黑果枸杞内生真菌E21菌株次生代谢产物的研究

目的:研究黑果枸杞根部的内生真菌E21次生代谢产物。方法:利用固体大米培养基对该菌株进行发酵培养,采用柱色谱以及重结晶等方法分离化合物。结果:经形态学特征及ITS序列分析结果鉴定菌株E21为白耙齿菌Irpex lacteus。从其发酵物中分离得到4个化合物,分别为monacolin K,dehydromonaco-lin K,5α,8α-环二氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇和麦角甾醇,其中monacolin K和dehydromonacolin K首次从白耙齿菌Irpex lacteus中分离得到。结论:monacolin K对革兰阴性菌和革兰阳性菌都具有很好的抑菌活性,而dehydromonacolin K仅对枯草芽孢杆菌具有一定的抑菌活性。     

基于ITS序列分析技术鉴定川牛膝与常见伪品麻牛膝

目的:比较川牛膝与其常见伪品麻牛膝之间的ITS序列差异及规律。为川牛膝与麻牛膝的DNA条形码鉴别提供适合的分子标记。方法:收集川牛膝及麻牛膝成品药材并提取纯化其基因组DNA,经PCR扩增得到ITS序列(包括ITS1、5.8S nrDNA、ITS2)并进行T-A克隆后测序,分析两者序列差异。结果:PCR扩增获得两者ITS序列,经多序列对比分析得出川牛膝与伪品麻牛膝的ITS序列存在明显差异。结论:ITS序列分析可以用作鉴定川牛膝与麻牛膝药材。     

ITS2+psbA-trnH复合序列鉴定徐长卿、白薇和白前

目的：建立以ITS2+psbA-trnH复合序列鉴定徐长卿、白薇和白前及其同属近缘混伪品的DNA条形码鉴定方法。方法：搜集徐长卿、白薇、白前及其近源混伪品,采用改良的CTAB法提取DNA,通过实验分别获得ITS2和psbA-trnH序列,将同一样本的ITS2序列与psbA-trnH序列整合得到43条ITS2+psbA-trnH复合序列,从GenBank数据库中下载来源于同一样本的ITS2序列与psbA-trnH序列整合得到14条ITS2+psbA-trnH 网上复合序列,用MEGA 6.05软件分析徐长卿、白薇、白前及其近源混伪品的复合序列变异位点,计算种内、种间的K2P距离,并构建NJ系统聚类树。结果：徐长卿、白薇和白前药材ITS2+psbA-trnH复合序列比对后产生17个变异位点;徐长卿、白薇和白前基源物种种内最大K2P距离均小于其与混伪品的种间最小K2P距离;系统NJ树能准确将徐长卿白薇和白前及其近缘混伪品。结论：该研究建立了应用ITS2+psbA-trnH复合序列鉴定徐长卿、白薇、白前及其近缘混伪品的DNA条形码鉴定方法。     

基于ITS2序列的三棱及其混伪品的分子鉴定

摘 要 目的：通过分析三棱及其混伪品的ITS2条形码序列,探索鉴定三棱及其混伪品的新方法。方法: 采集三棱及其混伪品共5个物种8个样本,并从Genbank网上下载三棱及其混伪品共6个物种23条ITS2序列,用MEGA5.0软件计算上述ITS2序列的种间、种内遗传距离,并构建系统发育树。结果: 三棱种内最大K2P距离为0.038,与混伪品种间最小K2P距离为0.697。由所构建的系统发育树可以看出,正品三棱的不同样品聚在一支,并能很好地与混伪品区分开。结论:ITS2条形码序列能够成功鉴定三棱与其混伪品,为三棱及其混伪品的鉴别提供了新的方法。     

桦褐孔菌甲醇提取物抗氧化及抗炎作用研究

目的:观察桦褐孔菌甲醇提取物的抗氧化及抗炎作用,为更合理有效地开发该多糖真菌提供科学依据。方法:通过大鼠足肿胀及大鼠棉球肉芽组织增生模型考察其抗炎活性,并通过清除DPPH自由基活性的清除作用评价其抗氧化作用。结果:100mg/kg以上的桦褐孔菌甲醇提物对角叉菜胶所致大鼠足肿、大鼠棉球肉芽组织增生有抑制作用;100mg/kg的桦褐孔菌甲醇提物可以清除DPPH自由基。结论:桦褐孔菌甲醇提取物具有良好的抗氧化及抗炎作用。     

通关藤及其常见混伪品的ITS2条形码鉴别研究

目的:采用ITS2序列分析,对通关藤及其混淆品进行鉴别,确保用药安全。方法:从GenBank下载通关藤序列,使用MEGA5.0软件对测序序列及下载序列进行对比分析,统计变异位点、计算遗传距离、构建样品NJ树,运用NCBI Blast进行物种鉴定,并与性状鉴别结果进行核对。结果:ITS2序列分析与遗传距离计算结果显示各通关藤样品间有明显差异,NJ树聚类结果能明显区分通关藤正品与伪品。结论:ITS2可准确鉴别通关藤及其伪品,可用于中药材真伪的快速鉴别,应用前景广阔。     

海洋芽孢杆菌B-9987中抗MDR菌活性成分研究

挖掘具有优良多重耐药菌(MDR)抗菌活性的次级代谢产物,为海洋新药研发提供分子多样性。方法 对海洋芽孢杆菌B-9987进行大发酵,将发酵产物进行提取分离,每一步分离过程进行MDR活性追踪。结果 B-9987粗提物对4株MDR菌(金黄色葡萄球菌CCARM 3090、沙门氏菌CCARM 8250、大肠杆菌CCARM 1009、粪肠球菌CCARM 5203)具有良好的抗菌活性。通过HPLC分离纯化及MS、NMR等波谱分析获得了化合物1(Macrolactin F)和化合物2(Bacillaene A)。化合物1对MDR菌没有抗菌活性。由于化合物2对光、温度、氧气十分不稳定,无法直接测试活性。对含有化合物2的组分进行活性测试,确定了B-9987的MDR菌抗菌活性来自于Bacillaene类化合物。结论 鉴定了B-9987中的抗MDR菌活性成分。     

海绵共附生菌Streptomyces olivaceus LHW2444的分离鉴定及其抗青枯菌活性代谢产物研究

目的 从海绵中分离培养放线菌,筛选具有抗青枯菌活性的菌株,分离鉴定活性代谢产物。方法 以来源于南海西沙永兴岛附近海域的海绵Leucetta chagosensis为实验材料,采用三种选择性分离培养基分离海绵的共附生放线菌,利用16S rRNA序列分析对各菌株进行种属鉴定。对各菌株的发酵提取物进行抗青枯菌活性筛选,采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析和高效液相色谱法对筛选到的活性菌株的发酵产物进行分离、纯化,运用核磁共振(NMR)、质谱(MS)等手段,鉴定化合物的结构。采用微量稀释法测定化合物的最小抑菌浓度(MIC)。结果 分离培养海绵共附生放线菌16株,筛选得到一株具有较好抗青枯菌活性的菌株Streptomyces olivaceus LHW2444,并从该菌株的发酵产物中分离鉴定2个吡咯类化合物、1个苯并二恶茂类化合物、2个吡喃酮类化合物,分别为pyrrole-2-carboxamide(1)、pyrrole-2-carboxylic acid(2)、1,3-benzodioxole-2-one-4-carboxylamide(3)、germicidin B(4)、germicidin C(5),化合物1-5为首次从该种属放线菌分离得到。首次发现pyrrole-2-carboxylic acid对青枯菌具有较强抑制作用,MIC值为8 μg/mL。结论 海绵共附生菌Streptomyces olivaceus LHW2444是潜在的植物青枯病生防菌,pyrrole-2-carboxylic acid是抗青枯菌的活性代谢产物。     

海洋真菌Aspergillus violaceus WZXY-m64-17中的抗菌活性成分

目的 研究海洋真菌Aspergillus violaceus WZXY-m64-17中的抗菌活性成分。方法 利用硅胶、反相ODS、Sephadex LH-20、半制备HPLC等色谱学方法对菌株固体发酵物行分离纯化;利用NMR、MS、UV、IR等波谱学技术手段,结合文献数据比对,确定化合物的结构。并通过肉汤稀释法测定了单体化合物的抗金葡萄球菌和抗耐药菌活性。结果 分离鉴定了6个化合物,分别为2-hydroxyemodin（1）、emodin （2）、nidurufin （3）、versicolorin B （4）、sterigmatocystin （5）、terrequinone A（6）,其中化合物4、6具有较好的抗菌活性。 结论 海洋真菌Aspergillus violaceus能够产生一系列醌类化合物,其中部分化合物具有良好抗金葡萄球菌和抗耐药菌活性。     

冷泉来源诺卡氏菌OUCLQ19-35-1次级代谢产物的研究

目的 探究深海冷泉来源微生物的次级代谢产物产生能力,从中挖掘具有抗多重耐药(multi-drug resistant, MDR)菌活性的次级代谢产物,为新药研发提供化合物实体。方法 采用稀释涂布法分离纯化深海冷泉海泥样品中的放线菌,通过琼脂扩散法筛选具有抗MDR菌活性的放线菌;基于16S rRNA基因片段序列分析和系统进化树构建初步确定目标放线菌种属;对目标放线菌进行大规模发酵,采用有机溶剂萃取、反相硅胶柱层析、半制备高效液相等分离手段对发酵产物进行分离纯化,利用NMR、MS等波谱学技术并结合文献对化合物进行结构鉴定,然后对化合物进行抗MDR菌活性测试。结果 从深海冷泉中筛选到一株具有抗MDR菌Micrococcus luteus ML01和Staphylococcus aureus CCARM3090活性的放线菌OUCLQ19-35-1,16S rRNA序列及系统进化树分析初步确定其为Nocardiopsis synnemataformans;从其发酵产物中分离得到3个化合物,分别为questiomycin A(1)、1,6-dihydroxyphenazine(2)和5a,6,11a,12-tetrahydro-5a,11a-dimethyl[1,4]benzoxazino[3,2-b][1,4]benzoxazine(3);活性结果显示,化合物1-3均无抗MDR菌活性,但其所在的组分有抑菌活性。结论 从深海冷泉筛选得到一株诺卡氏菌OUCLQ19-35-1,其能够产生抗MDR菌的活性次级代谢产物,具有潜在的应用价值,但其活性成分待进一步的确定。     

复方麝香黄芪滴丸的体外及体内血清化学成分分析

目的:应用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)对复方麝香黄芪滴丸的体外及体内血清化学成分进行快速分析鉴别.方法:采用Accucore C18(100 mm×2.1 mm,2.6 μm)色谱柱,以0.1％甲酸水溶液-甲醇梯度洗脱,流速0.2mL·min-1,进样量5...     

基于网络药理学的虎杖抗炎活性成分及作用机制研究

目的： 构建虎杖抗炎的"成分-靶点-通路"网络,探究虎杖可能的活性成分及其潜在作用机制。方法： 通过文献和TCMSP数据库查找虎杖化学成分,采用类药性（drug likeness,DL）以及口服生物利用度（oral bioactivity,OB）评估筛选活性成分;通过Drugbank、Pharmmapper数据库筛选虎杖活性成分潜在靶点基因,通过GeneCards和MalaCards数据库得到炎症相关基因靶点;将活性成分的潜在靶点基因与炎症相关基因进行比对,得到虎杖抗炎的潜在靶点基因;使用R语言和KOBAS3.0数据库对靶点基因功能和相关通路进行注释;采用Cytoscape3.6.1软件构建虎杖抗炎作用的"成分-靶点-通路"网络;将筛选得到的部分活性成分和关键靶点进行分子对接。结果： 从虎杖中共筛选出13个活性成分,涉及包括ELANE、PLG、ALB、MMP9等65个基因靶点,影响了Toxoplasmosis、IL-17 signaling pathway、Relaxin signaling pathway、TNF signaling pathway等96条信号通路;分子对接试验结果显示,筛选得到的两个活性成分与关键靶点的结合能力与阳性药物接近。结论： 构建的"成分-靶点-通路"网络图揭示了虎杖通过多成分、多靶点、多通路的形式发挥抗炎作用,分子对接试验间接证实了网络药理学预测结果的可靠性与准确性。研究结果为进一步阐释虎杖抗炎作用机制提供了科学依据。     

Monoterpenoids and their glycosides from Winchia calophylla

Three new monoterpenoid compounds have been isolated from extracts of the stem barks of Winchia calophylla A. DC. The new compounds include two cyclo-diglycosides, wincaloside A (2) and wincaloside B (3), and a derivative of tetrahydroxycyclohexane-carboxylic acid, winchiepoxide (1). Their structures have been elucidated by spectroscopic and chemical methods.     

Styryllactones from the rhizomes of Goniothalamus griffithii

Three new styryl-lactones 8-acetylgoniofufurone(1), 7-acetylgonio-pypyrone(3), and 5-acetylgoniopypyrone(4), along with ten known compounds, goniofufurone(2), goniopypyrone(5), goniothalamin, goniothalenol, (+)-isoaltholactone, goniodiol, 7-acetylgoniodiol, goniotriol, 8-acetylgoniotriol, 9-deoxygoniopypyrone were isolated from the rhizomes of Goniothalamus griffithii Hook f. et. Thoms. Their structures were elucidated by IR, MS, NMR spectra and chemical evidence. All compounds showed cytotoxic activities against human cancer cell lines.     

多枝雾水葛凝胶膏剂抗皮肤感染的药效学研究

目的：研究多枝雾水葛凝胶膏剂（Pouzolzia zeylanica var.microphylla gel，PZG）对皮肤感染性疾病的治疗作用。方法：建立金黄色葡萄球菌诱导的小鼠皮下脓肿模型和大鼠皮肤创伤性感染溃疡模型，通过检测体质量、皮肤脓肿体积或溃疡面积愈合率、皮肤细菌逆培养和局部皮肤病理形态、羟脯氨酸、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白介素-10（interleukin-10，IL-10）含量等指标，考察PZG对感染性皮下脓肿和皮肤溃疡的治疗作用。结果：PZG能显著缩小皮下脓肿体积，提高皮肤溃疡面积愈合率，且有一定的量效关系；PZG可抑制皮肤感染部位的细菌生长，改善局部皮肤病理形态；PZG可降低溃疡部位TNF-α和IL-10水平，增加组织中羟脯氨酸的含量，促进溃疡愈合。结论：中药有效部位制剂PZG具有良好的抗皮肤感染作用，机制可能与其综合的抗菌、抗炎作用有密切关系。     

黄连膏体外透皮吸收及抗炎活性研究

目的：采用改良的Franz透皮扩散池考察黄连膏中主要活性成分的体外透皮吸收情况,同时对黄连膏的抗炎活性进行初步研究。方法：选用改良Franz透皮扩散池,接收液为30%乙醇生理盐水,以小鼠背部皮肤为透皮材料,采用紫外分光光度法及高效液相色谱法测定透皮接收液中盐酸小檗碱、芝麻酚、芝麻素及总生物碱的含量,计算透皮吸收动力学参数,考察黄连膏中抗炎活性成分的累计透过量及吸收规律;取30只SPF级小鼠,随机分为5组,即模型组、醋酸地塞米松乳膏组（100 mg·kg^-1）、黄连膏高剂量组0.075 g·g^-1（生药/膏）、黄连膏中剂量组0.15 g ·g^-1（生药/膏）、黄连膏低剂量组0.3g ·g^-1（生药/膏）,每组6只。阳性对照组为醋酸地塞米松乳膏组,进行2,4-二硝基氯苯（DNCB）致小鼠耳肿胀实验,观察黄连膏对炎症的抑制作用。结果：黄连膏中芝麻酚、盐酸小檗碱、芝麻素及总生物碱在24 h内的累积透过量分别为2.82,4.10,0.78,16.54 μg·cm^-2;稳态透皮速率（J_s）分别为0.125 2,0.181 4,0.034 2,0.745 7 μg·cm^-2·h^-1;与阳性对照组比较,黄连膏高剂量组显著抑制DNCB所致小鼠耳肿胀。结论：黄连膏具有良好的体外透皮性能及抗炎活性,24 h内单位面积累积透过量随药物中主要有效成分含量升高而增加,经皮渗透行为符合零级动力学方程。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS和网络药理学方法探讨短梗五加改善失眠的潜在药效成分及作用机制

目的:研究短梗五加改善失眠的药效物质基础及潜在的作用机制。方法:运用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术,结合文献,对短梗五加化学成分进行分析鉴定,使用SwissADME对成分进行筛选,通过 Swiss Target Prediction数据库预测活性成分潜在靶点,GeneCards、DRUGBANK、OMIM和DisGeNET数据库搜集疾病靶点,使用VENNY软件收集成分-靶点交集,Cytoscape软件构建靶点蛋白相互作用网络,利用DAVID数据库进行GO和KEGG富集,使用微生信平台进行可视化分析。随后利用Cytoscape构建成分-靶点-通路图,运用AutoDock Vina和Pymol软件进行分子对接。进一步建立斑马鱼睡眠剥夺模型对活性成分进行验证。结果:异嗪皮啶、金合欢素、东莨菪碱内酯、丁香酸、川芎哚等16个成分为短梗五加改善睡眠药效成分,可能作用于ESR1、AKT1、EGFR、PTGS2和PPARG等靶点,成分与靶点结合能小于-4.25kJ·mol^-1的占总数94%,显示良好的结合活性。短梗五加通过雌激素、PI3K-Akt、ErbB、HIF-1等信号通路改善失眠。总提物、金合欢素、异嗪皮啶和东莨菪碱内酯均可改善失眠并具有一定的镇静作用(P＜0.01,P＜0.05)。结论:短梗五加改善失眠可能是通过多靶点、多成分起作用,本研究为产品的质量评价及深度开发提供科学依据。     

基于灰色关联分析的藤茶提取物体外抗炎作用的谱-效关系研究

目的： 研究藤茶不同极性部位高效液相色谱（HPLC）图谱与其体外抗炎作用的谱效关系。方法： 建立藤茶不同极性部位的HPLC图谱;采用脂多糖（LPS）刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7模型,检测藤茶不同提取部位对一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）释放的影响,考察其抗炎活性;采用灰色关联度法分析不同极性部位HPLC特征峰与其抗炎药效之间的谱效关系。结果： 藤茶不同极性部位HPLC图谱有明显差异,共确定了5个共有峰。谱-效分析结果显示,5个共有峰对药效贡献均较大。结论： 建立了藤茶不同极性部位的HPLC图谱及其体外抗炎活性的谱-效关系,为该药材的抗炎药效物质基础研究提供参考。     

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS分析桃仁化学成分及快速测定苦杏仁苷和野黑樱苷的含量

目的:采用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS法对桃仁化学成分进行分析鉴定,并建立快速测定桃仁中苦杏仁苷和野黑樱苷含量的方法.方法:采用ACQUITY UPLC HSS T3(100 mm×2.1mm,1.8 μm)色谱柱,以0.1％甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱;采用正负离子Full MS/dd-MS2模式,通...     

基于液质联用法对白及中2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类成分的定性定量分析

目的： 建立白及中2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类成分的UPLC-ESI-Q/TOF-MS快速识别鉴定方法,以及主成分militarine的UPLC测定方法。方法： 液质联用方法采用Waters Acquity UPLC BEH C₁₈（1.7 μm,2.1 mm×100 mm）色谱柱,乙腈-0.1%甲酸溶液梯度洗脱,检测器为高分辨四极杆飞行时间质谱,ESI离子源,MS^E（^E代表碰撞能量）采集方式,采集质量数范围m/z 100~1 000。含量测定采用UPLC法,以乙腈-0.1%磷酸溶液（22：78）为流动相;检测波长为223 nm;柱温：35℃;流速：0.2 mL·min^-1。结果： 利用建立的白及化学成分数据库,结合2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类成分的诊断离子、准确分子量、质谱碎片及对照品信息,快速分析鉴定21个目标化合物。主成分militarine在19.059 0~381.180 8 μg·mL^-1范围内线性关系良好（r=0.998 6）。加样回收率为100.9%,RSD为1.5%。36批白及中militarine的含量范围是1.5%~4.6%。结论： UPLC-Q/TOF-MS法能快速、准确地鉴定白及中的化学成分,为其药效物质基础研究提供科学依据。建立的UPLC含量测定方法操作简便、准确可靠,可用于白及的质量控制。