呋塞米对脑出血模型大鼠PERK/eIF2α/CHOP通路及继发性脑损伤的影响

目的探讨呋塞米(FUR)对脑出血(ICH)大鼠RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)/真核起始因子2α(eIF2α)/转录因子CCAAT增强子结合蛋白的同源蛋白(CHOP)通路及继发性脑损伤的影响。方法将大鼠分为假手术组、模型组(脑定位注射Ⅳ型胶原酶,建立ICH模型)、FUR低剂量组(FUR-L)、FUR中剂量组(FUR-M)、FUR高剂量组(FUR-H)、神经节苷脂组,每组18只。药物处理后,检测神经功能,对其进行Longa评分;测量大脑含水量;用Evans蓝外渗实验检测血脑屏障损伤;用HE染色检测海马神经元损伤;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)水平;用免疫印迹法检测大鼠脑组织PERK/eIF2α/CHOP通路相关蛋白p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、CHOP表达。结果相比假手术组,模型组大鼠海马神经元变性坏死,皱缩变小,数目明显减少,呈现严重病理损伤,Longa评分、Evans蓝渗出量、大脑含水量、血清IFN-γ及IL-6水平、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、CHOP表达水平明显升高...     

内质网应激在吸烟COPD模型小鼠膈肌细胞凋亡中的作用及机制研究北大核心CSCD

目的:研究内质网应激(ERS)在吸烟慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠膈肌细胞凋亡中的作用及机制。方法:野生型雄性C57BL/6小鼠分为对照组、COPD模型组、激动剂组、拮抗剂组,Perk基因敲除小鼠分为PERK-KO组、PERKKO+模型组,采用被动吸烟法复制COPD模型,给予ERS激动剂毒胡萝卜素或拮抗剂4-苯基丁酸干预,检测0.3 s用力呼气容积与用力肺活量比(FEV_(0.3)/FVC)、最高峰值流速(PEF)、血清及支气管肺泡灌流液(BALF)中IL-1β及IL-6含量、肺组织病理改变、膈肌中细胞凋亡率及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、肌醇酶1α(IRE1α)、活化转录因子6(ATF6)、p-eIF2α、ATF4、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Caspase-12表达水平。结果:与对照组相比,模型组FEV_(0.3)/FVC、PEF降低,肺组织出现病理改变,膈肌中细胞凋亡率及PERK、p-eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平提高(P<0.05);与模型组相比,激动剂组膈肌中细胞凋亡率及PERK、peIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平提高(P<0.05),拮抗剂组膈肌中细胞凋亡率及PERK、p-eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平降低(P<0.05);敲除PERK后,与模型组相比,PERK-KO+模型组膈肌中细胞凋亡率及eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平降低。结论:吸烟COPD模型小鼠膈肌细胞凋亡过度激活,ERS的PERK通路激活与膈肌细胞凋亡有关。     

青蒿琥酯调节PERK/ATF4/CHOP信号通路对OGD/R诱导的心肌细胞铁死亡的影响

目的:探讨青蒿琥酯调节蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/激活转录因子-4(ATF4)/C/EBP同源蛋白(CHOP)信号通路对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的心肌细胞铁死亡的影响。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2构建OGD/R模型,通过CCK-8法检测0、1.0、2.5、5、10、20μmol/L青蒿琥酯处理24h后各组细胞活力,筛选合适的青蒿琥酯作用浓度。将体外培养H9c2细胞随机分为对照组、模型组、青蒿琥酯低剂量组、青蒿琥酯高剂量组、MK-28(PERK激活剂)组、青蒿琥酯高剂量+MK-28组,除对照组外的其余各组细胞构建OGD/R模型,然后马上使用青蒿琥酯和MK-28分组处理,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测各组H9c2细胞活力和凋亡率;ELISA检测各组H9c2细胞培养基上清中心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(MB)、炎性因子[前列腺素E2(PGE2)、环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素(IL)-1β]水平;化学荧光法检测活性氧(ROS)水平,微量法检测铁含量、丙二醛(MDA)水平,微板法检测谷胱甘肽(GSH)水平;免疫印迹实验检测各组H9c2细胞PERK/ATF4/CHOP通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组细胞活力、GSH水平降低(P<0.05),凋亡率、细胞培养基上清中cTnI、CK-MB、MB、PGE2、COX-2及IL-1β水平、细胞ROS相对水平、铁含量、MDA水平、p-PERK/PERK及ATF4、CHOP蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,青蒿琥酯低剂量组、青蒿琥酯高剂量组细胞活力、GSH水平均升高(P<0.05),凋亡率、细胞培养基上清中cTnI、CK-MB、MB、PGE2、COX-2及IL-1β水平、细胞ROS相对水平、铁含量、MDA水平、p-PERK/PERK及ATF4、CHOP蛋白表达均降低(P<0.05);青蒿琥酯高剂量组细胞活力、GSH水平相较青蒿琥酯低剂量组进一步升高(P<0.05),凋亡率、细胞培养基上清中cTnI、CK-MB、MB、PGE2、COX-2及IL-1β水平、细胞ROS相对水平、铁含量、MDA水平、p-PERK/PERK及ATF4、CHOP蛋白表达较青蒿琥酯低剂量组进一步降低(P<0.05);MK-28组细胞活力、GSH水平降低(P<0.05),凋亡率、细胞培养基上清中cTnI、CK-MB、MB、PGE2、COX-2及IL-1β水平、细胞ROS相对水平、铁含量、MDA水平、p-PERK/PERK及ATF4、CHOP蛋白表达升高(P<0.05)。与青蒿琥酯高剂量组比较,青蒿琥酯高剂量+MK-28组细胞活力、GSH水平降低(P<0.05),凋亡率、细胞培养基上清中cTnI、CK-MB、MB、PGE2、COX-2及IL-1β水平、细胞ROS相对水平、铁含量、MDA水平、p-PERK/PERK及ATF4、CHOP蛋白表达升高(P<0.05)。结论:青蒿琥酯可通过抑制PERK/ATF4/CHOP信号激活而抑制OGD/R诱导的心肌细胞炎症、铁蓄积和脂质过氧化,减轻铁死亡,增强其细胞活力,缓解细胞损伤。     

FABP4沉默通过调节PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路对妊娠糖尿病大鼠内质网应激和胰岛素抵抗的影响

目的：探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)沉默通过调节蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）/真核细胞启动因子2α(eIF2α)/转录因子4(ATF4)/C/EBP同源蛋白（CHOP）信号通路对妊娠糖尿病（GDM）大鼠内质网应激（ERS）和胰岛素抵抗（IR）的影响。方法：腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立GDM大鼠模型。通过尾静脉注射FABP4 siRNA质粒（si-FABP4）、阴性对照质粒（NC）和PERK激活剂（CCT020312）,将大鼠随机分为Normal组、GDM组、GDM+NC组、GDM+si-FABP4组、GDM+si-FABP4+CCT020312组。检测胰腺组织中FABP4含量、血脂水平、炎症标志物水平和氧化应激标志物水平,检测胰腺组织中PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路相关蛋白表达。HTR-8/SVneo细胞分为5组：对照（Control）组、高糖（HG）组、HG+NC组、HG+siFABP4组、HG+si-FABP4+CCT020312组,24 h后检测细胞中FABP4及PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路相关蛋白表达。结果：与Normal组相...     

探讨绞股蓝总皂苷对骨关节炎大鼠的影响

目的 探讨绞股蓝总皂苷 ( gypenosides, GP) 对骨关节炎大鼠的影响。 方法 将大鼠随机分为 假手术组、 模型组、 GP 低、 中、 高剂量组和双氯芬酸钠组。 HE 染色和阿利新蓝染色检测大鼠软骨病理损 伤; CT 检测大鼠 BV/ TV、 Tb. N、 Tb. Sp 和 Tb. Th; WB 检测软骨基质相关蛋白和软骨组织 SIRT1 / AMPK 相 关蛋白表达; ELISA 检测大鼠软骨组织和血清炎性因子和氧化应激。 结果 随着 GP 剂量增加, 大鼠骨组 织炎性浸润和纤维化明显改善; BV/ TV、 Tb. Th 和 Tb. N 明显上升, Tb. Sp 明显下降 (P< 0. 05); 软骨基质 SOX-9、 Aggrecan 和 Collagen Ⅱ水平明显上升 (P< 0. 05); 血清和软骨组织 TNF-α、 IL-6 和 IL-1β 水平明显 下降 (P< 0. 05); 软骨组织 SOD 和 GSH-Px 水平明显上升, MDA 水平明显下降 (P< 0. 05); 软骨细胞 pAMPK、 SITR1 和 PGC1α 蛋白表达明显增加 (P< 0. 05)。 结论 GP 激活 AMPK/ SITR1 表达, 减轻氧化应 激, 修复软骨损伤。     

PERK介导的内质网应激参与血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的机制

目的: 研究蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)介导的内质网应激(ERS)反应在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大中的作用。方法: 在AngⅡ诱导原代培养的乳大鼠心肌细胞肥大模型上,采用[³H]-亮氨酸掺入、心肌细胞表面积测定等评估心肌细胞肥大程度;以实时定量PCR、RT-PCR和Western blotting检测ERS标志性分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、钙网蛋白(CRT)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)和C/EBP同源蛋白(CHOP)mRNA和蛋白表达变化。结果: 与正常对照组比较,AngⅡ组CRT mRNA和蛋白表达分别高146.4%和125.3%(P<0.05),GRP78 mRNA和蛋白的表达分别高84.0%和77.6% (P<0.05),PERK mRNA和蛋白表达分别高165.4%和132.1%(P<0.05),eIF2α mRNA和蛋白表达分别高110.9%和46.5%(P<0.05),CHOP mRNA和蛋白表达分别高117.7%和63.3%(P<0.05)。结论: PERK介导的内质网应激反应参与了AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。     

右归丸对膝骨关节炎模型鼠软骨组织显微结构及热休克蛋白90α蛋白表达的影响

目的:观察右归丸对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型大鼠软骨组织显微结构和热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,Hsp90α)蛋白表达的影响,进一步揭示右归丸防治KOA的机制。方法:将大鼠随机分为假手术对照组、KOA模型组、硫酸氨基葡萄糖组和右归丸(高、中、低剂量)组,每组10只。采用改良Hulth法制备大鼠KOA模型,分别予相应药物灌胃8周。HE染色法观察软骨组织的形态学变化,并进行Makin评分;应用免疫组化法检测各组大鼠软骨组织Hsp90α、纤连蛋白(fibronectin,Fn)和Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,COL-Ⅱ)的表达;RT-qPCR法检测各组大鼠软骨组织Hsp90α、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)和MMP-13的mRNA表达水平,应用Western blot法检测各组大鼠软骨组织Hsp90α和COL-Ⅱ的表达。结果:与假手术组比较,KOA模型组大鼠软骨组织Makin评分明显升高,软骨组织Hsp90α的蛋白表达显著升高,IL-1β、MMP-3和MMP-13的mRNA表达明显升高,COL-Ⅱ和Fn的蛋白表达明显降低(P<0.01),关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与KOA模型组相比,右归丸高剂量干预组大鼠软骨组织Makin评分和Hsp90α的蛋白表达均明显降低,Fn的蛋白表达明显升高,右归丸中、高剂量组COL-Ⅱ的蛋白表达明显升高,右归丸各干预组IL-1β、MMP-3和MMP-13的mRNA表达均明显降低(P<0.05或P<0.01),软骨结构趋于正常,软骨细胞分布仅偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论:右归丸通过下调Hsp90α的蛋白表达并上调Fn的蛋白表达来减缓炎症因子的分泌和细胞外基质的降解,从而有效保护KOA模型大鼠关节软骨,延缓关节软骨退变。     

MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡

 目的:研究肌原纤维形成调节因子1 (MR-1)是否通过抑制蛋白激酶R样内质网激酶 (PERK)/核因子E2相关因子2（Nrf2）途径减轻缺氧/复氧 (H/R)诱导的心肌细胞凋亡。方法:在原代培养的乳大鼠心肌细胞H/R模型上,采用Annexin V/PI双标法检测心肌细胞的凋亡率;以Western blotting检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、磷酸化PERK、Nrf2、活化转录因子4 (ATF4)、C/EBP同源蛋白 (CHOP)、Bcl-2和Bax的蛋白水平,研究过表达或敲低对于H/R致心肌细胞凋亡的影响及其与PERK/Nrf2途径活化的关系。结果:H/R引起心肌细胞凋亡;过表达MR-1减轻H/R引起的细胞凋亡 (P<0.01),下调CHOP表达 (P<0.05),引起Bcl-2/Bax值升高 (P<0.01),并抑制H/R诱导的PERK磷酸化、Nrf2核转位和ATF4表达 (P<0.01)。敲低MR-1加重H/R引起的细胞凋亡 (P<0.01)、CHOP表达上调 (P<0.05)和Bcl-2/Bax值下降 (P<0.01),并加重H/R诱导的PERK磷酸化 (P<0.05)、Nrf2核转位和ATF4表达 (P<0.01)。结论:MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径而减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡。     

红姜提取物保护早期膝骨关节炎模型大鼠的关节软骨

背景:研究报道,联合使用姜提取物降低血清促炎细胞因子白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α等水平与膝骨关节炎中软骨损伤的减轻有关。目的:观察红姜提取物灌胃对早期膝骨关节炎大鼠关节软骨保护情况及血清白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α和软骨Col2α1 mRNA水平表达的影响,探讨红姜提取物对早期膝骨关节炎大鼠关节软骨保护作用及可能机制。方法:将50只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、红姜低剂量组、红姜高剂量组、阳性对照组,每组各10只。除空白组外,其余40只大鼠膝关节腔注射4%木瓜蛋白酶0.2 mL+0.03 mol/L的L-半胱氨酸混合溶液,建造膝骨关节炎模型。空白组与模型组常规饲养;红姜低剂量组、红姜高剂量组、阳性对照组分别予50 mg/kg的红姜提取物水溶液、100 mg/kg红姜提取物水溶液、18 mg/kg的塞来昔布胶囊水溶液灌胃,所有干预每日1次,共持续4周。治疗4周后取大鼠膝关节软骨进行番红O-固绿染色,并对关节软骨行Mankin评分,检测血清中白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α及软骨中Col2α1 mRNA表达水平。实验方案经广州中医药大学动物实验伦理委员会批准,批准号:20190917002。结果与结论:①膝关节软骨的病理切片显示,模型组及各治疗组均有软骨基质流失,各治疗组Mankin评分均比空白组评分高(P<0.05),比模型组评分低(P<0.05),其中红姜高剂量组与阳性对照组评分差异无显著性意义(P>0.05),均显著低于红姜低剂量组(P<0.05);②血清白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α结果显示,阳性对照组、红姜高剂量组、红姜低剂量组均比空白组表达上调(P<0.05),均比模型组表达下调(P<0.05),且各治疗组间水平阳性对照组<红姜高剂量组<红姜低剂量组(P<0.05);③软骨中Col2α1 mRNA结果显示,空白组与红姜高剂量组、阳性对照组的Col2α1 mRNA表达差异无显著性意义(P>0.05),模型组和红姜低剂量组Col2α1 mRNA表达相较其他3组均显著上调(P<0.05);④结果说明,红姜提取物可能主要通过抑制白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α等炎症因子的表达,达到了保护膝骨关节炎关节软骨作用,从而延缓膝骨关节炎的发展进程;且相对于低剂量组,红姜提取物高剂量组的抗炎效果更好。     

HSYA对骨关节炎大鼠膝关节软骨损伤的修复作用研究

目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对骨关节炎(OA)大鼠膝关节及MMP-3、TGF-β1、Notch1的影响。方法将25只大鼠随机分为正常组(假手术)、OA组(模型大鼠)、低HSYA组(模型大鼠尾部注射2.5 mg/kg HSYA)、中HSYA组(模型大鼠尾部注射5.0 mg/kg HSYA)、高HSYA组(模型大鼠尾部注射10.0 mg/kg HSYA)。采用ELISA检测血清指标IL-1β、TNF-α,Pelletier评分评估膝关节软骨损伤情况,HE染色观察组织病理形态并以Mankin评分进行评估,免疫组化检测MMP-3阳性表达,Western blot检测TGF-β1、Notch1蛋白水平。结果OA组血清中IL-1β、TNF-α水平高于其余各组(P<0.05),高HSYA组IL-1β、TNF-α水平低于低HSYA组和中HSYA组(P<0.05)。各组大鼠Pelletier评分组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。OA组软骨和滑膜组织Mankin评分高于其余各组(P<0.05),高HSYA组Mankin评分低于低HSYA组、中HSYA组(P<0.05)。各组大鼠关节组织MMP-3阳性细胞率组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。各组大鼠关节组织TGF-β1、Notch1蛋白水平组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论HSYA能够降低OA大鼠血清炎性因子IL-1β、TNF-α水平,缓解滑膜组织损伤,且存在浓度依赖性,其机制与抑制MMP-3和Notch1表达、提高TGF-β1水平相关。     

大豆皂苷缓解骨关节炎模型大鼠软骨损伤和关节炎症的机制北大核心CSCD

目的探究大豆皂苷缓解骨关节炎模型大鼠软骨损伤和关节炎症的可能机制。方法SD大鼠随机分为假手术组、模型组、大豆皂苷低剂量组(20 mg·kg^(-1))、大豆皂苷中剂量组(40 mg·kg^(-1))、大豆皂苷高剂量组(80 mg·kg^(-1))和双醋瑞因组(54 mg·kg^(-1)),每组15只;切断前交叉韧带的方式构建骨性关节炎模型。HE和番红氧固绿染色观察关节滑膜组织病理损伤并进行Mankin's评分和OARSI评分,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6水平,Western blot检测丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)、转录因子核因子κB(NF-κB)、NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)蛋白表达。结果与模型组比较,大豆皂苷(中、高)剂量组和双醋瑞因组大鼠软骨组织表面较光滑,Mankin's、OARSI评分降低,血清及关节液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、ASC、Caspase-1表达降低(P<0.05),且具有剂量效应(P<0.05)。结论大豆皂苷可缓解骨关节炎大鼠软骨组织损伤及关节炎症损伤,其机制可能与抑制MAPK/NF-κB信号通路和NLRP3炎症小体活化有关。     

西洋参茎叶总皂苷通过抑制内质网应激减轻毒胡萝卜素诱导的心肌细胞凋亡

 目的:研究西洋参茎叶总皂苷 (PQS) 减轻毒胡萝卜素(TG) 诱导的心肌细胞凋亡的分子机制。方法:原代培养的心肌细胞分为：control组、TG组、PQS (40 mg/L、80 mg/L及160 mg/L)+TG组、牛磺酸 (40 mmol/L)+TG组、蛋白激酶R样内质网激酶 (PERK)敲低+TG组及随机双链RNA转染对照 (mock)+TG组。通过向培养液中加入1 μmol/L TG作用24 h诱导离体培养的乳大鼠心肌细胞凋亡。以RNAi方法敲低心肌细胞PERK基因。CCK-8法和流式细胞术检测细胞活性及凋亡率,Western blotting方法检测内质网应激(ERS)标志分子葡萄糖调节蛋白78 (GRP 78)、钙网蛋白 (CRT)、PERK、p-PERK、真核起始因子2α (eIF2α)、p- eIF2α、活化转录因子4 (ATF4)、C/EBP同源蛋白 (CHOP) 及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:与对照组比较,TG孵育明显诱导细胞凋亡,降低细胞活力,上调PERK和eIF2α磷酸化以及GRP78、CRT、ATF4、CHOP及促凋亡蛋白Bax表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达 (P<0.05);与TG组比较,PQS 160 mg/L及敲低PERK均可显著降低细胞凋亡率,升高细胞活力 (P<0.05);3种不同浓度的PQS可呈剂量依赖性降低Bax蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达 (P<0.05),敲低PERK基因及PQS (160 mg/L) 预处理均可降低ERS分子GRP78、CRT、ATF4及CHOP表达,降低PERK及eIF2α的磷酸化水平 (P<0.05)。结论: PQS 160 mg/L 减轻ERS诱导剂TG诱导的心肌细胞凋亡,PQS预处理可以模拟PERK敲低减轻TG致心肌细胞凋亡的效应,提示PERK-eIF2α-ATF4-CHOP途径参与PQS减轻ERS相关凋亡的作用。     

环氧合酶-2抑制剂对大鼠骨关节炎模型软骨中血管内皮生长因子表达的影响

目的研究环氧合酶-2抑制剂(吲哚美辛)对大鼠骨关节炎模型关节软骨中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法健康雄性wistar大鼠30只,随机均分为对照组、骨性关节炎组(OA组)和吲哚美辛处理组。利用膝关节注射4%的木瓜蛋白酶溶液的方法制作骨关节炎模型。采用关节炎评分法评定各组大鼠平均关节炎指数(MAI),免疫组化方法与Western blot方法检测关节软骨中VEGF蛋白的表达变化。结果 OA模型组随着造模的时间延长,关节出现了重度红肿现象,对照组关节无任何异常变化;与OA模型组比较,吲哚美辛组的关节炎症反应呈现消退现象。VEGF蛋白在对照组大鼠关节软骨仅有微量表达,而在术后8周OA组大鼠关节软骨表达则显著升高(P0.01);与OA组相比,吲哚美辛组大鼠关节软骨中VEGF蛋白表达显著降低(P0.01)。结论吲哚美辛对骨关节炎的抑制作用可能与下调VEGF蛋白的表达相关。     

尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I通过PERK/eIF2α通路诱导Tca8113细胞凋亡的机制研究

目的:探讨内质网应激(ERS)相关的蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/真核翻译起始因子2α(eIF2α)通路在尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I(AAVC-I)诱导人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡中的作用及机制。方法:不同实验浓度(4. 0、8. 0和16. 0 mg/L)的AAVC-I处理Tca8113细胞24 h后采用苏木素-伊红(HE)染色观察细胞形态;流式细胞术(annexin V-FITC/PI双荧光染色法)检测细胞凋亡;Western blot检测ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78),PERK/eIF2α通路中的磷酸化PERK(p-PERK)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)及下游的活化转录因子4(ATF4)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP),以及细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。结果:AAVCI各浓度组分别与正常对照组相比以及各浓度组之间相互比较的结果显示,随着AAVC-I浓度的增加,Tca8113细胞活力逐渐降低,细胞逐渐皱缩变小,间隙增大,胞核浓缩、碎裂,出现凋亡小体,细胞凋亡率增高(P0. 05);GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP及Bax蛋白水平上调,Bcl-2表达下调(P0. 05)。结论:AAVC-I抑制Tca8113细胞活力的同时引发细胞发生ERS并诱导细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的机制与PERK/eIF2α通路密切相关。     

紫草素调节NF-κB/ERK信号通路对膝关节骨性关节炎大鼠炎症反应的影响

目的：通过构建膝关节骨性关节炎大鼠模型，探究紫草素对膝关节骨性关节炎大鼠炎症反应、NF-κB/细胞外调节蛋白激酶（ERK）通路的影响，以及NF-κB/ERK信号通路作为紫草素作用新靶点的可能性。方法：选取72只SD雄性大鼠，随机分为假手术组、关节炎组、尼美舒利组、紫草素组、紫草素+ERK激活组、紫草素+NF-κB激活组，每组12只。构建膝关节骨性关节炎大鼠模型，评估各组大鼠关节炎指数，判断模型构建情况；番红固绿、HE染色观察各组大鼠膝关节软骨病理学情况；ELISA检测各组大鼠血清和软骨组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平；Western blot检测软骨组织中NF-κB p65、ERK、p-NF-κB p65、p-ERK蛋白表达量。结果：假手术组大鼠软骨组织无明显突起，番红染色全染；与假手术组相比，关节炎组大鼠软骨出现突起，染色完全失染，关节炎指数、血清和软骨组织中TNF-α、IL-6、IL-1β含量、软骨组织NF-κB p65、ERK蛋白磷酸化程度显著升高（P<0.05）；与关节炎组相比，尼美舒利组、紫草素组大鼠软骨组织逐渐恢复，番红染色增多，关节炎指数、血清和软骨组织中...     

荭草苷抑制PERK/ATF4/CHOP通路改善癫痫小鼠认知功能障碍机制

目的 探索荭草苷抑制PERK/ATF4/CHOP通路改善癫痫小鼠认知功能障碍的机制。方法腹腔注射东莨菪碱与盐酸匹鲁卡品,建立癫痫小鼠模型。小鼠随机分为5组：对照组、模型组、荭草苷（50 mg/kg）组、MK-28(PERK激活剂,1 mg/kg)组、荭草苷（50 mg/kg）+MK-28(1 mg/kg)组,分组给药后,观察小鼠癫痫发作情况;Morris水迷宫检测认知功能;TUNEL染色检测海马神经元凋亡率;ELISA测量血清COX-2、IL-18及IL-6水平;免疫印迹法检测海马组织凋亡及PERK/ATF4/CHOP通路蛋白表达。结果 荭草苷组小鼠发作次数及持续时间、逃避潜伏期、海马神经元凋亡率、血清COX-2、IL-18及IL-6水平、海马组织Caspase-3、Bax、ATF4、CHOP蛋白表达及p-PERK/PERK相比模型组和荭草苷+MK-28组均降低（P<0.05）,MK-28组小鼠各指标变化趋势与荭草苷组相反。结论 荭草苷可通过抑制PERK/ATF4/CHOP通路激活阻止炎症,减轻癫痫小鼠海马神经元凋亡,改善其认知功能。     

豨莶草调控sirt1 / FOXO1 通路对膝骨关节炎大鼠软骨损伤的影响

目的:探讨豨莶草调控sirt1/FOXO1通路对膝骨关节炎大鼠软骨损伤的影响。方法:SD大鼠随机分组为对照组、模型组、豨莶草(2 g/kg)组、尼克酰胺(NA,sirt1抑制剂,剂量:100 mg/kg)组、豨莶草+尼克酰胺组(豨莶草为2 g/kg,NA为100 mg/kg)。除对照组外,其余各组以改良伸直位固定法建立膝骨关节炎大鼠模型,按组别分别以药物处理后,测量各组大鼠膝关节宽度、被动活动度;检测各组大鼠压痛阈值、热痛阈值;以苏木精-伊红染色(HE)观察各组大鼠膝关节软骨病理损伤情况,进行Mankin′s评分;以酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测各组大鼠血清中IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)水平;以蛋白免疫印迹法检测各组大鼠膝关节软骨组织sirt1、FOXO1、acely-FOXO1蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠膝关节宽度、Mankin′s评分、血清中IL-1β、TNF-α及COMP水平、膝关节软骨组织中acely-FOXO1升高(P0.05),膝关节被动活动度、压痛阈值、热痛阈值、膝关节软骨组织中sirt1蛋白表达降低(P0.05)。与模型组相比,豨莶草组大鼠膝关节宽度、Mankin′s评分、血清中IL-1β、TNF-α及COMP水平、膝关节软骨组织中acely-FOXO1降低(P0.05),膝关节被动活动度、压痛阈值、热痛阈值、膝关节软骨组织中sirt1蛋白表达升高(P0.05);NA组大鼠膝关节宽度、Mankin′s评分、血清中IL-1β、TNF-α及COMP水平、膝关节软骨组织中acely-FOXO1升高(P0.05),膝关节被动活动度、压痛阈值、热痛阈值、膝关节软骨组织中sirt1蛋白表达降低(P0.05)。与豨莶草组相比,豨莶草+NA组大鼠膝关节宽度、Mankin′s评分、血清中IL-1β、TNF-α及COMP水平、膝关节软骨组织中acely-FOXO1升高(P0.05),膝关节被动活动度、压痛阈值、热痛阈值、膝关节软骨组织中sirt1蛋白表达降低(P0.05)。与NA组相比,豨莶草+NA组大鼠膝关节宽度、Mankin′s评分、血清中IL-1β、TNF-α及COMP水平、膝关节软骨组织中acely-FOXO1降低(P0.05),膝关节被动活动度、压痛阈值、热痛阈值、膝关节软骨组织中sirt1蛋白表达升高(P0.05)。结论:豨莶草可通过上调sirt1表达,下调FOXO1乙酰化水平,减轻膝骨关节炎大鼠软骨损伤。     

蛇床子素对膝骨关节炎大鼠的作用及对PI3K/Akt/NF-κB信号通路的影响

目的 观察蛇床子素对膝骨关节炎大鼠的治疗作用,探讨其对PI3K/Akt/NF-κB信号通路的影响.方法 SD大鼠(n=50),利用改良Hulth法建立膝骨关节炎大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、蛇床子素低剂量组(25 mg/kg)、蛇床子素高剂量组(50 mg/kg)及美洛昔康组(0.78 mg/kg),每组10只.模型制备成功6周后给予相应药物连续灌胃8周,假手术组及模型组给予等体积蒸馏水.HE观察大鼠膝关节软骨组织病理改变及Mankin评分;ELISA检测大鼠血清中IL-1β、TNF-a、IL-6、MMP-3、MMP-9及MMP-13水平;Western blot检测鼠软骨组织中MMP-3、MMP-9、MMP-13、PI3K、Akt、p-Akt、NF-κB及p-NF-K B蛋白的表达.结果 蛇床子素低、高剂量组及美洛昔康组大鼠Mankin评分显著降低,IL-1β、TNF-o、IL-6、MMP-3、MMP-9及MMP-13水平显著降低,且MMP-3、MMP-9、MMP-13、PI3K、p-Akt及p-NF-κB蛋白表达显著降低,与模型组相比,差异显著(P＜0.05).结论 蛇床子素改善膝骨关节炎模型大鼠的症状,与抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关.     

红景天苷对重症肺炎大鼠肺组织损伤的作用及可能机制

目的探讨红景天苷(salidroside, SAL)是否通过介导Toll样受体4/核转录因子-κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路改善重症肺炎(severe pneumonia, SP)大鼠肺组织损伤。方法 Wistar大鼠75只, 随机选择15只作为假手术组, 其余60只通过气管内滴注肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae, Kp)悬液诱导构建SP大鼠模型。建模成功大鼠随机分为模型组、SAL低剂量组(30 mg/kg)、SAL高剂量组(60 mg/kg)和地塞米松(dexamethasone, DXMS)组(15 mg/kg), 每组15只, 假手术组和模型组均灌服等量生理盐水, 连续7 d。检测肺组织湿干重比(Wet/Dry, W/D);HE和TUNEL染色观察各组大鼠肺脏组织形态及细胞凋亡情况;ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18及IL-10水平;Western blot检测肺组织中TLR4、髓样分化因子(myeloi...     

探讨醒脑灌肠液对心肺复苏后大鼠脑损伤及IL-33/ST2信号通路的影响

目的:研究醒脑灌肠液对心肺复苏后大鼠脑损伤及IL-33/ST2信号通路的影响,以探讨醒脑灌肠液对心肺复苏后大鼠的脑保护作用及机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、醒脑灌肠液低剂量(5 mL/kg)组、醒脑灌肠液中剂量(10 mL/kg)组、醒脑灌肠液高剂量(20 mL/kg)组和乌司他丁组,每组12只,除假手术组,其它各组建立大鼠心肺复苏模型,并相应给予醒脑灌肠液和乌司他丁治疗。7 d后所有大鼠进行神经功能缺损评分;处死大鼠检测脑组织含水量;以苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠脑组织病理性变化;以超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)检测试剂盒分别检测脑组织中SOD和MDA水平;以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中S100钙结合蛋白β亚基(S100β)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量及脑组织中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;以Western blot法检测脑组织白细胞介素33(IL-33)和生长刺激表达基因2蛋白(ST2)表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠脑组织出现组织结构紊乱,局灶出血,神经元核收缩、凋亡等病理改变;神经功能缺损评分升高,脑组织含水量,血清S100β、NSE、IL-1β和TNF-α水平,以及脑组织MDA、IL-33和ST2水平均显著升高,SOD水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,醒脑灌肠液低、中、高剂量组和乌司他丁组大鼠脑组织病理损伤减轻,神经功能缺损评分减少,脑组织含水量,血清S100β、NSE、IL-1β和TNF-α水平,以及脑组织MDA、IL-33和ST2水平均降低,SOD水平升高(P<0.05)。醒脑灌肠液各剂量之间有剂量依赖性,醒脑灌肠液高剂量组与乌司他丁组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:醒脑灌肠液可修复心肺复苏后大鼠脑损伤,下调IL-33/ST2信号通路可能是其作用机制。