熊果酸对大鼠肾小球系膜细胞凋亡及TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的： 观察熊果酸（ursolic acid,UA）对活化的大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells,MCs）凋亡与TGF-β₁/smads信号通路的影响,探讨UA抗肾纤维化的作用机制。方法： 原代培养并分离、纯化大鼠肾小球系膜细胞,转化生长因子β₁（TGF-β₁）刺激活化后,熊果酸按低剂量（2.5 μmol·L^-1）、中剂量（5 μmol·L^-1）、高剂量（10 μmol·L^-1）进行干预。Cell counting kit-8（CCK-8）及流式细胞仪分别检测系膜细胞活力及凋亡率,免疫印迹法测定系膜细胞TGF-β₁受体（TβRI、TβRII）、磷酸化蛋白P-smad信号分子表达的变化。结果： 5 μg·L^-1 TGF-β₁明显激活系膜细胞增殖,上调TGF-β₁受体表达及Smad2的磷酸化,抑制系膜细胞凋亡。低、中、高剂量熊果酸均能抑制系膜细胞增殖,促进凋亡,并下调系膜细胞TGF-β₁受体表达,抑制Smad2的磷酸化。结论： 熊果酸可通过影响TGF-β₁/Smads信号通路,诱导系膜细胞凋亡,拮抗细胞增殖,这可能是熊果酸抗肾脏纤维化的部分细胞学机制。     

基于Notch/Snail信号的艳山姜挥发油对内皮间质转分化的保护作用研究

目的：探讨艳山姜挥发油对转化生长因子β₁（TGF-β₁）诱导的内皮间质转分化（EndMT）的干预作用及信号机制。方法：以10 ng·mL^-1 TGF-β₁诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）建立EndMT模型。实验共分为两个部分：（1）分组：正常组,模型组（10 ng·mL^-1 TGF-β₁）,EOFAZ低剂量组（10 ng·mL^-1 TGF-β₁+1 μg·L^-1 EOFAZ）,EOFAZ高剂量组（10 ng·mL^-1 TGF-β₁+4 μg·L^-1 EOFAZ）。EOFAZ干预作用2 h后加入TGF-β₁共同孵育72 h。采用Transwell小室实验检测细胞迁移能力;波形蛋白（Vimentin）和血小板-内皮细胞粘附分子（CD31）以及Notch-1的蛋白表达情况通过蛋白免疫印迹法检测。（2）分组：正常组,模型组（10 ng·mL^-1 TGF-β₁）,γ-分泌酶抑制剂组（10 ng·mL^-1 TGF-β₁+15 μmol·L^-1 DAPT）,EOFAZ高剂量组（10 ng·mL^-1 TGF-β₁+4 μg·L^-1 EOFAZ）。DAPT及EOFAZ干预作用2 h后加入TGF-β₁共同孵育72 h。通过蛋白免疫印迹法检测Notch-1,Snail和Slug的表达。结果：内皮细胞经TGF-β₁处理72 h后,细胞迁移能力明显增强（P<0.01）,CD31蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,Vimentin,Notch-1,Snail和Slug蛋白表达水平显著提高（P<0.01,P<0.05）,给予EOFAZ作用后能逆转上述改变。同时在给予DAPT阻断Notch信号后,Notch-1,Snail和Slug蛋白水平下降（P<0.05）。结论：EOFAZ干预TGF-β₁诱导EndMT的作用与Notch信号相关,其可以进一步调控Snail和Slug的表达。     

鹿茸多肽对阿霉素诱导H9c2细胞损伤保护作用的研究

目的：探讨鹿茸多肽对阿霉素诱导的H9c2细胞损伤的保护作用与其作用机制。方法：培养H9c2细胞，采用CCK-8方法考察ADR和PAP对H9c2细胞存活率的影响，选择最优给药时间与浓度，分成4组，空白对照组（BCG组）、阿霉素诱导组（ADR组）、鹿茸多肽组（PAP组）、阿霉素与鹿茸多肽联合诱导组（ADR+PAP组），ELISA检测H9c2上清液中cTnT和cTnI的含量，免疫荧光法检测Caspase9的表达水平，Western blot法检测各组细胞相关蛋白TGF-β₁、SMAD7、PKC表达。结果：与BCG组比较，ADR组cTnT和cTnI含量显著升高（P<0.05），Caspase9活性表达降低，TGF-β₁蛋白表达升高（P<0.01），SMAD7、PKC蛋白表达降低（P<0.01），PAP组无显著性差异（P>0.05），与ADR组比较，ADR+PAP组cTnT和cTnI含量减少（P<0.05），Caspase9活性表达升高，TGF-β₁蛋白表达降低（P<0.05），SMAD7、PKC蛋白表达升高（P<0.01，P<0.05）。结论：鹿茸多肽可以对阿霉素诱导的H9c2细胞损伤有保护作用，其作用机制可能与调控TGF-β₁、SMAD7、PKC蛋白表达量有关。     

人组织激肽释放酶过表达对病毒性心肌炎小鼠心肌纤维化的抑制作用

目的：探讨过表达人组织激肽释放酶对病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌纤维化的影响。方法：24只4周龄BALb/c雄性小鼠，随机分为正常对照组（Sham组）、模型组（Model组）、病毒性心肌炎+hKLK1基因载体组（EZ.hKLK1组）、病毒性心肌炎+空载体组（EZ.null组）。采用腹腔注射柯萨奇B3病毒液构建VMC模型，通过尾静脉注射高表达人组织激肽释放酶的慢病毒颗粒（pEZ-Lv105-hKLK1）。第30天，心脏超声检测心功能后，断颈处死小鼠，计算心脏体重比，心肌胶原含量以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原比值，Western blot法测定hKLK1、TGF-β₁蛋白的表达。结果：与Sham组相比，Model组心脏指数、左心室舒张末期内径（LVEDd）、左心室收缩末期内径（LVEDs）、心肌胶原含量、Ⅰ/Ⅲ胶原比值、TGF-β₁的表达均显著升高（P<0.05），左心室缩短分数（FS）和射血分数（EF）显著降低（P<0.05），提示造模成功；与Model组相比，EZ.hKLK1组KLK1的表达显著升高（P<0.05），同时心脏指数、LVEDd、LVEDs、心肌胶原含量、Ⅰ/Ⅲ胶原比值、TGF-β₁的表达均显著降低（P<0.05），FS和EF显著升高（P<0.05），而EZ.null组差异无显著性（P>0.05）。结论：KLK1可通过调节TGF-β₁的表达而发挥抑制VMC小鼠心肌纤维化的作用。     

逆萎康含药血清调控AKT/GSK-3β/β-catenin通路抑制MC细胞的上皮间质转化

目的：逆萎康（NWK）含药血清对MC细胞（MNNG诱导人胃黏膜上皮细胞系（GES-1）恶性转化）上皮间质转化（EMT）的影响及可能机制。方法：用不同浓度含药血清作用于MC细胞,采用蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin、p-AKT Ser⁴⁷³、β-catenin、α-SMA、GSK-3β、p-GSK-3β Ser⁹、AKT蛋白的表达影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测C-myc基因的表达影响。结果：与空白组比较,蛋白质印迹实验表明,逆萎康含药血清、AKT抑制剂GSK690693（10 μmol·L^-1）使得β-catenin、p-AKT Ser⁴⁷³、E-cadherin和p-GSK-3β Ser⁹在蛋白水平的表达下调（P<0.05）,而α-SMA、N-cadherin和vimentin在蛋白水平上的表达上调（P<0.05）,但GSK-3β和AKT这两种蛋白的表达差异不显著;qRT-PCR结果证实逆萎康含药血清可以抑制C-myc mRNA（P<0.05）的表达,并且加入抑制剂后抑制作用增强,差异具有显著性。结论：逆萎康通过抑制AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路的活化,抑制MC细胞的EMT过程。     

麦冬皂苷B促进细胞铁死亡抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖的机制

目的：研究麦冬皂苷B对A549细胞增殖的影响及其作用机制。方法：细胞计数试剂盒（CCK-8）检测不同浓度麦冬皂苷B处理后A549细胞的存活率;将A549细胞分为对照组和麦冬皂苷B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组干预24 h,分析细胞克隆形成情况;DCFH-DA、C11-BODIPY、FeRhonox-1荧光探针分别检测细胞内活性氧、脂质过氧化水平、Fe²⁺浓度的荧光强度变化;GSH和MDA试剂盒分别检测细胞内GSH和MDA水平;Real-time PCR法和Western blot法分别检测SLC7A11、GPX4、SLC40A1、Transferrin、Nrf2、HO-1的mRNA水平和蛋白表达情况。结果：与对照组比较,A549细胞存活率随麦冬皂苷B药物浓度增大逐渐降低,其IC₅₀为 23.7 μmol·L^-1。麦冬皂苷B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著细胞克隆形成（P<0.05）。与对照组比较,OP B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著增强细胞内脂质过氧化水平的荧光强度和脂质过氧化产物MDA 积累（P<0.05）,且呈剂量依赖性,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著增强细胞内ROS和亚铁离子的荧光强度（P<0.05）,明显降低细胞内GSH含量（P<0.05）。RT-PCR结果显示,与对照组比较,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低GPX4、SLC7A11 mRNA 水平（P<0.05）,只有OP B高（48 μmol·L^-1）剂量组显著降低SLC40A1 的mRNA水平;Western blot结果显示,与对照组比较,OP B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低SLC7A11的蛋白水平（P<0.05）,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低GPX4、SLC7A11的蛋白水平（P<0.05）。与对照组比较,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低Nrf2的mRNA水平和Nrf2和HO-1的蛋白水平（P<0.05）,而OP B高（48 μmol·L^-1）剂量组显著降低HO-1的mRNA水平（P<0.05）。结论：麦冬皂苷B能够抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖,其机制可能与抑制Nrf2/HO-1抗氧化通路促进细胞铁死亡有关。     

大承气汤调控Nrf2/TGF-β1/ERK通路来减轻脂多糖诱导的急性肺损伤

目的：研究大承气汤（Dachengqi Decoction,DCQD）减轻脂多糖诱导的急性肺损伤模型的作用及机制。方法：选择无特定病原体（specific pathogen free,SPF）级8周龄SD雄性大鼠,采用脂多糖腹腔注射诱导急性肺损伤模型。将48只大鼠随机分为空白组（blank group）、模型组（model group）、大承气汤低浓度组（L-DCQD group,2.5 g·kg^-1）、中浓度组（M-DCQD group,5 g·kg^-1）、高浓度组（H-DCQD group,10 g·kg^-1）和大承气汤高浓度合Nrf2抑制剂组（H-DCQD＋ML385 group）,每组8只。采用脂多糖10 ml·kg^-1腹腔注射造模,每天灌胃给药1次,连用5 d,并于造模后2 h给予不同浓度的大承气汤灌胃,6 h后收集标本。ELISA检测肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、髓过氧化物酶（MPO）、丙二醛（MDA）、转化生长因子-β（TGF-β1）表达量,HE染色观察各组大鼠肺脏的病理变化,Western blot检测肺组织核因子E2相关因子2（Nrf2）、p-Nrf2、血红素氧合酶1（HO-1）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）、p-ERK的表达,免疫荧光检测Nrf2核转位情况。结果：与blank组相比,model组出现严重的炎症反应,肺泡损伤,肺水肿形成,大量炎症细胞浸润;相关促炎因子TNF-α、IL-1β及氧化指标MPO、MDA明显升高（P<0.05）;大鼠肺组织p-Nrf2及HO-1、p-ERK蛋白表达均上调（P<0.05）。与model组相比,DCQD组炎症反应减轻,肺组织损伤改善,TNF-α、IL-1β及氧化指标MPO、MDA下降,p-Nrf2及HO-1蛋白表达均上调（P<0.05）,p-ERK蛋白表达下调（P<0.05）,且DCQD高浓度组变化趋势更明显（P<0.05）。结论：大承气汤可减轻脂多糖引起的急性肺损伤,其机制与激活Nrf2/TGF-β1/ERK信号通路及抑制炎症反应、氧化应激、上皮间质转化有关。     

岩藻黄质调控TGF-β/Smad3信号通路减轻CCl4诱导的大鼠肝纤维化和氧化应激

目的： 探究岩藻黄质对肝纤维化模型大鼠氧化应激和纤维化的保护作用及可能机制。方法： 将雄性SD大鼠随机分为空白、模型、岩藻黄质和水飞蓟宾组。除空白组外,其余各组大鼠均皮下注射CCl₄溶液,2次/周,连续8周。造模同时,各组给予相应药物,空白和模型2组均给予等体积无菌水。8周后处死大鼠,检测血清谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（T-BIL）、直接胆红素（D-BIL）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽-过氧化物酶（GSH-Px）、透明质酸（HA）、羟脯氨酸（HYP）、层粘连蛋白（LN）含量以及α-SMA、TGF-β/Smad3通路主要mRNA和蛋白表达;并检测肝组织病理变化和纤维化。结果： 与空白组比较,模型组大鼠血清AST、ALT、T-BIL、D-BIL、HA、HYP、LN、MDA,肝组织α-SMA mRNA和α-SMA、TGF-β、p-Smad3蛋白水平显著上调,而SOD和GSH-Px含量降低,肝脏可见细胞结构破坏,大量炎症细胞浸润,胶原沉积和纤维增生;与模型组相比,岩藻黄质和水飞蓟宾可显著逆转大鼠血清ALT、AST、T-BIL、D-BIL、HA、HYP、LN和MDA的升高及SOD和GSH-Px的降低,并缓解肝组织炎症和纤维化程度;此外,岩藻黄质可显著抑制肝组织α-SMA、TGF-β mRNA和α-SMA、TGF-β、p-Smad3蛋白表达水平。结论： 岩藻黄质通过抑制TGF-β/p-Smad3通路缓解大鼠肝纤维化水平,调节氧化应激状态。     

姜黄素对亚急性肝内胆汁淤积大鼠肠内菌群变化的影响及其机制研究

目的： 研究姜黄素对亚急性肝内胆汁淤积（intrahepatic cholestasis,IHC）大鼠肠内菌群变化的影响,并分析相关机制。方法： 38只IHC大鼠随机分为模型组（9只）、姜黄素低剂量组（9只）、姜黄素高剂量组（10只）、阳性药物组（10只）,9只健康大鼠设置为对照组。姜黄素低、高剂量组姜黄素200、400 mg·kg^-1灌胃;阳性药物组熊去氧胆酸60 mg·kg^-1灌胃;对照组与疾病组等量生理盐水灌胃。均为每天一次;干预14 d。检测肝功能指标、胆红素代谢指标、炎症指标;qRT-PCR反应定量检测肠内菌群;Western blot检测肝组织核转录因子-κB（NF-κB）p65、p-NF-κB p65、核因子抑制蛋白（IκBα）、p-IκBα蛋白相对表达量。结果： 与疾病组比较,姜黄素低、高剂量组、阳性药物组碱性磷酸酶（ALP）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、总胆汁酸（TBA）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）均降低,白介素-10（IL-10）均升高,乳酸杆菌、双歧杆菌均增加,大肠杆菌均减少（P<0.05）;与姜黄素低剂量组比较,姜黄素高剂量组、阳性药物组ALP、ALT、AST、GGT、TBIL、DBIL、TBA、IL-1β、IL-6、TGF-β₁均降低,IL-10均升高,乳酸杆菌、双歧杆菌均增加,大肠杆菌均减少（P<0.05）。与疾病组比较,姜黄素低、高剂量组、阳性药物组p-NF-κB p65/NF-κB p65,p-IκBα/IκBα均降低（P<0.05）;与姜黄素低剂量组比较,姜黄素高剂量组、阳性药物组p-NF-κB p65/NF-κB p65,p-IκBα/IκBα均降低（P<0.05）。结论： 姜黄素可改善亚急性IHC模型大鼠肝功能、胆红素代谢、肠道菌群,减轻炎症反应及肝脏组织病理变化,且具有剂量依赖性,推测其作用机制与抑制NF-κB信号通路有关。     

大麻二酚对应激性心肌损伤的预防及其机制

目的：探索应激性心肌损伤之后,大鼠心肌组织及心肌细胞的状态和可能的作用机制。方法：采用水浸束缚应激的方式,建立大鼠应激性心肌损伤模型,观测大麻二酚治疗之后应激大鼠心率和血压的变化,血清中CORT、BNP、c-TnI、TNF-α和Il-1β的含量变化,以及应激前后心肌组织中mRNA的差异表达,将差异表达最显著的前100位基因按照具有氧化作用和抗氧化作用进行分类,采用HE染色和免疫组化研究方法,观察大麻二酚对应激性心肌损伤的影响,并利用Western blot研究应激性心肌损伤后心肌细胞中蛋白质差异表达。结果：通过HE染色、免疫组化和生化酶学检测验证大鼠应激性心肌损伤模型,心肌损伤的大鼠心率和血压明显升高（P<0.05）,血清中CORT （P<0.05）、BNP （P<0.05）、c-TnI （P<0.05）、TNF-α（P<0.05）和Il-1β（P<0.01）也显著升高,使用大麻二酚预处理之后,大鼠的心率（P<0.05）和血压（P<0.01）明显下降,血清中CORT （P<0.001）、c-TnI （P<0.001）、TNF-α（P<0.01）和Il-1β（P<0.05）也显著降低,转录组显示差异表达最显著的前100位基因中,44个基因发挥氧化作用,34个基因具有抗氧化作用。体外研究发现,心肌细胞应激之后细胞中MDA含量明显升高（P<0.01）,SOD （P<0.01）和GSH （P<0.01）显著降低,经过剂量为2.5 μmol·L^-1的大麻二酚预处理之后,MDA含量明显降低（P<0.01）,SOD （P<0.05）和GSH （P<0.01）水平却明显升高,利用Hoechst 33342和Annexinv-FITC/PI进行双染凋亡细胞检测,发现应激之后心肌细胞凋亡数量显著增加,大麻二酚预处理可减少心肌细胞凋亡,应用Western blot检测发现,应激之后Gsk3β和Bax蛋白表达量显著升高,而Nrf2和Bcl2蛋白表达量则显著降低,经过大麻二酚预处理之后Gsk3β、Bax蛋白表达量显著降低,Nrf2和Bcl2蛋白表达量显著升高。结论：大麻二酚可预防大鼠应激性心肌损伤,并且其作用机制与减少Gsk3β、Bax的表达和升高Nrf2、Bcl2蛋白的表达水平有关。     

基于OCT1美托洛尔对伊伐布雷定大鼠体内药代动力学影响及其机制研究

目的： 初步探明美托洛尔对伊伐布雷定药代动力学的影响及其机制。方法： 对照组：灌胃给予伊伐布雷定（1.0 mg·kg^-1），实验组：相继灌胃给予美托洛尔（1.0 mg·kg^-1）和伊伐布雷定（1.0 mg·kg^-1），比较两组间伊伐布雷定的药代动力学参数；采用原代肝细胞，分为对照组：伊伐布雷定（0.2、0.5、1 μmol·L^-1），实验组：美托洛尔（0.5、1.0、2.0 μmol·L^-1）+伊伐布雷定（0.2、0.5、1 μmol·L^-1），探讨美托洛尔对伊伐布雷定肝脏摄取的影响。结果： 合用美托洛尔后，伊伐布雷定药代动力学参数C_max、AUC_0-t、AUC_0-∞分别增加了121.70%、123.14%、119.80%，而CL_z/F值降低了54.49%，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。美托洛尔明显抑制肝细胞对伊伐布雷定的摄取，抑制作用随美托洛尔的浓度增加而增强。结论： 美托洛尔可以影响伊伐布雷定药代动力学特征，可能与抑制伊伐布雷定肝脏摄取有关。     

依普利酮对血管紧张素Ⅱ诱导心脏成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨依普利酮（eplerenone,EPL）对血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）诱导心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）增殖的影响。方法：利用Ang Ⅱ刺激CFs建立心肌纤维化的细胞模型,并给予依普利酮、Nrf2抑制剂Brusatol干预,采用CCK-8法检测细胞增殖率,Western blot法检测FN和CTGF、Nrf2和HO-1蛋白表达水平。结果：1 μmol·L^-1 Ang Ⅱ刺激CFs 24 h,细胞增殖率、FN和CTGF蛋白表达显著升高,Nrf2和HO-1蛋白表达显著降低（P<0.05）;给予依普利酮干预后,与Ang Ⅱ组比较,细胞增殖率、FN和CTGF蛋白表达显著降低,Nrf2和HO-1蛋白表达显著上调（P<0.05）;利用Brusatol抑制Nrf2活性,与Ang Ⅱ+EPL组比较,可逆转上述蛋白表达。结论：依普利酮能减轻Ang Ⅱ诱导的心肌纤维化,其可能的机制与激活Nrf2/HO-1信号通路,降低FN和CTGF蛋白表达有关。     

硫酸镁对合并高血压患者颅内动脉瘤手术血流动力学的影响

目的：探讨术前静脉泵注硫酸镁对合并高血压患者在全凭静脉麻醉下行颅内动脉瘤夹闭手术血流动力学的影响。方法：选择在全凭静脉麻醉下实施颅内动脉瘤夹闭术且合并有高血压的患者50例,其中男30例,女20例,年龄在18~65岁之间,随机分为硫酸镁组（M组）及对照组（C组）,每组25例。记录和比较2组在入室时刻（T₀）、诱导前（T₁）、诱导后（T₂）、气管插管后即刻（T₃）、插管后3 min （T₄）、切皮时（T₅）、开始切除动脉瘤时（T₆）、切除动脉瘤后（T₇）、缝皮时（T₈）和气管拔管时（T₉）的平均动脉压（mean arterial pressure,MAP）和心率（heart rate,HR）,术中舒芬太尼和阿曲库铵每小时的平均使用量及总药量,术后1、4、8、12、24 h的视觉模拟评分（visual analogue scale,VAS）。结果：M组T₂、T₃、T₆、T₇、T₈、T₉时的MAP值低于C组（P<0.05）;T₄、T₅时2组MAP值比较差异不明显（P>0.05）。M组T₃、T₅、T₈、T₉时的HR值均显著低于C组（P<0.01）;T₂、T₄、T₆、T₇时2组HR值比较差异不明显（P>0.05）。M组麻醉性镇痛药舒芬太尼和肌松药阿曲库铵的平均输注速度及总用药量均显著低于C组（P<0.01）。术后1 h、4 h和8 h,M组的VAS评分均显著低于C组（P<0.01）。结论：硫酸镁应用于高血压患者的颅内动脉瘤夹闭术,可以提供稳定的血流动力学环境,同时可以减少患者术中麻醉药物使用量,减轻术后疼痛,可作为一种麻醉辅助用药应用于临床麻醉。     

毛蕊花糖苷通过下调CD44表达抑制胶质瘤细胞上皮间质转化和侵袭

目的： 探讨毛蕊花糖苷（verbascoside,VB）对胶质瘤细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）和侵袭的影响及其分子调控机制。方法： 分别使用不同浓度（0,50,100,200 μmol·L^-1）的VB处理胶质瘤U87和U251细胞24 h。使用Jet Prime转染100 μmol·L^-1VB处理的细胞：对照组（转染空载质粒）、VB组（转染空载质粒+100 μmol·L^-1的VB）、oe-CD44组（转染CD44过表达质粒）、Both组（转染CD44过表达质粒+100 μmol·L^-1VB）。CCK-8法和Transwell试验分别检测VB对U87和U251细胞增殖、侵袭能力的影响。Western blot检测各组细胞的CD44和EMT相关蛋白Snail、Vimentin、N-cadherin的表达水平。结果： VB能呈浓度依赖性抑制胶质瘤U87和U251细胞的增殖和侵袭能力,下调CD44及EMT相关蛋白Snail、Vimentin、N-cadherin的表达水平。而CD44过表达时则明显上调以上蛋白表达水平,增加细胞增殖和侵袭能力。当CD44过表达并加入100 μmol·L^-1的VB时,能减弱VB下调CD44以及EMT相关蛋白Snail、Vimentin、N-cadherin表达水平的作用,同时能明显减弱VB所抑制的细胞增殖及侵袭能力。结论： VB通过下调CD44的表达而抑制胶质瘤细胞的上皮间质转化。     

半枝莲黄酮对复合Aβ所致阿尔茨海默病大鼠神经炎症的抑制作用及其机制

目的: 探讨半枝莲黄酮(SBF)对脑室注射Aβ_25-35联合AlCl₃和RHTGF-β₁(复合Aβ)建立的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠神经炎症的影响及其机制。方法: SD大鼠脑室注射复合Aβ建立AD模型,Morris水迷宫进行AD模型筛选。模型成功大鼠随机分为模型组和3个剂量药物组。药物组灌胃35,70和140 mg·kg^-1SBF,连续38 d,硫堇染色观察神经元形态和尼氏小体,IHC和Western blot检测脑内小胶质细胞(MG)标志性蛋白CD11b的表达,IHC检测脑内nNOS和iNOS蛋白表达,qPCR检测脑内eNOS mRNA表达,ELISA测定脑内炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10的水平。结果: 脑室注射复合Aβ可引起大鼠神经病理学改变、神经元丢失和尼氏小体减少;脑内CD11b、iNOS蛋白及eNOS mRNA表达增加(P<0.01)、nNOS蛋白表达降低(P<0.01);脑内IL-1β和IL-10的水平降低(P<0.01)、TNF-α、IL-6和IL-8的水平升高(P<0.01)。然而,模型大鼠灌胃SBF 38 d不同程度地逆转复合Aβ所致大鼠脑内上述异常改变(P<0.05,P<0.01),抑制MG增殖,调节NOS,降低炎性因子,减轻神经炎症。结论: SBF抑制复合Aβ所致的神经炎症与其抑制MG增殖、调节NOS和炎性因子有关。     

儿茶素对Caco-2细胞胆固醇摄取的影响及机制研究

目的： 研究儿茶素（Catechin，Cat）对Caco-2细胞胆固醇摄取的影响，以及可能的作用机制。方法： 利用胆固醇：甲基β环糊精复合物（Chol：MβCD）建立Caco-2细胞脂质蓄积模型。不同浓度的儿茶素（20、40、60 μmol·L^-1）处理细胞24 h，结合油红O染色法观察细胞内的脂质蓄积，酶法测定细胞内胆固醇含量及分布，qRT-PCR及Westernblot检测胆固醇代谢相关基因NPC1L1和SREBP-2的表达。结果： 与空白组相比，Chol：MβCD处理组细胞内红色脂滴颗粒以及胆固醇含量明显增加。20~60 μmol·L^-1儿茶素不仅可以不同程度地减少细胞内红染脂滴的形成，而且可以显著降低细胞内总胆固醇和游离胆固醇的含量，以及胆固醇酯在总胆固醇中的比例。此外，儿茶素可以剂量依赖性地降低胆固醇代谢相关基因NPC1L1及SREBP-2的mRNA和蛋白表达。其中以60 μmol·L^-1 Cat处理组的作用最为显著（P<0.01）。结论： 儿茶素可能通过下调胆固醇代谢相关基因NPC1L1和SREBP-2的表达，进而减少Caco-2细胞摄取胆固醇及蓄积。     

白藜芦醇通过SIRT1激活ADAM10促进APPα代谢

目的：探讨白藜芦醇可否通过SIRT1激活解整合素金属蛋白酶10（ADAM10）促进APPα代谢抑制Aβ分泌。方法：选取过表达人瑞典突变淀粉样前体蛋白APP695sw的细胞模型,分别设立DMSO空白对照组、SIRT1激活剂白藜芦醇组和SIRT1抑制剂EX527组。给药后,ELISA法分别检测细胞培养上清中sAPPα和Aβ的含量,免疫印记Western Blot法检测细胞SIRT1和ADAM10的蛋白水平。结果：与对照组比较,白藜芦醇组细胞培养上清sAPPα的含量增高,Aβ含量下降,sAPPα/Aβ比值增大,细胞SIRT1和ADAM10蛋白水平增高;而抑制剂EX527组与对照相比,细胞培养上清sAPPα的含量降低,Aβ含量升高,sAPPα/Aβ比值减小,细胞SIRT1和ADAM10蛋白水平降低;抑制剂下调SIRT1后各项指标与激动剂组呈现相反的趋势（P<0.05）。结论：白藜芦醇可通过SIRT1激活ADAM10,促进APP进行α非淀粉样代谢途径,增强sAPPα分泌并抑制Aβ产生。     

基于ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨玫瑰花甲醇提取物对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的：探讨玫瑰花甲醇提取物（RE）对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响及潜在作用机制。方法：采用CCK8法检测不同浓度RE对PC-3细胞增殖的影响;采用Hoechst染色法和Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;DCFH-DA检测细胞ROS水平;Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、Cyt-C、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达。结果：RE呈浓度依赖性抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,24 h和48 h后的IC₅₀值分别为31.30 mg·mL^-1和16.76 mg·mL^-1;RE能显著诱导PC-3细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）,且呈现浓度依赖性;RE可显著提高PC-3细胞ROS水平（P<0.05,P<0.01）,且具有浓度依赖性;RE能显著上调PC-3细胞Bax、cleaved caspase-3、Cyt-C的蛋白表达及Bax/Bcl-2的比值（P<0.05,P<0.01）,显著下调Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,以上均呈现浓度依赖性。结论：本研究表明RE在体外有明显抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖作用,并可能通过调控ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导其凋亡,研究结果可为玫瑰花及其组方临床治疗前列腺癌提供实验依据。     

环孢素A联合Wortmannin对胃癌细胞SGC-7901增殖抑制作用及对蛋白激酶B信号通路的影响

目的：探讨环孢素A（cyclosporin A,CsA）联合Wortmannin对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用及对蛋白激酶B（protein kinase B,PKB/AKT1）活性的影响,并解释其可能的分子机制。方法：培养人胃癌SGC-7901细胞,采用CCK8（Cell Counting Kit-8）法检测不同浓度环孢素A（5,10,20,40,80 μmol·L^-1）和不同浓度Wortmannin（10,50,100,500,1 000 nmol·L^-1）作用于胃癌细胞SGC-7901不同时间（24,48,72 h）后的细胞增殖抑制情况,并计算半数抑制浓度（half-inhibitory concentration,IC₅₀）;根据2种药物的IC₅₀确定最佳药物作用浓度,并分为CsA组、Wortmannin组以及CsA+Wortmannin组,用CCK8法和流式细胞实验检测CsA联合Wortmannin对胃癌细胞的增殖和凋亡水平的影响;Western blot法检测各组细胞中cleaved caspase 3、p-AKT、PI3K以及PKB/AKT1蛋白表达量。结果：不同浓度CsA、Wortmannin对人胃癌SGC-7901细胞作用24,48,72 h后,细胞存活率相比0 h显著下降（P<0.05）,且随着作用时间延长,细胞存活率呈逐渐下降趋势（P<0.01）。与对照组相比,CsA组、Wortmannin组、CsA+Wortmannin组细胞存活率均明显降低、细胞凋亡率明显升高,且CsA+Wortmannin 组细胞存活率明显低于CsA组和Wortmannin组,细胞凋亡率明显高于CsA组和Wortmannin组（P<0.05或P<0.01）。Western blot实验结果表明,CsA组、Wortmannin组、CsA+Wortmannin组的PKB/AKT1、PI3K、p-AKT蛋白表达均显著低于对照组,Cleaved caspase3蛋白表达率显著高于对照组（P<0.01）,且CsA+Wortmannin组PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于CsA组和Wortmannin组,cleaved caspase3蛋白表达率显著高于CsA组和Wortmannin组（P<0.01）。结论：CsA和Wortmannin均对胃癌细胞SGC-7901增殖具有明显抑制作用,且2者联用对胃癌细胞抑制作用显著强于单一药物,细胞增殖抑制作用的发挥可能是通过干扰PI3K/AKT1、PKB/AKT1信号通路和降低蛋白激酶B活性起效。     

黄芪甲苷通过calpain-1/NF-κB信号通路对低氧诱导的肺动脉高压小鼠的保护作用

目的：探究黄芪甲苷通过calpain-1/NF-κB信号通路对低氧诱导的肺动脉高压小鼠的保护作用。方法：40只C57BL/6小鼠随机分为5组：常氧对照组、低氧模型组、低氧NF-κB抑制剂组（5 mg·kg^-1）、低氧ASIV低剂量组（40 mg·kg^-1）、低氧ASIV高剂量组（80 mg·kg^-1）。16只calpain-1敲除鼠随机分为2组：常氧calpain-1敲除组、低氧calpain-1敲除组。低氧组置于10% O₂的低氧舱内造模28 d。造模结束后测定小鼠右心室收缩压（RVSP）和右心室肥厚指数（RVHI）;酶联免疫法（ELISA）检测血清中ET-1、IL-6、TNF-α含量;苏木素-伊红（HE）染色观察肺小动脉结构,测量肺小动脉血管面积占总面积的百分比（WA）和血管厚度占血管外径的百分比（WT）;免疫组化（IHC）观察肺组织PCNA蛋白的表达;免疫蛋白印迹法（Western blot）检测肺组织calpain-1、p65、p-p65、PCNA、VCAM1、ICAM1蛋白的表达。结果：与常氧对照组比较,低氧模型组小鼠的RVSP、RVHI、WA和WT升高（P<0.01）,血清中ET-1、IL-6、TNF-α含量升高（P<0.01）,肺组织中calpain-1、p-p65、PCNA、VCAM1、ICAM1蛋白表达升高（P<0.05）;与低氧模型组相比,低氧calpain-1敲除组、低氧NF-κB抑制剂组、低氧ASIV给药组小鼠的RVSP、RVHI、WA和WT明显降低（P<0.05）,血清中ET-1、IL-6、TNF-α含量降低（P<0.05）,肺组织中calpain-1、p-p65、PCNA、VCAM1、ICAM1蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论：黄芪甲苷可能通过calpain-1/NF-κB信号通路对低氧诱导的肺动脉高压小鼠发挥保护作用。