高效液相色谱法同时测定中毒患者血清中5种精神活性物质的浓度

目的建立可同时测定人血清中利培酮、9-羟利培酮、氯氮平、去甲氯氮平和瑞波西汀5种药物浓度的高效液相色谱-紫外检测法,并将该方法用于临床急性精神药物中毒患者的血液样本分析。方法以乙醚为溶剂进行一步液液萃取,待测物与内标帕罗西汀在Inertsil ODS-3柱,乙腈∶甲醇∶正丁胺∶冰醋酸∶去离子水(20∶2.87∶1.07∶1∶34.29)条件下可以基线分离。线性范围100～1 600 ng/mL,最低检测限25μg/L(S/N=10)。结果本方法批内精密度为3.1%～15.6%,批间精密度为5.7%～18.4%;批内准确度为0.1%～8.7%,批间准确度为0.3%～13.3%。常见精神科药物不干扰待测药物和内标。结论本方法简单、特异性好,可应用于急诊患者药物中毒检测。     

液液萃取-超高效液相色谱-串联质谱法定量测定污水中10种毒品

建立一种基于液液萃取-超高效液相色谱-串联质谱法（LLE-UPLC-MS/MS）同时测定污水中10种毒品的氘代内标定量分析方法。污水样品经二氯甲烷-乙酸乙酯（1∶1）液液萃取浓缩,采用C₁₈色谱柱,流动相为0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸铵水溶液和乙腈,线性梯度洗脱分离,ESI正离子化多反应监测进行定量分析。10种待测物在各自的标准曲线范围内线性关系良好（r≥0.995 7）,定量限为1 ng/L（除苯丙胺为2.5 ng/L）,相对回收率范围为96.36% ~ 106.43%,日内与日间精密度均小于4.70%。该方法准确可靠、重复性好,适用于污水中10种毒品的定量检测,对影响固相萃取富集的复杂基质污水同样适用,为实时监测药品滥用提供了新的分析手段。     

液相色谱-质谱联用法测定孕妇尿液中三种残留的氯霉素类抗生素

目的：建立液相色谱-质谱联用法测定孕妇尿液中3种残留的氯霉素类抗生素,并进行方法学验证。方法：尿液利用Oasis HLB固相萃取小柱进行净化和富集,液相分离采用SHISEIDO MG-C18(100mm×3.0mm,3.0μm)色谱柱,流动相为乙腈-水（含0.1%甲酸）,梯度洗脱。质谱采用ESI源,选择离子监测模式检测[M-H]-：氯霉素m/z 320.8、氟苯尼考m/z 355.8、甲砜霉素m/z 353.8、甲苯磺丁脲(内标) m/z 268.9。结果：尿液中3种残留的氯霉素类抗生素在5～500ng/mL范围内呈良好的线性关系（r均＞0.999）;批内和批间的精密度和准确度良好（RSD＜8.9% ,∣RE∣＜9.3%） ;提取回收率为71.4%～108.5%,稳定性良好（∣RE∣＜11.8%）;几乎没有残留;稀释不影响测定的精密度和准确度;共检测了18份来源不同的(孕早期、孕中期和孕晚期)孕妇尿样,大部分样品能检测到氯霉素（但低于最低定量限5ng/mL）,其中少量样品能测出氟苯尼考,完全没有检测到甲砜霉素残留。结论：该方法操作简便、重现性好,适用于尿液中3种氯霉素类抗生素的测定,可为氯霉素类抗生素的残留与孕妇不良妊娠结局的相关性研究提供方法学基础。     

液相色谱-质谱法测定孕妇尿液中3种残留的氯霉素类抗生素

目的 建立液相色谱-质谱法测定孕妇尿液中3种残留的氯霉素类抗生素,并进行方法学验证。方法 尿液利用Oasis HLB固相萃取小柱进行净化和富集,液相分离采用SHISEIDO MG-C18(100 mm×3.0 mm,3.0μm)色谱柱,流动相为乙腈-水（含0.1%甲酸）,梯度洗脱。质谱采用电喷雾离子源,选择离子监测模式检测[M-H]-：氯霉素m/z 320.8、氟苯尼考m/z 355.8、甲砜霉素m/z 353.8、甲苯磺丁脲（内标）m/z 268.9。结果 尿液中3种残留的氯霉素类抗生素在5～500 ng/mL范围内呈良好的线性关系（均r>0.999）;批内和批间的精密度及准确度良好（RSD<8.9%,∣相对误差（RE）∣<9.3%）;提取回收率为71.4%～108.5%,稳定性良好（∣RE∣<11.8%）;几乎没有残留;稀释不影响测定的精密度和准确度。共检测了18份不同孕期（孕早期、孕中期和孕晚期）孕妇的尿样,大部分样品能检测到氯霉素（但浓度低于最低定量限5 ng/mL）,其中少量样品能测出氟苯尼考,完全没有检测到甲砜霉素残留。结论 该方法操作简便、重现性好...     

小鼠血浆及尿液中多种氨基酸的UPLC-MS检测方法的建立

目的:采用超高液相色谱-串联质谱(ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS)建立16种氨基酸的定量方法,并对小鼠血浆以及尿液样本实现准确定量分析。方法:使用UPLC-MS技术,液相以20 mmol·L^-1甲酸铵水溶液(A)以及乙腈(含15%20 mmol·L^-1甲酸铵水溶液)(B)为流动相进行梯度洗脱,质谱以多反应监测模式(multiple reaction monitoring, MRM)进行检测,以专属性、检测限、定量限、线性、准确度、精密度、残留效应以及稳定性等方法学指标评价此氨基酸定量方法,并应用于小鼠血浆以及尿液的氨基酸定量。结果:通过对氨基酸标准品的方法学验证,此检测方法符合方法学验证的相关标准。对小鼠的血浆以及尿液中氨基酸的准确定量结果表明,此方法可同时检测小鼠血浆以及尿液中的16种氨基酸并进行准确定量。结论:应用UPLC-MS技术,建立了能对小鼠血浆以及尿液中16种氨基酸准确定量的非衍生化方法,具有良好的精密度以及准确性等...     

LC-MS/MS法检测血液和尿液中东莨菪碱和阿托品

  目的  建立曼陀罗中毒人体血液和尿液中东莨菪碱和阿托品的LC-MS/MS检测方法。  方法  采用Shim-pack GISR-HP C18色谱柱,以乙腈-甲酸（0.1%）水溶液为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源正离子多反应监测模式质谱分析,采用2个特征离子对和外标标准曲线法对曼陀罗中毒人体血液和尿液中东莨菪碱和阿托品进行定性定量分析。  结果  东莨菪碱和阿托品的定量离子对分别为m/z 304.25 [M+H]+→138.15和m/z 290.2 [M+H]+→124.15。东莨菪碱和阿托品在质量浓度1～100 ng/mL范围内线性良好（R≥0.999）,检出限（LOD）分别为:血液0.45 ng/mL和0.19 ng/mL,尿液0.38 ng/mL和0.16 ng/mL;定量限（LOQ）分别为:血液1.01 ng/mL和0.63 ng/mL,尿液1.07 ng/mL和0.38 ng/mL;提取回收率分别为:血液94.38%和94.49%,尿液94.96%和96.52%;基质效应为-3.51%～0.84%。2种目标物的准确度为89.38%～102.86%,日内和日间精密度均小于6%。  结论  建立的LC-MS/MS检测方法能快速、准确的测定生物检材中东莨菪碱和阿托品的含量。     

HPLC法测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱中杂质

目的建立盐酸麻黄碱(E)和盐酸伪麻黄碱(PE)中杂质的高效液相色谱HPLC测定方法。方法用RPC18色谱柱,以20mmol/LKH2PO4水溶液-甲醇(96∶4)为流动相,检测波长为210nm,分析时间为20min。结果6种麻黄生物碱均达到基线分离;混合对照品连续进样6次,色谱峰面积RSD均小于1.0%;对照品质量浓度在选定范围内呈现良好的线性关系(R2>0.999);各成分最低检出限分别为:去甲基麻黄碱(NE)为0.05μg/mL,去甲基伪麻黄碱(NPE)为0.04μg/mL,E和PE为0.1μg/mL,甲基麻黄碱(ME)和甲基伪麻黄碱(MPE)为0.2μg/mL;各成分的加样回收率均大于97.1%;6个待测样品均被检测出不同程度的杂质。结论本方法分离度好、精密度高、专属性强、灵敏度高,可用于麻黄生物碱类药物中杂质成分的定性和定量测定。     

白介素-6化学发光检测方法的建立

目的:建立一种快速、准确和灵敏的基于微孔板化学发光免疫分析平台的白介素-6(IL-6)定量检测方法并评估其性能。方法:以链霉亲和素包被微孔板,加入待检血清样本,偶联生物素和辣根过氧化物酶的配对抗体建立分析体系,采用双抗体夹心模式,建立IL-6抗原定量检测方法,并对其进行条件优化和性能评估。结果:生物素化抗体和酶标抗体的工作浓度分别为2.00μg/mL和1.75μg/mL,孵育时间选为12.5 min,分析灵敏度为2.00 pg/mL,检测范围为2.5～2 000 pg/mL,样本回收率在(100±10)%以内,重复性<8%,中间精密度<10%,116份临床血清样本测值与罗氏测值相关性较高(R²=0.987 7),不同疾病患者血清IL-6水平均明显高于对照组(P<0.05)。结论:建立了IL-6微孔板化学发光定量检测方法,且各项性能指标良好,可满足临床检测的需要。     

HPLC-DAD法测定何首乌中游离蒽醌类化合物的含量

目的:建立同时测定何首乌中大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素5种游离蒽醌类成分含量的方法。方法:色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(5μm,150mm×4.6mm),流动相为0.02%磷酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,流速为1 mLmin-1,检测波长254nm。结果:5条标准曲线在检测范围内均呈良好线性(r≥0.9999);5个待测成分的检测限均低于0.18ng,定量限均低于0.57ng;日内和日间精密度的RSD均小于3.1%,加样回收率为91.0%～103.1%。结论:本文所建立的何首乌中5个指标成分同时定量的方法准确、可靠,可作为何首乌药材质量控制的参考方法。     

福建省五岁以下儿童维生素A缺乏症的流行病学调查

目的了解福建省5岁以下儿童维生素A缺乏现状。方法采取整群分层抽样方法将福建省分为城市、沿海、山区三个层面,抽查福州等9个县市5岁以下儿童共3185人,对儿童病史询问、膳食调查和血清维生素A检测。结果福建省5岁以下儿童维生素A亚临床缺乏有200人,维生素A的平均值为0.595μmol/L,患病率为6.3%;有838人属于亚临床状态维生素A可疑缺乏,维生素A的平均值为0.900μmol/L,可疑缺乏患病率为26.3%;维生素A正常有2 147人,其平均值为1.464μmol/L。没有发现有临床表现的维生素A缺乏。亚临床维生素A缺乏的检出率存在地区差异,随着年龄的增长维生素A患病率在下降。结论增加与多食胡萝卜、肝脏等维生素A含量高的食物,婴儿早期服用鱼肝油,是预防和治疗维生素A缺乏的最有效、最迅速、经济的手段。     

甲基丙二酸半胱氨酸在小儿早期VitB12缺乏症诊断中的作用

目的:探讨甲基丙二酸半胱氨酸在小儿早期VitB12缺乏症诊断中的作用.方法:维生素B12缺乏亚临床症状组50例、临床症状组50例及正常健康儿童50例,测定其红细胞平均体积(MCV),红细胞平均血红蛋白(MCH),血清维生素B12、尿中甲基丙二酸(MMA)及血清半胱氨酸(Hcy)浓度.结果:①临床症状组MCV(114.2...     

串联质谱联合气相色谱-质谱检测遗传性代谢病

目的 应用串联质谱检测干血滤纸片中的氨基酸和酰基肉碱谱,联合气相色谱-质谱技术检测尿液中有机酸谱,对遗传性代谢病进行筛查和诊断.方法 留取4981例临床疑似遗传性代谢病儿童的干血滤纸片、尿或尿滤纸片,利用串联质谱仪检测血中氨基酸和酰基肉碱,利用气相色谱-质谱仪检测尿中有机酸,部分患儿结合相关酶活性测定及基因突变分析进行诊断.结果 在4981例患儿中共诊断319例(6.4%)24种遗传代谢病,其中氨基酸代谢病155例(48.6%),8种疾病;有机酸血症150例(47.0%),10种疾病;脂肪酸13氧化代谢病14例(4.4%),6种疾病.结论 串联质谱对氨基酸和脂肪酸代谢病的诊断具有特异性,气相色谱-质谱对有机酸血症的诊断具有特异性,部分氨北基酸代谢病需要这2种技术联合应用才能诊断.     

Prenatal diagnosis of methylmalonic aciduria by analysis of organic acids and total homocysteine in amniotic fluid

Background Methylmalonic aciduria （MMA） is the most frequent disease of organic aciduria in China. Various biochemical strategies are followed for the prenatal diagnosis of MMA. However, since fetuses affected by MMA have decreased excretion of methylmalonic acid, the difficulties of prenatal biochemical diagnosis are obvious. Gas chromatography mass spectrometry （GC/MS） and tandem mass spectrometry （ESl/MS/MS） have allowed us to identify the disease in affected fetuses. The aim of this study was to determine the value of analysis of organic acids and total homocysteine in amniotic fluid in prenatal diagnosis of MMA.
Methods The clinical diagnoses and outcomes of nine probands with MMA and the prenatal diagnoses based on biochemical analysis of nine fetuses at risk for MMA were investigated. Amniotic fluid samples from pregnancies at risk for MMA and metabolically normal pregnancies were obtained at 16-24 weeks of gestation. Methylmalonic acid and methylcitric acid were measured by GC/MS, propionylcarnitine was analyzed by ESl/MS/MS, and total homocysteine was determined by fluorescence polarization immunoassay.
Results In two pregnancies, high levels of methylmalonic acid, methylcitric acid, propionylcarnitine, and total homocysteine indicated combined MMA and homocysteinemia in the fetuses. One of the mothers continued pregnancy and received cobalamin supplement as prenatal treatment, and the other terminated her pregnancy. In one pregnancy, significantly elevated levels of methylmalonic acid, methylcitric acid, and propionylcarnitine, and normal level of total homocysteine was found indicating isolated MMA in the fetus; abortion was performed on this case. In the other six pregnancies, all the levels of the above mentioned metabolites were normal suggesting that the fetuses were not affected by MMA. The diagnoses were confirmed after delivery by testing urinary organic acids and plasma total homocysteine.
Conclusions The metabolic abnormalities of MMA occur early in gestation. The level of to     

比较两种不同预处理法的尿液有机酸分析在遗传代谢性疾病筛查和诊断

目的：比较两种不同预处理法的尿液有机酸分析在遗传代谢性疾病筛查和诊断中的应用。方法：留取本院内分泌代谢科80例遗传代谢病高危患儿和80例同年龄段正常儿童尿液,分别经尿素酶预处理法和有机酸萃取预处理法处理后用GC—MS检测尿代谢产物,进行疾病诊断、代谢产物的定性、半定量及抗干扰性分析。结果：尿素酶预处理法共诊断15例代谢性疾病及1例肾小管重吸收障碍,有机酸萃取预处理法诊断出13例代谢性疾病;尿素酶预处理法能检测有机酸、氨基酸、糖、醇及嘧啶类等多种代谢产物,有机酸萃取预处理法仅能检测到有机酸;有机酸萃取预处理法对有机酸的检测值及抗干扰性都要高于尿素酶预处理法。结论：尿素酶预处理法适用于临床不能确诊的遗传代谢病的筛查;有机酸萃取预处理法则适用于临床高度怀疑为有机酸病的诊断。     

Methylmalonic Acid in Amniotic Fluid and Maternal Urine as a Marker for Neural Tube Defects~

Neuraltubedefects (NTDs) ,ariseduetofailureofclosureoftheneuraltube,encompassingcraniorachis chisistotalis,anencephaly ,myeloschisis,encephaloce les,andmeningomyeloceles (andArnold Chiarimalfor mation) ,areamongthemostcommonneurologicaldevel opmentalbirth…     

微晶纤维素薄膜层析分析血和尿氨基酸——鉴定苯丙酮尿症

国产微晶纤维素薄膜(MN—A型)双向层析分析24种标准氨基酸,及正常人苯丙酮尿症惠者血、尿氨基酸。层析图谱清晰。是筛查氨基酸代谢病尤其筛查苯丙酮尿症的准确而简便的方法。在一般实验室易于推广。     

五例cblX型甲基丙二酸血症患儿的临床特征及基因型分析

目的：探讨钴胺素（cbl）X型甲基丙二酸血症（MMA）患儿的临床表型及基因型特点。方法：收集2016至2020年在上海交通大学医学院附属新华医院和上海市儿童医院就诊的5例cblX型MMA患儿的临床资料。采用串联质谱法检测血酰基肉碱水平,气相色谱–质谱法检测尿有机酸,全外显子基因测序法检测致病基因,并利用生物信息学分析方法预测新突变对三维蛋白质结构的影响。结果：5例cblX型MMA确诊患儿,男性4例,女性1例,发病年龄为出生后0～6个月。4例男性患儿的主要临床表现为顽固性癫痫、智力运动发育落后,代谢异常均表现为轻度血同型半胱氨酸水平增高,其中伴尿甲基丙二酸轻度升高3例,伴血丙酰基肉碱（C3）、C3/乙酰基肉碱（C2）升高1例;基因检测发现2例携带宿主细胞因子C1(HCFC1)已知基因突变c.344C>T(p.A115V),另外2例携带新的致病基因突变,分别为c.92G>A(p.R31Q)和c.166G>C(p.V56L)。这三种基因突变均位于HCFC1蛋白的Kelch结构域中。1例女性患儿携带c.3731G>T(p.R1244L)突变,临床症状较轻,仅尿甲基丙二酸...     

新生儿有机酸血症临床分析

目的探讨新生儿有机酸血症的临床特点和治疗方法。方法回顾性分析24例新生儿有机酸血症的临床资料,采用气相色谱-质谱法（gas chromatography-mass spectrometry,GC/MS）进行尿或血有机酸分析。结果本组患儿症状主要表现为喂养困难（20例）,反应减弱（18例）,呕吐（7例）,呼吸急促（4例）,惊厥（7例）,肌张力减低（17例）等。血小板减少13例,血气分析提示失代偿性酸中毒7例。10例确诊甲基丙二酸血症患儿接受维生素B12治疗,同时予低蛋白饮食及左旋肉碱治疗。2例死亡。随访8例,时间2个月～3年5个月,4例临床症状完全消失,4例明显好转。结论新生儿有机酸血症的临床表现是非特异性的,可依据GC/MS尿有机酸分析确诊,早期发现和治疗是改善预后的关键。     

串联质谱法检测结果阴性的甲基丙二酸血症合并同型半胱氨酸血症cblX型患儿一例

一例甲基丙二酸血症合并同型半胱氨酸血症cblX型患儿在婴儿早期出现局灶性癫痫发作和癫痫性痉挛发作,多种抗癫痫药物治疗效果不佳,患儿于4月龄时死亡。新生儿筛查和急性发作期串联质谱法检测均未见明显异常,超高效液相色谱-串联质谱法检测提示血甲基丙二酸和同型半胱氨酸增高,全外显子组测序显示HCFC1基因存在c.202C>G（p.Q68E）半合子突变,遗传自其母亲。     

同型半胱胺酸与后循环缺血性眩晕合并软斑的相关性研究

目的 通过对后循环缺血性眩晕并伴有颈部动脉斑块患者病例的收集,分析其与高同型半胱胺酸血症相关性研究。方法 以健康体检者120例为空白组,后循环缺血性眩晕患者120例作为阳性对照组,运用Logistic回归分析后循环缺血性眩晕患者的相关危险因素,对两组同型半胱胺酸水平的差异进行统计分析以及后循环缺血性眩晕合并软斑、混合斑及硬斑患者同型半胱胺酸水平的差异。结果 经Logisitc非条件回归分析可见,年龄、文化程度、吸烟、高血压、糖尿病、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血清总胆固醇、血浆同型半胱氨酸为后循环缺血性眩晕的危险因素。后循环缺血性眩晕患者血浆同型半胱胺酸水平(35.8±8.9)μmol/L明显高于健康体检者血浆同型半胱胺酸水平(10.3±3.2)μmol/L,两者比较有统计学差异(P＜0.05)。后循环缺血性眩晕合并软斑患者血浆同型半胱胺酸水平(31.3±10.3)μmol/L以及后循环缺血性眩晕合并混合斑患者血浆同型半胱胺酸水平(26.6±5.3)μmol/L明显高于后循环缺血性眩晕合并硬斑患者血浆同型半胱胺酸水平(16.6±3.3)μmol/L(P＜0.05)。结论 后循环缺血性眩晕患者同型半胱胺酸水平明显高于健康人群,高同型半胱胺酸血症与后循环缺血性眩晕患者合并斑块存在相关性。