肺炎克雷伯菌外排泵基因研究与耐药性的关系

目的分析肺炎克雷伯菌外排泵基因研究与耐药性的关系,为细菌耐药管理提供依据。方法选取2016年1月至2018月12月在该院住院的儿科患儿,从粪便、痰液、血液、组织液等标本中分离获得鉴定肺炎克雷伯菌144株,对其进行耐药性分析、基因分析及相关性分析。结果耐药性分析结果显示,肺炎克雷伯菌对氨苄青霉素耐药率最高,对亚胺培南、美罗培南的敏感性较高。肺炎克雷伯菌的外排泵基因检出率为0.0%～86.8%,阳性率最高为AcrAB-TolC,最低为qepA。检出外排泵基因3～6个,检出耐药药物品种1～10个,耐药药物品种数与外排泵基因存在正相关性(r=0.412,P0.05),qacE△1-sull的耐药药物品种数高于其他类型的基因,差异有统计学意义(P0.05)。结论肺炎克雷伯菌外排泵基因与耐药性存在相关性,外排泵类型、数量都会增加耐药风险。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌外排泵转录水平与耐药的关系

目的调查细菌耐药性与其主动外排泵系统的作用关系,并探讨大肠埃希菌外排泵调控基因对其外排泵结构基因表达水平的影响,分析其耐药机制。方法收集大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共59株,根据头孢他啶耐药情况分为实验组（耐药）与对照组（敏感）,多重聚合酶链反应（PCR）扩增外排泵调控基因acrR并测序,实时定量逆转录（RT）-PCR检测外排泵及调控基因marA的相对转表达水平,三维试验检测AmpC酶。结果实验组大肠埃希菌46.7%（7株）acrAB基因转录水平增高,肺炎克雷伯菌中51.9%（14株）acrAkp基因转录水平增高,敏感组外排泵基因均未见增高。实验组大肠埃希菌中,3株acrR发现突变,9株marA基因转录水平增高。59株菌株中39株（66.1%）AmpC阳性。结论主动外排泵系统是细菌耐药机制之一,常与其他耐药机制共同存在。acrR突变与marA表达增高均可引起大肠埃希菌acrAB表达增加。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌外排泵转录水平与耐药的关系

目的调查细菌耐药性与其主动外排泵系统的作用关系,并探讨大肠埃希菌外排泵调控基因对其外排泵结构基因表达水平的影响,分析其耐药机制。方法收集大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共59株,根据头孢他啶耐药情况分为实验组(耐药)与对照组(敏感),多重聚合酶链反应(PCR)扩增外排泵调控基因acrR并测序,实时定量逆转录(RT)-PCR检测外排泵及调控基因marA的相对转表达水平,三维试验检测AmpC酶。结果实验组大肠埃希菌46.7%(7株)acrAB基因转录水平增高,肺炎克雷伯菌中51.9%(14株)acrAkp基因转录水平增高,敏感组外排泵基因均未见增高。实验组大肠埃希菌中,3株acrR发现突变,9株marA基因转录水平增高。59株菌株中39株(66.1%)AmpC阳性。结论主动外排泵系统是细菌耐药机制之一,常与其他耐药机制共同存在。acrR突变与marA表达增高均可引起大肠埃希菌acrAB表达增加。     

外排泵在肺炎克雷伯菌对左氧氟沙星耐药中的作用

目的 探讨肺炎克雷伯菌(KP)中外排泵OqxAB、AcrAB和QepA介导的左氧氟沙星(LVX)耐药机制。方法 选择分离自南京鼓楼医院集团仪征医院2018年7月至2020年12月的门诊和住院患者的106株KP(剔除同一患者相同部位的重复分离株),采用微量肉汤稀释法检测KP对常用抗菌药物的敏感性,根据药物敏感试验结果随机选择24株对LVX耐药的KP作为试验组,27株LVX非耐药的KP作为对照组。采用羰基氰氯苯腙泵抑制法检测KP的外排泵表型,采用实时定量反转录PCR检测外排泵OqxAB、AcrAB和QepA相应表达基因OqxA、acrB和QepA的表达水平,采用常规PCR及测序检测acrR基因突变。分析两组KP外排泵基因表达水平的差异,LVX最低抑菌浓度(MIC)与外排泵基因表达水平间的关联性,以及两组KP外排泵表型的差异。结果 试验组与对照组KP外排泵表型试验结果差异无统计学意义(P>0.05)。两组KP外排泵基因OqxA、QepA表达水平差异无统计学意义(P>0.05),而acrB表达水平差异有统计学意义(P<0.05),且试验组acrB表达水平与LVX的log     

肺炎克雷伯菌对消毒剂抗性的研究

当前,细菌对消毒剂的抗性问题越来越受到关注,国内外对消毒剂抗性也作了大量的研究。该文介绍消毒剂抗性的概念以及消毒剂抗性的产生机制,探讨消毒剂抗性的研究方法,重点回顾对肺炎克雷伯菌的消毒剂抗性方面的研究成果,并进行简要分析,指出目前消毒剂研究领域存在的问题,对今后该领域研究发展的方向给出建议。     

下呼吸道分离高毒力肺炎克雷伯菌和经典肺炎克雷伯菌常见耐药基因检测以及耐药性比较分析

目的 分析下呼吸道分离高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae,hvKP)和经典肺炎克雷伯菌(classical Klebsiella pneumoniae,cKP)常见耐药基因及耐药性比较分析,为临床抗感染治疗提供流行病学依据。方法 收集2019 年8 月～ 2021 年12 月下呼吸道分离的200 株非重复肺炎克雷伯菌菌株。用纸片扩散法(K-B 法)进行菌株抗生素敏感试验,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测菌株的毒力基因、耐药基因。采用毒力基因iucA,rmpA 和peg-344 均阳性的菌株定义为hvKP,其余菌株定义为cKP,比较分析hvKP 和cKP 的耐药性。结果 200 株肺炎克雷伯菌中,hvKP 91 株,占比45.50%;cKP 109 株,占比54.50%。hvKP 和cKP 耐药菌株中的超广谱β- 内酰胺酶(extended spectrum β-Lactamases,ESBLs) 耐药基因均以blaSHV,blaTEM,blaCTX-1 group(1,3,15)为主要基因型,喹诺酮类耐药基因均以qnrS,acc(6’)- Ⅰ b,qnrB 为主要基因型。hvKP 对头孢唑林、头孢呋辛、头孢噻肟、阿莫西林/ 克拉维酸、左氧氟沙星、环丙沙星和复方新诺明的耐药率均低于cKP,差异有统计学意义(χ2=14.25,10.38,11.80,10.11,7.44,24.34,21.42,均P ＜ 0.05);qnrS 基因在hvKP 中的阳性率低于cKP,差异有统计学意义(χ2=12.63,P=0.001)。结论 下呼吸道分离hvKP 与cKP 耐药菌株中耐药基因主要基因型一致,但是hvKP 对临床常用抗生素耐药率低于cKP,临床治疗应根据药敏结果合理应用抗生素。     

肺炎克雷伯菌医院感染的临床分布及耐药研究

目的了解医院感染肺炎克雷伯菌(KPN)的临床分布及耐药特点,为临床合理应用抗生素提供依据。方法回顾性分析医院2010-2012年分离肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药性;采用美国BD phoenix 100全自动细菌鉴定药敏分析仪进行菌种鉴定及药敏分析,并结合相关临床资料进行统计分析。结果临床分离1221株KPN主要分布在脑外康复病区、重症监护病房,标本主要来源于痰液(70%),其次为尿液(15%),产ESBLs菌占62.7%。KPN对亚胺培南耐药率较低为15.8%,对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、环丙沙星耐药率为30%~40%。监测中发现泛耐药KPN近年来呈明显上升趋势。结论连续两年回顾分析,KPN对部分抗菌药物耐药率呈下降趋势,产ESBLs菌株近年无显著变化,耐碳青霉烯类KPN逐年升高,同时泛耐药KPN比例呈明显上升,应引起临床高度重视。     

肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌的耐药性与抗菌药物使用强度的相关性分析

目的探讨某三级综合医院2014-2017年抗菌药物专项整治前后肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药性和抗菌药物使用强度以及二者相关性,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法统计某院2014-2017年所有临床分离的肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌对头孢他啶、哌拉西林他唑巴坦、左氧氟沙星、亚胺培南的耐药率,及其使用强度,探讨他们之间的相关性。结果抗菌药物使用强度与细菌耐药性相关性分析显示,肺炎克雷伯菌对头孢他啶、亚胺培南耐药率下降与其使用强度下降有关(头孢他啶:r=0.993,P=0.007;亚胺培南:r=0.975,P=0.025),大肠埃希菌对头孢他啶、哌拉西林他唑巴坦耐药率下降与其使用强度下降有关(头孢他啶:r=0.995,P=0.005;哌拉西林他唑巴坦:r=0.951,P=0.049);肺炎克雷伯菌对哌拉西林他唑巴坦和左氧氟沙星耐药率下降与其使用强度下降无显著相关性(哌拉西林他唑巴坦:r=0.949,P=0.501;左氧氟沙星:r=-0.730,P=0.270),大肠埃希菌对左氧氟沙星和亚胺培南耐药率下降与其使用强度下降无显著相关性(左氧氟沙星:r=-0.612,P=0.388;亚胺培南:r=0.699,P=0.301)。结论肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌的耐药率在抗菌药物专项整治后随着抗菌药物使用量的下降均有不同程度的下降,抗菌药物不合理使用是细菌产生耐药性的原因之一,故加强抗菌药物合理使用监管,可以延缓细菌耐药性威胁。     

临床分离泛耐药肺炎克雷伯菌对抗菌药物及消毒剂抗性的相关研究

摘要 目的 研究医院临床分离的肺炎克雷伯菌抗菌药物耐药性与消毒剂抗性水平的关系。方法 采用药敏试验筛选泛耐药和敏感肺炎克雷伯菌,经MLST分子分型,测定最低抑菌浓度、最小杀菌浓度,分析其对消毒剂抗性水平的影响。结果 经药敏试验筛选30株对常用抗菌药物几乎全部耐药的泛耐药菌和5株敏感菌,MLST分型显示〖JP2〗泛耐药菌分为6个型,76.67%为优势型ST11,5株敏感菌ST型各异。泛耐药菌中21株对碘伏MIC值为400 mg/L,〖JP〗26株对含氯消毒剂MIC值为300 mg/L,与大肠杆菌(8099)相同,其余均略低于标准菌株,5株敏感株对碘伏和含氯消毒剂MIC值均与标准菌株相同。结论 与抗菌药物敏感菌株相比,临床分离泛耐药肺炎克雷伯菌对含氯消毒剂和碘伏消毒剂的抗性没有显著差异。     

主动外排系统acrAB在临床分离肺炎克雷伯菌中的分布和表达

目的：研究临床分离多重耐药肺炎克雷伯菌的耐药机制。检测肺炎克雷伯菌中有无类似大肠埃希菌主动外排系统acrAB的结构基因acrAB的分布和表达。方法：用聚合酶链反应(PCR)检测acrAB基因在临床分离的肺炎克雷伯菌和肺炎克雷伯菌标准菌株(ATCC 10031)中分布。用逆转录(RT)-PCR测定其mRNA表达水平。并对PCR扩增的ATCC 10031的acrAB基因片段进行序列分析。同大肠埃希菌acrAB基因的相应序列进行同源性比较。结果：在所有被检的临床分离肺炎克雷伯菌和ATCC 10031的染色体中均发现有类似大肠埃希菌的acrAB基因;肺炎克雷伯菌多重耐药菌株acrAB的mRNA水平显高于敏感野生株和耐药谱不同的菌株,而耐药谱不同的菌株仅略高于敏感菌株;PCR扩增的ATCC 10031的acrAB基因片段同大肠埃希菌acrAB基因相应片段,在核苷酸序列上具有很高的同源性。结论：本研究表明在肺炎克雷伯菌中有类似大肠埃希菌的acrAB基因存在,其表达水平决定了多重耐药表型。     

老年病区肺炎克雷伯菌分离株消毒剂-磺胺耐药基因携带情况的研究

目的了解老年病区肺炎克雷伯菌分离株消毒剂-磺胺耐药基因存在情况和耐药性。方法应用聚合酶链反应法和纸片法对肺炎克雷伯菌消毒剂-磺胺耐药基因和药敏进行了检测。结果该医院老年病区病人标本中分离的80株肺炎克雷伯菌检测出携带消毒剂-磺胺耐药基因63株,检出率为78.8%。分离的80株肺炎克雷伯菌对头孢类、替卡西林和环丙沙星类抗生素耐药率为100%;只对亚胺培南和美罗培南敏感率100%。结论该医院老年病区分离的肺炎克雷伯菌临床株消毒剂-磺胺耐药基因检出率较高,多数对临床常用抗生素耐药,提示临床耐药菌株可能同时对消毒剂存在抗性。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学和耐药基因分析

目的：探究徐州医学院附属医院临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的分子流行病学特征及耐药基因。方法收集并鉴定该院2013年2～12月临床分离非重复碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌株55株。肠杆菌基因间重复性共有序列（ERIC）‐聚合酶链反应（PCR）分析菌株的分子流行病学特征。药敏试验采用琼脂稀释法,改良 Hodge 方法检测碳青霉烯酶,亚胺培南＋乙二胺四乙酸双纸片协同法检测金属β‐内酰胺酶,PCR 方法检测细菌携带的耐药基因。结果 ERIC‐PCR 将55株肺炎克雷伯菌分为4型,以Ⅰ型为主,共41株。55株肺炎克雷伯菌对除多黏菌素和替加环素外的其他抗菌药物显示了较高的耐药性。改良 Hodge 试验阳性43株,金属酶检测试验结果均为阴性。 PCR 结果显示,K PC‐2型44株,CTX‐M‐9型27株,S HV 型22株, TEM 型23株,其中有25株同时携带3种或3种以上的耐药基因。结论该院分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌对临床大多数常用抗菌药物显示较高水平的耐药性;其耐药机制主要是 K PC‐2碳青霉烯酶,CTX‐M‐9、S HV 和 TEM 型β‐内酰胺酶同时参与其多重耐药机制。     

耐碳青霉烯类抗菌药物的肺炎克雷伯菌的耐药状况分析

目的了解南昌大学第三附属医院耐碳青霉烯类抗菌药物的肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药状况。方法将2009年1月至2013年12月临床送检合格标本,采用西门子Micro Scan Walk Away40 Plus微生物分析仪及配套的革兰阴性菌鉴定药敏板,进行菌株鉴定与药敏试验,结果判读按照CLSI的标准,将分离到的肺炎克雷伯菌进行筛选,再筛选出CRKP。结果从检测到的769株肺炎克雷伯菌中筛选到17株CRKP。CRKP发生率2009年为0.0%,2013年上升到4.3%。CRKP对加替沙星耐药率最低占33.3%,对氨苄青霉素、阿莫西林/棒酸、头孢唑啉、环丙沙星、替卡西林/棒酸、耐药率高达100.0%;头孢类除孢噻肟、头孢哌酮/舒巴坦耐药率在50.0%以下,其余的均在50.0%~100.0%。美洛配能亚胺培南耐药率高达80.0%以上。结论 CRKP对常用抗菌药物有严重的耐药趋势,对重症患者、感染严重患者,不能单凭经验用药,应依据药敏试验选择抗菌药物。更多还原     

抗菌药物使用量与肺炎克雷伯菌耐药的相关性

目的:探讨某院抗菌药物使用量与痰培养肺炎克雷伯菌耐药水平变化之间的关系。方法:计算2005-2007年某院18种抗菌药物平均每日每百张床位所消耗的用药频率(DDDs)及同期痰培养肺炎克雷伯菌的耐药率,并对抗菌药物用量与耐药率进行相关性分析。结果:痰培养肺炎克雷伯菌对头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率与丁胺卡那霉素用量呈正相关(r分别为0.97,0.78,0.82;均P<0.05);对氨苄西林、氨苄西林/棒酸、头孢唑啉、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率与左旋氧氟沙星用量呈正相关(r分别为0.77,0.73,0.75,0.83;均P<0.05);对氨苄西林/棒酸、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星、左旋氧氟沙星的耐药率与头孢哌酮/舒巴坦用量呈正相关(r分别为0.90,0.92,0.88,0.93,0.79,0.81;均P<0.05);对氨苄西林的耐药率与青霉素、克林霉素、哌拉西林/他唑巴坦用量呈正相关(r分别为0.88,0.81,0.80;均P<0.05)。结论:痰培养肺炎克雷伯菌对抗菌药物耐药水平变化与抗菌药物使用量之间存在相关关系。应提倡合理应用抗菌药物,控制和减缓细菌耐药性的增长。     

肺炎克雷伯菌肝脓肿微生物学特征和耐药情况分析

目的探讨肺炎克雷伯菌肝脓肿患者的临床特征,以及肺炎克雷伯菌的微生物学特征和耐药情况。方法收集110例肺炎克雷伯菌肝脓肿患者的临床资料,分为有其他肝胆疾病组和无其他肝胆疾病组进行研究,采用黏液丝试验确定肺炎克雷伯菌的高黏液性状,采用PCR扩增法进行毒力基因检测及荚膜分型,选用纸片扩散法进行药敏试验,并对结果进行统计学分析。结果肺炎克雷伯菌肝脓肿常见于40~80岁的中老年男性,50.00%患者有糖尿病基础。110株肺炎克雷伯菌中,86.36%的菌株具有高黏液表型,荚膜分型以K1、K2血清型为主。无其他肝胆疾病组高黏液表型菌株、携毒力基因rmpA及气杆菌素的检出率明显高于有其他肝胆疾病组,差异有统计学意义(P0.01)。肺炎克雷伯菌对12种常见的抗菌药物的耐药率均较低。结论肺炎克雷伯菌肝脓肿常见于中老年男性,高黏液、携带毒力基因rmpA和气杆菌素的高毒力肺炎克雷伯菌是肝脓肿的主要病原菌,对常见抗菌药物的耐药率较低。     

肺炎克雷伯菌对消毒剂抗性的研究进展

当前,细菌对消毒剂的抗性问题越来越受到关注,国内外对消毒剂抗性也作了大量的研究。该文介绍消毒剂抗性的概念以及消毒剂抗性的产生机制,探讨消毒剂抗性的研究方法,重点回顾对肺炎克雷伯菌的消毒剂抗性方面的研究成果,并进行简要分析,指出目前消毒剂研究领域存在的问题,对今后该领域研究发展的方向给出建议。     

肺炎克雷伯菌的分布特征及耐药性分析

目的分析该院2014年肺炎克雷伯菌(KPN)分离株的分布情况及其耐药性。方法使用西门子医学诊断公司的M/W-96全自动细菌鉴定/药敏鉴定仪对临床KPN分离株进行药敏试验,细菌药敏结果根据2012版临床和实验室标准协会(CLSI)M100-S22文件判读。结果 8 486例送检标本共检出KPN 291株,其中KPN药敏株(DS-KPN)213株,肺炎克雷伯菌多重耐药株(MDR-KPN)20株,产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(ESBLs-KPN)48株,碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CR-KPN)10株。不同标本KPN检出率差异有统计学意义(P=0.000),痰标本构成比最高(P=0.000);不同病房KPN检出率差异有统计学意义(P=0.000),呼吸病房构成比最高(P=0.000);KPN对不同抗菌药物耐药率、敏感率差异有统计学意义(P=0.000),碳青霉烯类抗菌药物耐药率最低。结论 KPN对常用抗菌药物耐药率相对较低,其多重耐药株耐药率处于较高水平,必须引起临床和院感部门的重视,并采取一定的监管措施。     

碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的药物敏感性及分子特征分析

目的分析碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae without producing carbapenemase,CRKPPC)的抗菌药物敏感性、β-内酰胺酶基因和外排泵基因的分布及外排泵抑制剂的抑制作用。方法收集2012—2014年我院碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌108株,用Mastdiscs combi Carba plus纸片系统检测碳青霉烯酶表型。用微量肉汤稀释法测定CRKPPC菌株对抗菌药物的敏感性;用PCR和DNA测序技术检测β-内酰胺酶耐药基因,包括超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamase,ESBL)和质粒介导的头孢菌素酶(Amp C)编码基因及外排泵基因acr AB-tolC、kex D、kde A、kpn EF和kpn GH;外排泵抑制剂羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)和利血平抑制试验分析外排泵在碳青霉烯耐药中的作用;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析细菌外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36的表达。结果碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌菌株中有26株细菌为CRKPPC;这26株细菌对β-内酰胺类药物高度耐药,对阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率均较高,但对替加环素、多黏菌素、头孢他啶/阿维巴坦和氨曲南/阿维巴坦等有很好的敏感性; blaCTX-M和blaSHV检出率依次为76.9%和57.7%;外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36均有不同程度的缺失,缺失率分别为57.7%和19.2%;80%以上的细菌中存在acr AB-tolC、kex D、kde A、kpn EF和kpn GH基因; CCCP对碳青霉烯类药物具有显著的抑制作用,而利血平没有明显的抑制作用。结论替加环素、多黏菌素可以作为CRKPPC联合用药的基础药物。CRKPPC菌株中存在Amp C、ESBLs及不同程度的外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36缺失,但外排泵对碳青霉烯类药物的外排作用是CRKPPC对碳青霉烯耐药的主要机制,外排泵抑制剂可能在这种细菌引起的感染治疗中有重要价值。     

肺炎克雷伯菌耐药基因及菌株聚类分析

目的了解临床分离的肺炎克雷伯菌耐药相关基因存在状况和菌株间的亲缘性。方法细菌鉴定和药敏试验用Phoe-nixTM-100系统检测。PCR扩增β-内酰胺酶、氨基糖苷类药物修饰酶、氯己定-磺胺等22种耐药基因,并用DNA测序证实。结果53株肺炎克雷伯菌对亚胺培南全部敏感,而对其余9种抗生素的耐药率均高于60%。53株肺炎克雷菌中检出TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、LEN、OKP和DHA8种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为75.5%、22.6%、18.9%、7.5%、11.3%、5.7%、3.8%和41.5%。aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb和ant(3″)-Ⅰ的阳性率分别为90.6%、49.1%和24.5%。而氯己定-磺胺(qacE△1-sul1)基因的阳性率达90.6%。18株肺炎克雷伯菌聚类分析显示有2株菌为同一克隆株,其耐药表型基本一致。结论常州地区肺炎克雷伯菌已携带多种β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶等耐药基因,同一克隆株易传播医院内感染。