对羟基苯甲醇通过SIRT1/PGC-1α/TFAM信号通路抗脑缺血再灌注损伤的作用及机制研究

目的:基于SIRT1/PGC-1α/TFAM信号通路探讨对羟基苯甲醇(HBA)抗脑缺血再灌注损伤作用。方法:通过线栓法复制MCAO/R大鼠模型,分为假手术组、模型组(MCAO/R)、HBA组、抑制剂(EX527)组。其中抑制剂组是侧脑注射EX527(10mmol·L^-1,10μL),HBA治疗组给予HBA 20mg·kg^-1进行药物干预。旷场实验、转棒实验、Morris水迷宫实验观察大鼠行为学变化;TTC法检测脑梗死体积;取缺血侧脑组织,电镜观察线粒体显微结构变化,检测组织中活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)、呼吸链酶复合体Ⅰ~Ⅳ活性、ATP水平;免疫组化法检测脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长相关蛋白(GAP-43)蛋白阳性表达;Western blot法检测脑组织中SIRT1、PGC-1a、NRF1/2、TFAM蛋白表达。结果:HBA干预后能改善MCAO/R大鼠记忆空间学习及运动能力等行为学变化,明显降低脑梗死体积;改善线粒体结构损伤,降低ROS水平,提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ~Ⅳ活性、MMP以及ATP水平。促进BDNF和GAP-43及SIRT1/PGC-1a途径相关蛋白表达。SIRT1抑制剂处理后可逆转HBA的治疗作用。结论:HBA可促进缺血再灌注过程中神经元的修复,其可能与激活SIRT1/PGC-1a/TFAM信号通路有关。     

白藜芦醇对重症急性胰腺炎大鼠肾损伤的作用

目的 探讨白藜芦醇对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肾损伤的保护作用及可能机制。方法 40只雄性SD大鼠,随机分为假手术组(SHAM组)、模型组(MO组)、白藜芦醇组(RE组)、白藜芦醇+沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)抑制剂EX527组(RE+EX组),每组10只。MO组、RE组、RE+EX组手术建立重症急性胰腺炎模型, SHAM组仅翻动十二指肠。RE组经尾静脉输入白藜芦醇,RE+EX组经尾静脉输入白藜芦醇+EX527, SHAM组及MO组经尾静脉输入等量生理盐水。药物干预24 h后取材,肾组织采用HE染色并进行肾小管Paller评分;全自动生化仪检测血清淀粉酶(AMS)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平及肾组织SIRT1、核因子κB(NF-κB)蛋白表达情况。观察四组大鼠肾组织形态学,比较四组大鼠血清指标(AMS、Cr、BUN、TNF-α、IL-1β、IL-6及NGAL)、肾组织指标(SIRT1、NF-κB蛋白)水平及P...     

苦酒汤配方工艺优化及其药效机制

目的 优化苦酒汤加工工艺与配方,并探究其药效及作用机制。方法 采用单因素结合正交试验对苦酒汤配方进行优化,以抑菌圈平均直径作为苦酒汤配方优化评价指标。制备空白组,模型组,阳性药组,苦酒汤低、中、高剂量组及苦酒汤古方组大鼠含药血清,体外培养人支气管上皮细胞(16HBE),以20 μg·mL^-1的脂多糖及10%含药血清进行干预,CCK-8法检测各组含药血清对脂多糖诱导的16HBE细胞增殖活力的影响,ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)的含量,PCR检测P65、IκBα mRNA的表达。结果 苦酒汤最优配方为米醋60 mL,鸡蛋清30 g,清半夏10 g,凤凰衣1 g。与空白组比较,模型组16HBE增殖活力下降(P<0.01),TNF-α、IL-6和IL-1β含量升高(P<0.01),P65 mRNA表达上调,IκBα mRNA表达下调(P<0.01)。与模型组比较,苦酒汤中、高剂量组及古方组细胞增殖活力上升(P<0.01),TNF-α、IL-6、IL-1β含量下降(P<0.01),P65 mRNA表达下调,IκBα mRNA表达上调(P<0.01)。与苦酒汤古方组比较,苦酒汤高剂量组TNF-α、IL-1β含量下降(P<0.01),P65 mRNA表达下调(P<0.01)。结论 经工艺优化后的苦酒汤制备方便,用量明确,其含药血清能够减轻脂多糖诱导的16HBE细胞炎症反应,药效优于原方,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

白藜芦醇通过激活SIRT1在阿尔茨海默病发病机制中的神经保护作用

目的沉默信息调节因子(SIRT)是一组依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)激活的具有去乙酰化作用的蛋白。本研究通过观察慢β-淀粉样肽前体蛋白(APP)高表达转基因小鼠及经Aβ处理的体外培养神经细胞中SIRT1的表达,探讨其在AD中枢神经损伤中的作用及其相关分子机制。方法用4月龄及8月龄APPswe/PSEN1d E9双转基因小鼠模型(APP高表达),经灌胃给予20 mg·kg~(-1)白藜芦醇(RSV)-SIRT1激活剂、20 mg·kg~(-1)Suramin-SIRT1抑制剂、对照组动物给予生理盐水,处理时间为2个月。细胞模型采用0.5μmol·L-1Aβ寡聚体(AβO)、10μmol·L-1RSV、200 mg·L-1Suramin、20μmol·L-1ZLN005及过氧化物酶体增殖物激活受体共激活因子1(PGC-1α)转染质粒分别或合并处理,孵育时间为24～48 h。用免疫荧光方法检测SIRT1在脑组织中的表达及定位;用CCK-8试验检测细胞的存活率;流式细胞技术或激光共聚焦显微镜检测体外培养细胞凋亡;用ELISA试剂盒检测血清、脑脊液中α-可溶性分泌型APP片断(αAPP)及脑组织中不可溶性Aβ含量;用蛋白印迹、免疫荧光、实时荧光定量PCR及NAD+检测试剂盒分别检测小鼠脑组织不同脑区和体外培养细胞中各种相关蛋白、m RNA表达水平及NAD+水平;用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力。结果不同月龄双转基因小鼠大脑海马及皮质区均出现数量不等的老年斑,且其数量及分布程度随月龄增加而增加;应用RSV处理双转基因小鼠后,其学习记忆能力及脑组织病理学变化明显改善,而Suramin则可进一步加重这些改变。双转基因小鼠海马、皮质区及加AβO处理神经元内SIRT1蛋白及m RNA表达均出现不同程度降低;同时,PGC-1α蛋白表达明显降低;α-分泌酶(ADAM10)及β-分泌酶(BACE2)蛋白表达出现不同程度降低,而β-分泌酶(BACE1)明显升高;另外,双转基因小鼠血清及脑脊液中αAPP含量明显降低;脑组织中不可溶性Aβ水平明显增加,动物及细胞模型中NAD+含量明显降低;同时,AβO使细胞凋亡明显升高;而上述改变均可被RSV逆转,动物老年斑明显减少。而随着PGC-1α的沉默,SIRT1不能降低细胞凋亡;而激活PGC-1α后,即使抑制SIRT1的表达,也能调控细胞凋亡。结论 (1) APP高表达转基因小鼠脑组织及经AβO的神经细胞中SIRT表达的降低,可能是导致老年斑大量聚集的原因之一。(2) RSV通过增加SIRT的表达,减少AβO诱导的细胞毒性作用,其机制可能涉及SIRT激活后调控其下游的一系列蛋白,从而减少细胞凋亡,进而降低细胞老化所引起的学习记忆能力的改变。(3) SIRT激活后通过活化ADAM10,增强APP非淀粉代谢途径,促进s APPα分泌,从而减少Aβ在大脑中的沉积。     

α7 nAChR通过提高抗氧化能力提升AD模型动物学习记忆能力及抗神经毒性作用

目的α7尼古丁型乙酰胆碱能受体(α7 nAChR)对学习与记忆功能密切相关,但其作用机制尚不十分清楚。为此,本研究选用APP/PS1双转基因动物模型,应用α7 nAChR激动剂/抑制剂研究nAChR是否能对抗Aβ引起的神经毒性作用,改善学习与记忆功能。方法选择α7 nAChR激动剂PNU-282987、α7 nAChR抑制剂甲基牛扁碱(MLA)分别处理6月龄、10月龄APP/PS1双转基因小鼠,水迷宫测定小鼠空间学习及记忆能力;HE染色观察APP/PS1双转基因小鼠脑组织病理学改变;免疫组织化学染色检测小鼠大脑内老年斑分布及表达;生物化学方法测定小鼠大脑及血清中丙二醛(MDA)含量、SOD及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;Western蛋白印迹法检测小鼠海马APP代谢途径中α分泌型淀粉样前体蛋白(αAPP)、β分泌型淀粉样前体蛋白(βAPP)、β淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)、BACE2及解聚素金属蛋白酶结构域蛋白10(ADAM10),抗氧化应激通路核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)、突触素(SYN)和突触相关蛋白(SNAP-25)等蛋白的表达水平。结果在6月龄、10月龄小鼠中,与对照组相比,PNU处理组小鼠的平台逗留时间明显升高,穿越平台次数明显增多,逃避潜伏期也有相应缩短;而MLA处理组小鼠平台逗留时间,穿越平台次数明显减少,逃避潜伏期则相应延长。6月龄APP/PS1转基因小鼠中,PNU处理组小鼠脑组织MDA含量较阳性对照组降低,SOD及GSH-Px活性较阳性对照组明显升高;MAL处理组小鼠脑组织MDA含量较阳性对照组升高,而SOD及GSH-Px活性较阳性对照组明显降低。10月龄APP/PS1转基因小鼠中,氧化应激指标略有加重,血清中氧化应激水平变化与脑组织中相似。Western蛋白印迹法结果显示,在6月龄小鼠中,PNU能够上调Nrf2/HO-1,ADAM10,BACE2,αAPP,SYN和SNAP-25蛋白表达水平,MLA可降低BACE1,αAPP,SYN和SNAP-25蛋白表达水平;在10月龄小鼠中,PNU能够上调Nrf2/HO-1,ADAM10,αAPP,SYN和SNAP-25蛋白表达水平,MLA可降低ADAM10,αAPP,SYN,SNAP-25蛋白表达水平。结论α7 nAChR可通过提高抗氧化能力来提升AD动物学习记忆能力及抗神经毒性作用:(1)激活α7 nAChR能改善APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力,而抑制α7 nAChR可加重该动物模型学习记忆障碍;(2)激活α7 nAChR能够活化Nrf/HO-1抗氧化应激通路和降低氧化应激水平;(3)α7 nAChR可调节APP代谢相关酶,促进αAPP生成,抑制Aβ生成及增强SYN、SNAP-25蛋白表达,改善突触可塑性。     

黄精多糖调控SIRT1/AMPK/PGC-1α信号通路改善H2O2诱导的HT22细胞氧化损伤

目的 研究黄精多糖对H₂O₂诱导的HT22细胞氧化应激损伤及其对SIRT1/AMPK/PGC-1α信号通路关键信号分子的影响。方法 建立H₂O₂诱导HT22细胞氧化损伤模型,黄精多糖干预后,观察黄精多糖对HT22细胞活性乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放的影响,检测超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量、还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）含量、线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ活性、腺嘌呤核苷三磷酸（adenosine triphosphate,ATP）含量,Western blotting检测细胞中SIRT1、AMPK、p-AMPK及PGC-1α蛋白的表达。结果 与模型组相比,黄精多糖（100,200,400 μmicro;g·mL^-1）明显提高细胞活性（P<0.05或P<0.01）,降低LDH释放（P<0.05或P<0.01）,减少MDA的产生（P<0.05或P<0.01）,增加SOD活力和GSH含量（P<0.05或P<0.01）,可提高ATP含量及线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ活性。此外,黄精多糖还能够上调细胞中SIRT1、p-AMPK及PGC-1α蛋白的表达。结论 黄精多糖能通过增强细胞内抗氧化活性,提高HT22细胞的存活率,改善线粒体功能,从而保护细胞抗氧化损伤,其作用机制与激活SIRT1/AMPK/PGC-1α信号通路有关。     

逆萎康含药血清调控AKT/GSK-3β/β-catenin通路抑制MC细胞的上皮间质转化

目的：逆萎康（NWK）含药血清对MC细胞（MNNG诱导人胃黏膜上皮细胞系（GES-1）恶性转化）上皮间质转化（EMT）的影响及可能机制。方法：用不同浓度含药血清作用于MC细胞,采用蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin、p-AKT Ser⁴⁷³、β-catenin、α-SMA、GSK-3β、p-GSK-3β Ser⁹、AKT蛋白的表达影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测C-myc基因的表达影响。结果：与空白组比较,蛋白质印迹实验表明,逆萎康含药血清、AKT抑制剂GSK690693（10 μmol·L^-1）使得β-catenin、p-AKT Ser⁴⁷³、E-cadherin和p-GSK-3β Ser⁹在蛋白水平的表达下调（P<0.05）,而α-SMA、N-cadherin和vimentin在蛋白水平上的表达上调（P<0.05）,但GSK-3β和AKT这两种蛋白的表达差异不显著;qRT-PCR结果证实逆萎康含药血清可以抑制C-myc mRNA（P<0.05）的表达,并且加入抑制剂后抑制作用增强,差异具有显著性。结论：逆萎康通过抑制AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路的活化,抑制MC细胞的EMT过程。     

黄芪多糖对脓毒症急性肾损伤大鼠AMPK/SIRT1信号通路介导的肾上皮细胞能量代谢的影响

目的：研究黄芪多糖（APS）对脓毒症急性肾损伤（AKI）大鼠肾上皮细胞能量代谢的影响。方法： 60只大鼠随机抽取10只设为正常组,其余随机分为AKI组,APS低、高剂量组各10只,地塞米松组11只。建模后6,12,18 h时APS低、高剂量组APS 100,200 mg·kg^-1灌胃,地塞米松组地塞米松10 mg·kg^-1灌胃,正常组及AKI组等量生理盐水灌胃。建模后24 h测磷法检测肾上皮细胞钠-钾-三磷酸腺苷酶（Na^＋-K^＋-ATP）活性;Western blot法检测肾组织沉默信息调节因子2相关酶类1（SIRT1）。结果：与AKI组比较,APS低、高剂量组,地塞米松组Na^＋-K^＋-ATP酶活性增强（t=3.894,P=0.005;t=6.564,P<0.01;t=6.565,P<0.01）;与APS低剂量组比较,APS高剂量组、地塞米松组Na^＋-K^＋-ATP酶活性增强（t=2.544,P=0.034;t=2.635,P=0.030）;与AKI组比较,APS低、高剂量组,地塞米松组SIRT1蛋白表达量升高（t=9.923,P<0.01;t=12.042,P<0.01;t=10.960,P<0.01）;与APS低剂量组比较,APS高剂量组、地塞米松组SIRT1蛋白表达量升高（t=4.985,P=0.001;t=5.000,P=0.001）。结论： APS可改善脓毒症AKI大鼠肾上皮细胞能量代谢,可能与激活AMPK/SIRT1信号通路有关。     

类叶升麻苷对APP/PS1双转基因小鼠抗炎及抗氧化作用的研究

目的：探讨类叶升麻苷（Acteoside，AS）对APP/PS1双转基因小鼠炎症因子及氧化应激因子变化的影响。方法：健康APP/PS1转基因小鼠90只，对照B6C3雄鼠16只，雌雄各半，连续90 d灌胃给药，给药76 d进行Morris水迷宫实验，87 d进行跳台实验，解剖后检测血清、海马和皮层中炎症及氧化应激相关因子。结果：模型组小鼠血清中IL6、TNF-α含量显著高于正常组，模型组小鼠海马中IL1-β、IL6、IFN-γ、ROS含量显著高于正常组，模型组小鼠皮层中IL1-β、ROS含量显著高于正常组，IL6、TNF-α、IFN-γ含量与正常组无明显差异。AS可显著降低皮层中IL1-β、IL6、IFN-γ、ROS含量。结论：AS可通过降低痴呆小鼠致炎因子含量以抑制炎症反应，从而对机体产生免疫调节作用，保护神经细胞并改善脑部损伤，进而发挥其神经保护及改善学习记忆的作用。同时，AS可显著降低ROS含量，说明AS可通过抑制氧化应激损伤达到改善小鼠学习记忆功能的作用。     

PARP-1抑制剂下调SIRT1基因表达诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的机制

目的 观察PARP-1抑制剂Olaparib对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响及可能机制.方法 常规培养A549细胞,分别给予不同剂量Olaparib(0、5、10、20、50μmol/L)和(或)SIRT1激动剂SRT1720(1μmol/L)、SIRT1抑制剂EX527(1μmol/L)处理24 h,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western-blot检测细胞SIRT1及凋亡相关基因表达.结果 Olaparib处理A549细胞24 h后,细胞存活率、SIRT1及抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达逐渐降低,凋亡率及促凋亡基因Bax、Caspase-3蛋白表达逐渐增加,呈剂量依赖性(P<0.05).单独给予EX527处理A549细胞能够模拟Olaparib的上述作用(P<0.05),但SRT1720和Olaparib联合组能够拮抗Olaparib的上述作用(P<0.05).结论 PARP-1抑制剂Olaparib通过下调SIRT1基因表达抑制A549细胞增殖,并诱导其凋亡.     

菊苣酸对大鼠软骨关节炎的作用及机制

目的: 探究菊苣酸(cichoric acid)对大鼠软骨关节炎的作用及机制。方法: 分离大鼠膝关节处软骨原代细胞,利用白细胞介素1β(interleukin 1 beta, IL-1β)和肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor alpha, TNF-α)诱导软骨关节炎细胞模型,给予低中高剂量的菊苣酸和姜黄素干预。免疫荧光分析Type Ⅱ collagen表达水平,甲苯胺蓝染色和阿利新蓝染色观察干预后软骨关节炎细胞变化,β-半乳糖苷酶染色进行衰老检测,TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western blot检测FOXO4 (forkhead box O4)、p53 (tumor protein P53)和Type Ⅱ collagen蛋白表达水平,生化检测超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD),丙二醛(Malondialdehyde, MDA)和一氧化氮(nitric oxide, NO)含量。结果: 分离得到大鼠软骨原代细胞,IL-1β和TNF-α诱导细胞炎性,甲苯胺蓝染色和阿利新蓝染色面积增加,大鼠软骨关节炎细胞构建成功。与模型组相比菊苣酸高剂量组,甲苯胺蓝染色、阿利新蓝染色、β-半乳糖苷酶染色和TUNEL染色平均光密度比值,MDA含量、NO含量,FOXO4和Type Ⅱ collagen蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),p53蛋白表达水平,SOD含量显著增加(P＜0.05)。结论: 菊苣酸阻止软骨关节炎导致的细胞衰老,抑制软骨关节炎导致的细胞凋亡,进而阻止原代细胞中软骨关节炎的进展,其机制与菊苣酸下调FOXO4蛋白参与的衰老进程相关。     

白藜芦醇调控RAGE/LRP1通路改善β-淀粉样蛋白对PC12细胞神经毒性作用研究

目的:探究中药活性单体白藜芦醇对β-淀粉样蛋白(amyloid-beta,Aβ)诱导PC12细胞损伤的保护作用及对相关蛋白表达调控的影响。方法:用不同浓度(1,5和10μmol·L^-1)白藜芦醇处理Aβ_1-42诱导的PC12细胞,应用MTT法检测PC12细胞增殖情况,ELISA法检测PC12细胞内Aβ_1-42含量变化,qPCR法检测晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白1 (low-density lipoprotein receptor-related protein 1,LRP1)在基因水平的变化,应用Western Blot法检测RAGE和LRP1在蛋白水平的变化。结果:白藜芦醇对PC12细胞增殖的IC₁₀值是11.2μmol·L^-1。白藜芦醇能够改善Aβ_1-42诱导的细胞增殖活力下降,同时白藜芦醇能够降低Aβ_1-42在...     

白藜芦醇降低高脂小鼠体内胆固醇水平的作用及胆汁酸转化分子机制的初步研究

目的：研究白藜芦醇对高脂小鼠体内胆固醇水平的降低作用及其调节胆汁酸转化的分子机制。方法：选取40只Apo E-/-小鼠给予高脂饮食制备高胆固醇小鼠模型，随机分为4组：模型组、白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇中剂量组及白藜芦醇高剂量组，分别每天灌胃0.2 mL 生理盐水、10 g·L^-1白藜芦醇，20 g·L^-1白藜芦醇和40 g·L^-1白藜芦醇。分别在第0，5，10，20周比较4组小鼠血浆总胆固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）的水平。在第20周实验结束时，比较4组小鼠血浆低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）含量、动脉粥样硬化指数（arteriosclerosis index，AI）水平以及肝脏中TC、TG的含量。在人肝癌细胞株HepG2细胞系中加入0，6.25，12.5，25 μmol·L^-1白藜芦醇，检测加入白藜芦醇后各组细胞内胆固醇含量、细胞外胆汁酸含量差异。最后用25 μmol·L^-1白藜芦醇处理细胞，采用RT-PCR及Western blot分别检测细胞中胆固醇代谢相关基因胆固醇7-羟化酶（cholesterol 7α-hydroxylase，CYP7A1）、腺苷三磷酸结合盒转运体超家族成员（ABCG5）的mRNA及蛋白的表达水平。结果：白藜芦醇各剂量组小鼠的TC、TG、LDL-C、AI水平均显著低于模型组，而HDL-C显著高于模型组。白藜芦醇可降低HepG2细胞中总胆固醇含量，并促进细胞分泌胆汁酸含量。RT-PCR及Western blot结果显示，25 μmol·L^-1白藜芦醇处理HepG2细胞后，CYP7A1、ABCG5的mRNA及蛋白的表达水平明显增加。结论：白藜芦醇可以降低高脂小鼠体内胆固醇水平，这种作用可能是通过调节胆汁酸转化过程中相关基因CYP7A1、ABCG5的表达来实现的。     

蛇床子素对APP/PS1小鼠学习记忆的影响

目的观察蛇床子素(OST)对APP/PS1小鼠学习记忆功能的影响。方法采用雄性APP/PS1双转基因小鼠及野生型(WT)小鼠,随机分为3组:WT对照组、APP/PS1对照组和APP/PS1+OST。给药组小鼠自9月龄开始每天给予OST10 mg·kg~(-1),对照组小鼠则给予等体积的双蒸水,连续给药12周。每月观察小鼠筑巢行为的改变;实验结束前采用Morris水迷宫观察小鼠行为学的改变。之后,麻醉并处死小鼠,收集脑组织,采用Nissl染色观察海马神经元的形态及数量;Western蛋白印迹法检测海马组织Aβ1-40/Aβ1-42含量,APP、α分泌酶(ADAM10)及β分泌酶(BACE1)的蛋白表达水平。结果 APP/PS1小鼠筑巢行为评分随着时间推移而逐渐变差,不能筑成完整的巢穴;给予OST治疗后,小鼠的筑巢行为评分接近WT小鼠,基本筑成完整巢穴。由此说明,12月龄的APP/PS1小鼠日常生活能力和社会行为有所损伤,而OST对此可部分恢复。水迷宫结果显示,与WT小鼠相比,APP/PS1小鼠出现明显的空间学习记忆能力的下降,表现为平均逃避潜伏期明显延长且目标象限停留时间百分比和穿越平台次数明显减少;给予OST后改善了APP/PS1小鼠的空间学习记忆能力。组织形态及分子生物学结果显示,APP/PS1小鼠海马DG区及CA3区神经元的细胞形态受损并伴有完整神经元数量的减少,并且海马组织Aβ1-40/Aβ1-42含量增加,APP及BACE1蛋白呈现高表达,ADAM10的蛋白表达下降;给予OST后,减少了APP/PS1小鼠海马组织Aβ的含量,降低了APP及BACE1蛋白水平,增加了ADAM10的蛋白表达。结论 OST可改善APP/PS1小鼠日常生活能力、社会行为及空间学习记忆等能力,并减少海马组织Aβ的含量,可能与调节海马APP的酶切途径有关。     

阿里红多糖对阿尔茨海默症小鼠认知功能的作用机制研究

目的 考察阿里红多糖（FOPS）改善淀粉样前体/早老素（APP/PS1）阿尔茨海默症小鼠的认知功能及潜在机制。方法 C57BL/6J雄性小鼠作正常组;根据体重将APP/PS1双转基因雄性小鼠随机分为4组：模型组、对照组、FOPS-a实验组和FOPS-b实验组,每组8只。模型组正常饲养,对照组给予0.65 mg·kg^-1盐酸多哌奈齐,FOPS-a实验组给予60 mg·kg^-1 FOPS-a, FOPS-b实验组给予60 mg·kg^-1 FOPS-b,灌胃给药;qd,连续给药3个月。用Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,实时荧光定量-聚合酶链反应法测定海马区糖原合成酶激酶-3（GSK3α）、淀粉样前体蛋白（APP）、β淀粉样蛋白（Aβ）基因转录情况,蛋白质印迹法检测GSK3Α、APP、Aβ_1-42、早老素（PS-1）蛋白的表达。结果 模型组、正常组、对照组、FOPS-a组、FOPS-b剂量组第4天逃避潜伏期分别为（48.29±10.49）,（27.36±17.25）(28.91±20.31),（...     

槲皮素通过调节SIRT1/NLRP3信号通路对实验性巨结肠大鼠肠损伤的影响

目的 探究槲皮素通过调节沉默信息调控因子1(SIRT1)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对实验性巨结肠大鼠肠损伤的影响.方法 采用苯扎溴铵滴注法诱导建立大鼠实验性巨结肠模型,并随机分为模型组,槲皮素低(5 mg/kg)、高(50 mg/kg)剂量组,SIRT1抑制剂(EX527)组,槲皮素+EX527组,每组...     

槲皮素通过调节TGF-β1/Smad抑制增生性瘢痕的形成

目的：探讨槲皮素对人增生性瘢痕成纤维细胞（HSFb）及其介导的TGF-β₁/Smad信号通路中相关蛋白表达的影响。方法：提取人增生性瘢痕成纤维细胞进行原代培养并鉴定;采用CCK-8法检测不同浓度的槲皮素（50~600 μmol·L^-1）处理后的HSFb细胞活力;Western blot检测α-SMA、COL-Ⅲ、TGF-β₁、Smad2、Smad7的蛋白表达,免疫荧光检测α-SMA的表达以及HSF和HSFb中波形蛋白的表达。结果：与模型组相比,槲皮素（250,500 μmol·L^-1）可降低α-SMA蛋白的表达（P<0.05）并显著下调COL-Ⅲ蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）,其中500 μmol·L^-1槲皮素组对HSFb细胞Ⅲ-型胶原分泌的抑制作用最强,并显著降低TGF-β₁和Smad2的蛋白表达;显著上调Smad7蛋白表达并且呈浓度依赖性,差异均具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：槲皮素主要通过抑制COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β₁/Smad通路的活化从而抑制增生性瘢痕的形成。     

大承气汤调控Nrf2/TGF-β1/ERK通路来减轻脂多糖诱导的急性肺损伤

目的：研究大承气汤（Dachengqi Decoction,DCQD）减轻脂多糖诱导的急性肺损伤模型的作用及机制。方法：选择无特定病原体（specific pathogen free,SPF）级8周龄SD雄性大鼠,采用脂多糖腹腔注射诱导急性肺损伤模型。将48只大鼠随机分为空白组（blank group）、模型组（model group）、大承气汤低浓度组（L-DCQD group,2.5 g·kg^-1）、中浓度组（M-DCQD group,5 g·kg^-1）、高浓度组（H-DCQD group,10 g·kg^-1）和大承气汤高浓度合Nrf2抑制剂组（H-DCQD＋ML385 group）,每组8只。采用脂多糖10 ml·kg^-1腹腔注射造模,每天灌胃给药1次,连用5 d,并于造模后2 h给予不同浓度的大承气汤灌胃,6 h后收集标本。ELISA检测肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、髓过氧化物酶（MPO）、丙二醛（MDA）、转化生长因子-β（TGF-β1）表达量,HE染色观察各组大鼠肺脏的病理变化,Western blot检测肺组织核因子E2相关因子2（Nrf2）、p-Nrf2、血红素氧合酶1（HO-1）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）、p-ERK的表达,免疫荧光检测Nrf2核转位情况。结果：与blank组相比,model组出现严重的炎症反应,肺泡损伤,肺水肿形成,大量炎症细胞浸润;相关促炎因子TNF-α、IL-1β及氧化指标MPO、MDA明显升高（P<0.05）;大鼠肺组织p-Nrf2及HO-1、p-ERK蛋白表达均上调（P<0.05）。与model组相比,DCQD组炎症反应减轻,肺组织损伤改善,TNF-α、IL-1β及氧化指标MPO、MDA下降,p-Nrf2及HO-1蛋白表达均上调（P<0.05）,p-ERK蛋白表达下调（P<0.05）,且DCQD高浓度组变化趋势更明显（P<0.05）。结论：大承气汤可减轻脂多糖引起的急性肺损伤,其机制与激活Nrf2/TGF-β1/ERK信号通路及抑制炎症反应、氧化应激、上皮间质转化有关。     

基于网络药理学研究六味地黄丸治疗阿尔茨海默病作用机制

目的 基于网络药理学探讨六味地黄丸治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的作用机制。方法 从TCMSP数据库筛选六味地黄丸治疗AD的活性成分,并构建药物-靶标网络、蛋白与蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,运用生物信息学分析方法进行GO分析、KEGG通路富集分析和PPI网络分析。采用荧光实时定量PCR对网络药理学主要分析结果进行验证。结果 分析结果表明,六味地黄丸主要关联AD的β淀粉样蛋白聚集、Tau蛋白的磷酸化、细胞凋亡、氧化应激反应、炎症反应、自噬、胰岛素代谢等;体外实验提示,六味地黄丸参与调控APP介导的β淀粉样蛋白聚集,GSK-3β介导的Tau蛋白磷酸化,GNB1介导的炎症反应,Caspase-3介导的细胞凋亡,MAOB介导的氧化应激反应,mTOR介导的自噬,以及INSR介导的胰岛素代谢等通路。结论 六味地黄丸治疗AD具有多成分、多靶点的特点,可为进一步研究其作用机制提供依据。     

左乙拉西坦通过抑制NLRP3炎症小体的活化和氧化应激改善APP/PS1小鼠的认知障碍

目的 以氧化应激和神经炎症为切入点,考察左乙拉西坦治疗阿尔茨海默病的药效和潜在机制。方法 淀粉样蛋白前体蛋白/I型早老素双转基因（amyloid precursor protein-swe/presenilin-1-1dE9,APP/PS1）模型小鼠按照体质量每2 d通过尾静脉注射不同剂量左乙拉西坦（5,10,20 mg·kg^-1）,连续给药30 d。自主活动试验考察实验动物自主活动能力;Morris水迷宫试验考察实验动物认知能力;免疫组化试验考察实验动物海马脑区小胶质细胞活化程度;半胱天冬酶-1（caspase-1）活力检测试剂盒考察实验动物海马脑区caspase-1活力;蛋白免疫印迹试验考察实验动物海马脑区白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin结构域蛋白3（NOD-,LRR-and pyrin domain-containing protein 3,NLRP3）、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC）、caspase-1蛋白表达水平;比色法试剂盒检测实验动物海马脑区超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力、谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平、过氧化氢（H₂O₂）含量和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平。结果 与空白组小鼠相比,APP/PS1模型组小鼠的逃避潜伏期显著延长,且海马脑区小胶质细胞活化程度明显加剧,IL-1β水平明显增加,NLRP3和caspase-1蛋白水平明显增加,SOD活力显著下降,GSH水平显著减少,MDA水平显著增加。与模型组相比,左乙拉西坦10 mg·kg^-1和20 mg·kg^-1可以显著缩短APP/PS1小鼠逃避潜伏期,显著减轻海马脑区小胶质细胞活化程度,显著降低IL-1β水平,显著减少NLRP3和caspase-1蛋白水平,显著增加SOD活力和GSH水平、显著减少MDA水平。结论 左乙拉西坦可以显著改善APP/PS1小鼠的认知功能,其作用机制可能与抑制炎症小体的活化和氧化应激密切相关。