罗汉果苷V通过Wnt/β-catenin信号通路对糖尿病状态成骨细胞增殖与分化的影响

目的:探索罗汉果苷V(mogroside V,MV)对糖尿病状态下成骨细胞增殖分化的影响及其可能的作用机制。方法:构建糖尿病大鼠模型,分离培养正常大鼠和糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞。CCK8法检测不同质量浓度MV对糖尿病大鼠成骨细胞的毒性和增殖活性,并筛选出适宜的MV浓度用于后续实验;取正常大鼠和糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞,分别设立正常对照组、高糖组及MV+高糖组,茜素红染色及定量分析检测成骨分化情况,实时荧光定量PCR检测成骨相关因子ALP、OCN及Wnt/β-catenin信号通路相关因子Runx2,β-catenin,Axin2,Lef1及Osterix的mRNA表达。结果:0~0.4 g·L^-1质量浓度范围内MV对糖尿病状态成骨细胞均未表现出毒性,且浓度为6.25×10^-3g·L^-1时促进细胞增殖活性最强;与高糖组相比,MV+高糖组(含质量浓度为6.25×10^-3g·L^-1 MV)成骨分化能力增强,ALP、OCN、Runx2、β-catenin、Lef1、Osterix的表达显著升高,Axin2的表达显著降低。 结论:罗汉果苷V可促进糖尿病状态成骨细胞增殖与分化,其机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。     

山柰酚体外促成骨分化作用研究

目的 探究不同浓度的山柰酚对骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响。方法 使用含不同浓度山柰酚的培养基培养骨髓间充质干细胞,通过CCK8检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶活力检测细胞的碱性磷酸酶表达水平,茜素红染色观察钙化结节形成情况,实时荧光定量聚合酶链式反应检测细胞Runx2、OCN成骨相关基因的表达水平。结果 10^-4mol/L山柰酚对骨髓间充质干细胞增殖分化有明显抑制作用(P <0.05),10^-5、10^-8mol/L山柰酚对骨髓间充质干细胞增殖分化无影响(P> 0.05),10^-6、10^-7mol/L山柰酚对骨髓间充质干细胞增殖有明显促进作用(P <0.05),其中10^-6mol/L山柰酚还可促进骨髓间充质干细胞的碱性磷酸酶表达、成骨矿化以及Runx2、OCN成骨相关基因的表达。结论 10^-6mol/L山柰酚可以促进骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化。     

槲皮素通过调节TGF-β1/Smad抑制增生性瘢痕的形成

目的：探讨槲皮素对人增生性瘢痕成纤维细胞（HSFb）及其介导的TGF-β₁/Smad信号通路中相关蛋白表达的影响。方法：提取人增生性瘢痕成纤维细胞进行原代培养并鉴定;采用CCK-8法检测不同浓度的槲皮素（50~600 μmol·L^-1）处理后的HSFb细胞活力;Western blot检测α-SMA、COL-Ⅲ、TGF-β₁、Smad2、Smad7的蛋白表达,免疫荧光检测α-SMA的表达以及HSF和HSFb中波形蛋白的表达。结果：与模型组相比,槲皮素（250,500 μmol·L^-1）可降低α-SMA蛋白的表达（P<0.05）并显著下调COL-Ⅲ蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）,其中500 μmol·L^-1槲皮素组对HSFb细胞Ⅲ-型胶原分泌的抑制作用最强,并显著降低TGF-β₁和Smad2的蛋白表达;显著上调Smad7蛋白表达并且呈浓度依赖性,差异均具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：槲皮素主要通过抑制COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β₁/Smad通路的活化从而抑制增生性瘢痕的形成。     

毛蕊花糖苷通过下调CD44表达抑制胶质瘤细胞上皮间质转化和侵袭

目的： 探讨毛蕊花糖苷（verbascoside,VB）对胶质瘤细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）和侵袭的影响及其分子调控机制。方法： 分别使用不同浓度（0,50,100,200 μmol·L^-1）的VB处理胶质瘤U87和U251细胞24 h。使用Jet Prime转染100 μmol·L^-1VB处理的细胞：对照组（转染空载质粒）、VB组（转染空载质粒+100 μmol·L^-1的VB）、oe-CD44组（转染CD44过表达质粒）、Both组（转染CD44过表达质粒+100 μmol·L^-1VB）。CCK-8法和Transwell试验分别检测VB对U87和U251细胞增殖、侵袭能力的影响。Western blot检测各组细胞的CD44和EMT相关蛋白Snail、Vimentin、N-cadherin的表达水平。结果： VB能呈浓度依赖性抑制胶质瘤U87和U251细胞的增殖和侵袭能力,下调CD44及EMT相关蛋白Snail、Vimentin、N-cadherin的表达水平。而CD44过表达时则明显上调以上蛋白表达水平,增加细胞增殖和侵袭能力。当CD44过表达并加入100 μmol·L^-1的VB时,能减弱VB下调CD44以及EMT相关蛋白Snail、Vimentin、N-cadherin表达水平的作用,同时能明显减弱VB所抑制的细胞增殖及侵袭能力。结论： VB通过下调CD44的表达而抑制胶质瘤细胞的上皮间质转化。     

唑来膦酸对高糖诱导的成骨细胞分化、凋亡和氧化应激的影响

目的 探讨唑来膦酸对高糖诱导的成骨细胞分化、凋亡和氧化应激的影响。方法 将人成骨细胞hFOB 1.19分为对照组、高糖组(5.5 mol·L^-1葡萄糖)、低剂量实验组(5.5 mol·L^-1葡萄糖+1×10^-11 mol·L^-1唑来膦酸)、中剂量实验组(5.5 mol·L^-1葡萄糖+1×10^-10 mol·L^-1唑来膦酸)、高剂量实验组(5.5 mol·L^-1葡萄糖+1×10^-9 mol·L^-1唑来膦酸)。通过细胞计数试剂盒（CCK-8）检测各组细胞增殖活性,用碱性磷酸酶（ALP）染色检测ALP活性,用Alizarin red S染色检测钙结节形成情况;用蛋白质印迹（Western Blot）法检测唑来膦酸对高糖诱导的hFOB 1.19细胞分化以及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路相关蛋白表达的影响;用流式细胞术检测唑来膦酸对高糖诱导的hFOB 1.19...     

基于药-靶结合动力学的胰脂肪酶靶点占有率模型建立研究

目的：建立以胰脂肪酶和已上市药物为媒介的药-靶结合动力学模型,依据动力学参数与肠腔药动学构建靶点占有率模型,以评估药-靶结合动力学参数对体内药效的影响。方法：采用体外酶促反应体系测定胰脂肪酶抑制剂奥利司他和新利司他的半抑制浓度（IC₅₀）;通过反应进度曲线测定求解表观速率常数（k_obs）;采用快速稀释法测定药物-酶解离速率常数（k_off）;采用非线性拟合求解其他关键结合动力学参数;应用药物肠腔药代动力学模型,计算肠道中不同时间药物浓度;构建体内靶点占有率模型,并计算体内不同时间的靶点占有率。结果：测得奥利司他的IC₅₀为19.1 nmol·L^-1,新利司他的IC₅₀为76 nmol·L^-1;2个药物与胰脂肪酶呈时间、浓度依赖的缓慢结合反应,且结合反应属于两步结合模式,结合类型为机制B;可逆性研究结果显示奥利司他和新利司他为不可逆抑制;两药的结合速率常数（k_on）分别为76.5×10⁴和1.7×10⁴M^-1S^-1,k_off分别为0.33×10^-6和8.4×10^-6S^-1。奥利司他对脂肪酶的靶点占有率在24 h大于90%,新利司他对脂肪酶的靶点占有率在21 h时大于60%。结论：本研究所建立的基于药-靶结合动力学胰脂肪酶靶点占有率模型可用于评估动力学参数对体内药效的影响。     

1,25-二羟基维生素D3抑制脂肪细胞分化作用的研究

【摘要】目的研究1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)₂D₃]对脂肪细胞分化的影响及其机制。方法以间充质干细胞系C3H10T1/2为研究对象,将其分为6组,分别为对照组、诱导分化组和4个不同剂量的1,25(OH)₂D₃处理组。其中对照组加入溶媒,诱导分化组加入脂肪细胞诱导分化试剂,1,25(OH)₂D₃处理组除了加入脂肪细胞诱导分化试剂外,予以10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol/L 1,25(OH)₂D₃处理。处理后5d进行油红O染色,RT-PCR检测脂肪细胞特异性转录因子和Wnt/β-catenin信号通路相关因子表达水平,Western blot检测β-catenin蛋白水平。结果1,25(OH)₂D₃能够强烈抑制脂肪细胞生成,阻断脂肪细胞特异性转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ、CCAAT增强子结合蛋白（C/EBP）α及脂肪细胞表征因子aP2mRNA表达,下调Wnt/β-catenin信号通路抑制因子分泌性卷曲相关蛋白1（sFRP1）mRNA,上调β连环素（β-catenin）蛋白水平。结论1,25(OH)₂D₃强烈抑制脂肪细胞分化,该作用可能与其激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

毛冬青甲素对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及迁移的影响

目的观察毛冬青甲素(ilexonin A,IA)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响,并探讨IA是否通过上调CXCR4的表达促进大鼠BMSCs迁移。方法采用MTT比色法检测IA(3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400、800 mg·L^-1)预处理BMSCs 24、48、72 h,观察对BMSCs增殖的影响,确定最佳药物浓度和最佳作用时间。用最佳浓度的IA干预第3代BMSCs 48 h,Transwell检测BMSCs迁移能力,Western blot法检测CXCR4的表达水平。结果 MTT结果显示,IA孵育BMSCs 24、48 h,与对照组相比,100~800 mg·L^-1组的细胞增殖明显减少(P<0.05);IA孵育BMSCs 48h,与对照组相比,6.25、3.125 mg·L^-1组细胞增殖明显增加(P<0.05);IA孵育BMSCs 72 h,与对照组相比,12.5~800mg·L^-1组细胞增殖明显减少(P<0.05),提示IA 6.25、3.125 mg·L^-1剂量组于48 h预处理BMSCs是最优选择。Transwell细胞迁移实验表明,IA(6.25、3.125 mg·L^-1)预处理BMSCs 48 h明显增强BMSCs运动迁移能力(P<0.05),且迁移与IA浓度无关,CXCR4拮抗剂AMD3100可完全阻断其促迁移效应。Western blot显示,IA(6.25、3.125 mg·L^-1)预处理BMSCs 48 h,上调CXCR4蛋白表达(P<0.05)。结论 IA可以促进BMSCs的增殖,并通过上调CXCR4的表达,提高BMSCs的迁移能力。     

比较鳗鱼降钙素与17β-雌二醇对体外培养成骨细胞增殖与分化的影响

目的比较鳗鱼降钙素(CT)与17β-雌二醇对大鼠体外培养成骨细胞增殖和分化的影响。方法用酶消化法分离培养新生SD大鼠成骨细胞(OB),取第2继代,在培养液中分别加入不同浓度的CT和17β-雌二醇(E2);用MTT法观察OB的增殖能力(A值)及分化功能(ALP)。结果CT组较对照组从1×10-12mol·L-1起A值增加,且呈剂量依赖关系,当浓度≥1×10-9mol·L-1时,差异才有显著意义(P<0.05);E2组较对照组在1×10-9～1×10-7mol·L-1,A值均增加(P<0.001),以1×10-8mol·L-1作用最明显。CT组较对照组从1×10-12mol·L-1起ALP活性均增加,也呈剂量依赖关系,当浓度≥1×10-10mol·L-1差异有显著性意义(P<0.05);E2组较对照组在1×10-9～1×10-7mol·L-1,ALP活性均增加(P<0.05),以1×10-8mol·L-1作用最强。结论鳗鱼降钙素与17-β雌二醇均可促进大鼠体外培养OB增殖和分化。     

染料木素促成骨样细胞增殖作用及其机制研究

目的观察染料木素(genistein)对成骨样细胞MC3T3-E1细胞增殖及骨形成蛋白-2(BMP-2)、β-连环素(β-catenin)表达的影响。方法培养成骨样细胞MC3T3-E1,加入不同浓度的染料木素(1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6和1×10-5mol·L-1),以1×10-9mol·L-1雌激素(β-estradiol,E2)作为阳性对照组,采用MTT比色试验法和碱性磷酸酶(ALP)活性检测法,观察染料木素作用后MC3T3-E1的增殖及分化情况,以Westernblot方法检测成骨样细胞中BMP-2和β-catenin蛋白的表达。结果染料木素可促进MC3T3-E1细胞增殖,染料木素作用后细胞的ALP值也明显升高,呈浓度依赖性;染料木素可增加BMP-2和β-catenin表达,且呈浓度依赖性。结论染料木素促进MC3T3-E1细胞增殖与分化,可通过调节BMP-2和Wnt/β-catenin信号通路而影响成骨样细胞的活性。     

熊果酸对大鼠肾小球系膜细胞凋亡及TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的： 观察熊果酸（ursolic acid,UA）对活化的大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells,MCs）凋亡与TGF-β₁/smads信号通路的影响,探讨UA抗肾纤维化的作用机制。方法： 原代培养并分离、纯化大鼠肾小球系膜细胞,转化生长因子β₁（TGF-β₁）刺激活化后,熊果酸按低剂量（2.5 μmol·L^-1）、中剂量（5 μmol·L^-1）、高剂量（10 μmol·L^-1）进行干预。Cell counting kit-8（CCK-8）及流式细胞仪分别检测系膜细胞活力及凋亡率,免疫印迹法测定系膜细胞TGF-β₁受体（TβRI、TβRII）、磷酸化蛋白P-smad信号分子表达的变化。结果： 5 μg·L^-1 TGF-β₁明显激活系膜细胞增殖,上调TGF-β₁受体表达及Smad2的磷酸化,抑制系膜细胞凋亡。低、中、高剂量熊果酸均能抑制系膜细胞增殖,促进凋亡,并下调系膜细胞TGF-β₁受体表达,抑制Smad2的磷酸化。结论： 熊果酸可通过影响TGF-β₁/Smads信号通路,诱导系膜细胞凋亡,拮抗细胞增殖,这可能是熊果酸抗肾脏纤维化的部分细胞学机制。     

心脉隆对离体人脐动脉血管张力的影响及其机制

目的：探讨心脉隆对离体人脐动脉血管张力的影响,并分析其机制。方法：运用离体血管张力测定实验方法,累积加入不同浓度的心脉隆,观察其对静息人脐动脉的张力影响;加入60 mmol·L^-1 KCl、1 μmol·L^-1苯肾上腺素（PE）使血管收缩、张力平稳后,观察不同浓度心脉隆对预收缩的人脐动脉张力的影响;同时观察细胞外Ca²⁺浓度、L-型钙通道阻滞剂维拉帕米（VEP）对心脉隆血管效应的影响。结果：心脉隆能浓度依赖性收缩静息状态下内皮完整的离体人脐动脉,对KCl、PE预收缩的离体人脐动脉有进一步增加张力的作用,在无钙灌流液中诱发的血管收缩效应明显减弱,随着细胞外Ca²⁺浓度增加其致血管收缩张力增加,维拉帕米能显著抑制心脉隆对人脐动脉的收缩反应。结论：心脉隆可促进细胞外Ca²⁺内流和细胞内Ca²⁺释放,从而具有浓度依赖性地收缩离体人脐动脉的作用。     

通关藤注射液对恶性肿瘤化疗患者血小板的临床作用

目的:探讨通关藤注射液对恶性肿瘤化疗患者血小板的临床作用和安全性。方法:回顾性选取2020年1月至2021年12月蚌埠市第三人民医院诊断为肿瘤的并有化疗史的患者,其中使用通关藤注射液(观察组)935例,未使用通关藤注射液(对照组)1433例,并对2组进行倾向性评分匹配(PSM)。比较匹配后2组治疗后血小板相关指标与不良反应情况。结果:经倾向性评分匹配后,对照组和观察组各纳入273例患者。治疗后,对照组血小板计数(PLT)为(157.06±51.33)×10⁹L^-1,观察组为(179.12±48.93)×10⁹L^-1;对照组平均血小板体积(MPV)为(8.66±1.45)×10⁹L^-1,观察组为(9.28±1.41)×10⁹L^-1,2组的PLT与MPV指标比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)。观察组患者在白细胞减少,血小板减少和恶心呕吐的不良反应发生率明显低于对照组。结论:通关藤注射液可以提高恶性肿瘤患者化疗后血小板的数量与质量,降低不良反应的发生率,临床作用值得进一步发掘。     

克班宁血液和关节微透析探针体内外回收率研究

目的：考察克班宁血液和关节微透析探针的体内外回收率及其稳定性。方法：采用正微透析法和反微透析法,分别考察克班宁灌流速率、质量浓度对血液和关节探针体外回收率的影响,探讨正、反微透析法的回收率之间的关系;将血液和关节探针分别植入大鼠颈静脉和关节腔,考察探针在大鼠体内10 h反向回收率的稳定性。结果：克班宁血液和关节探针体外正向和反向微透析的回收率随着灌流速率（1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 μL·min^-1）的增大而降低;与克班宁质量浓度（4,8,16,40 μg·mL^-1）无关,正向回收率与反向回收率基本一致,说明可以用反微透析法的回收率代替正微透析法的回收率对药物实际浓度进行校正;克班宁血液和关节探针在大鼠体内10 h反向回收率保持相对稳定,血液和关节探针体内反向回收率分别为（65.57±1.11）%和（32.7±0.94）%。结论：建立的克班宁血液和关节微透析方法可用于克班宁大鼠血液和关节药动学研究。     

余甘子软膏的制备及冰片促渗作用考察

目的:制备余甘子软膏并考察冰片对余甘子软膏经皮渗透的影响。方法:采用L₉(3⁴)正交试验,以耐寒试验、耐热试验、离心试验及感官评价为指标优选余甘子软膏的制备工艺,并进行皮肤刺激性考察;采用Franz扩散池法,以没食子酸、柯里拉京的体外透皮为指标,通过HPLC考察不同含量冰片对余甘子软膏的促渗作用;并对余甘子软膏经皮渗透及体外释放规律进行探究。结果:余甘子软膏的最佳处方为石蜡油0.5 g,凡士林1 g,羊毛脂5 g,硬脂酸3 g,纯净水1 g,丙三醇1 g,余甘子浸膏4 g;5%的冰片对余甘子软膏中没食子酸和柯里拉京的促渗效果最佳,24 h时的经皮累计渗透量分别为1.163 6,0.073 8 mg·cm^-2,经皮吸收速率为0.046 3,0.003 1 mg·cm^-2·h^-1,增渗倍数为1.738 0,1.822 5;24 h时余甘子软膏中没食子酸和柯里拉京的累计释放率分别为58.91%,45.47%;含5%冰片的余甘子软膏中没食子酸和柯里拉京的经皮渗透均符合一级方程,体外释放分别符合Higuchi方程、Hixson-Crowell方程;单次给药1,24 h后均无明显皮肤刺激性。结论:制得的余甘子软膏具有良好的性状及体外经皮渗透、体外释放性能,无明显皮肤刺激性。     

芥酸酰胺抑制甘氨酸裂解介导抗大鼠应激性肝损伤的机制研究

目的：研究芥酸酰胺（erucamide,Era）对应激所致大鼠肝损伤的作用机制。方法：将成年雌性SD大鼠分为3组：正常组（normal group）、应激性肝损伤组（stress-induced liver injury,SLI）和SLI+erucamide （95.4 μmol·L^-1·kg^-1）治疗组。使用Illumina测序平台对来自9个大鼠肝脏组织的转录组进行测序,筛选差异表达的基因和相关的细胞信号传导途径及RT-qPCR验证基因表达。HE染色法观察大鼠肝脏组织的病理变化,并通过微孔板法测定丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）的水平。将处于对数生长期的LO2细胞分为正常组,皮质酮组,芥酸酰胺和甘氨酸（glycine,Gly）干预组。皮质酮（corticosterone,Cort,300 μmol·L^-1）用于体外诱导LO2细胞损伤,并使用MTT比色法测定并计算细胞活力。结果：芥酸酰胺对大鼠应激性肝损伤具有显著影响,HE染色法和ALT/AST检测实验结果证明了这一点（P<0.05）;此外,芥酸酰胺降低了甘氨酸裂解系统中关键基因DLD和AMT的表达（P<0.05）,从而减少甘氨酸裂解,达到预防大鼠应激性肝损伤的作用。在体外实验中,芥酸酰胺和甘氨酸均可预防Cort诱导的LO2肝细胞损伤。结论：芥酸酰胺抑制了甘氨酸的裂解以抗大鼠应激性肝损伤。     

麦冬皂苷B促进细胞铁死亡抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖的机制

目的：研究麦冬皂苷B对A549细胞增殖的影响及其作用机制。方法：细胞计数试剂盒（CCK-8）检测不同浓度麦冬皂苷B处理后A549细胞的存活率;将A549细胞分为对照组和麦冬皂苷B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组干预24 h,分析细胞克隆形成情况;DCFH-DA、C11-BODIPY、FeRhonox-1荧光探针分别检测细胞内活性氧、脂质过氧化水平、Fe²⁺浓度的荧光强度变化;GSH和MDA试剂盒分别检测细胞内GSH和MDA水平;Real-time PCR法和Western blot法分别检测SLC7A11、GPX4、SLC40A1、Transferrin、Nrf2、HO-1的mRNA水平和蛋白表达情况。结果：与对照组比较,A549细胞存活率随麦冬皂苷B药物浓度增大逐渐降低,其IC₅₀为 23.7 μmol·L^-1。麦冬皂苷B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著细胞克隆形成（P<0.05）。与对照组比较,OP B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著增强细胞内脂质过氧化水平的荧光强度和脂质过氧化产物MDA 积累（P<0.05）,且呈剂量依赖性,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著增强细胞内ROS和亚铁离子的荧光强度（P<0.05）,明显降低细胞内GSH含量（P<0.05）。RT-PCR结果显示,与对照组比较,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低GPX4、SLC7A11 mRNA 水平（P<0.05）,只有OP B高（48 μmol·L^-1）剂量组显著降低SLC40A1 的mRNA水平;Western blot结果显示,与对照组比较,OP B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低SLC7A11的蛋白水平（P<0.05）,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低GPX4、SLC7A11的蛋白水平（P<0.05）。与对照组比较,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低Nrf2的mRNA水平和Nrf2和HO-1的蛋白水平（P<0.05）,而OP B高（48 μmol·L^-1）剂量组显著降低HO-1的mRNA水平（P<0.05）。结论：麦冬皂苷B能够抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖,其机制可能与抑制Nrf2/HO-1抗氧化通路促进细胞铁死亡有关。