基于UPLC-Q-Orbitrap MS/MS技术研究膝痹宁对KOA模型大鼠的软骨保护效应

  目的  运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UPLC-Q-Orbitrap MS/MS)技术分析膝痹宁的药物活性成分, 通过干预膝骨关节炎(KOA)模型大鼠代谢因素探讨膝痹宁软骨保护效应的作用机制。  方法  制备膝痹宁水提物, UPLC-Q-Orbitrap MS/MS技术分析膝痹宁的活性成分。将大鼠分为空白组、KOA组、膝痹宁组, 提取大鼠软骨组织, HE染色、番红O-固绿染色观察组织结构形态; qPCR和Western blot法检测过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、PPARγ辅助激活因子1α(PGC1α)及基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP13的mRNA和蛋白表达水平; 取各组大鼠血清完成代谢组学分析。  结果  经鉴定, 膝痹宁含活性成分56种; 组织学切片提示膝痹宁具有软骨保护作用, 并能上调KOA大鼠软骨组织PPARγ、PGC1α的mRNA和蛋白表达水平(P < 0.05, P < 0.01), 降低MMP3、MMP13的mRNA和蛋白表达水平(P < 0.05, P < 0.01);此外, 代谢组学研究发现, 膝痹宁对13种KOA差异代谢物存在干预作用, 涉及10条代谢通路。  结论  膝痹宁具有多种药物活性成分, 其KOA软骨保护效应与药物活性成分对KOA的代谢调控有关。      

NLRP3炎症小体在颞下颌关节骨关节炎痛觉过敏中的作用

目的 探究核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体在大鼠颞下颌关节骨关节炎(TMJOA)痛觉过敏中的作用。方法 选取20只6周龄雄性SD大鼠随机分为NS组和MIA组，采用碘乙酸钠(MIA)注射颞下颌关节上腔构建实验性TMJOA大鼠模型；采用Von Frey检测大鼠颞下颌关节(TMJ)区注射MIA后痛觉阈值变化；苏木精-伊红(HE)、番红固绿染色观察髁突结构的改变；HE染色观察三叉神经节(TG)的病理结构改变；免疫组化检测TG NLRP3蛋白表达及分布；Western blot检测TG NLRP3、白细胞介素(IL)-1β蛋白表达；实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测TG NLRP3、凋亡相关斑点状蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β、IL-18 mRNA表达。结果 与NS组比较，实验性TMJOA大鼠痛觉阈值下降(P<0.05);TMJ、TG病理结构改变明显；TMJOA组大鼠TG组织中表达NLRP3的蛋白和mRNA水平均升高(P<0.05)。结论 NLRP3炎症小体可能参与调控TMJOA大鼠痛觉过敏。     

膝关节骨性关节炎并内翻畸形股骨髁软骨退行性变观察研究

目的 膝关节骨性关节炎并内翻畸形股骨内侧髁软骨退行性变及超微结构观察。方法 收集2018年11月至2021年10月行人工全膝关节置换术的55例膝关节骨性关节炎并内翻畸形患者的股骨髁,股骨内髁设为观察组,股骨外髁设为对照组。两组分别进行大体观察、HE染色、番红O-固绿染色及电镜下观察。结果大体观察：观察组股骨髁关节面不光滑,色泽灰暗,部分软骨剥脱有软骨下骨外露;HE染色观察：观察组软骨细胞排列不规整,潮线紊乱,软骨下骨板异常增厚,对照组股骨髁软骨退变程度较轻;番红O-固绿染色观察：观察组软骨层着色强度不均匀,番红染色在成簇状软骨细胞周围深染,软骨表面染色不均,软骨基质及细胞数量减少,软骨层与软骨下骨边界不清;扫描电镜下观察：观察组关节面凹凸不平,存在大量凸起、裂隙,对照组表面较为平整,可见软骨表面有散在均匀的软骨颗粒。结论 膝关节骨性关节炎并内翻畸形股骨内髁关节中钙化层和软骨下骨的改变对骨性关节炎发病机制及病情发展起着重要作用。     

髁突骨软骨瘤与Ⅰ型髁突增生的分子差异表达研究

目的 比较髁突骨软骨瘤(OC)与Ⅰ型髁突增生(CH)的分子特征差异.方法 收集该院14例Ⅰ型CH及9例髁突OC患者资料.取Ⅰ型CH与髁突OC标本进行番红固绿染色、抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色.使用免疫组织化学染色、实时PCR检测两者软骨相关蛋白及mRNA相对表达水平.使用CCK-8试剂盒检测两者软骨原代细胞的增殖能力.结果 番红固绿染色及TRAP染色发现两种疾病存在不同的病理特征.COL2α1、Sox9、PCNA、Nestin、OCT4、Cyclin D1、CCNB1、MIP、TGF-β1、FGF-2、IGF-1基因在髁突OC中表达较Ⅰ型CH高.COL1α2、Runx2基因在Ⅰ型CH中表达较髁突OC高.髁突OC软骨细胞增殖速度较Ⅰ型CH快(P＜0.05).结论 髁突OC软骨细胞比Ⅰ型CH软骨细胞具有更强的增殖能力,这可能是由于在髁突OC中有大量的生长因子特异表达.     

异常机械负荷加重大鼠颞下颌关节骨关节炎的组织病理学研究

目的 研究异常机械负荷在大鼠颞下颌关节软骨退变中的作用。方法 36只8周龄雌性SD大鼠随机分为4组,分别为对照组（control group,Con组）、Ⅱ型胶原蛋白酶组（collagenase type Ⅱ group,CⅡ组）、大张嘴组（wide mouth opening group,MS组）和Ⅱ型胶原酶+大张嘴组（collagenase type Ⅱ+wide mouth opening group,CⅡ+MS组）。HE染色、番红O-固绿染色观测软骨组织病理学变化,免疫组化实验检测炎性因子基质金属蛋白酶3（matrix metalloproteinase 3,MMP3）和聚蛋白多糖酶5（a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5,ADAMTS5）的表达。结果 与Con组相比,CⅡ、MS和CⅡ+MS组大鼠颞下颌关节软骨后区总厚度、钙化层厚度和番红O阳性面积比均显著降低（均P<0.05）,CⅡ、MS和CⅡ+MS组中MMP3和ADAMTS5的阳性表达均显著增高（均P=0.000）;与CⅡ和MS组相比,CⅡ+MS组软骨钙化层厚度显著降低（均P=0.000）,ADAMTS5表达显著增高（均P=0.000）;MS和CⅡ+MS组软骨后区潮线呈波浪状。结论 异常机械负荷促使髁突软骨后区退变及改建,这将有助于异常负荷致颞下颌关节骨关节炎的机制研究。     

单侧咬合创伤建立大鼠颞下颌关节骨关节炎模型的 组织病理学观察

目的：通过单侧咬合创伤方法建立大鼠颞下颌关节骨关节炎（temporomandibular joint osteoarthritis,TMJ-OA）模型,并观察髁突软骨的组织病理学变化。方法：将大鼠随机分为对照组和实验组,再分为4个亚组,即4、8、12、16周组,每组6只大鼠。用树脂将方弓丝粘接于实验组大鼠右侧上颌第一磨牙（牙合）面,垫高约0.5 mm。称量并记录各组大鼠第1、2、3、4、8、12、16周体质量,并于第4、8、12、16周分别取材,通过苏木精-伊红及番红O-固绿染色,检查、分析大鼠颞下颌关节髁突软骨的组织病理学变化,并测量各组大鼠髁突软骨各层厚度变化。结果：①在实验早期,咬合创伤对大鼠体质量增长影响较大（t1=4.757,P1=0.000;t2=3.096,P2=0.003）。②8周时,实验侧髁突软骨发生较明显组织病理学变化[组织学评分为（8.67±1.37）,t=-7.267,P=0.000],纤维层软骨出现水平裂隙,增殖层软骨细胞排列紊乱,呈早期骨关节炎样软骨病损。③咬合创伤对髁突软骨造成的病理损害程度与其作用时间相关,时间越长,病损越重。结论：采用单侧咬合创伤方法成功建立了大鼠颞下颌关节骨关节炎模型,且造模8周后可观察到早期的骨关节炎样病损表现,此模型可作为研究TMJ-OA早期病理机制的理想模型。     

氢气水调控自噬对百草枯中毒大鼠肺纤维化的影响

  目的  探讨氢气水通过自噬对百草枯诱导的大鼠肺纤维化的治疗作用及机制。  方法  6～8周SD大鼠随机分为对照组、染毒组、氢气水治疗组、雷帕霉素治疗组、综合治疗组，每组10只大鼠，在28 d处死大鼠，取肺组织。予HE染色和Masson’ s染色法观察各组标本肺组织病理变化，使用RT-PCR检测Col-ImRNA和Col-IIImRNA表达，用Westernbolt方法检测P62、LC3表达。  结果  与对照组相比，百草枯染毒组的大鼠肺组织出现纤维化病理改变，Col-ImRNA和Col-IIImRNA表达升高（P < 0.01），P62表达升高（P < 0.001），LC3II/I值降低（P < 0.05）；与百草枯染毒组相比，氢气水治疗组大鼠肺纤维化程度减轻，Col-ImRNA和Col-IIImRNA表达下降（P < 0.05），P62表达下降（P < 0.05），LC3II/I值升高（P < 0.05）；与百草枯染毒组相比，雷帕霉素治疗组大鼠肺纤维化程度减轻，Col-ImRNA和Col-IIImRNA表达下降（P < 0.05），P62表达下降（P < 0.01），LC3II/I值升高（P < 0.01）；与百草枯染毒组相比，综合治疗组大鼠肺纤维化程度明显减轻，Col-ImRNA和Col-IIImRNA表达显著下降（P < 0.01），P62表达下降明显（P < 0.01），LC3II/I值显著升高（P < 0.001）。  结论   （1）百草枯诱导大鼠肺纤维化形成并抑制了自噬；（2）雷帕霉素激活自噬并减轻了百草枯诱导的大鼠肺纤维化；（3）氢气水缓解了百草枯诱导的大鼠肺纤维化并促进了自噬；（4）氢气水与雷帕霉素联合治疗百草枯诱导的肺纤维化优于二者单用。     

胆绿素改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机制

  目的  探讨胆绿素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用以及机制。  方法  采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型（middle cerebral artery occlusion model，MCAO），给予胆绿素治疗后，采用改良版神经功能缺损评分评价大鼠神经功能缺损情况，干湿重法测定脑组织含水量，TTC染色测定脑梗死面积，Iba-1/DAPI染色标记缺血侧脑组织小胶质细胞活化情况，免疫荧光染色检测脑组织炎症因子TNF-α表达，Western blot测定脑组织Iba-1/CD68的蛋白表达。  结果  和IR组比较，胆绿素治疗可改善MCAO大鼠的神经功能缺损（P < 0.05），同时，还能减轻脑组织含水量（P < 0.05），降低大脑梗死面积（P < 0.05），以及降低缺血侧脑组织中小胶质细胞的表达和Iba-1/CD68蛋白的表达（P < 0.05）。此外，胆绿素治疗还能减少缺血侧脑组织中炎症因子TNF-α的表达（P < 0.05）。  结论  胆绿素在MCAO大鼠中可能通过抑制小胶质细胞活化而减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。     

关节腔内注射脂肪干细胞对颞下颌关节骨关节炎模型兔关节软骨破坏的修复作用及其机制

目的：探讨关节腔内注射脂肪干细胞（ADSCs）对颞下颌关节骨关节炎（TMJOA）模型兔关节软骨破坏的修复作用,并阐明其可能的作用机制。方法：27只兔随机分为对照组、模型组和ADSCs组。提取兔ADSCs进行培养,采用碘乙酸钠（MIA）注射法制备兔TMJOA模型。ADSCs组TMJOA模型兔颞下颌关节腔内连续2次注射1.0×106 mL-1ADSCs,对照组和模型组兔颞下颌关节腔内注射等量生理盐水,8周后取各组兔颞下颌关节行显微CT (Micro-CT)扫描,分析各组兔髁突组织的骨体积分数（BV/TV）、骨表面积/骨体积比（BS/BV）、骨小梁厚度（Tb. Th）、骨小梁间距（Tb. Sp）和骨小梁数（Tb. N）,HE染色观察各组兔髁突组织病理形态表现,免疫组织化学染色法检测各组兔髁突组织中SRY相关高迁移率族盒基因9 (SOX9)、基质金属蛋白酶13 (MMP-13)和血管内皮生长因子（VEGF）的定位情况和蛋白表达水平,Western blotting法检测各组兔髁突组织中SOX9、MMP-13和VEGF蛋白表达水平。结果：Micro-CT扫描,与对照组比较,模型组兔髁突组织的BV...     

去势大鼠髁突软骨雌激素受体及Ⅱ型胶原表达的研究

目的：观察去势大鼠髁突软骨组织学变化,并检测雌激素受体（ER）和Ⅱ型胶原（ColⅡ）的表达,分析去势后髁突软骨生长代谢的变化,探讨雌激素缺乏与颞下颌关节骨关节病（OA）的关系。方法 HE染色观察大鼠去势后不同时期髁突软骨组织学变化,免疫组织化学法检测去势大鼠髁突软骨ER及ColⅡ表达,并运用图像分析仪测量并计算其平均阳性染色面积百分比。结果雌激素缺乏导致髁突软骨退行性改变。去势后大鼠ER和ColⅡ的表达受到抑制,且随作用时间的延长,其作用增强。结论雌激素缺乏或低下导致大鼠髁突软骨病损。低浓度雌激素降低或抑制ER表达,髁突软骨胶原表达与雌激素相关。     

SOX9在SD大鼠胚胎发育髁突软骨与胫骨生长板软骨中的时间表达研究

目的 通过建立SD大鼠的发育模型,观察髁突软骨与胫骨生长板软骨在胚胎发育过程中的不同生长特性,探讨比较SOX9在2种不同性质软骨生长发育过程中的表达变化及其意义.方法 30只成年SD大鼠按2雌1雄的比例合笼,观察雌鼠于合笼后是否发现阴栓作为怀孕的标志,计为妊娠0d,隔离常规饲养.分别于孕鼠妊娠13d、14 d、15d、...     

建立大鼠颞下颌关节骨关节炎动物模型的2种方法比较

目的 通过被动张口和咬合紊乱2种方法建立大鼠颞下颌关节骨关节炎的模型,观察软骨和软骨下骨的病理变化来比较2种建模方法并评价其实用性。方法 21只8周龄雄性SD大鼠随机分为4组,对照组（Control组）3只大鼠常规饲养。剩余18只大鼠随机分成3组：被动张口组（OP组）,每天保持张口度20 mm,持续1 min;咬合紊乱组（OD组）,0.25 mm的结扎丝包绕第一磨牙,结扎在第一磨牙的面;咬合紊乱对照组（ODS组）采用同样的手术方法,结扎结在第一磨牙的近中。4周后处死所有大鼠,解剖下颌骨后,通过MicroCT,番红-O-固绿染色,HE染色来评估颞下颌关节的变化。结果 OD组和OP组均出现了颞下颌关节骨关节炎样组织学改变,Micro CT分析都表现出骨体积分数的下降,骨体积比和骨小梁厚度在OD组与OP组的差异无统计学意义（P> 0.05）。OD组和OP组的改良Mankin评分均增高,但差异无统计学意义（P> 0.05）,且OP组中有2个样本未出现颞下颌关节骨关节炎样组织学改变。结论 咬合紊乱为较为稳定的大鼠颞下颌关节骨关节炎的建模方法,被动张口能造成大鼠颞下颌关节骨关节炎的组...     

意向性运动干预影响局部脑缺血大鼠GLUA2和N-cadherin表达的影响

目的 研究意向性运动干预治疗对大脑局部缺血大鼠行为学及梗死灶周围组织中GluA2和Ncadherin表达的影响。方法 利用鱼线栓堵法将大鼠制成大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型共144只,随机分成模型（MCAO）组、生活环境变化（environment modification,EM）组、普通康复训练（control rehabilitstion, CR）组和意向性运动干预（willed movement,WM）组,每组根据术后时间划分为7 d、15 d、30 d 3个亚组。对各组研究对象的行为变化进行观察分析,通过免疫组化技术研究脑梗死灶周围组织中GluA2和N-cadherin蛋白水平。结果 再灌7 d、15 d、30 d,意向性运动干预组的攀爬频率显著高于EM及CR组（P <0.01）;再灌30 d,和MCAO组相比,意向性运动干预组的神经功能缺损评分更低（P <0.05）;而其缺血半暗带区域GLUA2、N-cadherin蛋白表达量都更高（P <0.05）。结论 对于大脑局部缺血所导致的神经功能障碍...     

横向不调伴TMD患者髁突位置及对称性

  目的  研究横向不调伴TMD（Temporomandibular Disorders，颞下颌关节紊乱病）患者髁突形态、位置及下颌骨对称性与正常者的区别。  方法  纳入18名不调伴颞下颌关节病患者及18名正常者，治疗前拍摄CBCT（Cone Beam CT，锥形束CT），对比分析2组髁突形态、位置与下颌对称性的特点。  结果  （1）双侧升支高度，试验组与对照组，差异无统计学意义（P > 0.05）；试验组与对照组下颌骨对称性指数，差异有统计学意义（P < 0.05）；下颌骨对称性对照组优于试验组。（2）试验组与对照组相比，关节前间隙、上间隙、后间隙，差异无统计学意义（P > 0.05）；对照组双侧髁突位置有相关性（P < 0.05），试验组双侧髁突位置无相关性（P > 0.05）。（3）试验组双侧髁突轴向角左侧（25.56±8.69）°，右侧（25.88±10.19）°显著大于对照组，左侧（19.77±8.18）°，右侧（19.69±7.53）°，差异有统计学意义（P < 0.05）；试验组与对照组双侧髁突轴向角均有相关性（P < 0.05）。（4）髁突前后径试验组，左侧（16.47±2.03） mm，右侧（16.62±2.16） mm 与对照组的左侧（17.76±1.93） mm，右侧（17.84±2.09） mm，差异无统计学意义（P > 0.05）；髁突中侧径试验组的左侧（7.12±1.3） mm，右侧（6.78±1.47） mm，与对照组的左侧（8±0.88） mm，右侧（7.76±0.92） mm，差异有统计学意义（P < 0.05）。（5）试验组双侧髁突中心与正中矢状面距，差异无统计学意义（P > 0.05）；对照组双侧髁突中心与正中矢状面距，差异无统计学意义（P > 0.05）；双侧髁突中心前后向，试验组与对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05），试验组两侧髁突与正中矢状面距无相关性（P > 0.05），对照组两侧髁突与正中矢状面距有相关性（P < 0.05）。  结论  横向不调伴TMD患者下颌骨对称性、盘突关系、双侧髁突位置相关性较差，髁突小于正常者。对于横向不调患者，临床应积极评估颞下颌关节，以降低正畸治疗风险。     

尿酸酶缺失大鼠肠道菌群的变化

  目的  观察雄性尿酸酶缺失大鼠（Kunming-DY,即KDY大鼠）肠道和新鲜粪便的菌群变化。  方法  与同性别同日龄野生型SD大鼠对照,选取45日龄雄性尿酸酶缺失大鼠称体质量,乌拉坦麻醉后解剖取血制备血清,将小肠依次分成18段,结肠分成2段（每段5 cm）。用磷钨酸法检测血清尿酸含量,用DNA提取试剂盒提取各肠段和新鲜粪便DNA,采用特异性16s rDNA引物扩增后进行高通量测序,将测序结果与数据库比对在门、纲、目、科和属水平鉴定菌群。  结果  45 d日龄时,KDY大鼠体质量下降（P < 0.05）,但血尿酸水平明显升高（P < 0.05）,肠道菌群多样性呈降低趋势（P < 0.05）,但粪便菌群多样无明显变化（P > 0.05）。KDY大鼠肠道和粪便中乳酸杆菌属丰度明显增加（P < 0.05）。  结论  相比野生型SD大鼠,KDY大鼠肠道菌群多样性下降,但肠道和粪便中的乳酸杆菌属丰度明显增加。     

富血小板血浆促进人子宫内膜间充质干细胞（EnMSCs）增殖的机制

目的探讨PRP促进EnMSCs增殖的机制,为EnMSCs的扩增及临床应用提供理论基础。方法将EnMSCs随机分为对照组、2%PRP组、2%PRP+LY294002组,CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪监测细胞周期及Western Blot和ELISA检测细胞中p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR及p-mTOR的蛋白表达。结果 (1) CCK-8结果显示:与对照组相比较,2%PRP组EnMSCs的增殖水平显著较高(P <0.05);与2%PRP组相比,2%PRP+LY294002组EnMSCs的增殖水平显著较低(P <0.05);(2)流式细胞仪分析细胞周期结果显示:2%PRP组G2/M期细胞比例显著高于对照组和2%PRP+LY294002组,G0/G1细胞比例明显低于对照组和2%PRP+LY294002组,差异均有统计学意义(P <0.05);(3) 2%PRP组EnMSCs中p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、 p-mTOR的蛋白表达明显高于对照组及2%PRP+LY294002组,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 EnMSCs的增...     

右美托咪定抑制大鼠创伤性脑损伤后神经细胞凋亡

  目的  探讨右美托咪定（DEX）对创伤性脑损伤（TBI）的神经保护作用是否与抑制神经细胞凋亡有关，是否涉及SIRT1信号通路。  方法  将SD大鼠随机分为Sham组、TBI + NS组、TBI + DEX组和TBI + DEX + EX527组。采用干/湿重法评估脑创伤后脑组织含水量；神经功能缺损评分检查神经功能受损情况；Western blot法检测大鼠皮质Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。  结果  实验结果显示DEX干预后可减少脑创伤后促凋亡的调控蛋白Bax表达，差异有统计学意义（P < 0.05），增加抑制凋亡的调控蛋白Bcl-2表达，差异有统计学意义（P < 0.05），减轻脑水肿，差异有统计学意义（P < 0.05）和改善神经功能，差异有统计学意义（P < 0.05），上述观测指标的变化可被SIRT1抑制剂EX527逆转。  结论  提示DEX通过抑制神经细胞凋亡而减轻脑创伤后的继发性损害，该神经保护作用与SIRT1信号通路之间存在一定相关性。     

培哚普利对肥胖大鼠肠道微生态的影响

目的 研究培哚普利对肥胖大鼠体重、血脂及肠道菌群的影响。方法 SPF级Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,培哚普利低、高剂量组[0.4、2 mg/（kg·d）],连续给药3周后测定各组大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C、UA、GLU及粪便中肠道菌群的变化。结果 与正常组比较,模型组大鼠终体重、体重增重、Lee’s 2s指数升高（P <0.01）,说明模型建立成功;与模型组比较,培哚普利低、高剂量组大鼠体重明显降低（P <0.05）。16S rRNA测序结果显示,培哚普利可提高大鼠肠道菌群多样性水平,培哚普利低剂量组OTU总数增加了4.56%;在门和属水平上,培哚普利低剂量组厚壁菌门物种组成显著降低（P <0.01）,拟普雷沃菌属、NK4A214＿group、no＿rank＿f＿＿Erysipelotrichaceae、norank＿f＿＿Eubacterium＿coprostanoligenes＿group物种组成显著升高（P <0.05）,培哚普利高剂量组放线菌门、norank＿f＿＿Erysipelotrichaceae、Enterorhabdu...