抗菌肽LL-37 与膀胱尿路上皮癌关系的初步探讨

目的 检测抗菌肽LL-37 在膀胱尿路上皮癌中的表达,同时体外研究LL-37 对膀胱肿瘤细胞株T24、EJ 的作用。方法 ELISA 检测30 例膀胱尿路上皮癌患者和30 例健康体检者新鲜晨尿中LL-37 的表达,同时检测T24、EJ 细胞和尿路上皮SV-HUC-1 细胞经不同浓度LPS 刺激后细胞培养液上清中LL-37水平。免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测30 例膀胱癌患者的肿瘤组织标本、肿瘤基底及周围组织标本中LL-37 的表达。在体外将不同浓度的LL-37 作用于T24、EJ 和SV-HUC-1 细胞,MTT 检测细胞的增殖。结果 健康体检者和膀胱癌患者尿液中LL-37 的水平分别为（2.02±0.06）和（24.32±0.02）ng/ml,差异有统计学意义（P <0.05）。免疫组织化学结果显示,LL-37 在癌组织中表达阴性,而在癌组织周围的炎症细胞、血管壁及平滑肌内却呈阳性表达。RT-PCR 结果表明,癌周围组织中LL-37的表达水平比癌组织高约30 倍。T24、EJ 和SV-HUC-1 细胞经LPS 刺激后培养液上清中LL-37 浓度均升高。在体外,LL-37 呈剂量依赖性地抑制T24、EJ 细胞的增殖,而其对SV-HUC-1 细胞的抑制需更高的浓度。结论 LL-37 与膀胱癌的发生可能有着一定的关联,体外高浓度的LL-37 可抑制膀胱癌T24、EJ 细胞的生长。     

褪黑素通过NRF2对氯胺酮诱导的尿路上皮损伤保护作用研究

目的 在细胞水平探究褪黑素通过NRF2对氯胺酮相关性膀胱炎(KC)尿路上皮损伤的保护作用.方法 首先利用Western blot验证NRF2在氯胺酮刺激后的SV-HUC-1细胞的表达水平变化;构建沉默NRF2的SV-HUC-1细胞株,利用流式细胞术检测氯胺酮共培养后的细胞凋亡率;利用CCK-8筛选褪黑素的工作浓度,将S...     

吴茱萸碱维持结肠癌上皮细胞的屏障完整性的机制探讨

目的观察吴茱萸碱对LPS诱导结肠癌上皮细胞(Caco-2)炎症反应的保护作用及机制。方法采用LPS处理人结肠癌上皮细胞(Caco-2)制备肠上皮细胞炎症损伤模型,用适宜浓度的吴茱萸碱共培养细胞,通过短路电流检测跨上皮电阻、小室共培养检测FD4透过率测定细胞旁通透性,采用ELISA检测上清液中IL-1β和TNF-α含量,通过蛋白印记检测occludin、accludin-1和ZO-1的表达。结果与LPS处理组相比,吴茱萸碱刺激后显著增加跨上皮电阻,降低细胞旁通透性。与对照组相比,LPS处理显著增加IL-1β和TNF-α含量,而吴茱萸碱能逆转促炎症因子的表达。紧密连接相关蛋白occludin、accludin-1和ZO-1在LPS处理后显著降低,而吴茱萸碱处理后,紧密连接蛋白表达量显著增加。结论吴茱萸碱通过降低炎症反应,增加紧密连接蛋白表达,维持肠上皮细胞的屏障完整性。     

柯萨奇病毒-腺病毒受体siRNA对体外血睾屏障完整性的影响

目的观察柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)siRNA对体外血睾屏障完整性的影响,探讨睾丸CAR分子功能。方法体外建立血睾屏障模型,以CAR siRNA和阴性对照siRNA进行转染,然后以RTPCR和Western blot法检测相关基因mRNA或蛋白表达的变化,免疫荧光法检测蛋白分布,以及测量跨上皮电阻的改变。结果 CAR siRNA组较对照组CAR表达显著降低。与对照组比较,CAR siRNA显著降低了跨上皮电阻,同时,也显著降低了ZO-1的表达,使其分布发生紊乱。结论 CAR siRNA降低支持细胞上皮屏障功能,CAR是血睾屏障的重要调控分子。     

25羟维生素D3对正常气道上皮细胞通透性的影响及可能机制

目的探讨25羟维生素D3对人正常气道上皮细胞通透性及ZO-1表达的影响。方法选取正常人支气管上皮细胞系16HBE为研究对象,MTT法分别检测不同浓度25羟维生素D3对细胞活力的影响;实验分组为:对照组,不同浓度25羟维生素D3处理组。各处理因素作用细胞总时间为24h。跨上皮电阻测量仪测量标准化单细胞层跨上皮电阻(TER),比较各组TER差别。进一步用实时定量PCR观测各处理组紧密连接蛋白ZO-1mRNA表达的变化。结果与对照组相比,25羟维生素D3处理组TER(P<0.05)显著增高,但各浓度的25羟维生素D3对ZO-1表达无明显影响(P>0.05)。结论 25羟维生素D3可以使气道上皮通透性减低,但这种效应并非通过上调气道上皮ZO-1表达实现的。     

氯化锂通过AKT/GSK-3β阻滞近端肾小管上皮细胞周期在G2期

目的探讨氯化锂（LiCl）是否影响近端肾小管上皮细胞（HK-2 细胞）的细胞周期及其信号通路。方法将不同浓度（5、 12.5、20、25 mmol/L）的LiCl作用于HK-2细胞不同时间（12、24、48、72 h）,采用流式细胞术检测细胞周期变化,CCK-8测定HK-2 细胞的活力,Western blotting 检测细胞周期G2 期的关键蛋白Cyclin B1、CDK1 以及AKT/GSK-3β信号通路相关蛋白的表达 量。结果流式细胞术结果提示LiCl以时间-浓度依赖的方式使HK-2细胞的G2细胞周期比例逐渐增加（P<0.05）,CCK-8结果 提示HK-2 细胞的活力随LiCl 作用的时间-浓度的增加而降低（P<0.05）,Western blotting 显示Cyclin B1、CDK1、p-GSK-3β、β- catenin蛋白含量随着时间以及浓度的增加而增加,而AKT磷酸化水平随着时间及浓度的增加而减少（P<0.05）。结论LiCl可 能通过激活AKT/GSK-3β信号通路使HK-2细胞阻滞在G2期。     

雌激素激活GPER-EGFR-ERK通路促进人乳腺癌SKBR-3细胞系增殖

目的探讨G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)介导雌激素对人乳癌细胞系SKBR-3增殖的影响。方法激光共聚焦显微镜扫描检测钙离子探针标记的细胞内钙离子浓度随时间的变化,CCK-8法观测细胞的增殖生长,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho-extracellular regu-late kinase,p-ERK)的相对表达量。结果 17-β雌二醇(E2)与GPER激动剂(G1)(E2、G1处理组)刺激SKBR-3细胞后,细胞内钙离子浓度从120 s开始迅速升高,细胞增殖与对照组相比显著增加,CCK-8测定的(E2、G1处理组)相对细胞数分别是对照组的(2.08±0.07)倍和(2.00±0.04)倍;流式细胞术检测E2、G1处理组细胞增殖指数(PI)(E2、G1处理组)为(43.12±0.38)%、(42.43±0.52)%,较对照组(29.19±0.29)%明显增加(P<0.05);Western blot检测结果显示E2处理组p-ERK表达量显著高于对照组(P<0.05)。GPER特异性抑制剂G15、EGFR拮抗剂AG1478、ERK拮抗剂U0126均可抑制E2、G1触发的相应变化,PI3K拮抗剂WM则不能。结论雌激素激活GPER-EGFR-ERK通路促进人乳腺癌SKBR-3细胞系增殖。     

氯胺酮诱导人膀胱SV-HUC-1 细胞凋亡的实验研究

目的：研究氯胺酮对人膀胱SV-HUC-1 细胞凋亡的影响，初步探讨氯胺酮相关性膀胱功能损伤的发 病机制。方法：培养人膀胱SV-HUC-1 永生化上皮细胞系，用不同质量浓度的氯胺酮作用于SV-HUC-1 细胞， 作用不同时间后用Annexin V-FITC/PI 双染法流式细胞术检测细胞凋亡率，用Western 印迹法检测Bax，Bcl-2， pro-caspase-3，cleaved caspase-3 蛋白表达的含量。结果：与对照组相比，加入氯胺酮后SV-HUC-1 细胞凋亡率增加， Bax 表达增高，Bcl-2 表达减弱，Bax 与Bcl-2 比值增高，pro-caspase-3 表达减少，cleaved caspase-3 表达增高(P<0.05)， 且与氯胺酮质量浓度和作用时间相关(P<0.05)。 结论：氯胺酮能够明显促进人膀胱SV-HUC-1 细胞的凋亡，并 呈浓度依赖性和时间依赖性。     

p38/MAPK信号通路在高渗透压破坏角膜上皮屏障功能中的作用

目的 探讨高渗透压对角膜上皮屏障功能的影响及p38/MAPK信号通路在此过程中潜在的作用.方法 体外培养人永生化角膜上皮细胞(human corneal epithelial cells,HCEC),用不同浓度渗透压[302(正常渗透压)、350、500 mOsm/L]作用于HCEC细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖活性;免疫荧光检测细胞紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-1的表达和分布;p38/MAPK阻断剂预处理HCEC细胞前后,Western blot分别检测紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1和p38/MAPK信号通路表达及其磷酸化水平;跨膜电阻仪检测上皮细胞跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)的变化.结果 高渗透压对HCEC细胞增殖活性没有影响;免疫荧光染色可见正常渗透压组ZO-1、Claudin-1沿着细胞膜呈线性分布,而350、500 mOsm/L高渗透压组ZO-1、Claudin-1荧光信号均减弱,且细胞间紧密连接结构破坏(P＜0.05);在高渗透压下,HCEC细胞紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1表达量明显下降(P＜0.05),p38/MAPK磷酸化水平增加(P＜0.05),上皮细胞跨膜电阻(TEER)降低(P＜0.05),而p38/MAPK阻断剂SB203580可抑制高渗透压引起的上述反应(P＜0.05).结论 高渗透压可以使人角膜上皮细胞屏障功能破坏,其机制为通过激活p38/MAPK信号通路导致紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1表达下降.     

HLA-G通过促进活化性受体的表达增强NK细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用

目的 探索宫颈癌细胞中HLA-G表达差异对NK细胞表面活化性受体的影响。方法 实时定量PCR(real-time PCR)及免疫印迹法（Western-Blot WB）检测宫颈癌细胞及正常宫颈细胞中HLA-G的表达差异。利用慢病毒载体构建HLA-G稳定下调的宫颈癌细胞株,并与NK细胞共培养,CCK8法检测共培养后宫颈癌细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测宫颈癌细胞凋亡水平。同时,流式细胞术检测共培养后NK细胞表面活化性受体NKG2D、NKP30的表达水平及颗粒素（Granzyme）、穿孔酶（Perforin）的表达差异。结果 RT-PCR及WB法检测结果显示：与H8细胞相比,C33a、SiHa细胞中HLA-G的表达显著升高（P <0.05）。CCK8法检测结果显示：HLA-G下调后,C33a及SiHa细胞与NK细胞共培养,C33a及SiHa细胞的增殖能力显著减弱（P <0.05）,同时,C33a及SiHa细胞的凋亡水平显著升高（P <0.05）。流式细胞术检测结果显示：C33a及SiHa细胞HLAG下调后,与其共培养的NK表面NKG2D表达显著升高（P <0.05...     

病毒载量检测在102例HIV抗体不确定样本诊断中的应用

  目的  探讨病毒载量检测在HIV抗体不确定样本诊断中的应用价值。  方法  选取2016年1月至2019年12月期间昆明市第三人民医院门诊及住院102例HIV抗体不确定病例，1周内进行COBAS TaqMan HIV-1 Test v2.0病毒载量检测和CD4细胞计数，2～4周后随访蛋白印迹实验（western blotting，WB）检测，综合比对分析两种方法的检测结果。  结果  102例HIV抗体不确定病例，病毒载量检测结果大于20 IU/mL的84例样本随访均转阳，2例病毒载量检测结果低于检测下限20 IU/mL，随访结果最终为阳性，病毒载量检测结果为TND的16例病例，随访结果为阴性。  结论  高精度病毒载量检测对HIV抗体不确定结果能快速准确鉴别，缩短随访复查的时间，提早对病情准确判断，核酸检测作为补充实验可用于艾滋抗体确证试验不确定样本的判定。     

葛根素对牙周炎大鼠Th17/Treg细胞免疫平衡及相关转录因子表达的影响

目的 探究葛根素对牙周炎大鼠辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)/调节性T细胞（Regulatory T cell, Treg）免疫平衡及相关转录因子的影响。方法 采用分离牙龈、丝线结扎配合龈下注射大肠杆菌内毒素（ELPS）法建立大鼠牙周炎模型。将大鼠随机分为正常对照组（A组）、牙周炎模型组（B组）、200 mg/（kg·d）葛根素组（C组）。HE染色观察牙周组织病理形态学变化。通过Micro-CT对骨生物学参数定量分析牙槽骨吸收情况。流式细胞术、免疫印迹法（western blot,WB）分别检测牙周组织中Th17、Treg细胞比例、白介素-17(IL-17)、视黄酸相关孤儿受体（RORγt）、IL-10、叉头状转录因子-3(Foxp3)蛋白表达。结果 HE染色中葛根素组大鼠牙根部可见明显新生骨细胞增生,牙周膜可见少量炎症细胞聚集,牙槽骨结构较整齐。Micro-CT显示治疗组大鼠牙槽骨较模型组骨量略有下降,骨质量及强度有所上升。流式细胞术检测全血细胞发现葛根素组的TH17、Treg细胞比例均下降,且TH17/Treg的细胞比例也下降。IL-10、Foxp3在...     

长链非编码RNA-p21调控微小RNA-9/去乙酰化酶1信号通路逆转结直肠癌细胞奥沙利铂耐药性

  目的  探讨长链非编码RNA（LncRNA）-p21调控微小RNA-9（miR-9）/去乙酰化酶1（SIRT1）信号通路逆转结直肠癌（CRC）奥沙利铂相关的细胞自噬及耐药性的分子机制。  方法  采用qPCR方法LncRNA-p21的表达检测,Westbloting blotting法检测细胞自噬相关蛋白（微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ（（LC3-I）、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ））,自噬底物 （P62）、去乙酰化酶1（Sirtuin-1,SIRT1）、miR-9 的表达水平;克隆形成实验检测细胞活性。  结果  （1）LncRNA-p21 在奥沙利铂耐药的结直肠肿瘤细胞 HCT116,SW620 中高表达,差异有统计学意义（P < 0.001）;（2）敲降 LncRNA-p21 可抑制细胞自噬,改善 HCT116 细胞对奥沙利铂的化疗敏感性;（3）敲降 LncRNA-p21 后 miR-9 表达上调,而miR-9 过表达可增强 HCT116 细胞对奥沙利铂的化疗敏感性,差异有统计学意义（P < 0.001）;（4）同时,SIRT1 的表达受到 LncRNA-p21 和 miR-9 的调控。  结论  结直肠肿瘤对于化疗药奥沙利铂抵抗可能由LncRNA-p21诱导细胞自噬增强而引起,其过程可能通过 LncRNA-p21调控miR-9/SIRT1信号通路而实现。     

木犀草素通过调控内质网应激抑制平滑肌细胞的迁移

  目的  研究木犀草素对人主动脉平滑肌细胞迁移的调控作用,并探讨其调控作用是否通过激活内质网应激途径实现。  方法  体外培养人主动脉平滑肌细胞,分为空白对照组（不做任何处理,BC）、阴性对照组（加等量无关试剂,NC）、木犀草素组（25 μmol/L处理）、木犀草素+4-苯基丁酸钠共处理组（4-苯基丁酸钠预处理后加入等量木犀草素）,于12h小时后细胞划痕实验法检测人主动脉平滑肌细胞迁移情况,Western blot和RT-qPCR检测BIP、CHOP蛋白及RNA表达水平。  结果  （1）与空白对照组和阴性对照组相比,木犀草素组细胞迁移水平明显降低,BIP、CHOP表达水平明显增高;（2）与木犀草素组相比,木犀草素+4-苯基丁酸钠共处理组细胞迁移水平增强,同时BIP、CHOP表达水平降低。  结论  木犀草素通过上调内质网应激抑制人主动脉平滑肌细胞的迁移。     

CASR/VDR/PTH1R信号通路在含钙肾结石发生机制中的初步研究

  目的  研究CASR/VDR/PTH1R通路在含钙肾结石发生中的作用及机制。  方法  取肾结石患者肾脏髓质为实验组,肾脏肿瘤患者正常肾髓质为对照组,分别采用q-PCR、WB、免疫荧光法检测肾实体组织中CASR、VDR、PTH1R的mRNA表达和蛋白水平。  结果  CASR、PTH1R基因 mRNA在积水肾髓质及肾肿瘤正常髓质表达水平差异无统计学意义（P > 0.05）。VDR基因的mRNA在积水肾髓质及肾肿瘤正常髓质表达水平差异有统计学意义（P < 0.05）。  结论  CASR、VDR、PTH1R在肾结石患者肾脏髓质中表达,且有可能通过CASR/VDR/PTH1R信号通路途径参与含钙肾结石的发生机制。     

早期运动指导对早产儿发育行为的影响

目的 探讨给予早产儿父母运动指导后对婴儿运动发育的影响.方法 纳入153名研究对象,分为早产指导组(47例)、早产对照组(50例)和足月对照组(56例).给予早产指导组婴儿父母3个月的婴儿运动方法的指导,并指导家长在家中进行;对照组婴儿对父母进行常规养育指导.婴儿1岁时进行发育评估.结果 1岁时发育评估比较,早产指导组...     

白细胞介素-4在脂多糖诱导急性肺损伤模型中的保护作用

目的 探讨白细胞介素-4(IL-4)在急性肺损伤（acute lung injury,ALI）中的保护作用。方法 脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导A549细胞形成ALI细胞模型。使用不同浓度的IL-4(0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL)在不同时长下干预该模型,通过流式细胞术检测A549细胞凋亡率,ELISA法测定A549细胞分泌IL-1、IL-6、IL-10、TNF-α、TNF-γ情况。结果 IL-4可降低ALI模型中A549细胞凋亡率、抑制Caspase3表达（P <0.05）,其效果随IL-4浓度增加及干预时长延长而加强;同时促进Bcl-2表达（P <0.05）,IL-4浓度1μg/mL干预12 h时效果最佳。上述条件下,IL-4可降低ALI模型中A549细胞的IL-1、IL-6、TNF-α、TNF-γ,并增加IL-10(P <0.05)。结论 IL-4可以通过改善ALI体外模型中细胞因子分泌情况,在急性肺损伤中发挥正向调节作用。     

不同剂量天麻素对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路的影响

目的 探讨不同剂量的天麻素（Gastrodin,Gas）对甲基苯丙胺（Methamphetamine,Meth）依赖条件性位置偏爱（Conditioned place preference,CPP）大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB通路的作用。方法 建立Meth(10 mg/kg,ip,14 d)依赖大鼠CPP模型,采用低中高剂量的天麻素（10、30、100 mg/kg）干预14 d后,采用Western blotting和RT-qPCR方法检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中关键因子的蛋白和mRNA在海马中的表达水平。结果 天麻素干预后TLR4、MyD88、NF-κB p65、TRAF6的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性降低（P <0.001、P <0.01或P <0.05）、p-NF-κB p65的蛋白表达呈剂量依赖性降低（P <0.01或P <0.05）、IκB-α的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性升高（P <0.01或P <0.05）,天麻素干预后p-IκB-α的蛋白表达降低（P <0.01）。结论 天麻素干预对甲基...