柳氮磺吡啶通过铁死亡途径增强结直肠癌细胞放射敏感性研究

目的 探究低剂量柳氮磺吡啶（SAS）对结直肠癌细胞的放疗增敏作用。方法 CCK‐8检测不同浓度SAS对结直肠癌细胞的增殖抑制作用,采用凋亡、自噬等抑制剂联合SAS处理结直肠癌细胞,CCK‐8法比较细胞活力。采用锥虫蓝染色、平板克隆形成、细胞生长曲线等实验评价低浓度SAS联合放疗对结直肠癌细胞的体外放疗增敏作用。通过检测细胞内脂质过氧化物、铁死亡蛋白标志物（GPX4、PTGS2）等,探究低浓度SAS联合放疗对细胞铁死亡的促进作用。利用小鼠皮下移植瘤模型,明确SAS的体内放疗增敏效应。结果 高浓度SAS可诱导结直肠癌细胞凋亡与铁死亡。低浓度SAS增强结直肠癌细胞放疗敏感性,该效应可被铁死亡抑制剂（Fer‐1）阻断。低浓度SAS联合放疗显著增加细胞内脂质过氧化物含量与PTGS2表达,降低GPX4表达。皮下移植瘤模型中SAS亦显示显著的放疗增敏效应。结论 低浓度SAS通过铁死亡途径增强结直肠癌细胞放疗敏感性。     

NVP‐LDE225与放射联用治疗黑色素瘤的潜在作用机制

目的 初步探讨音猬因子（SHH）信号通路抑制剂NVP‐LDE225与放射联用治疗黑色素瘤的潜在作用机制以及可行性。方法 通过qPCR的方法检测处理前后黑色素瘤细胞Melan‐A及SK‐MEL‐2中Gli1的mRNA的表达量。NVP‐LDE225、GDC‐0449与放射联合处理24 h后,通过细胞计数法和CCK‐8法检测黑色素瘤细胞Melan‐A及SK‐MEL‐2的细胞数量与细胞活性,细胞克隆法检测Melan‐A及SK‐MEL‐2的生存以及增殖能力,流式细胞术检测Melan‐A细胞周期的变化,Western blot检测Melan‐A细胞中凋亡蛋白Bax及Caspase3的表达变化。结果 单纯给予Smo抑制剂NVP‐LDE225能够抑制黑色素瘤细胞中Gli1的mRNA表达,减少黑色素瘤细胞的增殖,诱导其凋亡,且将黑色素瘤细胞阻滞于G₀/G₁期。NVP‐LDE225处理后1 h给予γ射线照射将进一步抑制SHH信号通路,使黑色素瘤细胞阻滞于G₂/M期,进一步抑制黑色素瘤细胞的增殖。结论 Smo抑制剂NVP‐LDE225能抑制黑色素瘤细胞中SHH信号通路,抑制细胞增殖,与放射联用后,进一步增加抑制细胞增殖的效果。其可以作为一个潜在的与放疗联合治疗黑色素瘤的药物,值得进一步研究。     

LncRNA ANRIL靶向miR-195对HCT116细胞及裸鼠移植瘤放射增敏实验研究

目的 探究LncRNA ANRIL对结直肠癌HCT116细胞体外体内放射增敏作用及机制。方法 qPCR检测ANRIL表达。将阴性对照siRNA、ANRIL siRNA、miR-NC mimic、miR-195 mimic、miR-NC inhibitor、miR-195 inhibitor转染至HCT116细胞中分别记为阴性对照、沉默ANRIL、过表达miR-NC、过表达miR-195、抑制miR-NC、抑制miR-195组,以不做任何处理的HCT116细胞为空白对照组。克隆形成实验检测放射敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡,StarBase预测ANRIL下游miRNAs,双荧光素酶报告基因实验进一步验证。裸鼠皮下移植瘤实验检测ANRIL对照射后移植瘤生长影响。结果 沉默ANRIL组细胞存活分数较阴性对照组降低(P<0.05),其放射增敏比为1.52。沉默ANRIL+4Gy组细胞凋亡率较阴性对照+4Gy组增加[(27.86±2.78)%︰(12.06±1.46)%,P<0.05]。裸鼠皮下移植瘤实验结果显示在13、16、19、22、25天时阴性对照组肿瘤体积比沉默ANRIL组降低[(234±66)、(273±63)、(296±72)、(321±85)、(403±94) mm³与(357±79)、(485±124)、(617±143)、(764±174)、(985±221) mm³,P<0.05]。miR-195是ANRIL靶基因,抑制miR-195可逆转沉默ANRIL对HCT116细胞放射增敏和凋亡促进作用及移植瘤生长抑制作用。结论 LncRNA ANRIL通过调控miR-195表达来调节HCT116细胞放射敏感性,可能为临床结直肠癌放疗提供一个新的增敏靶点。     

纳米氧化铈颗粒对人肺腺癌耐顺铂细胞辐射敏感性的影响

目的：研究纳米氧化铈颗粒对人肺腺癌耐顺铂细胞（A549/DDP）辐射敏感性的影响。方法：采用细胞增殖抑制实验确定γ射线半数抑制剂量和纳米氧化铈的使用浓度,细胞集落形成实验检测γ射线和纳米氧化铈处理后的细胞存活情况。将细胞分为阴性对照,γ射线照射组,纳米氧化铈低、中、高浓度组（分别加入0.000 5、0.05和5 μmol/L的纳米氧化铈处理后,再进行照射）,采用流式细胞术进行细胞凋亡率、细胞周期和胞内pH值检测。结果：通过细胞增殖抑制实验,确定γ射线诱导A549/DDP细胞半数抑制剂量为25 Gy。细胞集落形成实验观察发现,与照射组相比,纳米氧化铈低浓度组细胞的SF₂降低、a/b比值和增敏比升高。流式细胞术检测发现,纳米氧化铈低浓度组细胞凋亡率增加（t=5.42,P < 0.05）;纳米氧化铈低、中、高浓度组的S期阻滞明显（t=3.14、4.08、6.81,P < 0.05）;纳米氧化铈低、高浓度组的胞内pH值升高（t=2.86、4.93,P < 0.05）。结论：低浓度纳米氧化铈对于体外培养的A549/DDP细胞具有一定的辐射增敏作用。     

铁钯纳米颗粒修饰的碳纳米管对人乳腺癌MCF-7细胞的放射增敏作用

目的 探究铁钯纳米颗粒修饰的碳纳米管(FePd@CNTs)对人乳腺癌MCF-7细胞的放射增敏作用。方法 用化学还原法制备FePd@CNTs,并通过透射电子显微镜、能谱仪进行表征。CCK-8法检测FePd@CNTs对人正常乳腺上皮MCF-10A细胞的相容性。CCK-8法、流式细胞术和克隆形成实验评估FePd@CNTs对人乳腺癌MCF-7细胞的放射增敏作用。结果 FePd纳米颗粒成功地通过化学还原方法被修饰在CNTs的表面。FePd@CNTs对MCF-10A细胞显示低细胞毒性(IC50=738.3μg/m),同时可有效增强X射线对MCF-7细胞的杀伤(增敏比为1.22)。结论 FePd@CNTs具有对乳腺癌的治疗作用与放射增敏的潜力。     

lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p对宫颈癌SiHa细胞增殖及放疗敏感性的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）SNHG6对宫颈癌SiHa细胞增殖和放疗敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法 检测lncRNA SNHG6、miR‐485‐3p在宫颈癌组织、癌旁组织、SiHa细胞及X线照射的SiHa细胞中的表达。分析lncRNA SNHG6与miR‐485‐3p之间的关系。过表达或敲降SNHG6、miR‐485‐3p后,MTT、Transwell迁移实验和流式细胞仪检测细胞增殖能力、侵袭数目和凋亡率。分析miR‐485‐3p对Wnt/β‐catenin通路的影响以及XAV939对SiHa细胞增殖及放疗敏感性的影响。结果 lncRNA SNHG6在宫颈癌组织和SiHa细胞中高表达,在X线照射的SiHa细胞中低表达,miR‐485‐3p在宫颈癌组织和SiHa细胞中低表达,在X线照射的SiHa细胞中高表达。lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p。下调lncRNA SNHG6表达抑制了细胞增殖和侵袭,增强了其对X线的放疗敏感性,而miR‐485‐3p抑制剂转染细胞后则起到相反作用。上调lncRNA SNHG6通过miR‐485‐3p促进了SiHa细胞的增殖与侵袭,降低了放疗敏感性。下调miR‐485‐3p激活了Wnt/β‐catenin通路,促进了SiHa的细胞增殖和侵袭,降低了其对X线的放疗敏感性。结论 过表达lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p激活Wnt/β‐catenin通路调控SiHa细胞的增殖及其放疗敏感性。     

lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p对宫颈癌SiHa细胞增殖及放疗敏感性的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）SNHG6对宫颈癌SiHa细胞增殖和放疗敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法 检测lncRNA SNHG6、miR‐485‐3p在宫颈癌组织、癌旁组织、SiHa细胞及X线照射的SiHa细胞中的表达。分析lncRNA SNHG6与miR‐485‐3p之间的关系。过表达或敲降SNHG6、miR‐485‐3p后,MTT、Transwell迁移实验和流式细胞仪检测细胞增殖能力、侵袭数目和凋亡率。分析miR‐485‐3p对Wnt/β‐catenin通路的影响以及XAV939对SiHa细胞增殖及放疗敏感性的影响。结果 lncRNA SNHG6在宫颈癌组织和SiHa细胞中高表达,在X线照射的SiHa细胞中低表达,miR‐485‐3p在宫颈癌组织和SiHa细胞中低表达,在X线照射的SiHa细胞中高表达。lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p。下调lncRNA SNHG6表达抑制了细胞增殖和侵袭,增强了其对X线的放疗敏感性,而miR‐485‐3p抑制剂转染细胞后则起到相反作用。上调lncRNA SNHG6通过miR‐485‐3p促进了SiHa细胞的增殖与侵袭,降低了放疗敏感性。下调miR‐485‐3p激活了Wnt/β‐catenin通路,促进了SiHa的细胞增殖和侵袭,降低了其对X线的放疗敏感性。结论 过表达lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p激活Wnt/β‐catenin通路调控SiHa细胞的增殖及其放疗敏感性。     

环状RNA circATL2通过miR‐205调控直肠癌放射敏感性的研究

目的 探讨环状RNA对直肠癌放射敏感性的影响及其作用机制。方法 通过基因测序筛选直肠癌放射敏感和放射抵抗组织（放化疗前活检组织）中的差异circRNAs,后通过细胞实验验证circRNAs对肠癌细胞的放射敏感性的影响。结果 通过对直肠癌组织标本进行基因测序,发现64个在直肠癌放射敏感组织中高表达的circRNAs,36个在放射敏感组织中低表达的circRNAs。选取10个差异circRNAs,经qRT‐PCR验证,发现circATL2在直肠癌放射敏感组织中高表达。后在细胞实验中,上调circATL2表达,能显著提高肠癌的放射敏感性。随后分析在直肠癌放射敏感组织中低表达的8个miRNA,通过双荧光素酶实验,验证了miR‐205与circATL2是直接结合的关系。进一步的挽救实验,证实了直肠癌中circATL2通过miR‐205调控直肠癌的放射敏感性。结论 circATL2通过靶向吸附miR‐205调控直肠癌的放射敏感性。     

天然化合物通过铁死亡途径抗肿瘤作用的研究进展

摘 要：铁死亡是一种不同于凋亡、坏死、自噬的新细胞死亡方式。铁死亡的结果是有毒脂质过氧化物损伤细胞导致细胞死亡,该过程依赖铁的参与,任何影响细胞内铁离子浓度或脂质氧化代谢的因素都有可能参与铁死亡的调控。铁死亡在肿瘤治疗方面具有逆转耐药、放疗增敏、协同免疫疗法等优势。研究发现某些天然化合物具有促进铁死亡的作用,如青蒿素及其衍生物、丹参酮、荜茇酰胺等天然化合物通过铁死亡发挥抗肿瘤作用。全文就天然化合物通过铁死亡方式发挥抗肿瘤作用的进展进行综述。     

华蟾毒精对人结直肠癌SW-480、HT-29、HCT-116细胞的放疗增敏作用

目的探讨华蟾毒精对人结直肠癌SW-480、HT-29、HCT-116细胞的放疗增敏作用。方法选用SW-480、HT-29、HCT-116这3种人结直肠癌细胞株,细胞经单纯放疗和联合药物处理24 h、48 h、72 h后CCK8法检测细胞增殖,并于处理后48 h流式细胞仪测定细胞周期和凋亡。结果与单独放疗作用相比,华蟾毒精和放疗联合应用能明显抑制人结直肠癌SW-480、HT-29、HCT-116细胞增殖,同时诱导和促进人结直肠癌细胞的凋亡发生,调整细胞周期的变化。结论华蟾毒精可以增加人结直肠癌SW-480、HT-29、HCT-116细胞的放疗敏感性,提高放疗对人结直肠细胞的放射治疗效果。     

上调HuR基因对食管鳞癌细胞Kyse450放射敏感性的影响

目的 研究HuR基因上调对于食管鳞癌细胞Kyse450放射敏感性的影响。方法 慢病毒上调Kyse450细胞HuR基因,同时选取X射线6Gy照射剂量作为干预条件。采用Western blot和qPCR技术分别检测Kyse450转染后的蛋白和RNA表达情况;CCK8试剂盒检测细胞的增殖速率;克隆形成试验检测细胞克隆形成能力;伤口愈合试验和Transwell试验检测细胞迁移能力的改变。结果 CCK8试验显示HuR基因上调后细胞的增殖能力增强,放射后这种增强趋势更加明显;平板克隆试验显示随着放射剂量的增加,两组细胞的克隆形成率都随之降低,但是过表达组的克隆形成数多于对照组;伤口愈合试验以及Transwell试验表明过表达组的伤口愈合速率和迁移能力高于对照组,放射治疗后这种差异更显著;Western blot显示放射治疗后24h过表达组细胞内MMP9、MMP2水平高于对照组。结论 HuR上调会增强食管鳞癌细胞增殖、克隆、迁移能力,降低其放射敏感性。     

盐霉素增加鼻咽癌CNE-2细胞放疗敏感性的实验研究

目的:探讨盐霉素（Sal）对鼻咽癌CNE-2细胞的放疗增敏作用及其可能的机制。方法:CCK8测定不同浓度盐霉素、不同剂量放疗及联合应用对CNE-2细胞增殖的抑制作用;平板克隆实验观察盐霉素联合放疗后细胞的克隆形成率;Hoechst33258染色观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化情况。结果:CCK8结果显示,盐霉素和放疗对鼻咽癌CNE-2细胞的生长有显著的抑制作用,呈浓度和剂量依赖性,且联合组抑制作用强于单纯药物组或放疗组。平板克隆实验显示盐霉素联合放疗后能显著降低细胞的克隆形成率;Hoechst33258染色显示盐霉素联合放疗治疗后细胞凋亡现象更明显;细胞流式术检测显示联合组较单纯药物组或放疗组凋亡率增加,盐霉素对放疗具有增敏作用。药物组和放疗组均能使G2/M期细胞比例增加,两者联合效果更明显。结论:盐霉素能增加人鼻咽癌CNE-2细胞的放疗敏感性,其作用机制可能与周期阻滞及其凋亡诱导相关。     

lncRNA H19对结肠癌预后评估及辐射抗性的调控作用研究

目的 探索lncRNA H19在结肠癌预后评估及辐射抗性调控中的作用,为结肠癌的诊疗提供新的潜在靶点。方法 基于生物信息学技术分析lncRNA H19在结肠癌临床病理参数及预后评估中的价值。通过siRNA和过表达质粒转染调节lncRNA H19在结肠癌细胞HCT116及SW620中的表达。通过CCK8、EdU、克隆存活及流式细胞术检测调节lncRNA H19表达对X线辐射后结肠癌细胞增殖、DNA合成、辐射敏感性及细胞周期的影响。结果 lncRNA H19在结肠癌组织中表达显著上调并与结肠癌患者的预后不良相关。lncRNA H19作为结肠癌的高风险因子,对于结肠癌的预后评估具有显著的优势（曲线下面积值为0.816）。进一步的实验表明,辐射可以诱导lncRNA H19在结肠癌细胞中高表达。敲低lncRNA H19（siRNA‐H19）可以明显增加HCT116细胞对X线的敏感性,而过表达lncRNA H19（H19‐OE）的SW620细胞辐射抗性增强。此外,流式分析显示敲低lncRNA H19可以增强X线诱导的G₂/M期阻滞,提示lncRNA H19可能通过参与细胞周期调控影响结肠癌细胞的辐射敏感性。结论 lncRNA H19在结肠癌预后评估及辐射抗性调控中发挥关键作用,可能作为增强放疗敏感性的潜在靶点。     

miR-338通过靶向GPX4抑制非小细胞肺癌细胞增殖

目的:探讨miRNA-338（miR-338）通过靶向调控谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）表达在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)增殖中的作用及机制研究。方法:通过实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测非小细胞肺癌组织、癌旁、细胞系及对照细胞系中miR-338及GPX4 mRNA的表达水平;通过Western Blot检测非小细胞肺癌组织、癌旁、细胞系及对照细胞系中GPX4蛋白水平;通过荧光素酶报告基因时间验证miR-338直接靶向调节GPX4的表达;通过CCK-8探索miR-338是否通过调节铁死亡影响肿瘤细胞增殖;通过试剂盒检测细胞脂质氧化和活性氧水平。结果:NSCLC组织和细胞系中miR-338表达水平低于癌旁组织和对照细胞系;NSCLC组织和细胞系中GPX4 mRNA及蛋白表达水平高于癌旁组织和对照细胞系;Starbase软件分析发现GPX4 mRNA序列中含有miR-338特异作用位点,荧光素酶报告基因实验结果证实miR-338直接靶向调节GPX4表达;过表达miR-338提高肿瘤细胞中脂质氧化及活性氧水平,并抑制肿瘤细胞增殖;而铁死亡抑制剂预处理可以逆转miR-338的抑癌作用。结论:miR-338通过负向调控GPX4表达进而促进肿瘤细胞铁死亡,最终抑制NSCLC细胞增殖。     

miR-106b靶向调控PTEN促进结直肠癌细胞放射抵抗

目的 阐明miR-106b在结直肠癌细胞放射敏感性中的作用及机制。方法 构建稳定过表达和干扰miR-106b结直肠癌细胞系,通过免疫荧光和平板克隆实验探讨miR-106b对结直肠癌细胞放射敏感性的影响;Western blot检测Caspase-3和γ-H2AX的表达;生物信息学预测miR-106b下游调控的靶基因,双荧光素酶报告系统、荧光定量PCR及Western blot进一步验证。在稳定过表达miR-106b的结直肠癌细胞系中转染pCDNA3.0-PTEN,探讨细胞放射敏感性变化,明确miR-106b是否通过靶向调控PTEN增加结直肠癌细胞放射抵抗。结果 在结直肠癌细胞系过表达miR-106b,经过同等条件的照射处理后,与对照组相比,过表达miR-106b组细胞存活分数升高,放射抵抗增强(P<0.05),Caspase-3及γ-H2AX表达降低。在稳定过表达miR-106b的细胞中上调PTEN后能逆转miR-106b引起的放射抵抗。结论 miR-106b通过靶向抑制PTEN从而诱导结直肠癌细胞放射抵抗,预示着miR-106b-PTEN位点可能为临床提高结直肠癌放疗效果寻找相关靶点提供理论依据。     

miR-106b enhances cell radioresistance by targeting PTEN in colorectal carcinoma

Objective To investigate the role of miR-106b in the cell radioresistance in colorectal carcinoma (CRC), and unravel the underlying mechanism. Methods The CRC cell lines stably overexpressing and interfering miR-106b were established. The effect of miR-106b upon the CRC cell radiosensitivity was evaluated by cell radiation, immunofluorescence and colony formation assay. The expression levels of Caspase-3 and γ-H2AX were detected by Western blot. The target genes of miR-106b were identified by bioinformatics prediction, which were further validated by dual luciferase assay, fluorescence quantitative PCR and Western blot. The CRC cell lines stably overexpressing miR-106b were transfected with pCDNA3.0-PTEN. The changes of CRC cell radiosensitivity were investigated. Whether miR-106b could increase the radioresistance of CRC cells by targeting PTEN was clarified. Results Compared with the control group (miR-ctr group), the cell surviving fraction was significantly elevated (P<0.05), the radioresistance (P<0.05) was considerably enhanced and the expression levels of Caspase-3 and γ-H2AX were significantly down-regulated (both P<0.05) in the miR-106b overexpression group. PTEN up-regulation in CRC cell lines stably overexpressing miR-106b could reverse the radioresistance induced by miR-106b. Conclusion miR-106b can induce CRC cell radioresistance by inhibiting PTEN, prompting that miR-106b-PTEN might provide theoretical evidence for relevant targets which can enhance the clinical efficacy of radiotherapy.     

shRNA干扰RACK1表达增强口腔鳞癌细胞放射敏感性的研究

目的 探讨下调RACK1基因表达对口腔鳞癌细胞生长及放射敏感性的影响。方法 构建RACK1基因的shRNA载体,通过脂质体转染技术将其转入口腔鳞癌HSC-3细胞,G418筛选得到稳定转染细胞。荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测细胞中RACK1mRNA和RACK1蛋白表达水平;CCK8实验检测细胞生长能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力;克隆形成实验检测下调RACK1表达联合X射线照射对细胞增殖能力的影响。构建裸鼠移植瘤模型,观察下调RACK1基因表达联合X射线照射对口腔鳞癌的生长抑制作用。结果 RT-PCR和Western blot结果显示转染后HSC-3细胞RACK1mRNA相对表达量明显降低(P<0.05),RACK1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。CCK8实验结果显示下调RACK1表达可抑制HSC-3细胞生长(P<0.05),联合X射线照射使细胞凋亡率明显升高(P<0.05),外侵袭穿透细胞数显著减少(P<0.05)。克隆形成实验结果显示shRACK1组的存活分数低于对照组,放射增敏比为1.37(D0值比)。裸鼠移植瘤实验显示shRACK1组照射后瘤体生长缓慢,瘤体体积减小幅度低于对照组(P<0.05),瘤体质量低于对照组(P<0.05)。结论 下调RACK1表达可以增强口腔鳞癌细胞的放射敏感性,为提高口腔鳞癌放射敏感性研究提供新思路。