ⅰ、Timp1的mRNA表达均显著低于DDC组(P<0.05)。DDC组小鼠的p-p65蛋白活化水平显著高于空白对照组(P=0.002),经木犀草素治疗后,p-p65蛋白活化水平下降(P=0.012)。结论 木犀草素对DDC诱导的PSC有一定的治疗作用,其作用机制可能与核因子-κB信号通路有关。 相似文献
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目的 探讨内质网应激是否参与高磷诱导血管平滑肌细胞钙化及其作用机制。方法 体外培养人胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),分为对照组、正常磷组(1.3 mmol/L磷,NP组)、高磷组(2.6 mmol/L磷,HP组),培养10 d。茜素红染色后观察细胞钙盐沉积情况;实时定量PCR和Western blotting检测肌醇需求因子1 (IRE1)、RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、内质网应激标志蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、骨形态发生蛋白2 (BMP-2)及Runt相关转录因子2 (Runx-2)的表达;应用CHOP siRNA转染高磷培养VSMC敲低CHOP表达后,检测BMP-2及Runx-2表达;应用JNK抑制剂SP600125 (DMSO溶解),终浓度10μmol/L预处理30 min后加入高磷培养基培养10 min,茜素红染色观察钙沉积情况。结果 与对照组及NP组比较,HP组内质网应激蛋白(IRE1、PERK、JNK、CHOP)及钙化蛋白(BMP-2、Runx-2)均明显增高(均P <0.01)。敲低CHOP表达后钙化蛋白... 相似文献
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【摘要】目的:观察GPR30受体激动剂G1对高糖诱导的eahy926内皮细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的影响。方法:选用eahy926内皮细胞为研究对象,分为3组:正常对照组(Con,17.51mmol/L)、高糖组(HG,33.3mmol/L)、高糖 G1组(HG G1,HG 1umol/L G1),利用流式细胞术检测三组细胞凋亡率,Western blot法检测ERS相关分子BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX、Bcl-2的表达变化,RT-PCR法检测BIP和CHOP的mRNA表达变化。结果:HG组与Con组比较,细胞凋亡率明显升高(P<0.01),BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX表达上调(P<0.01或P<0.001),Bcl-2的表达下调(P<0.05),BIP、CHOP mRNA 表达上调(P<0.01),HG G1组与HG组比较,细胞凋亡率明显降低(P<0.01),BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX表达下调(P<0.05或P<0.01或P<0.001),Bcl-2的表达上调(P<0.05),BIP、CHOP mRNA 表达下调(P<0.01)。结论:GPR30受体激动剂G1可抑制eahy926内皮细胞内质网应激。 相似文献
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目的 观察木犀草素与顺铂联合应用诱导体外培养的人肺癌细胞 A549 凋亡作用及对细胞周期的影响。方法 将木犀草素与顺铂单独及联合作用于 A549 细胞,AO/EB 荧光染料染色,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,Western blotting 检测 p53 蛋白表达情况。结果 木犀草素 (40 μmol/L) 和顺铂 (10 μg/mL) 联用组诱导的 A549 细胞凋亡率和S期阻滞作用均显著强于木犀草素组或顺铂组,Western blotting 发现,木犀草素和顺铂联用组 p53 蛋白水平也明显高于单独木犀草素组或顺铂组。结论 木犀草素能显著增强顺铂诱导的人肺癌细胞 A549 细胞凋亡和细胞周期阻滞;p53 蛋白可能参与调节木犀草素和顺铂联合诱导的肿瘤细胞凋亡。 相似文献
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目的 研究木犀草素(LUT)对镉(Cd)诱导的人肺上皮Beas-2B细胞损伤的保护作用。方法 用不同浓度的木犀草素(0~160 μmol/L)或镉(0 ~40 μmol/L)处理Beas-2B细胞24 h,用MTT法检测细胞活性。用木犀草素(0.25、0.50和0.75 μmol/L)和/或 镉(5 μmol/L)处理Beas-2B细胞24 h,用MTT法检测细胞活性;用LD-L 微板法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性;用Hoechst荧光染色法观察细胞核形态变化;用DCFH-DA法测定细胞ROS水平;用WST-8法测定细胞SOD水平;用TBA法测定细胞GSH水平;用DTNB法测定细胞MDA水平,用Western blot检测细胞Akt、p-Akt和核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白的表达水平。结果 木犀草素在一定浓度范围内(0~80 μmol/L)不影响Beas-2B细胞的存活率(P>0.05),镉在5 μmol/L浓度水平时即可显著抑制Beas-2B细胞的生长(P<0.05),半数抑制浓度为24.6 μmol/L。木犀草素干预可不同程度地减轻镉处理引起的Beas-2B细胞活力的降低(P<0.05),减少镉处理组细胞LDH的释放量(P<0.05),改善镉处理组细胞的凋亡情况,抑制镉处理组细胞ROS水平的升高(P<0.05),增强镉处理组细胞SOD活性(P<0.05)和GSH含量(P<0.05),减少镉处理组细胞MDA的产生(P<0.05)。此外,木犀草素(0.5和0.75 μmol/L)干预可上调镉处理组细胞p-Akt和Nrf2的蛋白表达水平(P<0.05)。结论 木犀草素可显著减轻镉诱导的Beas-2B细胞的损伤,其机制可能与p-Akt和Nrf2蛋白表达水平的上调有关。 相似文献
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目的:探讨内质网应激反应蛋白在氧化应激诱导人宫颈癌Hela细胞自噬过程中的作用,阐明内质网应激-自噬途径调控肿瘤细胞生存的可能机制。方法:人宫颈癌Hela细胞分为对照组、VK3 (30 μmol•L-1)组、内质网应激抑制剂牛磺熊去氧酸钠(TUDC )(500 μmol•L-1)组和VK3 (30 μmol•L-1)与TUDC(500 μmol•L-1)联合作用组。透射电镜观察Hela细胞内质网形态学变化。MTT 法检测细胞生存率。Western blotting法检测内质网应激特征性分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ)的表达水平。结果:对照组细胞形态正常,VK3组细胞浆内可见自噬泡及扩张的内质网。与VK3组比较,VK3与TUDC联合作用组Hela细胞生存率降低(P<0.05)。与对照组比较,VK3组GRP78和LC3-Ⅱ蛋白表达水平均增加(P<0.05);与VK3组比较,VK3与TUDC联合作用组 GRP78和LC3-Ⅱ蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:在氧化应激诱导Hela细胞损伤过程中,内质网应激反应蛋白可介导Hela细胞发生自噬。 相似文献
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目的: 观察新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)及稳定表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒(recombinant avirulent NDV LaSota strain expressing the rabies virus glycoprotein,rL-RVG)对胃腺癌HGC细胞内质网应激及凋亡的影响。方法: 将HGC细胞随机分为对照组、NDV组和rL-RVG组,分别转染PBS、NDV和rL-RVG 24 h,免疫印迹法和免疫荧光检测糖调节蛋白78 (glucose regulated protein 78, GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)表达。再将HGC细胞随机分为对照组、4-苯基丁酸钠盐(sodium phenylbutyrate, 4-PBA)组、rL-RVG组和4-PBA+rL-RVG组,4 PBA组和4-PBA+rL-RVG组分别加入4-PBA预处理4 h,然后rL-RVG组和4-PBA+rL-RVG组分别转染rL-RVG,对照组和4-PBA组转染PBS,免疫印迹法检测各组细胞GRP78、CHOP和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果: 感染HGC细胞24 h后,NDV组及rL-RVG组GRP78和CHOP表达明显高于对照组(P均<0.05),且rL-RVG组明显高于NDV组(P<0.01)。4 PBA预处理后,4-PBA+rL-RVG组GRP78、CHOP、caspase-3蛋白表达和细胞凋亡率较rL-RVG组明显降低(P<0.05)。结论: rL-RVG较NDV更易引起胃腺癌HGC细胞内质网应激,且与凋亡相关。 相似文献
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HU Yong Bin WU Xia QIN Xiao Feng WANG Lei PAN Pin Hua 《Biomedical and environmental sciences : BES》2017,30(8)
Objective We investigated the role of endoplasmic reticulum stress(ERS) in silica-induced apoptosis in alveolar macrophages in vitro. Methods RAW264.7 cells were incubated with 200 μg/mL silica for different time periods. Cell viability was assayed by the MTT assay. Cell apoptosis was evaluated by DAPI staining, flow cytometry analysis, and Western blot analysis of caspase-3. Morphological changes in the endoplasmic reticulum were observed by transmission electron microscopy. The expression of ERS markers binding protein(BiP) and CCAAT-enhancer-binding protein homologous protein(CHOP) was examined by Western blotting and real-time PCR. As an inhibitor of ERS, 4-phenylbutyric acid(4-PBA) was used in the experiments. Results Silica exposure induced nuclear condensation and caspase-3 expression in RAW264.7 cells. The number of apoptotic cells increased after silica exposure in a time-dependent manner. Silica treatment induced expansion of the endoplasmic reticulum. In addition, the expression of BiP and CHOP increased in silica-stimulated cells. Furthermore, 4-PBA treatment inhibited silica-induced endoplasmic reticulum expansion and the expression of Bi P and CHOP. Moreover, 4-PBA treatment attenuated nuclear condensation, reduced apoptotic cells, and downregulated caspase-3 expression in silica-stimulated cells. Conclusion Silica-induced ERS is involved in the apoptosis of alveolar macrophages. 相似文献
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目的 探讨Twist1对胆囊癌细胞侵袭转移的影响,以及对Bmi1、E-Cadherine、N-Cadherine的调控作用。方法 构建Twist1 shRNA慢病毒载体感染GBC-SD细胞做为实验组,空载慢病毒感染GBC-SD细胞为阴性对照组,不做任何处理的GBC-SD细胞为空白对照组。细胞划痕及Transwell侵袭小室实验检测细胞的迁移及侵袭能力,Western blot及RT-PCR检测Twist1、Bmi1、E-Cadherine及N-Cadherine的蛋白及mRNA的相对表达量。结果 与阴性组、空白组相比,实验组细胞划痕愈合度低、侵袭数少(P <0.000 1),而阴性组及空白组间细胞迁移率、侵袭数比较差异均无统计学意义(P> 0.05)。阴性组及空白组的Twist1、Bmi1、NCadherine的蛋白及mRNA的相对表达量明显高于实验组(P <0.001),而E-Cadherine蛋白及mRNA的相对表达量则明显低于实验组(P <0.000 1),阴性组及空白组组间各蛋白及mRNA的相对表达水平比较差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 ... 相似文献
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