三七总皂苷对小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响

目的:观察三七总皂苷(PNS)对小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响,以探讨PNS抗动脉粥样硬化(AS)作用的机制。方法:采用小鼠腹腔巨噬细胞与40mg.L-1的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育72h建立泡沫细胞模型,用PNS进行干预。油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量及CE/TC比值。结果:模型组细胞中TC、FC、CE及CE/TC均显著高于对照组细胞(P<0.01);与模型组比较,PNS高、中剂量组细胞内TC、FC、CE及CE/TC均有显著性降低(P<0.01);且PNS各剂量组间有显著性差异。形态学上,PNS高、中剂量组细胞的油红O染色阳性细胞数显著减少。结论:PNS可能通过抑制泡沫细胞的形成发挥抗AS的作用。     

三七总皂苷中3种单体不同配伍对小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响研究

目的:利用正交试验研究三七总皂苷单体不同配伍对小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响,并评价最佳配伍的作用效果。方法:采用小鼠腹腔巨噬细胞与40mg.L-1氧化低密度脂蛋白孵育48h复制泡沫细胞模型,利用正交试验方法,以胆固醇酯(CE)含量为考察指标,对三七总皂苷中含量最高的3种单体成分的不同配伍影响泡沫细胞的形成进行观察。酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、CE的含量及CE/TC的比值。选用最佳配伍组与三七总皂苷(80mg.L-1)的作用进行比较。结果:人参皂苷R1、Rg1、Rb1效应都显著,并且R1×Rb1和Rg1×Rb1的交互作用显著(P<0.01)。最佳单体配伍组合是R1∶Rg1∶Rb1=10-5∶10-5∶10-6mol.L-1。其作用效果与三七总皂苷(80mg.L-1)无显著差异。结论:该三七总皂苷单体配伍组合结果可证,可为临床提供理论依据。     

延龄草总皂苷抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231转移的作用及机制研究

目的观察延龄草总皂苷对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭与迁移的影响及相关机制。方法培养乳腺癌细胞MDA-MB-231,加入延龄草总皂苷(1.5、3 mg·L~(-1))24 h后,采用细胞侵袭实验、划痕实验观察延龄草总皂苷对MDA-MB-231细胞侵袭与迁移的影响,以Western blot方法检测细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的表达。结果延龄草总皂苷能够有效地抑制MDA-MB-231细胞的侵袭与迁移,降低MMP-2与MMP-9的蛋白表达并呈现浓度依赖性。结论延龄草总皂苷能够有效地抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭与迁移,其可能机制与降低MMP-2、MMP-9的表达水平有关。     

三七总皂苷对人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的探讨三七总皂苷(Panax notoginseng,PNS)治疗胃癌(gastric cancer,GC)的潜在分子机制,为临床PNS治疗GC奠定理论基础。方法将培养的人胃癌SGC-7901细胞随机分为4组:对照组(C组,只加入生理盐水),低质量浓度组(L组,PNS:200μg·mL~(-1)),中质量浓度组(M组,PNS:50μg·mL~(-1))和高质量浓度组(H组,PNS:100μg·mL~(-1))。PNS给药24,48,72和96 h后,采用CCK-8法检测人胃癌SGC-7901细胞活力。使用流式细胞仪检测PNS对胃癌SGC-7901细胞周期的影响。在给PNS 48 h后,通过Hoechst-33342荧光染色探索胃癌SGC-7901细胞凋亡情况。通过Transwell试验,检测不同质量浓度PNS对SGC-7901细胞侵袭的影响。同时,利用蛋白免疫印迹实验检测PNS对胃癌SGC-7901细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果 PNS能够抑制体外人胃癌SGC-7901细胞的增殖活力。给药24 h后,H组细胞活力明显低于C组(P<0.05);给药48和72 h后,3个实验组细胞活力均明显低于C组(P<0.05);给药48和72 h后,H组细胞活力均明显低于L组和M组;给药72 h后,M组细胞活力明显低于L组(P<0.05)。流式细胞仪结果显示,与C组比较,3个组G0/G1期细胞数量均明显增加,而S期细胞数量均明显减少(P<0.05);与L组比较,H组G0/G1期细胞数量均明显增加,而S期细胞数量均明显减少(P<0.05)。细胞凋亡实验结果表明,与C组比较,3个组细胞凋亡率均明显提高(P<0.05);与L组比较,M组、H组细胞凋亡率明显提高(P<0.05);与M组比较,H组细胞凋亡率明显提高(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,PNS能以质量浓度依赖方式抑制胃癌SGC-7901细胞的侵袭。与C组比较,3个组细胞穿膜数量明显减少(P<0.05);与L组和M组比较,H组细胞穿膜数量明显减少(P<0.05)。蛋白免疫印迹实验结果显示,与C组比较,3个组Bax蛋白表达明显增加(P<0.05);与L组比较,M组和H组Bax蛋白表达明显增加(P<0.05);与M组比较,H组Bax蛋白表达明显增加(P<0.05)。与C组比较,3个组Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.05);与L组比较,M组和H组Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论 PNS能抑制SGC-7901细胞的增殖和侵袭,促进其凋亡。     

超高效液相色谱法测定三七总皂苷中三七皂苷K

目的建立三七总皂苷中三七皂苷K的超高效液相色谱(UPLC)测定的方法。方法采用Cosmosil Cholester色谱柱(50 mm×2.0 mm,2.5μm);流动相:[水–乙腈(85∶15)]–乙腈,进行梯度洗脱;体积流量0.5 m L/min;检测波长203 nm;柱温30℃;进样量2μL。结果三七皂苷K在2.020~101.000μg/m L与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为99.50%,RSD值为1.35%。结论建立的UPLC法操作简便、结果可靠、重复性好、专属性强,可用于三七总皂苷中三七皂苷K的质量控制。     

三七药材中总皂苷的含量测定

目的：测定三七中总皂苷的含量.方法：应用比色法.结果：三七中总皂苷的平均含量为0.452mg/g.结论：本法简便、可行,可供本品质量控制用.     

刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响及作用机制研究

目的：探讨刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响及作用机制。方法：CCK-8检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖能力的影响;细胞划痕实验检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移的影响;Transwell实验检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的影响;试剂盒检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞乳酸分泌的影响;PCR检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞HK、PFK和Glut4基因表达的影响;Western Blot法检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞HK、PFK和Glut4蛋白表达的影响。结果：刺五加皂苷B/E 25、50、100、200 μmol·L-1剂量不抑制MDA-MB-231细胞增殖;刺五加皂苷B/E 100、200 μmol·L-1能够抑制MDA-MB-231细胞迁移;刺五加皂苷B/E 50、100、200 μmol·L-1能够抑制MDA-MB-231细胞侵袭和乳酸分泌,也能够降低MDA-MB-231细胞有氧糖酵解中相关蛋白HK、PFK、Glut4的表达。结论：刺五加皂苷B/E能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移、侵袭,其机制可能与抑制肿瘤细胞糖酵解有关。     

三七总皂苷对肥厚心肌大鼠蛋白激酶C表达的影响

目的：探讨三七总皂苷对心肌肥厚大鼠的细胞信号转导系统中蛋白激酶C（PKC）的影响。方法采用腹主动脉部分缩窄术复制大鼠心肌肥厚模型,50只大鼠随机分为假手术组,心肌肥厚模型组,低、中、高剂量三七总皂苷治疗组,检测心脏质量指数及左室心肌质量指数,B超检测左心室后壁及室间隔厚度, Western blot对比心肌组织中PKC含量。结果同假手术组比较,模型组和各个治疗组的大鼠左室心肌质量指数增加（P〈0.05）,左心室及室间隔厚度增加（P〈0.05）, PKC含量升高;同模型组比较,心脏质量指数及左室心肌质量指数下降（P〈0.05）,左心室及室间隔厚度减少（P〈0.05）, PKC含量下降,但低,中,高剂量丹三七总皂苷治疗组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论三七总皂苷可以减少PKC表达,抑制心肌肥厚。     

三七花中总皂苷对大鼠血液流变学的影响

目的:观察三七花中的总皂苷对急性血淤模型大鼠血液流变学的影响。方法:给大鼠注射大剂量盐酸肾上腺素,并施以冰水浸泡,制作急性血淤模型大鼠,测定不同切变率的全血粘度、血浆粘度、红细胞压积、凝血酶原时间、纤维蛋白原的数量等指标。结果:三七花中的总皂苷高、中、低三个剂量组可明显降低大鼠的全血高、中、低切粘度值,和红细胞压积指数,能延长凝血酶原时间,使纤维蛋白原数量减少。结论:三七花中的总皂苷可明显改善急性血淤模型大鼠的血液流变性,可以防止血液粘度增加。     

三七总皂苷对血管平滑肌细胞迁移的抑制作用及机制探讨

目的探讨三七总皂苷抑制血管平滑肌细胞迁移的分子机制。方法采用伤口愈合实验分析三七总皂苷抑制血管平滑肌细胞迁移的作用,通过RT-PCR、明胶酶谱分析及Western blot的方法检测迁移相关基因基质金属蛋白酶2、9(matrix metalloproteinases 2 and 9,MMP-2,MMP-9)及骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因的表达。结果三七总皂苷抑制大鼠血管平滑肌细胞的迁移活性,并抑制迁移相关基因MMP-2、MMP-9及OPN的表达(P<0.05)。结论三七总皂苷抑制血管平滑肌细胞的迁移,该作用与抑制迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9和OPN基因的表达有关。     

槐耳颗粒联合DC-CIK细胞对乳腺癌MDA-MB-231干细胞体内外杀伤作用研究

目的 观察槐耳颗粒联合树突细胞(DC)-细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对乳腺癌MDA-MB-231干细胞体内外的杀伤效果.方法 用槐耳颗粒(500 mg/L)、槐耳颗粒(1000 mg/L)与乳腺癌MDA-MB-231细胞作用后,荧光倒置显微镜观察MDA-MB-231细胞形态的变化,MTT比色法检测槐耳颗粒对MDA-...     

山药提取物联合树突细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞对荷MDA-MB-231乳腺癌干细胞瘤裸鼠的治疗作用研究

目的 研究山药Dioscorea opposita提取物联合树突细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞（DC-CIK）对荷MDA-MB-231乳腺癌干细胞瘤裸鼠的治疗效果。方法 制备荷MDA-MB-231乳腺癌干细胞Balb/c裸鼠模型,随机分为4组,每组8只：对照组裸鼠尾iv生理盐水,0.2 mL/次,2次/周;DC-CIK组裸鼠在肿瘤干细胞接种4 d后尾iv 1×10⁶个DC-CIK细胞,2次/周,给药3周;山药提取物组裸鼠ig山药提取物125 mg/kg,0.2 mL/d,给药3周;山药提取物联合DC-CIK组裸鼠ig山药提取物125 mg/kg,0.2 mL/d,同时尾iv 1×10⁶个DC-CIK细胞,2次/周,给药3周。各组裸鼠在治疗3周期间每2天测量瘤体大小及裸鼠体质量,治疗结束后处死裸鼠,取出瘤体称质量;qRT-PCR法检测瘤组织中Akt信号通路中关键原癌基因c-Myc表达水平。结果 治疗结束后,各组裸鼠瘤体生长速率为山药提取物联合DC-CIK组结论 对荷MDA-MB-231乳腺癌干细胞瘤裸鼠治疗效果中,各给药组裸鼠肿瘤生长均受到明显抑制,其中以山药提取物联合DC-CIK组效果最佳。     

Inhibitory effects of isoliquiritigenin on the migration and invasion of human breast cancer cells

Introduction: Isoliquiritigenin (ISL) is a natural phenolic compound extracted from licorice. Previous studies have shown that ISL is a potent antioxidant with anti-inflammatory and antitumor activities. The anti-invasive activity of ISL was still unclear. The actual causes of death for most breast cancer patients were due to the tumor metastasis. Attenuating the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and matrix metalloproteinases (MMPs) is well known to prevent tumor metastasis.

Objectives: The purpose of this study is to investigate the effects of ISL on VEGF and MMP expression in highly metastatic human breast cancer cell line, MDA-MB-231.

Results: ISL reduced the secretions and protein levels of VEGF. The VEGF upstream regulatory protein, hypoxia-inducible factor 1-alpha (HIF-1α), was also reduced after ISL treatment. Moreover, ISL inhibited the expression and gelatinolytic activity of MMP-2 and MMP-9 which were confirmed by western blot and gelatin zymography assay. Additionally, the anti-migratory activity of ISL was further confirmed by chamber migration assay and wound migration assay. Upstream signaling pathways, including the expression of phosphatidylinositol-3 kinase (PI3K), the phosphorylation of p38 and Akt kinase and NF-κB DNA binding activity, were suppressed by ISL.

Conclusion: These findings suggest that ISL suppresses the migration of MDA-MB-231 cells by inhibiting the upstream signaling pathways.     

泽漆抑制三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞及其凋亡机制研究

目的 研究泽漆对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用及其作用机制。方法 用MTT法检测细胞活力;用荧光显微镜法测定MDA-MB-231细胞的活性氧（ROS）生成量;用流式细胞仪检测细胞的凋亡率;用TUNEL检测法检测细胞凋亡DNA碎片;用Western blot检测caspase-9、caspase-3、PARP等凋亡相关因子的水平变化。结果 MTT试验显示泽漆提取物对MDA-MB-231细胞具有显著的抑制作用,但作用可被ROS抑制剂NAC及caspase抑制剂Z-VAD-FMK所消除;荧光显微镜检测显示泽漆提取物能显著提高ROS的生成;流式细胞仪检测显示泽漆提取物处理后,PI染色阳性细胞明显增加,但被NAC减弱。Caspase-9、caspase-3在提取物处理后均转为激活形式,PARP被剪切。TUNEL法显示,提取物处理后细胞凋亡碎片明显增多,而提前加入ROS抑制剂NAC和caspase抑制剂Z-VAD-FMK能使泽漆提取物诱导凋亡的DNA碎片明显减少。结论 泽漆乙酸乙酯提取物可以有效抑制MDA-MB-231细胞的生长,诱导其凋亡,其作用机制可能与ROS过量生成所致的线粒体损伤途径有关。     

Antiproliferative effects of quercetin through cell cycle arrest and apoptosis in human breast cancer MDA-MB-453 cells

To explore the anticancer effects of the flavonoid quercetin on human breast cancer MDA-MB-453 cells via cell cycle regulation and the induction of apoptosis, the antiproliferative effect of quercetin was first examined by MTT assay. When MDA-MB-453 cells were treated with quercetin for various periods of time (3–24 hrs) and at various doses (1–100 μM), cell growth decreased significantly in a time-and dose-dependent manner. To elucidate the mechanism underlying the antiproliferative effect of quercetin, cell cycle progression and the induction of apoptosis in MDA-MB-453 cells exposed to 100 μM quercetin for 24 hrs were investigated. Quercetin caused a remarkable increase in the number of sub-G1 phase cells, and an Annexin-V assay revealed that exposure to quercetin affected apoptosis. Moreover, treatment with quercetin increased Bax expression but decreased Bcl-2 expression. Cleaved caspase-3 and PARP expression was also increased by quercetin. Thus, quercetin has probable anticancer activity. Our results suggest the existence of multiple pathways for the induction of cell cycle arrest and apoptosis by quercetin.     

瑞香素对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的抑制作用及其机制研究

目的 探讨瑞香素对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖、迁移及侵袭的抑制作用及其潜在机制。方法 体外培养MDA-MB-231细胞,随机分为对照组和瑞香素10,20,40 μg·mL^–1组。以MTT法检测细胞的增殖情况;通过克隆形成试验检测各组MDA-MB-231细胞克隆形成情况;划痕试验及Transwell观测细胞迁移和侵袭情况;Western blotting检测Vimentin、MMP9、Cyclin D1、CDK4蛋白表达量。结果 与对照组相比,瑞香素组（10,20,40 μg·mL^–1）显著抑制细胞增殖（P<0.05或P<0.01）;瑞香素组（10,20,40 μg·mL^–1）可以抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的克隆形成（P<0.01）;瑞香素组（20,40 μg·mL^–1）细胞的迁移能力和侵袭能力显著下降（P<0.01）;瑞香素组（20,40 μg·mL^–1）细胞Vimentin、MMP9、Cyclin D1、CDK4蛋白表达量显著降低（P<0.01）。结论 瑞香素可以抑制三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖、迁移及侵袭能力,其作用机制可能与下调Vimentin、MMP9、Cyclin D1、CDK4的表达有关。     

分化和DNA结合抑制因子1基因对MDA-MB-231乳腺癌细胞株MMP9表达的影响

目的筛选成功转染Id1 miRNA真核表达载体乳腺癌MDA-MB-23 1细胞系,观察对乳腺癌细胞的对Id 1、MMP 9表达的影响。方法构建Id1miRNA真核表达载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞株以杀稻瘟霉素筛选稳定表达的细胞株。经RT-PCR方法鉴定其对Id1、MMP9表达的影响。结果经过筛选,获得转染Id1 miRNA真核表达载体稳定表达的MDA-MB-231细胞系。经RT-PCR方法鉴定,结果表明转染Id1 miRNA真核表达载体的乳腺癌MDA-MB-231细胞株其Id 1、MMP 9表达水平低于对照组,且Id 1、MMP 9表达水平正相关。未转染组与阴性对照转染组无明显差异。结论本实验成功筛选出稳定表达Id1 miRNA的乳腺癌细胞株,证实Id1 miRNA真核表达载体构建成功干扰有效,并且Id1与mmp9表达相关,为将来进一步研究他们之间的生物学行为差异,或详细了解其分子作用机制奠定了基础。     

五味子乙素通过ROS介导内质网应激诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的研究

目的 研究五味子乙素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 用细胞计数试剂(CCK-8)检测不同浓度五味子乙素对MDA-MB-231细胞存活率的影响;五味子乙素（10、20、40 μmol/L）作用 MDA-MB-231 细胞 24 h,分别用Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡情况;用DCFA-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平;用Western blot法检测细胞凋亡及内质网应激相关蛋白（Bcl-2、Bax、CHOP、GPR78、PERK、p-PERK、p-eIF2α、eIF2）的表达。结果 与空白组比较,随着五味子乙素浓度增大,细胞存活率明显降低,其IC₅₀为19.16 μmol/L;与对照组比较,五味子乙素（10、20、40 μmol/L）均能抑制细胞克隆形成(P<0.05),且呈剂量依赖;五味子乙素（10、20、40 μmol/L）均可诱导细胞凋亡（P<0.05）,使抗凋亡蛋白BCL-2的表达显著降低,促凋亡蛋白Bax的表达显著升高(P<0.05);五味子乙素（10、20、40 μmol/L）显著升高细胞内ROS水平(P<0.05),且呈剂量依赖;五味子乙素（10、20、40 μmol/L）能够激发内质网应激,使内质网应激相关蛋白CHOP、GPR78、p-eIF2α表达增多(P<0.05),且呈剂量依赖。结论 五味子乙素可能通过ROS介导内质网应激诱导MDA-MB-231细胞凋亡。     

芦荟大黄素对高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响

目的研究芦荟大黄素(Aloe emodin,AE)对人高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响及其作用机制。方法 MTT法检测AE对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;Transwell chamber法检测AE对MDA-MB-231细胞侵袭重组基底膜能力和趋化性运动能力的影响;RT-PCR、Western blot法检测AE对MDA-MB-231细胞黏着斑激酶(FAK)mRNA和蛋白表达的影响。明胶酶谱法检测MDA-MB-231细胞分泌的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性。结果 80μmol·L-1 AE抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭重组基底膜能力、趋化性运动能力,其抑制率分别为(52.98±5.46)%,(45.88±8.51)%。作用于MDA-MB-231细胞24 h后,AE下调FAK mRNA和蛋白表达,下调MDA-MB-231细胞分泌MMP-9。结论 AE抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭能力、趋化性运动能力,其作用机制与其下调FAK表达和MMP-9的分泌有关。     

川芎嗪对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭黏附能力的影响

目的观察不同浓度川芎嗪干预后乳腺癌细胞侵袭、黏附能力的改变及MMP-2/MMP-9的表达。方法用细胞黏附实验,检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞黏附力的抑制作用;用Transwell小室检测不同浓度川芎嗪干预后MDA-MB-231细胞体外侵袭能力的改变;用半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞MMP-2/MMP-9 mRNA表达的抑制作用。结果川芎嗪对MDA-MB-231细胞黏附力有明显抑制作用,对MDA-MB-231细胞的MMP-2 mRNA的表达有明显抑制作用;但对MMP-9mRNA的表达无明显影响。结论川芎嗪能显著抑制MDA-MB-231细胞的黏附和侵袭能力,其抑制效应与药物的浓度呈正相关。川芎嗪可能通过下调MDA-MB-231细胞MMP-2mRNA的表达而抑制细胞的黏附、侵袭能力。